鼠抗人C_3McAb的制备及其特性

C_3成分是补体系统活化的枢纽,深入研究C_3是免疫病理学中的重要课题。但因纯化C_3难度较大,不易得到高纯度的抗C_3抗体,给研究工作带来许多不便。制备高度专一性的抗C_3McAb实属必需。我们将纯C_3免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,共获4孔稳定的杂交瘤,经抗C_3ELISA和CH_(50)抑制鉴定,有3个阳性孔,经有限稀释,有7株分泌较多抗体的克隆。来源于C_3孔的5个克隆分泌的Ig属IgG_1,用ELISA法检测     

流行性乙型脑炎病毒McAb的研究

将SP2/0-Ag小鼠骨髓瘤细胞与经乙脑病毒SA_(14)株免疫的BALB/C鼠脾细胞融合,获3株分泌乙脑McAb的杂交瘤细胞,其中32号用血凝抑制试验测抗体时不仅抗乙脑,而且和乙组其它虫媒病毒有交叉反应;51号无血凝抑制作用,用免疫荧光法测抗体时只和乙脑病毒     

抗人IgA McAb的鉴定

用人IgA免疫BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0-Ag 14融合,测定99个融合孔,抗体阳性者10孔。其中2个经克隆获得代表株39-1,2-9。对后者所分泌的McAb及杂交瘤细胞免疫小鼠的腹水,进行了特异性和纯度鉴定。被动血凝抑制试验证明,2个McAb均可被抗原IgA所抑制,抑制率与抗原量成正比;用含2％PEG-6000的琼脂免疫双扩散试验,39-1McAb和免疫抗原IgA产生一条沉淀线,     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文用呼吸道合胞病毒(RSV)作抗原免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立3株分泌抗RSV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经鉴定所产生的McAb确系抗RSV的McAb。     

分泌抗人IgM单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步鉴定(简报)

用经过初步统化的人IgG免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞在聚乙二醇1000作用下与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞融合,克隆后得到一株分泌抗人IgM McAb的杂交瘤细胞株5C1C8。     

分泌抗人IgMμ链McAb杂交瘤细胞株的建立

本文从正常人（HBSAg阴性）血清中分离纯化人IgM，以此作为抗原免疫BALB／C小鼠，根据kohler和Milstein杂交瘤细胞建株原理，采用本室建立的常规方法，将免疫脾细胞和小鼠SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，建立了分泌抗人IgMμ链单克隆抗体杂交瘤细胞株。经过间接ELISA双向琼脂扩散试验及封闭试验等方法证实，所分泌的抗体为抗人IgMμ链McAb，其中3A4、3D32株杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代，均能分泌高效价抗体，且为IgG1亚类。本实验结果为抗人IgM鼠队嵌合抗体基因的构建奠定了基础。     

适于标记的HFRS病毒组特异性McAb的建立及其应用

用陕西81-14A株HFRSV,免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得分泌抗HFRSV抗体的C_4株杂交瘤细胞系。C_4株McAb与我国各地的28株及朝鲜的76-118株、Seoul株HFRSV均产生免疫反应,表明是HFRSV组特异性扩体,并适用于荧光素及辣根过氧化物酶标记。经初步应用,效果满意。     

抗人IgG结合型Lambda McAb和抗人IgG McAb的鉴定

SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞和经人IgG的Fab抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,其融合率为97.22％。用微量ELISA和PHA试验检测抗体,筛出7个亚克隆杂交瘤细胞株,对其中的C31.10和C31.6株的鉴定结果为:用人IgG作抗原,两个McAb的PHA效价均为1∶16000～1∶32000,被动血凝抑制的抑制率随抗原量而增加,两者呈线性关系,证明它们对人IgG特异;用含2～3％PEG-6000的琼脂糖双扩散试验,C31.JoMcAb与IgG,Lambda型IgG1、IgG2、IgG3、IgG4及正常人血清呈阳性反应,但不与IgA、IgM、IgD、     

抗猴逆转病毒Ⅰ型(SRV-1)杂交瘤细胞株的建立及应用

以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法(IFA)检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体(McAb)C_4和C_(15)。两株杂交瘤细胞经3次克隆后分别注入同品系的小鼠腹腔,所产生的腹水经IFA和ELISA法测定其滴度为1:800～1:1600。经琼脂免疫双扩散法鉴定,C_4McAb     

抗人IgA单克隆抗体的定鉴

人 IgA免疫的 BALB/C 鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,以ELISA和PHA方法检测抗体,建立了两株对 IgA 的单克隆杂交细胞林39-1,2-9。本株单克隆抗体不与 IgG、IgM、κ及λ抗原反应,是对α链特异的,两株单克隆抗体分别属鼠 IgG2b和 IgG1亚类。     

抗人红细胞膜三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)杂交瘤细胞株的建立

SP 2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞与经人红细胞膜(ghost)GAPD免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,经两次克隆,获抗人红细胞膜GAPD的杂交瘤细胞株9C6,其培养上清液的被动血凝滴度为1∶200～1∶400;免疫小鼠腹水滴度达1∶64,000。将ghost与9C6株McAb保温37℃60秒测GAPD活性,证明此株McAb能特异的抑制ghost中的GAPD活性。将无血清培养液浓缩30倍,用兔抗鼠各型Ig标准抗血清鉴定,证明9C6所分泌的Ig属小鼠IgM,经SDS-PAGE检查,它不能通过大孔胶,经2-巯基乙醇还原后,可见两条区带,     

二株抗人原发性肝癌AFP—McAb杂交瘤的建立

本文报道从GHC—1及GHC—3分泌的AFP,经过常规方法的改进,获得AFP—McAb。以5pg/kg AFP免疫后的BAL B/C小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,采用ELISA—Ⅰ、DIBA、RPHA—Ⅰ和杂交瘤细胞免疫荧光法,筛建了二株可分泌抗人原发性肝癌的AFP—McAb杂交瘤,定名为GAH_1及GAH_2。 RPHA—Ⅰ测试表明,GAH_1及GAH_2分泌的McAb,可抑制原发性肝细胞癌病人的腹水和血清,但对脐带血不能完全抑制。     

抗人肺癌单克隆抗体的制备及初步鉴定

以人肺癌细胞株GLC作为抗原，免疫BALB／C小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。经克隆筛选获得两株分泌抗人肺癌单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株，并对其McAb特异性进行了初步鉴定。1材料和方法1.1动物和细胞系BALB／C小鼠由同济医院动物中心提供；SP2／0、SMC7721、BGC均为本室冻存细胞；GLC由中国科学院肿瘤所提供。1.2免疫过程人肺腺癌细胞系GLC培养在含20％小牛血清的RPMI1640完全培养液中，取对数生长期细胞调整细胞浓度为1×10~7细胞／ml，BALB／C小鼠腹腔注射1ml，间隔2周加强注射1次，于融合前3d每天加强免疫1…     

抗绿脓杆菌Ⅱ群10117株及Ⅳ群10119株McAb杂交瘤细胞株的筛选和鉴定

用SP2/0骨髓瘤细胞分别与绿脓杆菌Ⅱ群10117株和Ⅳ群10119株免疫BALB/c小鼠脾细胞融合,各获得三株连续分泌抗绿脓杆菌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株10117A_1、B_3、D_5及10119A_6、B_4、C_3。经染色体、IFA、ELISA 鉴定分析,证明是能分泌高效价McAb的杂交瘤细胞株。McAb类和亚类鉴定分别为IgG_? IgG_2b和IgM。交叉反应初步表明上述McAb具有较高的型特异性。     

抗登革Ⅱ型病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

采用登革Ⅱ型病毒免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞,在40％PEG1000的作用下进行融合,获得6株分泌抗登革Ⅱ型病毒单克隆抗体的杂交瘤,用间接免疫荧光法鉴定其单克隆抗体(McAb)对登革Ⅱ型病毒均有特异性。HIA和CF试验有5株McAb为CF型特异的。5株具有HIA抑制活性。     

分泌抗活化小鼠T细胞抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用Con A活化的小鼠脾脏细胞免疫同品系动物(BALB/c鼠),取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,选择了一株有分泌抗活化小鼠T细胞抗原抗体的杂交瘤细胞,经有限稀释法连续4次克隆化。采用ELISA法分析,初步证实该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)与Con A 活化的小鼠脾细胞的结合反应明显高于与未经活化的其他细胞(胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞、脾细胞)的反应。用琼脂双扩散法证明该MeAb属于小鼠IgG类。     

抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

作者用SP2/0骨髓瘤细胞与绿脓杆菌Ⅰ群10115株免疫的BALB/c鼠脾细胞融合获得三株连续分泌抗绿脓杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株C_3、D_1和D_3,对其中C_3杂交瘤株作了PHA、ELISA、IFA检定分析,证明能分泌高效价特异的单克隆抗体。PAGE结果出现一特殊区带。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_1。     

粒细胞集落刺激因子及其McAb的研究

利用B细胞杂交瘤技术,用rhG-CSF免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地建立了3株能持续分泌特异抗rhG-CSF McAb的杂交瘤细胞。取其中2D_4-B_4杂交瘤细胞进行染色体数目测定,并将2D_4-B_4瘤细胞注入小鼠腹腔,获得抗体阳性腹水,测定提纯抗体IgG亚型、特异性、稳定性和亲和力,证实该McAb可以和hG-CSF及小鼠G-CSF特异结合。为进一步研究hG-CSF和人工合成G-CSF打下良好的基础。     

分泌本周氏蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

本文报告了以人的本周氏蛋白(BJK)免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/o—Ag14小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)MW400作用下融合,并经7次克隆后获得二株抗人的BJK杂交瘤细胞系(E_6,H_4)。经染色体核型分析证实为杂交瘤细胞。本单克隆抗体经标准兔抗小鼠IgG亚类血清鉴定,属小鼠IgG_2a,IgG_2b。两株细胞经液氮冻存、复苏仍能正常分泌抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定植瘤小鼠的腹水及其血清的抗体滴度分别为10~4—10~5,10~3—10~4。     

分泌抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以医用尿激酶免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Fo和Ns-1骨髓瘤细胞进行3次融合,筛选到6株分泌抗尿激酶单克隆抗体的杂立瘤细胞系,分别为IUB_5、IUD_2、3UA_2、3UD_12、3UG_2和3UH_7细胞株,对其中IUB和IUD_2两个细胞株进行克隆化培养、冷冻、储存、复苏传代和染色体分析等处理,结果显示IUB_5和IUD_2确系BALB/C鼠脾细胞与FO骨髓瘤细胞融合后获得的单个细胞的克隆。根据免疫双扩散法和ELISA方法鉴定,它属IgG_1和IgG_(2(?));其培养上清液的ELISA效价为10~(-2)～10~(-3),注入BALB/C×C_(57)第一代杂交鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-6)～10~(-7)。经高纯度的低分子量尿激酶检测后,确定是抗高分子量尿激酶的单克隆抗体。