补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症模型小鼠BK/BKB1R、PGF2α水平的影响

目的探讨补肾温阳化瘀方干预子宫内膜异位症痛经的作用机制。方法将75只BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组与西药组,每组15只。除假手术组外,其余各组小鼠均采用手术移植法复制子宫内膜异位症痛经模型。造模同时中药高、低剂量组分别每日予补肾温阳化瘀方61.67、15.42g/kg和戊酸雌二醇0.5 mg/kg,西药组每周2次予孕三烯酮0.4 mg/kg和戊酸雌二醇0.5mg/kg。于造模12天腹腔注射缩宫素后观察各组小鼠扭体反应,测量异位灶体积,检测小鼠血清血管舒缓激肽(BK)、前列腺素F2α(PGF2α)含量,免疫组化法和western blotting法检测子宫和异位灶缓激肽B1受体(BKB1R)蛋白表达,RT-PCR法检测子宫和异位灶BKB1R mRNA的表达。结果造模第12天,除假手术组外,其余各组小鼠均成功诱发扭体反应并见异位灶。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组与西药组扭体潜伏期均明显延长、扭体次数显著减少、异位灶体积减小(P0.05或P0.01)。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组、西药组血清BK、PGF2α含量显著下降,子宫及异位灶BKB1R蛋白及其mRNA表达显著降低(P0.01),且中药高剂量组子宫内膜异位灶BKB1R mRNA明显低于西药组(P0.01)。结论补肾温阳化瘀方能有效防治子宫内膜异位症,其机制可能与降低血清BK及PGF2α含量、抑制BKB1R蛋白及其mRNA的表达有关。     

补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症TRPV1及其致敏因子NGF的影响

目的研究补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)简称内异症,瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ(transientreceptor potential vanilloid receptor 1,TRPV1)及致敏因子神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的影响,以探讨补肾温阳化瘀方治疗EMT疼痛的作用机制。方法将近交系BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、孕三烯酮组,每组15只。观察各组扭体反应,并采用酶联免疫法(ELISA)检测血清NGF的含量,采用免疫组化SP法及Western blot法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白的表达,采用Real-time PCR方法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1 mRNA的表达。结果模型组血清NGF含量显著高于假手术组(P0.01),且与小鼠扭体次数呈正相关(r=0.574,P0.01);与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组血清NGF含量显著下降(P0.05);模型组子宫NGF、TRPV1蛋白及NGF、TRPV1 mRNA表达均高于假手术组(P0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白表达均显著降低(P0.01),NGF、TRPV1 mRNA以中药高剂量组下降最为明显(P0.01)。子宫及异位灶NGF与TRPV1蛋白及mRNA表达均呈正相关(P0.01)。结论 TRPV1及致敏因子NGF共同参与了EMT疼痛的发生;补肾温阳化瘀方可通过降低NGF对TRPV1的上调作用从而发挥抑制EMT疼痛的作用。     

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症大鼠PKC信号通路的影响

目的：研究补肾温阳化瘀方治疗子宫内膜异位症(EMs)的作用,探讨其调控蛋白激酶C(PKC)信号通路的机制。方法：将50只SPF级8～10周龄雌性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组和西药组,每组10只。采用自体移植法复制EMs大鼠模型,造模成功后分别给予补肾温阳化瘀方低、高剂量及孕三烯酮灌胃,假手术和模型组灌胃蒸馏水,连续21 d。HE染色观察在位内膜及异位灶的病理形态改变;Western blot测定在位内膜及异位灶磷酸化蛋白激酶C的α亚型(p-PKCα)、蛋白激酶C的α亚型(PKCα)蛋白的表达水平。结果：模型组在位内膜和异位灶p-PKCα蛋白水平升高;给予补肾温阳化瘀方治疗后,p-PKCα的蛋白表达水平降低(P<0.05),PKCα的蛋白表达水平无明显变化。结论：补肾温阳化瘀方通过抑制PKC信号通路来治疗EMs。     

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症模型大鼠内膜组织缺氧诱导因子-1α、葡萄糖转运因子-1表达的影响

目的: 探讨补肾温阳化瘀方治疗内异症的可能作用机制。 方法: 选用SPF级雌性大鼠复制腹膜型内异症大鼠模型,将造模成功的大鼠分为4组:补肾温阳化瘀方高剂量组(16只)、低剂量组(16只)、丹那唑组(16只)、模型组(17只),并设对照组(12只)。运用免疫组化(S-P)法,检测内异症模型大鼠治疗前、后异位内膜组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运因子-1(GLUT-1)的表达,并比较治疗前后异位灶体积变化。 结果: 补肾温阳化瘀方高、低剂量组及丹那唑组治疗后子宫内膜异位灶体积较治疗前明显缩小(P<0.05),且以补肾温阳化瘀方高剂量组最显著(P<0.01);HIF-1α,GLUT-1在模型组异位内膜的表达与对照组在位内膜相比显著升高(P<0.01);补肾温阳化瘀方高、低剂量组及丹那唑组均能够显著抑制HIF-1α,GLUT-1的高表达(P<0.01),与对照组表达无明显差异,且以中药高剂量组作用效果最显著,低剂量组次之;丹那唑组与补肾温阳化瘀方高剂量组比较抑制效果有差异(P<0.05)。 结论: 补肾温阳化瘀方可能通过抑制HIF-1α与GLUT-1的表达达到治疗内异症的目的。     

补肾活血方冻干粉对低氧诱导HTR-8/SVneo滋养细胞HIF-1α及VEGFA表达的影响

目的:探讨补肾活血方冻干粉对HTR-8/SVneo滋养细胞小管形成、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子A(VEGFA)表达的影响及其作用机制。方法:体外常规培养HTR-8/SVneo滋养细胞,采用CoCl2法诱导低氧环境,实验分为空白组、低氧模型组和补肾活血方冻干粉低、中、高剂量组。Tube formation法检测各组细胞小管形成能力,实时定量PCR及Western blotting检测各组细胞HIF-1αmRNA、VEGFA mRNA及其蛋白的表达。结果:小管形成实验结果显示,空白组、低氧模型组和补肾活血方冻干粉低、中、高剂量组形成的小管分支点数分别为12.35±1.25、27.76±1.79、31.61±0.82、33.24±1.22和38.84±1.68。Real-time PCR和Western blotting结果显示,与空白组比较,低氧模型组和补肾活血方冻干粉低、中、高剂量组VEGFA mRNA,以及补肾活血方冻干粉高剂量组HIF-1αmRNA表达均升高(P<0.05);与低氧模型组比较,补肾活血方冻干粉中、高剂量组VEGFA mRNA和补肾活血方冻干粉高剂量组HIF-1αmRNA表达均升高(P<0.05)。与空白组、低氧模型组比较,补肾活血方冻干粉低、中、高剂量组的HIF-1α、VEGFA蛋白表达均升高(P<0.05);与补肾活血方冻干粉低剂量组比较,补肾活血方冻干粉高剂量组HIF-1αmRNA、VEGFA mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与补肾活血方冻干粉中剂量组比较,补肾活血方冻干粉高剂量组HIF-1α蛋白表达升高(P<0.05)。结论:补肾活血方冻干粉可以提高滋养细胞HTR-8/SVneo小管形成能力,其治疗复发性流产的机制可能与上调HIF-1αmRNA、VEGFA mRNA和蛋白表达相关。     

益气活血通阳法不同配比对急性心肌梗死兔血管生成因子影响的研究

目的观察不同红参/水蛭配比组方的益气活血通阳之安心颗粒对急性心肌梗死兔梗死边缘区心肌及主动脉斑块内血管生成因子的影响,明确最佳配比组方。方法将50只健康雄性家兔按体质量随机分为10组,每组5只。假手术组给予正常饮食,只开胸穿线,不结扎左冠状动脉前降支,术后给予生理盐水灌胃。模型组、西药组和不同配比中药组复制动脉粥样硬化和急性心肌梗死双模型,模型组术后给予生理盐水灌胃,西药组于开胸结扎冠脉后当时立即在结扎处周围予碱性成纤维生长因子喷洒,不同配比中药组术后给予红参/水蛭比例为10/0,10/4,10/7,10/10,7/10,4/10,0/10的安心颗粒液连续灌胃10周。采用qPCR法检测各组家兔不同心肌区及主动脉区血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)mRNA和低氧诱导因子-1α(HIF-1α) mRNA表达水平,采用Western Blot法检测各组家兔不同心肌区及主动脉区VEGFR-2和HIF-1α蛋白表达水平。结果模型组、西药组及不同配比中药组梗死心肌区和缺血心肌区VEGFR-2R、HIF-1αmRNA和蛋白表达水平均明显高于假手术组(P均0.05)。西药组及10/4中药组缺血心肌区VEGFR-2R、HIF-1αmRNA和蛋白表达水平均显著高于其他中药组及模型组(P均0.05),西药组与10/4中药组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。各组间主动脉区VEGFR-2R、HIF-1αmRNA和蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论红参/水蛭比例为10/4的安心颗粒可提高梗死边缘区血管生成因子水平,且对动脉斑块内血管生成因子水平无明显影响。     

加减驻景方对脉络膜新生血管动物模型缺氧信号因子表达的影响

目的观察加减驻景方对CNV动物模型缺氧信号因子表达的影响。方法氪激光诱导BN大鼠建立CNV动物模型,造模后大鼠被随机分为模型组、中药组、西药组和联合组。模型组大鼠用生理盐水灌胃,中药组用加减驻景方灌胃,西药组用玻璃体腔注射康柏西普,联合组用加减驻景方灌胃+玻璃体腔注射康柏西普。光凝后7 d、14 d、21 d处死大鼠取材,通过免疫组织化学法、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)技术检测CNV组织中AKT/mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路mRNA和蛋白的相对表达量。结果 (1)免疫组化:模型组和各治疗组AKT、mTOR、HIF-1α、VEGF蛋白表达均呈阳性,随光凝时间延长,各治疗组目的蛋白表达量均低于模型组(P0.05)。(2)RT-qPCR:模型组与各治疗组各目的基因mRNA相对表达量较空白组均显著增多(P0.05)。除mTOR以外,各治疗组目的基因mRNA相对表达量均低于模型组(P0.05)。各治疗组AKT、mTOR、VEGF mRNA相对表达量由高到低依次为中药组、西药组和联合组(P0.05)。中药组HIF-1αmRNA相对表达量高于西药组和联合组(P0.05),西药组和联合组之间比较无统计学意义(P0.05)。(3)Western blotting:模型组与各治疗组目的蛋白相对表达量,较空白组均显著增多(P0.05),除AKT蛋白以外,各治疗组目的蛋白相对表达量均低于模型组(P0.05)。AKT和HIF-1α蛋白相对表达量中药组高于西药组和联合组(P0.05)。mTOR与VEGF蛋白相对表达量由高到低依次为中药组、西药组和联合组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 AKT/mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的激活促进了CNV的生成,加减驻景方可通过抑制AKT/mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路活性,发挥抑制CNV的作用,联合组作用最强。     

止血化瘀利水方对缺氧诱导ARPE-19细胞VEGF及HIF-1α表达的影响

目的探讨止血化瘀利水方含药血清对CoCl_2诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白及mRNA表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,用CoCl_2诱导构建缺氧模型,将RPE细胞分为正常组、缺氧模型组、空白对照组、阳性对照组、中药组,以CCK-8法检测细胞增殖活性,ELISA法检测VEGF蛋白浓度,应用荧光定量PCR检测HIF-1α和VEGF的mRNA表达水平。结果 200μmol/LCoCl_2对RPE细胞吸光度值(OD值)影响最大,设立为缺氧细胞模型浓度。与正常组比较,缺氧模型组细胞增殖活性增强,VEGF蛋白浓度增高,HIF-1α及VEGF的m RNA表达水平上调。与缺氧模型组比较,中药组、阳性对照组在24 h、48 h、72 h细胞VEGF蛋白均含量减少,差异均有统计学意义(中药组:t_(24 h)=4.242,P_(24 h)0.001;t_(48 h)=3.430,P_(48 h)0.001;t72 h=2.501,P72 h=0.006;阳性对照组:t_(24 h)=2.897,P_(24 h)=0.001;t_(48 h)=2.308,P_(48 h)=0.013;t72 h=4.748,P72 h0.001),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。中药组、阳性对照组在48 h细胞HIF-1αmRNA表达下调,与缺氧模型组比较,差异有统计学意义(中药组:t=15.358,P0.001;阳性对照组:t=14.918,P0.001),24 h、72 h差异无统计学意义(P0.05)。中药组、阳性对照组在24 h、48 h细胞VEGF m RNA表达受到抑制,与缺氧模型组比较,差异均有统计学意义(中药组:t_(24 h)=3.084,P_(24 h)=0.003;t_(48 h)=14.837,P_(48 h)0.001;阳性对照组:t_(24 h)=3.437,P_(24 h)=0.001;t_(48 h)=13.554,P_(48 h)0.001)。结论缺氧损伤可诱导ARPE-19细胞增殖,VEGF蛋白表达量增加,HIF-1α和VEGF mRNA表达水平上调;止血化瘀利水方对缺氧RPE细胞的增殖及VEGF蛋白、HIF-1α和VEGF mRNA的表达有抑制作用。与对照组复方血栓通胶囊比较,止血化瘀利水方对RPE细胞增殖的抑制作用更持久,在24 h、48 h控制VEGF蛋白表达水平更接近正常组;而二者在抑制VEGF和HIF-1αmRNA表达方面作用相似。     

益气消癥方对雌激素诱导子宫肌瘤模型豚鼠子宫组织血管生成的影响

目的探讨益气消癥方治疗子宫肌瘤的可能作用机制。方法采用去势+雌激素诱导建立豚鼠子宫肌瘤模型,将68只造模成功豚鼠随机分为模型组(15只)、中药高剂量组(14只)、中药中剂量组(12只)、中药低剂量组(13只)及西药组(14只),并设正常对照组(15只)。去势术后第21日开始,中药高、中、低剂量组分别给予益气消癥方4g/kg、2g/kg、1g/kg干粉;西药组给予米非司酮片1.94mg/kg。各组灌胃容积为1ml/(100g·d),正常对照组及模型组给予等容积蒸馏水,连续12周。检测各组豚鼠子宫组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,并进行HIF-1α与VEGF相关性分析。结果模型组豚鼠子宫组织HIF-1α、VEGF蛋白表达显著高于正常对照组(P0.05或P0.01)。与模型组比较,中药高、中剂量组和西药组豚鼠子宫组织HIF-1α、VEGF蛋白表达明显降低(P0.05或P0.01);中药高剂量组豚鼠子宫组织HIF-1α蛋白表达显著低于中药中、低剂量组(P0.01),中药高剂量组豚鼠子宫组织VEGF蛋白表达显著低于中药中、低剂量组和西药组(P0.01)。HIF-1α与VEGF相关性分析显示,相关系数为0.930,P=0.000。结论益气消癥方可能是通过降低子宫组织HIF-1α、VEGF蛋白表达,抑制血管生成,从而达治疗子宫肌瘤的作用。     

温阳补肾灸对血管性痴呆大鼠NF-κB信号通路的影响（英文）

目的:观察温阳补肾灸对血管性痴呆(VD)大鼠行为学、海马IL-1β、TNF-α及NF-κB相关基因与蛋白表达的影响,探讨温阳补肾灸抑制VD炎性反应的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、艾灸组、西药组,每组10只。采用双侧颈总动脉缺血再灌注法制造VD大鼠模型。造模后,艾灸组大鼠悬灸"大椎""命门""关元",每次15 min,每日一次,连续治疗4周;西药组大鼠用尼莫地平灌胃(2 mg·kg~(-1)·d~(-1))连续治疗4周。运用Morris水迷宫测试对各组大鼠进行行为学检测。用HE染色观察其组织病理学改变。运用RT-qPCR法和Westernblot法检测海马IL-1β、TNF-α及NF-κB相关蛋白与基因的表达。结果:造模后手术组大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期较假手术组明显延长(P0.05)。HE染色显示模型组神经元细胞排列松散,细胞膜模糊,细胞质不均匀,核固缩,坏死量增多,炎细胞显著增加。与模型组相比,艾灸组与西药组炎细胞数目明显减少,神经元坏死减少。治疗后,与模型组比较,艾灸组、西药组大鼠海马组织TNF-α、p-IκB、NF-κBp65蛋白表达量显著降低(P0.05);与模型组比较,艾灸组、西药组大鼠海马组织IL-1β、TNF-α、NF-κBp65 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论:温阳补肾灸可能通过降低脑内IL-1β、TNF-α及NF-κB相关基因的表达水平,抑制NF-κB信号通路,降低炎性反应,以达到治疗VD的目的。     

温阳化瘀方对5/6肾切除大鼠Sirt/NF-κB炎症通路的调节作用

目的:探讨温阳化瘀方对5/6肾切除大鼠Sirt/NF-κB炎症通路的调节作用。方法:SD大鼠32只,随机分为假手术组、模型组、温阳化瘀方组、西药组,每组8只。温阳化瘀方组予以温阳化瘀方水煎液15. 1 g/(kg·d)灌胃,西药组予以洛汀新1mg/(kg·d)灌胃,连续灌胃4周;全自动生化仪检测各组大鼠血SCr、尿NAG、24 h尿蛋白水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)和人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,qRT-PCR检测大鼠肾组织沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1) mRNA表达。结果:与模型组比较,温阳化瘀方组、西药组大鼠血SCr、尿NAG水平均显著降低(P 0. 01),NF-κB和MCP-1水平均显著降低(P 0. 01);温阳化瘀方组SIRT1mRNA表达上升(P 0. 05),西药组SIRT1mRNA表达差异无统计学意义(P0. 05)。结论:温阳化瘀方能上调SIRT水平,抑制NF-κB和MCP-1表达,改善肾功能。     

解毒化瘀健脾方对慢性萎缩性胃炎伴异型增生大鼠PTEN、E-cad表达的影响

目的观察解毒化瘀健脾方对慢性萎缩性胃炎伴异型增生模型大鼠的抑癌基因磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)和上皮细胞钙黏蛋白(E-cad)基因的影响。方法运用综合造模方法 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),建立慢性萎缩性胃炎伴异型增生病变大鼠模型,随机分为模型组、西药组(维甲酸)、中药组(解毒化瘀健脾方),进行相应药物干预,另选取正常大鼠作为正常对照组。应用Real-time PCR、Western blotting技术检测大鼠PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,模型组PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达量显著降低(P0.01);中药组E-cad mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药组和西药组PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达量显著增加(P0.05)。与西药组比较,中药组PTEN、E-cad mRNA表达量明显升高(P0.01);中药组PTEN蛋白表达量降低,E-cad蛋白表达升高(P0.01)。结论解毒化瘀健脾方可诱导慢性萎缩性胃炎伴异型增生胃黏膜细胞PTEN、E-cad基因的蛋白表达量上升,从而实现对慢性萎缩性胃炎伴异型增生的治疗,逆转胃癌前病变。     

大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的观察大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响,探讨其作用机制。方法实验细胞分为正常组、模型组、雷帕霉素组和大黄低、中、高剂量组,MTT法检测细胞毒性后,ELISA检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量PCR检测缺氧诱导因子-lα(HIF-1α)、p70S6K1和eIF4E mRNA表达,Western blot检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、eIF4E和p70S6K1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄各剂量组细胞TNF-α、IL-6和IL-1β含量降低,HIF-1α、p70S6K1和eIF4E mRNA表达降低,HIF-1α、VEGF蛋白表达降低。结论大黄可下调炎症因子水平,其机制可能与其下调HIF-1α、VEGF蛋白表达及HIF-1α、eIF4E、p70S6K1 mRNA表达水平有关。     

山药多糖对肾缺血再灌注损伤大鼠肾组织缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的观察山药多糖对肾缺血再灌注损伤大鼠肾组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,并探讨其作用机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、山药多糖组,制备肾缺血再灌注损伤大鼠模型,术前7 d,山药多糖组每日给予山药多糖(200 mg/kg)灌胃,假手术组和模型组每日给予等体积生理盐水灌胃,缺血再灌注6 h后,检测各组大鼠血尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)的含量,Western Blot法检测各组肾组织HIF-1α蛋白表达水平,RT-PCR法检测各组肾组织HIF-1α、VEGF mRNA表达水平。结果与假手术组比较,模型组和山药多糖组血清BUN、SCr含量升高(P0.01),肾组织HIF-1αmRNA、蛋白表达及VEGF mRNA表达升高(P0.01);与模型组比较,山药多糖组血清BUN、SCr含量降低(P0.01),肾组织HIF-1α蛋白、mRNA表达及VEGF mRNA表达升高(P0.01)。结论山药多糖对肾缺血再灌注损伤大鼠具有明显保护作用,其机制可能是通过上调肾组织HIF-1α表达进而诱导VEGF的表达而达到治疗作用。     

补肾化瘀泄浊方通过调控细胞外调节蛋白激酶信号通路阻抑人肾小管上皮细胞间充质转化的机制研究

目的:观察补肾化瘀泄浊方对转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)的上皮间充质转化(EMT)及Smad2/3的影响,探讨其阻抑HK-2 EMT的机制。方法:采用TGF-β1诱导建立HK-2 EMT模型,Western blot检测TGF-β1对EMT标记蛋白、Smad2/3及细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号蛋白的影响。予不同剂量补肾化瘀泄浊方进行干预,Real-Time PCR检测EMT相关基因mRNA的表达,Western blot检测EMT相关蛋白、Smad2/3及ERK的表达;与ERK通路抑制剂PD98059作比较,观察补肾化瘀泄浊方通过ERK信号通路干预HK-2 EMT的作用。结果:与空白组比较,模型组HK-2细胞出现EMT特有的“纺锤形”结构,EMT标记α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),且磷酸化ERK及Smad2/3蛋白水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,补肾化瘀泄浊方各剂量组HK-2细胞EMT样形态改善,α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),E-cadherin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),磷酸化ERK及Smad2/3蛋白水平下降(P<0.05),且剂量越高作用越明显。与模型组比较,ERK通路抑制剂能显著下调α-SMA、Vimentin、磷酸化Smad2/3蛋白水平(P<0.05);补肾化瘀泄浊方高剂量具有与ERK通路抑制剂类似的作用。结论:TGF-β1可诱导HK-2 EMT,上调ERK及Smad2/3磷酸化水平,补肾化瘀泄浊方很可能通过抑制ERK通路活化,下调Smad2/3磷酸化水平,阻抑HK-2 EMT。     

五脏温阳化瘀汤对血管性痴呆模型大鼠海马组织PI3K/Akt-mTOR信号通路的影响

目的探讨五脏温阳化瘀汤治疗血管性痴呆的可能作用机制。方法 55只大鼠随机选择8只为假手术组,剩余大鼠采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备血管性痴呆模型。将造模成功的39只大鼠随机分为中药高剂量组10只,中药低剂量组10只,吡拉西坦组10只,模型组9只。中药高、低剂量组分别给予五脏温阳化瘀汤5、1. 25 g/(kg·d)灌胃,吡拉西坦组给予吡拉西坦分散片0. 15 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃。2周后用Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力;分别采用RT-PCR法和Western blot法检测大鼠海马组织中的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长,跨越平台次数减少,海马组织PI3K、Akt、mTOR蛋白及mRNA表达升高(P 0. 05或P 0. 01);与模型组比较,中药高剂量组、吡拉西坦组大鼠逃避潜伏期、跨越平台次数增加,海马组织PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA表达升高(P 0. 05或P 0. 01);中药高剂量组与吡拉西坦组各指标比较差异均无统计学意义(P0. 05)。结论五脏温阳化瘀汤可以提高血管性痴呆模型大鼠的学习记忆能力,可能是通过调控海马组织PI3K/Akt-mTOR信号通路发挥作用。     

温阳化浊通络方对系统性硬化症模型小鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨温阳化浊通络方治疗系统性硬化症(SSc)的可能作用机制。方法将60只C3H/He小鼠随机分为正常组、模型组、西药组和中药低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外其余各组给予皮下注射博莱霉素3周建立SSc小鼠模型。西药组小鼠灌服青霉胺片65 mg/(kg·d),中药低、中、高剂量组分别灌服温阳化浊通络方水煎剂11.75、23.50、47.00 g/(kg·d),模型组和正常组给予等体积的生理盐水,共干预8周。采用HE染色观察皮肤组织病理变化,采用RT-PCR法检测皮肤转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad7 mRNA表达,采用Western blot法检测皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)表达。结果模型组较正常组皮肤真皮变厚,胶原增加、变粗,真皮小血管周围炎症细胞浸润,西药组和中药低、中、高各剂量组与模型组比较真皮变薄、胶原含量减少,血管周围炎症细胞浸润减轻。与正常组比较,模型组TGF-β1、Smad2 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达升高,Smad7 mRNA表达降低(P0.01);与模型组比较,西药组和中药低、中、高剂量组TGF-β1、Smad2 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达减少,Smad7 mRNA表达增加(P0.05或P0.01);中药高剂量组TGF-β1、Smad2、Smad7 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达改善优于西药组和中药低剂量组(P0.05或P0.01)。结论温阳化浊通络方可拮抗SSc纤维化,可能与干预TGF-β1/Smad信号通路、降低皮肤胶原蛋白含量有关,且高剂量效果更佳。     

补肾舒脊颗粒对人骨髓间充质干细胞BMP-4、Smad-4 mRNA及蛋白表达的影响

目的研究补肾舒脊颗粒对人骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白(BMP)通路BMP-4、Smad-4mRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养人骨髓间充质干细胞,并将其分为空白组、西药组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,向成骨细胞诱导,干预28天后提取mRNA及蛋白,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测BMP-4、Smad-4 mRNA及其蛋白的表达。结果(1)RT-PCR结果发现,与模型组比较,中药低剂量组BMP-4 mRNA表达水平降低(P0.05),中药中、高剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA表达水平降低(P0.05)。与西药组比较,中药低、中、高各剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA水平均降低(P0.05)。与中药低剂量组比较,中药中剂量组BMP-4 mRNA表达水平降低(P0.05),中药高剂量组BMP-4、Smad-4 mRNA表达水平降低(P0.05)。(2)Western blot结果发现,与空白组比较,模型组BMP-4蛋白表达降低(P0.05);与模型组比较,西药组、中药低、中剂量组BMP-4、Smad-4蛋白表达均降低(P0.05);与西药组比较,中药中剂量组BMP-4、Smad-4蛋白表达水平降低(P0.05)。结论补肾舒脊颗粒可能通过BMP通路抑制BMP-4及Smad-4的表达,从而起到延缓强直性脊柱炎异位骨化的作用。其中中药低剂量组可以降低BMP-4表达水平,而中、高剂量组可以降低BMP-4、Smad-4表达水平。     

益气化瘀补肾方治疗腰椎间盘突出症的实验研究

目的:研究中药益气化瘀补肾方治疗腰椎间盘突出症的机理。方法:以中药益气化瘀补肾方为观察对象,设立模型组、假手术模型对照组、正常对照组、西药对照组对照观察,观察与腰椎间盘突出症密切相关的血清免疫球蛋白IgG,IgM及椎间盘组织细胞因子IL-1α,IL-6,TNFα等指标的变化。结果:中药益气化瘀补肾方对降低腰椎间盘突出症兔模型的IgG,IgM,IL-1α,TNFα的含量有明显作用(P<0.05或P<0.01)。结论:减少自身免疫刺激从而缓解神经根的疼痛是中药益气化瘀补肾方治疗腰椎间盘突出症的一个途径。     

化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏NLRP3、Caspase1、IL-1β表达的影响

目的观察化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3[NOD(nucleotide-binding oligomerization domain)-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β表达的影响。方法将40只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(10只)、造模组(30只),采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)手术复制梗阻性肾病模型,成功后随机分为模型组、西药组和中药组,每组各10只。西药组给予依普利酮100 mg/(kg·d),中药组给予化瘀解毒方13.7 g/(kg·d),假手术组和模型组给予等量生理盐水,连续给药10天。检测各组血清IL-1β含量,检测肾脏NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,检测肾脏TUNEL阳性细胞率。结果假手术组NLRP3表达不明显,Caspase-1及IL-1β呈弱表达,仅见少量TUNEL阳性细胞。与假手术组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P0.01),肾组织NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达升高(P0.01);NLRP3主要表达于肾间质巨噬细胞及肾小管上皮细胞,Caspase-1及IL-1β主要见于肾小管上皮细胞胞浆;TUNEL阳性细胞增多,以间质扩张的远端小管上皮细胞为主(P0.01)。与模型组比较,两个给药组血清IL-1β含量降低(P0.01),NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达降低,TUNEL阳性细胞率降低(P0.05,P0.01)。结论化瘀解毒方可下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,减轻肾组织炎症损伤。