Fas配体基因导入对大鼠颈动脉损伤后新生内膜的影响

目的 :探讨腺病毒载体介导 Fas配体 （Fas L）基因导入对大鼠颈动脉损伤后新生内膜的影响。方法 :利用重组腺病毒载体将 Fas L 导入大鼠颈动脉球囊损伤的内膜 ,14d后观察其对新生内膜形成的影响。结果 :通过腺病毒载体介导导入 Fas L 基因的被球囊损伤的大鼠颈动脉 ,与 Ad- β gal基因的对照组相比较 ,14d后损伤血管新生内膜 /中膜面积比降低了 73%（P<0 .0 1）。结论 :Fas L 可抑制新生内膜的增生。     

全反式维甲酸对大鼠腹主动脉球囊损伤后新生内膜形成和内皮再生的影响

为研究全反式维甲酸对球囊损伤的大鼠腹主动脉内皮再生和新生内膜形成的影响 ,制作球囊损伤的大鼠腹主动脉剥脱模型 ,将 12只血管损伤的Wistar大鼠随机分为两组 ,对照组 (n =6 )腹腔内注射脂肪乳剂 (1mL/d) ,全反式维甲酸组 (n =6 )腹腔内注射溶解于脂肪乳剂的全反式维甲酸 [4 μg/ (g·d) ],球囊损伤 14天后 ,采用原位灌注固定取材 ,染色 ,进行组织学观察和形态学分析。结果显示 ,全反式维甲酸组球囊损伤血管段的内皮再生面积大于对照组 ,而新生内膜形成面积小于对照组。结果提示 ,全反式维甲酸具有促进损伤血管内皮再生和抑制新生内膜形成的作用     

PEP-1-SOD1对离体缺血再灌注损伤大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究细胞穿透肽PEP-1介导人铜锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD,SOD1)对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)细胞凋亡的影响。方法:采用Langendorff灌流系统对离体大鼠心脏进行停灌-复灌建立心肌缺血再灌注损伤模型。大鼠随机分为对照组、SOD1蛋白预处理组,25、50、100μmol/L PEP-1-SOD1蛋白预处理组。复灌结束后,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫荧光法检测心肌组织Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与对照组及SOD1组相比,各PEP-1-SOD1组心肌细胞凋亡指数(AI)显著下降,Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:PEP-1-SOD1融合蛋白可抑制离体心脏缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bax表达及下调Bcl-2表达有关。     

Fas Ligand基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :研究腺病毒介导FasLigand基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响。 方法 :常规分子生物学技术构建重组腺病毒Ad FasL、Ad βgal。免疫组化方法检测转染Ad FasL的大鼠血管平滑肌细胞FasLigand蛋白表达。用TUNEL法检测转染腺病毒的血管平滑肌细胞是否发生凋亡。结果 :10 0moiAd FasL转染大鼠血管平滑肌细胞 ,10 0 %细胞表达FasLigand蛋白 ,并发生凋亡。结论 :大鼠对Ad FasL转染诱导的凋亡易感。因此可以推断Ad FasL转染损伤后血管壁将减少血管平滑肌细胞积累。Ad FasL转染可能是有效的再狭窄治疗策略     

凋亡素VP3蛋白的原核表达及纯化

目的构建凋亡素VP3蛋白的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法采用PCR法自PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒中扩增VP3基因,运用靶向克隆酶将VP3基因插入线性pET15b,构建重组表达质粒pET-15b-VP3;经测序证实构建成功后转化E.coli Rosetta,表达凋亡素VP3蛋白;经Ni-NTA树脂亲和层析,对纯化产物进行SDS-PAGE、Western blotting分析鉴定。结果成功构建凋亡素VP3蛋白原核表达质粒,表达并纯化了分子量为13.6 kD的凋亡素VP3蛋白。结论凋亡素VP蛋白原核表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用凋亡素VP3蛋白进行抗肿瘤研究奠定了基础。     

反义AT1R腺病毒穿梭质粒的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的　构建含人血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)反义cDNA(ahAT1 )的腺病毒穿梭质粒 ,观察其在血管平滑肌细胞 (VSMC)中的表达 ,为ahAT1抗高血压、PTCA术后再狭窄及肺动脉高压的研究奠定基础。方法　用定向克隆法将人AT1RcDNA反向插入到穿梭质粒pACCMVPLPA的CMV启动子之下 ,即获得重组腺病毒穿梭质粒pAd/CMV .ahAT1。以脂质体包裹质粒并转染VSMC ,用免疫细胞化学方法和图像分析鉴定此质粒对VSMC表达AT1R的影响。结果　AT1RcDNA成功地反向插入到pACCMVPLPA载体 ,与对照组相比 ,pAd/CMV .ahAT1明显抑制了VSMC的AT1R表达 (P <0 0 5 )。结论　成功构建了携带反义人AT1RcDNA的腺病毒穿梭质粒 ,并在血管平滑肌细胞中得到了有效表达     

过氧化氢酶过度表达对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:用含过氧化氢酶基因的重组腺病毒(AdCat)转染人血管平滑肌细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法观察血管平滑肌细胞的增殖活性,同时用流式细胞术观察血管平滑肌细胞细胞周期的变化。结果:MTT比色法分析显示AdCat组明显抑制细胞增殖,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);细胞周期分析发现AdCat组G0/G1期分布百分率显著高于对照组,而S、G2/M期分布百分率显著低于对照组,细胞增殖能力下降(P<0.05)。结论:腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染能抑制人血管平滑肌细胞的增殖。     

外源性硫化氢对阿尔茨海默病大鼠学习能力及海马形态学的影响

目的:观察外源性硫化氢对阿尔茨海默病大鼠的空间学习记忆功能及海马组织形态学的影响。方法:通过双侧海马内注射Aβ25-35制作大鼠AD模型,再连续7 d脑室内给予硫氢化钠。采用Morris水迷宫测试大鼠认知功能,断头取脑行HE染色、透射电镜等方法观察海马神经元的结构变化。结果:海马内注射Aβ25-35后大鼠学习记忆能力明显下降,可见海马细胞排列紊乱,核边聚、碎裂。脑室内给予硫氢化钠可显著改善大鼠认知功能,减轻海马神经元病变。结论:外源性硫化氢对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病模型大鼠脑组织内海马退行性变神经元有保护作用,并能改善大鼠学习记忆能力。     

靶向克隆法构建PEP-1-VP3基因的原核表达载体

目的 利用PCR 产物靶向克隆法构建细胞穿透肽-凋亡素(PEP-1-VP3)的原核表达载体.方法 以PGEX-6P-1/TAT-VP3 质粒为模板,PCR 扩增VP3 基因的366 bp 片段,应用靶向克隆酶,将VP3 基因插入到线性pET15b-PEP-1,得到重组表达质粒pET15b-PEP-1-VP3,经过筛选,挑选出阳性克隆进行Nde Ⅰ和BamHⅠ双酶切图谱分析和重组质粒核苷酸序列分析以鉴定所构建的原核表达载体.结果 PCR产物经过电泳可见366 bp 特征性的VP3 片段,重组的质粒经过双酶切获得了一个大小为440 bp 的特征性PEP-1-VP3 片段,重组质粒测序证实VP3 cDNA 编码区成功地克隆入了pET15b-PEP-1,且其序列与GeneBank 中VP3 cDNA 序列完全一致.结论 靶向克隆法可快速、高效地构建PEP-1-VP3 基因的原核表达载体,为制备PEP-1-VP3 融合蛋白奠定基础.     

不同检测体系下骨髓源间充质干细胞迁移特征的比较

为研究不同检测体系下骨髓源间充质干细胞（MSC）迁移特征的差异，本研究利用Boydenchamber观察hSDF-1对MSC迁移的影响是否存在浓度依赖性；观察上述体系经50nmol渥曼青霉素（wortmannin），10μmol/L LY294002，50μmol/L PD98059，10μmol/L U73122，126μmol/L AMD3100以及50nmol/L维拉帕米等处理MSC后对MSC迁移的影响。结果表明：MSC迁移能力随着hSDF·1α浓度的递增而逐渐增强，并且发现Wortmannin、LY294002、PD98059、U70312、AMD3100、Verapamil对MSC迁移均有影响，其中U73122、AMD3100对MSC迁移阻断的效应最显著。结论：SDF-1／CXCR4所介导的MSC迁移可能与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C（PI-PLC）和蛋白激酶C（PKC）等信号途径有关。