活体生物光学分子成像技术研究进展

活体生物体内光学成像技术是近年发展起来的新兴技术,在生命科学研究中占有重要地位。其原理为采用荧光报告基团或荧光染料标记的目的细胞,通过灵敏的光学成像仪器,检测活体生物体内细胞生物学行为。按发光模式可分为生物自发光和荧光激发光两类。相对于传统光学成像技术,具有无创、可多次重复、实时活体成像、灵敏、安全等优势,目前已成为肿瘤诊断、治疗、疗效判断及抗肿瘤药物筛选等研究领域中不可缺少的工具。     

诱发荧光技术及其在肿瘤病理诊断和鉴别诊断中的应用研究

诱发荧光技术是指人体组织细胞(如APUD细胞、黑色素细胞、肾上腺髓质细胞、肥大细胞、视网膜母细胞等)内的一些代谢物质(如5-HT、儿茶酚胺)及其中间产物(如多巴胶等)经某些试剂(如甲醛、乙醛酸)处理后,在荧光显微镜下能发出某些特定的荧光。随着现代科学技术的不断发展,荧光显微镜已在很多单位广泛使用,从而为应用诱发荧光技术对某些肿瘤的快速诊断和鉴别诊断提供了一种简单、实用、经济的新方法。近年来,我科应用这一技术对恶性黑色素瘤和类癌癌细胞的荧光进行了观察,现介绍如下。     

荧光定量PCR法和ELISA检测儿童呼吸道感染病原体的意义

儿童呼吸道感染是儿童秋冬季节常见的疾病,临床症状以发热、咳嗽、流涕等为主,近年来除了常见的细菌与病毒感染以外,肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)和肺炎衣原体(chlamydiapliel pneumoniae,CP)也逐渐成为急性呼吸道感染的主要病原体.由于该两类病原体的分离培养方法复杂,所需时间长,不便于临床快速诊断[1],早期检测出病原体而成为临床诊断棘手的问题.目前大多数医院对该两类病原体的检测仍以血清学方法(如ELISA)为主.但近年来随着分子生物学技术的发展,聚合酶链(PCR)反应,尤其是荧光定量PCR技术的广泛使用[2],为病原体的检测提供了新的技术与手段.本研究拟同时采用ELISA和荧光定量PCR技术对儿童呼吸道感染病原体进行检测,比较2种方法对病原体检出的阳性率、一致性和优越性.     

荧光抗体快速诊断流感的实验室研究

在病毒分离与鉴定工作中,为力求迅速、敏感和具有特异性,采用荧光抗体技术是有价值的。关于应用荧光抗体技术快速诊断流感的实验室研究,已有许多报道,均证实特异荧光出现于血球吸附阳性和细胞病变之前。早期主要在细胞核内,随后胞核、胞浆均有,或仅在胞浆内有特异荧光颗粒出现;认为经此技术鉴定后,无须再作进一步试验(如血球凝集抑制试验、补体结合、中和等),以免耗时过长。     

眼底荧光血管造影技术在不同眼科疾病诊断的应用

目的:探讨分析眼底荧光血管造影技术在不同眼科疾病诊断中的应用价值。方法:回顾性分析采用眼底荧光血管造影技术诊断的208例眼底有病变或怀疑有病变患者的临床资料。结果:不同年龄阶段眼科疾病的眼底荧光血管造影确诊率基本相同,共有六种眼科疾病:视网膜血管病变、黄斑病变、色素上皮病变、视神经乳头病变、脉络膜病变和外伤;不良反应发生率为4.33%。结论:眼底荧光血管造影技术是一种可用于不同年龄及不同眼科疾病诊断的安全有效的检查方法。     

用X、Y双色探针行人胚分裂球植入前诊断

目的:运用X?Y双色探针行人类胚胎分裂球植入前诊断, 探讨荧光原位杂交技术在人类胚胎植入前诊断中的应用价值?方法:对常规获得的胚胎, 采用胚胎活检或直接行胚胎透明带的溶解,获取胚胎分裂球采用X?Y双色着丝粒探针进行荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)分析?结果:FISH分析成功率为79.49%,有价值结果获得率为23.98%?采用活检方法固定率?杂交率?完整信号率和有价值结果获得率分别为84.06%?77.59%?33.33%?21.74%;直接消化透明带固定率?杂交率?完整信号率和有价值结果获得率分别为77.17%?80.61%?40.51%?25.20%?两者相比无明显差异?结论:X?Y双色探针荧光原位杂交技术适用于胚胎植入前单个胚胎分裂球的遗传学诊断?     

实时荧光RT-PCR检测儿童流感病毒

目的对湛江地区的流感病毒感染情况进行调查,采用实时荧光RT-PCR技术快速检测流感病毒,用于流感的诊断。方法收集湛江地区2009年具有流感样症状患者的鼻咽拭子等标本351份,采用实时荧光RT-PCR技术检测标本中的流感病毒,与酶免疫分析技术（EIA）方法进行对照。结果 351例标本中,A、B型流感病毒阳性检出率分别为8.3%（29/351）和3.1%（11/351）,本方法与EIA法具有较高的相关性和符合率,均可用于流感病毒的早期诊断。结论实时荧光RT-PCR技术均可用于儿童流感病毒的临床诊断。     

肿瘤固有荧光诊断子宫颈癌

采用肿癌固有荧光诊断技术，检测宫颈共３０４８例，检测结果荧光阳性１９例，经病理证实为宫颈癌１７例，出现２例假阳性，其荧光诊断与病理诊断的符合率为８９％。检测结果荧光可疑１６例，经进一步检查和作活组织病理检查发现其中有２例为宫颈鳞癌早期。说明荧光检测不仅可用于宫颈癌的诊断，还可以用于宫颈癌的早期诊断，以提高宫颈癌的治愈率和生存率。     

免疫荧光直接法在肾穿中的应用体会

免疫荧光技术又称荧光抗体法,是利用荧光色素标记抗体与组织切片或细胞涂片中相应抗原反应,形成抗原与抗体的复合物,借助紫外光激发荧光色素,在荧光显微镜下观察发出荧光的抗原抗体复合物,检测出抗原.免疫荧光直接法对肾小球疾病的病理诊断和研究是不可缺少的方法之一.     

实时荧光定量PCR快速检测肠道病毒EV71

目的建立荧光定量PCR技术用于检测肠道病毒EV71。方法临床诊断或疑似为手足口病病例的咽拭子或肛拭子387份,采用荧光定量PCR技术检测EV71病毒的感染情况。结果 EV71病毒的感染率为50.90%。年龄为2个月～6岁,其中,男性为231例,感染率为51.95%（120/231）;女性为156例,感染率为49.36%（77/156）,最小感染者5个月,最大感染者6岁。结论实时荧光定量PCR技术可用于肠道病毒EV71的检测,有利于感染者的早发现并对患者治疗提供依据。     

活体荧光成像技术在肿瘤研究中的应用

活体动物体内荧光成像采用荧光报告基团标记细胞或DNA,通过非常灵敏的光学仪器检测,可观测活体动物体内标记肿瘤细胞的生长、转移和肿瘤血管生成,从而为肿瘤诊断方法及抗癌药物的研发提供信息.     

S-Detect技术与弹性成像技术联合应用对乳腺BI-RADS4类结节良恶性评估的诊断价值

〗［摘要］ 目的探讨S-Detect技术与弹性成像技术联合应用对乳腺影像学报告及数据系统4（Breast Imaging Reporting and Data System 4,BI-RADS4）类结节良恶性评估的诊断价值。 方法采用二维超声、弹性成像技术及S-Detect技术对110例女性患者诊断为BI-RADS4类120个乳腺结节病灶进行良恶性鉴别,以术后病理诊断结果作为金标准,对比分析二维超声单独联合弹性成像技术,以及同时联合采用S-Detect技术与弹性成像技术的诊断效能。 结果二维超声单独联合弹性成像技术诊断的敏感度为73.68%,特异度为82.92%,准确度为80.00%;而同时联合采用S-Detect技术与弹性成像技术诊断的敏感度为86.84%,特异度为87.80%,准确度为86.66%。二维超声单独联合弹性成像技术、同时联合采用S-Detect技术与弹性成像技术诊断乳腺BI-RADS 4类结节病灶良恶性的ROC曲线下面积分别为0.746和0.942（P＜0.05）。二维超声同时联合采用S-Detect技术与弹性成像技术诊断效能优于单独联合弹性成像技术（P＜0.05）。 结论S-Detect技术联合弹性成像技术可作为一种新型的乳腺二维超声补充诊断手段,辅助二维超声诊断可明显提高对BI-RADS 4类乳腺结节的良恶性鉴别诊断的效能。     

荧光腹腔镜的工作原理及应用

腹腔镜作为治疗人体内器官的重要工具,其显著的疗效和微创的优点已得到医学界公认,随着腹腔镜技术的改进和成熟,出现了荧光辅助腹腔镜检查,该技术检查可能成为诊断微小分散、隐藏或肉眼无法看见的肿瘤转移病灶治疗的新手段。简要解析荧光腹腔镜的工作原理和应用。     

结核分枝杆菌免疫层析和荧光PCR联合检测方法的应用

目的探讨一种基于免疫层析法和荧光PCR DNA定性检测技术的肺结核多重诊断模式。方法以208例疑似结核患者为研究对象,采用免疫层析法检测其血清特异性抗结核抗体,同时采用荧光PCR方法检测其痰液中结核分枝杆菌DNA,并将两种方法的检测结果进行比较。结果免疫层析法检测结果显示,16份血清标本呈阳性,阳性率为7.7%;荧光PCR方法检测结果显示,14份痰液标本呈阳性,阳性率为6.7%。两种检测方法协同诊断率为100.0%。结论结核分枝杆菌免疫层析法和荧光PCR法相结合的实验室诊断模式有助于肺结核的快速诊断和传染风险性评估。     

DNA荧光原位杂交(FISH)技术在血液肿瘤诊断中的运用

荧光原位杂交技术是一种非常有用的分子细胞遗传学工具,特别是对一些染色体数目异常和复杂染色体异常的诊断,架起了染色体显带技术和分子遗传学之间的桥梁。DNA荧光原位杂交（FISH）技术是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示DNA序列位置的方法[1]。该技术具有快速、安全、灵敏度高以及探针可长期保存等特点,目前已广泛应用于各种细胞遗传学、肿瘤生物学及基因定位、基因作图、基因扩增,包括产前诊断及哺乳动物染色体进化研究等领域血液肿瘤检测,血液肿瘤是我国十大高发肿瘤之一,细胞遗传学对肿瘤分型、诊断、治疗和预测预后都具有重要的意义。     

α-地中海贫血种植前基因诊断妊娠成功

【目的】探讨种植前基因诊断的临床应用。【方法】对 1例夫妇均为东南亚缺失型α 地中海贫血携带者 ,经超排取卵、卵母细胞单精子显微注射受精及胚胎细胞活检 ,吸取的单个卵裂球采用针对α SEA基因的 gap PCR引物和荧光探针用荧光定量PCR技术进行诊断 ,将诊断为不致病的 3个胚胎进行宫腔内移植。【结果】胚胎移植后 7周B超诊断单胎妊娠 ,18周羊膜腔穿刺产前诊断证实为不致病胎儿。【结论】应用成熟的显微操作技术进行胚胎细胞活检 ,活检的单个卵裂球用荧光定量PCR技术进行诊断 ,获得国内首例α 地中海贫血胚胎种植前基因诊断后妊娠成功。     

内镜下激光激发自体荧光在胃癌及其癌前病变诊断中的应用

目的研究内镜下激光激发自体荧光对胃癌及其癌前病变诊断的意义。方法有上消化道症状、行内镜、激光荧光和病理活检的198例患者,采用医用激光荧光快速诊断仪测定胃癌及其癌前病变的自体荧光光谱,并与组织病理结果比较。结果20例经病理检查诊断为胃癌的患者中,16例可检测到肿瘤特征峰,符合率为80.0%;22例经病理诊断为胃黏膜非典型和/或肠化患者中,19例检测到肿瘤特征峰,符合率为86.4%。156例胃溃疡及慢性浅表性胃炎患者中,141例未检测到肿瘤特征峰。自体荧光检查与病理学检查的总符合率为88.9%,对胃癌及其癌前病变的敏感性为87.7%,特异性为90.8%。结论激光荧光光谱测定对胃癌及其癌前病变的诊断具有较高的敏感性及特异性,可以作为辅助检查手段。     

军团病和毛细胞性白血病

本文报道一组33例免疫抑制的患者,因急性发热性肺炎住血液科。通过间接荧光抗体技术进行特异性血清学试验,4例诊断为军团病。其基础疾病,3例为毛细胞性白血病,一例是同种骨髓移植患者。从所观察的临床症状和体征,及经气管采取之标本,未发现任何其它病原菌,且在红霉素治疗下,病情进展。但在研究期间,未采用直接荧光抗体和/或培养     

前部缺血性视神经病变的FFA及视野临床分析

目的:探讨眼底荧光造影和视野检查对前部缺血性视神经病变的诊断作用。方法:对确诊为前部缺血性视神经病变45例患者50只眼行眼底荧光血管造影检查、视野检查等,对其结果进行分析。结果:50眼眼底荧光血管造影早期视盘部分或大部分荧光充盈迟缓或缺损,伴有相应的视野缺损。结论:前部缺血性视神经病变的诊断应结合临床症状、眼底、视野和眼底荧光血管造影检查结果。     

PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血基因诊断中的应用

目的探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血基因诊断中的诊断效能。方法采用PCR-流式荧光杂交技术对381例疑似地贫患者标本进行α和β-地贫基因检测,同时以常用的多重Gap-PCR和PCR-RDB为对比方法,比较两者在地贫基因诊断中的结果是否一致。结果采用PCR-流式荧光杂交法对381例疑似地贫样本进行检测,检出地贫165例,检出率为43.31%,包括α-地贫115例、β-地贫43例和αβ-复合地贫7例。α-地贫中检出的基因型主要为--~(SEA)、-α~(3.7)和-α~(4.2);β-地贫中检出CD41-42突变频率最高,其次是IVS-II-654与CD17。PCR-流式荧光杂交法与Gap-PCR技术和PCR-RDB技术相比较,其灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%。两种方法检测结果一致性很好。结论 PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速、结果可靠,适合于地中海贫血的基因诊断。