肺癌细胞株肺癌相关基因差异表达分析

目的通过芯片技术检测肺癌细胞株基因差异表达探讨肺癌的发病机制,并尝试寻找可能用于肺癌的预防、诊断和治疗的基因.方法对四株肺癌细胞(PGCl3、PAa、H1299、NiS成瘤)作肺癌相关基因的芯片检测,分析其与对照组永生化细胞株(16HBE)之间的表达差异.从检测结果中选取了三个基因作RT-PCR鉴定.结果H1299有89个基因表达改变,PAa有59个基因表达改变,PGCL3有93个基因表达改变,NiS成瘤有78个基因表达改变.经RT-PCR鉴定的三个基因:L6A在各肿瘤细胞株中呈高表达,RXRB在各肿瘤细胞中呈低表达,vimentin除在无恶性转移株PAa中无显著差异外,在其他肿瘤细胞株中均呈高表达,结果与芯片结果一致.结论肿瘤的发生发展是多基因多阶段相互作用的结果,L6抗原可能作为肿瘤的特异性标记物,vimentin可能与肺肿瘤的转移有关,RXRB的表达水平可能与肿瘤细胞的分化相关.     

雌激素受体Arg548／Cys548基因突变导致受体的高敏感性

目的：研究雌激素受体新突变Arg548／Cys548对受体介导的下游基因表达调控的影响,并探讨其机理和在女孩性早熟中的作用。方法：利用已构建的雌激素受体反应元件报道质粒pGL3-promoter-ERE,分别与野生型ESR1表达质粒PsG5-wtER和定点突变受体表达质粒PSG5-mutER共转染cMF-7和MDA—MB-231细胞,转染后加入雌激素、类似物和拮抗物处理,检测转染细胞的荧光素酶活性值。结果：转染突变型受体的CMF-7和MDA-MB-231细胞的荧光素酶活性值明显升高,在生理浓度雌激素及类似物植物类雌激素异黄酮刺激下,Cys548突变型受体基因转染比野生型受体转染的CMF-7和MDA231细胞均表现出显著强烈的增加萤火虫荧光素酶的活性,表现高敏感的特性;单独加入TAM后荧光素酶活性值没有变化,而同时加入E2和TAM后荧光素酶活性值比加入E2的荧光素酶活性值则明显下降。结论：Cys548突变受体在体外具有较高的敏感性,对药物雌二醇及类似物反应敏感,拮抗剂TAM对受体的活性没有抑制作用,却能竞争性降低雌激素及类似物的作用。     

二株抗人原发性肝癌AFP—McAb杂交瘤的建立

本文报道从GHC—1及GHC—3分泌的AFP,经过常规方法的改进,获得AFP—McAb。以5pg/kg AFP免疫后的BAL B/C小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,采用ELISA—Ⅰ、DIBA、RPHA—Ⅰ和杂交瘤细胞免疫荧光法,筛建了二株可分泌抗人原发性肝癌的AFP—McAb杂交瘤,定名为GAH_1及GAH_2。 RPHA—Ⅰ测试表明,GAH_1及GAH_2分泌的McAb,可抑制原发性肝细胞癌病人的腹水和血清,但对脐带血不能完全抑制。     

红细胞与肝癌细胞免疫粘附实验观察

红细胞(RBC)具有诸多免疫功能,已被视为机体免疫系统的重要组成部分[1].其表面受体可与瘤细胞结合而攻击肿瘤[2],在抗肿瘤免疫中起积极作用.机制较为复杂,近年初步有用于临床检测.肝癌在我国较常见,由于肝内有丰富的血液供应,原发性肝癌的血行转移发生也较早和较多,给防治带来困难.免疫粘附肝癌细胞少见报道.现拟从几种不同条件观察RBC与肝癌细胞免疫粘附作用,探索RBC与肝癌细胞免疫作用的关系,为防治提供实验依据.     

脂质体介导转染培养细胞的基因表达及转染程序的简化

目的：以绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）作为报道基因，观察脂质体介导转染培养细胞后基因的表达时间和表达效率，并探讨简化转染程序的影响。方法：用MCF-7细胞分别以无血清和低血清转染PEGFP—C2,从转染后4h开始，每隔1h在荧光显微镜下观察。结果：用无血清和低血清转染的转染效率无明显区别，5～6h开始表达，20～24h达到最强，48h荧光未见减弱，72h仍可见荧光。结论：血清不影响转染效率。能简化转染程序。基因在转染5h后开始表达，暗示转染10h后，基因表达可能属于其相关基因表达产物对细胞生理活动的刺激影响。     

一种提高细胞贴附率的简易方法

目的：探讨提高细胞贴附率的简易方法。方法：以不同血清浓度预接触培养瓶及不同的接触时间计算细胞贴附率。结果：以常规培养HETFC细胞的预培养液中血清浓度为10％作为对照标准,降低血清浓度,细胞的贴附率下降,无血清状态下则更低,经统计学处理有显性差异（P＜0．01）,而提高血清浓度,细胞的贴附率相应提高,当血清浓度为20％时生长密度甚至高于对照组;以常规的没有用培养液预接触培养瓶为对照;用培养液预接触培养瓶不同时间,细胞的贴附率基本相近,而且近乎达到顶峰。实验结果经统计学处理有显性差异（P＜0．01）。结论：用培养液预接触培养瓶一定时间再接种细胞的确能提高细胞的贴附率。     

转录因子上游刺激因子在大鼠不同组织中的分布

目的：探讨转录因子上游刺激因子（USF）在大鼠不同正常组织中的分布情况.方法：使用大鼠多种组织构成的组织芯片,免疫组织化学检测USF1、USF2在各组织及其细胞中的表达.结果：USF是体内广泛分布的转录因子,除血管内皮、肾小球细胞外在大多数上皮细胞有强的表达.在肌肉组织主要表达于骨骼肌和心肌组织,平滑肌则只有USF2表达;结缔组织中,表达阴性或弱阳性;在卵巢组织中,USF1在发育卵泡和闭锁卵泡均为强阳性表达,USF2则在闭锁卵泡中,强阳性表达,在发育卵泡则表达较弱.结论：USF是大鼠体内广泛分布的转录因子,可能参与调控一般细胞生理活动的基因表达.     

不同转移潜能肺癌细胞的基因表达差异

目的：了解肺癌转移过程中基因的参与，进而为肺癌诊断、治疗提供依据。方法：选用5个不同转移潜能的体外培养肺癌细胞株H1299、HLAMP、PGCL3、PAa和NiS作为研究对象，以永生化的支气管上皮细胞16HBE为对照，采用含有800个基因探针的肺癌相关基因芯片LUs，研究各细胞株基因表达的差异。结果：5个肺癌细胞株差异表达的基因共有：355个，5株细胞共同上调或下调的基因仅有4个，基因表达的变化在不同细胞株之间明显表现出多态性。其中4个转移株与无转移的NiS间比较，有9个基因表达差异；3个高转移细胞株H1299、HLAMP、PGCL3与和低转移细胞株PAa和无转移NiS之间比较，有13个基因表达差异。这些基因大多是膜蛋白、细胞骨架蛋白，或和细胞信号转导有关，基因功能复习提示和肿瘤转移有可能的关联性。结果还显示和细胞膜陷窝结构有关的蛋白可能在肺癌转移过程中具有较大的意义。结论：基因芯片方法对于筛选肺癌转移相关基因有独特的优势；获得的差异表达基因具有较强的代表性，对这些基因的进一步分析可能会对肿瘤转移机理的研究产生重要的影响。     

肿瘤抑制基因p53的结构与功能保守性的比较分析

目的　比较分析不同物种来源的p5 3蛋白的系统发育规律及其结构与功能的保守性。方法　多序列比较、结构域比对和二级结构预测等生物信息学分析及系统发生树构建。结果　模式生物间p5 3蛋白有较高同源性 ,而且都具有p5 3蛋白的典型结构特征 ;各结构域中维持功能活性必需的氨基酸残基几乎不变 ,二级结构折叠元件的组成和分布也十分类似 ;最大似然法和邻接法两种方法推导出的分子系统进化树基本一致。结论　物种来源不同的p5 3蛋白同属于一个有相似功能作用的蛋白家族。从比较生物学新的角度 ,进一步说明了p5 3蛋白的结构和功能保守性。     

肺癌细胞株肺癌相关基因差异表达分析

目的通过芯片技术检测肺癌细胞株基因差异表达探讨肺癌的发病机制,并尝试寻找可能用于肺癌的预防、诊断和治疗的基因。方法对四株肺癌细胞(PGCl3、PAa、H1299、NiS成瘤)作肺癌相关基因的芯片检测,分析其与对照组永生化细胞株(16HBE)之间的表达差异。从检测结果中选取了三个基因作RT-PCR鉴定。结果H1299有89个基因表达改变,PAa有59个基因表达改变,PGCL3有93个基因表达改变,NiS成瘤有78个基因表达改变。经RT-PCR鉴定的三个基因:L6A在各肿瘤细胞株中呈高表达,RXRB在各肿瘤细胞中呈低表达,vimentin除在无恶性转移株PAa中无显著差异外,在其他肿瘤细胞株中均呈高表达,结果与芯片结果一致。结论肿瘤的发生发展是多基因多阶段相互作用的结果,L6抗原可能作为肿瘤的特异性标记物,vimentin可能与肺肿瘤的转移有关,RXRB的表达水平可能与肿瘤细胞的分化相关。