松弛素对TGF-β诱导的内皮细胞间质化的抑制作用

目的 ：探讨松弛素（RLX）对TGF-β诱导的内皮细胞间质化现象的影响。方法：采用体外分离的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）作为体外细胞模型,通过TGF-β10 ng/mL诱导内皮细胞间质化,100 ng/mL和200 ng/mL RLX分别预处理,再与TGF-β联合培养48 h。光镜下观察细胞形态学改变,CCK-8实验和transwell实验检测细胞增殖和迁移能力,免疫荧光单双染技术观察vimentin和CD31的表达变化,蛋白免疫印迹技术观察各实验组vimentin、CD31、ve-cadherin和α-SMA的蛋白表达。结果：阴性对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β诱导组细胞形态向梭形转化,呈扩散迁移趋势。与阴性对照组相比,TGF-β诱导组细胞增殖、迁移能力明显增强;而RLX可抑制TGF-β诱导的增殖和迁移。免疫荧光单染结果显示,与阴性对照组相比,TGF-β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin明显上升;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组CD31表达上调而vimentin表达下调。免疫荧光双染结果显示,阴性对照组以内皮性质的细胞为主,仅存在少量的CD31和vimentin双阳性细胞;TGF-β诱导组双阳性细胞明显增多;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组间质效应的双阳性细胞下调,而内皮效应的双阳性细胞增多。蛋白免疫印迹结果显示,与阴性对照组相比,TGF-β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31（0.36±0.076 vs 0.88±0.086）和ve-cadherin（0.54±0.046 vs 1.09±0.13）表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin（0.72±0.102 vs 0.21±0.081）和α-SMA（0.88±0.084 vs 0.24±0.046）明显上升（P＜0.05）;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组CD31（0.67±0.09、0.59±0.12 vs 0.36±0.076）和ve-cadherin（0.85±0.09、0.72±0.064 vs 0.54±0.046）表达上调,而vimentin（0.56±0.011、0.48±0.06 vs 0.72±0.102）和α-SMA（0.65±0.081、0.54±0.032 vs 0.88±0.084）表达下降（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论：RLX可抑制TGF-β诱导的内皮细胞向间质化细胞转化。     

腺病毒介导的基质细胞衍生因子-1对心肌梗死大鼠心脏功能的影响

目的：探索腺病毒介导的基质细胞衍生因子-1对心肌梗死心脏功能的影响．方法：采用成年SD大鼠,经左冠状动脉前降支结扎建立急性心肌梗死模型．术后1h,将1×10^10 PFU Adv—SDF-1分6个点注射到心肌梗死部位及其周边区域．移植后4wk测定心脏功能,随后取材、连续冰冻切片,观察CD133和CD31的表达以及心肌组织形态学．结果：注射在心肌梗死部位的Adv—SDF-1高表达,促进了CD133和CD31阳性细胞迁移到心肌梗死部位,增加了心肌梗死部位毛细血管的密度（Ad—SDF-1组与模型组和Ad—LacZ组相比：32±4vs15±2,16±3,P〈0．05）,保护并促进了心肌再生,从而缩小梗死区域面积,心室壁的厚度和弹性增加;心室胶原含量减少[Ad—SDF-1组与模型组和Ad—LacZ组相比：（41±3）％vs（78±8）％,（76±7）％,P〈0．05],延缓心室重构而改善心脏的收缩和舒张功能．结论：SDF-1过表达通过促进血管新生改善心肌的血供,达到改善心脏功能的目的．     

囊素五肽对人肺成纤维细胞细胞外基质及转化生长因子β1／Smad信号通路的影响

目的观察囊素五肽（BP5）对转化生长因子β1（TGF-1）刺激的人肺成纤维细胞分泌的细胞外基质以及对转化生长一β1／Smad信号通路的影响,探讨囊素五肽抗肺纤维化的机制。方法HLF细胞分为阴性对照组、TGF- β1 刺激组、TGF-β1＋BP5药物干预组（三组均用TGF-β1刺激后分别使用不同浓度BP52．5、5及10μg／mL进行干预）。免疫荧光法测定细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,Westernblot方法检测collagen—Ⅰ、p-Smad2／3、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。结果TGF—β1刺激细胞经免疫荧光标记显示α-SMA阳性表达,说明人肺成纤维细胞在TGF-β1刺激下转化为肌成纤维细胞（MF）,TGF-β1刺激同时加BP5不同药物浓度组中,10μg／mL的BP5药物浓度能显著减少细胞增殖转化。经TGF-β1刺激后,人肺成纤维细胞collagen—Ⅰ[（1．402±0．158）比（0．605±0．367）]、p-Smad2／3[（1．457±0．111）比（0．815±0．039）]、p-Smad3[（1．320±O．147）比（0．623±O．128）]蛋白表达较刺激前表达明显增多（P〈0．01）,Smad7表达较对照组降低[（0．613±0．107）比（0．865±0．063）,P〈0．05）];与TGF-β1处理组相比,BP5可抑制由TGF-β1刺激人肺成纤维细胞引起的collagen—Ⅰ蛋白[（0．718±0．049）比（1．402±0．t58）]、p-Smad2／3[（0．696±0．031）比（1．457±0．111）]p-Smad3[（0．766±0．006）比（1．320±0．147）]表达上调（P均〈0．01）,而Smad7的蛋白表达明显增加[（1．237±0．173）比（0．614±0．107）,P〈0．05]。结论BP5可能通过抑制TGF—β1／Smads信号通路激活,下调TGF-β1刺激下人肺成纤维细胞的collagen-Ⅰ及d—SMA蛋白的表达,提示BP5可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

ILK 介导 TGF-β／Smad 通路诱导肾小球内皮细胞-间充质细胞转分化的研究

目的：观察 TGF‐β1在肾小球内皮细胞‐间充质细胞转分化（EndM T ）中的作用,探讨 ILK 介导 TGF‐β／Smad 信号通路在 EndM T 过程中的作用。方法以体外培养人肾小球内皮细胞为研究对象,分为空白对照组、TGF‐β112．5、25．0、50．0 ng／mL 组、TGF‐β150．0 ng／mL ＋Ⅰ型受体抑制剂（LY364749）5．0μmol／L 组和 ILK 抑制剂（QLT‐0267）5．0μmol／L 组,各组细胞在上述处理因素下培养48、72 h ,以 RT‐PCR 测定 P‐Smad2／3和 ILK mRNA 的表达水平,以 Western blot 测定 P‐Smad2／3、ILK 及E‐cadherin 、CD31、α‐SMA 和 FSP‐1蛋白的表达水平。结果（1）TGF‐β1可剂量依赖性诱导 HGEnCP‐Smad2／3和 ILK mRNA 水平显著升高（P＜0．01）以及 P‐Smad2／3、ILK 、α‐SMA 和 FSP‐1蛋白水平显著升高（P＜0．01）,但是剂量依赖性诱导 E‐cadherin 和CD31蛋白水平显著降低（P＜0．01）;（2）TGF‐β1Ⅰ型受体抑制剂和 ILK 抑制剂可显著抑制 TGF‐β1诱导 ILK mRNA 水平的升高（P＜0．01）以及 ILK 、α‐SMA 和 FSP‐1蛋白水平的升高（P ＜0．01）,抑制 E‐cadherin 和 CD31蛋白水平的降低（P＜0．01）;（3） TGF‐β1Ⅰ型受体抑制剂可显著抑制 TGF‐β1诱导 P‐Smad2／3 mRNA 和蛋白水平的升高（P ＜0．01）,但是 ILK 抑制剂对 P‐Smad2／3 mRNA 和蛋白无显著影响（P＞0．05）。结论 TGF‐β1可促进肾小球内皮‐间充质细胞转分化,ILK 作为下游效应因子介导 TGF‐β／Smad 信号通路参与了该过程,可能在肾脏纤维化过程中发挥重要作用。     

TGF-β3在臀肌挛缩症患者中的表达及其作用

目的探讨转化生长因子-β3（transforming growth factor—β3,TGF—β3）在臀肌挛缩症（gluteal muscle contracture,GMC）患者臀肌挛缩带中的表达及其意义。方法分别采用实时定量PCR和免疫组化检测23例臀肌挛缩症患者臀肌挛缩带和挛缩带旁臀大肌组织中TGF—β3,的表达水平。结果挛缩带中TGF-β3,弥漫性分布于成纤维细胞和血管内皮细胞中,呈强阳性。TGF-β3 mRNA在挛缩带中的表达水平明显高于挛缩带旁臀大肌组织的表达水平,差异有统计学意义（1．76±0．63 vs 1．28±0．49,P〈0．05）。结论臀肌挛缩症患者臀肌挛缩带中TGF—β3,表达水平升高,TGF—β3可能参与了臀肌挛缩症的发病过程。     

罗格列酮对OLETF大鼠肺组织TGF-β1／JNK信号转导途径的影响

目的 探讨罗格列酮对自发性2型糖尿病OLETF大鼠肺组织转化生长因子-1β（TGF-β1）／c—Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导途径的影响。方法将16只30周龄成模OLETF大鼠分为OLETF组和罗格列酮治疗组（OLETF／L纽）,设LETO大鼠8只为对照组。免疫组织化学分析肺组织TGF—p1、磷酸化（P）-JNK、I型胶原表达。结果与LETO组大鼠相比,OLETF组大鼠肺组织TGF—β1、P—JNK表达（7．4438±0,6397vs1．1844±0．2066、5．7025±0．5530VS1．5875±0．1727）及Ⅰ型胶原的阳性面积比、平均光密度（0．1705±0．0110VS0．0550±0．0048、0．0597±0．0066VS0．0292±0．0019）均显著增加（P〈0．05）。与OLETF组大鼠相比,OLETF／L组大鼠肺组织TGF-β1、PJNK表达（1．8398±0．3591VS7．4438±0．6397、1．7500±0．1690vs5．7025±0．5530）及Ⅰ型胶原的阳性面积比、平均光密度（0．0856±0．0068VS0．1705±0．0110、0．0351±0．0059VS0．0597±0．0066）均显著减少（P〈0．05）。结论罗格列酮可能通过调控TGF-β1／JNK信号转导途径改善糖尿病肺纤维化。     

糖尿病大鼠肾皮质局部转化生长因子β1、波形蛋白和结蛋白的表达

目的 探讨糖尿病大鼠肾皮质中转化生长因子β1（TGF-β1）、波形蛋白（vimentin）和结蛋白（desmin）表达的变化规律及其相互关系。方法 建立STZ诱导的SD大鼠糖尿病模型;用RT-PCR法检测造模成功后第3、7、14、30、60和90天糖尿病大鼠肾皮质中TGF-β1、vimentin和desmin mRNA的表达水平。结果 ①糖尿病大鼠肾皮质TGF—β1和vimentin mRNA的表达分别从模型建立后第7天和第14天起逐渐增多,desmin mRNA的表达从第14天起却逐渐减少,这种变化持续至整个实验期末,糖尿病大鼠和对照组大鼠相比差异具有显著性;②糖尿病大鼠肾皮质TGF—β1和vimentin的mRNA表达呈显著正相关,TGF—β1和desmin的mRNA表达却呈显著负相关,desmin和vimentin的mRNA表达也呈显著负相关。结论 糖尿病大鼠TGF—β1在肾皮质局部表达增多可能促进肾小管上皮细胞向成纤维细胞转化。     

TGF-β1在低氧诱导肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化中的作用

目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAEC）向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1（TGF—β1）在此转分化过程中的作用。方法将经免疫磁珠法（用血小板内皮细胞粘附分子1做免疫分选标记）纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧（含21％O2、5％CO2、74％N2）和低氧（含1％O2、5％CO2、94％N2）条件下培养1、4、7d，用核酸干扰法（RNAi）阻断TGF—β1的表达，用逆转录-聚合酶链式反应法（RT—PCR）和Western blot分别检测各组细胞TGF—β1 mRNA和蛋白的表达，并用免疫细胞化学法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α—SM—actin）的表达，结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化。结果低氧可增加肺动脉内皮细胞TGF—β1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．05），RNAi沉默TGF—β1基因表达后可明显降低其mRNA和蛋白含量（P〈0．05），随着低氧培养时间的延长，肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加（P〈0．05）；阻断TGF—β1表达后，平滑肌样细胞的转化率明显降低（P〈0．05）。结论肺动脉内皮中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞；低氧可明显促进转分化，TGF-β1在此转分化过程中起重要作用。     

槲皮素对TGF-β诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化的影响

目的探讨槲皮素对TGF—β诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化的影响。方法在体外分别采取槲皮素及阴性对照DMSO干预经或不经TGF—B（10ng／mL）诱导的人肺癌A549细胞12、24、48、72h后,MTT法检测不同浓度槲皮素对A549细胞增殖的影响;RT—PCR和Westemblot实验检测上皮间质转化标志性因子E—cad—herin、N—cadherin、Vimentin的表达变化。结果与阴性对照组相比,不同浓度槲皮素作用的实验组A549细胞的增殖能力降低,同时在mRNA和蛋白水平E—cadherin上调以及N—cadherin、Vimentin的表达下调（P〈0．05）。结论槲皮素能够抑制TGF—β诱导的人肺癌A549细胞的增殖,且呈时间一剂量依赖性,阻止A549细胞发生上皮间质转化,降低A549细胞的迁移侵袭运动能力。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠肾成纤维细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂阻断转化生长因子（TGF）β1致肾间质纤维化作用的机制，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株（NRK／49F），观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白（FN）mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察PPARγ激动剂对TGFβ1诱导的FN和Smad蛋白表达的影响。结果（1）与1ng／ml TGFβ1组比较，5ng／ml TGFβ1组FN mRNA表达量增加了3．6倍（P〈0．01），5ng／ml TGFβ1刺激24h时较刺激前增加了2．4倍（P〈0．01），TGFβ1诱导FN mRNA表达呈一定范围内的剂量（0—5ne／ml）和时间（0—24h）依赖效应。（2）与5ng／ml TGFβ1组比较，10μmol 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组FN mRNA表达量分别降低37．3％、41．5％和22．7％，FN蛋白表达量分别降低20．6％、38．1％和28．6％。（3）5ng／ml TGFβ1以时间（0．2h）依赖方式诱导p-Smad2／3蛋白表达量增加，作用1h时达到高峰；5ng／ml TGFβ1组p-Smad2／3蛋白表达量较对照组和2ng／ml TGFβ1组分别增加3．42倍和0．97倍。（4）15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组p-Smad2／3蛋白表达量与5ng／ml TGFβ1组比较分别降低61．2％、53．0％和59．S％。3种药物干预组之间p-Smad2／3蛋白表达量比较差异无统计学意义，各组Smad2和Smad3蛋白表达量无显著变化。结论PPART激动剂可以抑制TGFβ1诱导的肾间质成纤维细胞细胞外基质合成，其机制可能与阻断TGF-β1／Smad信号途径有关，提示PPARγ激动剂具有抗肾间质纤维化的潜在作用，可能成为延缓终末期肾功能衰竭的治疗新手段之一。     

丙泊酚对高糖诱导的肾小球系膜细胞转化生长因子－β和核转录因子－κB 表达的影响

目的：观察丙泊酚对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子－β（TGF －β）和核转录因－κB （NF －κB）表达的影响。方法在体外培养的系膜细胞上进行研究。设立正常葡萄糖对照组（糖浓度为5．6 mmol／L）、高糖组（30 mmol ／L）以及 PDTC 干预组（100μmol／L）和分别含丙泊酚12．5、50、100μmol／L 的干预组。用 ELISA法检测培养细胞上清中 TGF －β蛋白,以实时荧光定量 PCR 检测 TGF －βmRNA 的表达,Western blot 方法检测系膜细胞内磷酸化 NF －κBp65（p －NF －κBp65）蛋白的表达。结果高糖诱导系膜细胞24 h 后,TGF －β蛋白分泌明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚（12．5、50、100μmol ／L）对高糖诱导的系膜细胞分泌的 TGF －β的抑制作用随浓度的变化而变化;系膜细胞在低浓度葡萄糖水平下可低水平表达 TGF －βmRNA,高糖作用24 h 后,TGF －βmRNA 表达明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚可明显下调高糖诱导的 TGF －βmRNA 的表达（P ＜0．01）;在高糖作用1 h 后,系膜细胞内的 p －NF －κBp65蛋白表达增强（P ＜0．05）,丙泊酚能够部分抑制高糖诱导的系膜细胞 p －NF －κBp65蛋白增多（P ＜0．05）。结论在体外含高糖培养条件下,丙泊酚可以抑制 TGF －βmRNA 及蛋白在系膜细胞的表达,部分逆转高糖诱导的系膜细胞 NF －κB 的活化,提示丙泊酚对糖尿病肾病可能有抗炎、抗纤维化作用。     

骨髓基质干细胞来源的血管内皮细胞Angiogenin1，Angiogenin2基因的表达

目的：研究骨髓基质干细胞来源的血管内皮细胞表达成熟血管内皮细胞特异性基因,探讨为组织工程血管化提供种子细胞的可行性．方法：从SD大鼠后肢获取骨髓基质干细胞,进行体外扩增培养,取生长良好的第3代细胞体外诱导培养14d．细胞分诱导组（含内皮诱导因子VEGF和bFGF的完全血管内皮细胞条件培养基）和对照组（含M199普通培养基）．MTT法检测两组细胞增殖活性．免疫细胞化学法检测CD31,CD34蛋白的表达;RT—PCR检测细胞血管生成素1（Ang1）、血管生成素2（angiogenin2,Ang2）mRNA的表达．结果：MTT法检测发现,诱导组与对照组在1,2,3,4,5d5个时间点内,其细胞增殖活性无显著性差异（P1d=0．855,P2d=0．053,P3d=0．249,P4d=0．059,P5d=0．174）．免疫细胞化学检测结果CD34,CD31呈阳性表达．RT—PCR结果显示,诱导的血管内皮细胞表达成熟内皮细胞特异性基因Ang1,Ang2．结论：骨髓基质干细胞在一定诱导条件下可以表达血管内皮细胞特异性标志,可作为组织工程血管化理想的种子细胞．     

黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂抑制大鼠动脉移植慢性排斥反应的实验研究

目的观察黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂对大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应的影响。方法建立大鼠腹主动脉移植模型,移植后大鼠随机分为对照组、霉酚酸酯（MMF）组、黄芪多糖（APS）组和黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂（APS—CPS）组,同时设立假手术组。各组动物在饲养35d后,观察移植动脉的病理变化,分别用免疫组织化学和胶原纤维染色,观察移植动脉TGF—β1的表达、胶原蛋白合成;应用流式细胞术检测脾脏中CD4^＋、CD8^＋阳性T淋巴细胞。结果对照组血管内膜明显增厚,平滑肌细胞明显增生,胶原纤维增生明显;TGF—β1蛋白于内膜平滑肌细胞、单核细胞、动脉内皮细胞等均呈阳性表达。APS—CPS组血管壁三层结构清晰,内膜未见明显增生,胶原原纤维稀疏;TGF-β1表达较对照组明显减弱（P〈0．01）,且移植前后CD4^＋、CD8^＋阳性T淋巴细胞百分率、CD4^＋／CD8^＋比值均无明显变化（P〉0．05）。结论APS-CPS抑制大鼠动脉移植慢性排斥反应,能下调TGF-β1表达,抑制内膜平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成,维持CD4^＋／CD8^＋比值的正常。     

金雀异黄素对TGF-β1诱导大鼠肾系膜细胞CTGF表达的影响

目的了解金雀异黄素（genistein，Gen）对转化生长因子（TGF）β1诱导大鼠肾系膜细胞（MCs）结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。进一步探讨金雀异黄素抑制肾纤维化的机制。方法将体外培养的MCs分为4组：正常对照组，未加任何刺激因素；Gen组，Gen的终浓度分别为50、100μmol／L；TGF-β1组，终浓度为5ng／mL；TGF-β1＋Gen组，TGF-β1和Gen的终浓度分别同前。刺激MCs24h后，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内CTGFmRNA的水平，Westernblot法测定细胞内CTGF蛋白的表达。结果与对照组比较，Gen组CTGFmRNA的水平和蛋白的表达无显著性差异（P〉0．05），而TGF—β1组CTGFm—RNA的水平和蛋白的表达明显增加（P〈0．01）；与TGF-β1组比较，50μmol／L和100μmol／L的Gen能明显抑制TGF—β1诱导的CTGFmRNA的水平和蛋白表达，以100μmol／LGen效果最显著（P〈0．01）。结论Gen能部分抑制TGF—β1诱导CTGF的基因和蛋白的表达，提示金雀异黄素可能通过阻抑CTGF表达减少细胞外基质的积聚，具有潜在的抗肾纤维化作用.     

急性冠状动脉综合征患者调节性T细胞亚群Th3细胞的改变及临床意义

目的探讨调节性T细胞亚群Th3细胞在急性冠脉综合征（ACS）发病中的作用。方法32例急性心肌梗死（AMI）、37例不稳定型心绞痛（UAP）和31例稳定型心绞痛（SAP）患者为研究对象,采用流式细胞学检测外周血单个核细胞,并计算Th3细胞比例（CD4＋TGF-β1＋／CD4＋T细胞）,ELISA检测血浆中Th3相关细胞因子TGF-β1的表达水平。结果SAP组Th3细胞比例和TGF—β1表达水平显著高于AMI组和UAP组,相比较差异有统计学意义（P〈0．05）;而AMI组和UAP组Th3细胞比例和TGF-β1表达水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。Th3细胞的比例与TGF—β1的表达水平呈正相关（r=0．547,P〈0．01）。结论Th3细胞下调可能与ACS的发生和发展有关,Th3细胞可能成为预防和治疗ACS新靶点。     

siRNA沉默新生大鼠肺成纤维细胞转化生长因子-β1的表达及临床意义

目的利用RNA干扰技术（RNAi）抑制转化生长因子β1（TGF—β1）在新生大鼠肺成纤维细胞中的表达并探讨其临床意义。方法构建TGF—β1小分子干扰RNA（siRNA）重组表达载体,测序鉴定后转染新生大鼠肺成纤维细胞,应用RT—PCR检测其对TGF—β1mRNA表达的影响。结果实验组与对照组相比,TGF—β1mRNA的表达明显下调（P〈0．01）,其中以T1实验组的沉默效率最为显著（P〈0．05）。结论成功构建并筛选出能高效抑制TGF—β1表达的siRNA真核表达载体,有望成为临床治疗肺间质纤维化的新靶点。     

卡维地洛对慢性心力衰竭大鼠心肌酪氨酸羟化酶表达的影响

目的：评价卡维地洛（Carvedil01）对慢性心力衰竭（CHF）大鼠心肌酪氨酸羟化酶（TH）表达的影响．方法：应用阿霉素腹腔注射制作CHF大鼠模型,根据干预药物的不同随机分为Carvedilol治疗组（CHF—C组,n=9）,倍他乐克（Betaloc）治疗组（CHF-M组,n=9）,CHF安慰剂治疗组（CHF—P组,n=9）和正常对照组（NC组,n=6）．阿霉素应用第5周后采用灌胃给药途径,CHF,C组以Carvedilol 0．25mg／kg,1次／d进行干预;CHF-M组以Betaloc0．25mg／kg,10〈／a进行干预;CHF—P组和NC组加以食用淀粉0．25mg／kg,1次／d进行干预．10wk后透射电镜检测大鼠心肌超微结构,并采用RT-PCR和WesternBlot方法检测大鼠心肌TH表达水平．结果：大鼠心肌THmRNA和蛋白表达水平CHF—C组明显低于NC组[（0。94±0．31）US（1．18±0．39）,（0．91±0．50）vs（1．32±0．41）,均P〈0．05];但明显高于CHF—P组[（0．94±0．31）VS（0．47±0．12）,（0．91±0．30）US（0．41±0．14）,均P〈0．05];也明显高于CHF—M组[（0．94±0．31）掷（0。66±0。20）,（0．91±0．30）vs（0．58±0．19）,均P〈0．05]．结论：CHF大鼠心肌TH表达水平明显下调,Carve-dilol治疗能够阻止CHF心肌TH下调,有助于改善CHF大鼠心肌交感神经重构．     

正常大鼠肝脏祖细胞的分离和培养

目的探讨正常大鼠肝脏祖细胞的分离和体外培养方法。方法选择正常Wistar大鼠,以CD90．1为标志物,通过免疫磁珠法分离正常肝脏内的祖细胞。对祖细胞进行体外培养,并诱导分化。结果CD90．1阳性细胞占肝脏非实质细胞的（0．32±0．03）％,流式细胞仪分析显示CD90．1阳性细胞占分离细胞的（98．26±1．37）％。刚分离的CD90．1阳性细胞中,CK-19表达呈强阳性,HNF-4a表达呈阴性;培养8周后,CK-19表达呈阴性,HNF-4a表达呈阳性。结论正常大鼠肝脏内存在祖细胞,可将其诱导分化为肝细胞。     

高尿酸通过miR-663下调转化生长因子β1抑制内皮细胞迁移

目的探讨高尿酸通过miR-663影响内皮细胞迁移功能的机制。方法培养人脐静脉内皮细胞系（EA．hy926）,用600μmol／L尿酸孵育48h,实时定量PCR检测miR-663的水平,并检测高尿酸患者血清中miR-663水平;利用双荧光素酶试验预测并验证miR-663的靶基因;检测高尿酸条件下内皮细胞中转化生长因子β1（transforming growth fator beta1,TGF—β1）的表达水平,利用miR-663抑制物、TGFB1siRNA转染及划痕实验观察高尿酸如何通过miR-663及其靶基因影响内皮细胞的迁移功能。结果高尿酸培养条件下内皮细胞中miR-663表达水平明显升高,高尿酸血症患者血清中miR-663的水平也高于正常人;双荧光素酶试验结果表明TGFB1的翻译水平受miR-663直接调控;高尿酸能明显抑制细胞的迁移能力,而高尿酸条件下TGF-β1的表达水平也明显下降,转染miR-663抑制物后,TGF-β1表达水平升高,内皮细胞迁移能力也明显改善,但是利用siRNA抑制TGF—β1的表达后,miR-663抑制物不能再促进内皮细胞的迁移。结论高尿酸通过miRNA-663下调TGF—β1而抑制细胞迁移。     

内皮细胞Jagged1下调促进PDGF诱导大鼠平滑肌细胞的增殖迁移

目的探讨内皮细胞Jagged1表达对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖迁移的调节作用。方法分离培养大鼠主动脉内皮和平滑肌细胞,将内皮接种于下室、平滑肌接种于上室建立细胞共培养体系,根据内皮是否行Jagged1小RNA干扰分为对照组、空载体组和Jagged1小RNA干扰组。用Western印迹法检测内皮细胞Jagged1基因的干扰效率。于下室加入PDGF(10μg/L)干预24 h后分别用3H-TdR掺入和平滑肌迁移计数检测平滑肌细胞增殖迁移能力,用Western印迹法检测平滑肌细胞α-SM-actin蛋白表达。结果与对照组相比,空载体组内皮细胞Jagged1蛋白表达差异无统计学意义,Jagged1小RNA干扰组内皮细胞Jagged1蛋白光密度相对值明显降低(0．26±0．02比0．67±0．02, P<0．05);PDGF 空载体组平滑肌3H-7dR掺入量和迁移数与PDGF组相比差异无统计学意义, PDGF Jagged1小RNA干扰组平滑肌3H-TdR掺入量和迁移数较PDGF组增高[3H-7dR掺入(23 074±2 702) cpm／well比(16 442±1 803) cpm／well,n=5, P<0．05;迁移(27±4) cells／field比(15±3) cells／field, n=5, P<0．05];PDGF 空载体组平滑肌α-SM-act in蛋白表达与PDGF组相比,差异无统计学意义, PD6F Jagged 1小RNA干扰组平滑肌α-SM-actin光密度相对值较PDGF组降低(0．25±0．06比0．49±0．04,n=3,P<0．05)。结论内皮细胞Jagged1下调促进PDGF诱导的平滑肌细胞增殖迁移,提示血管内皮细胞Jagged 1表达在维持平滑肌收缩表型、抑制平滑肌过度增殖迁移中起一定调控作用。