“通督启神”法两种电针对APP/PS1小鼠额叶皮层小胶质细胞TNF-α表达的影响

目的：观察“通督启神”法不同电针对APP/PS1 小鼠学习记忆能力及额叶皮层MG与TNF-α表达的影响,探讨不同电针治疗AD的疗效差异及其作用机制。方法：APP/PS1小鼠随机分为模型组、脉冲电针组和音乐电针组,C57BL/6小鼠为正常对照组,每组8只。先取“人中”点刺,后取“百会”、“印堂”二穴,连接脉冲电针及音乐电针,留针20min。正常对照组与模型组同样方法束缚20min。治疗15天后,用Morris水迷宫检测小鼠的行为学变化,免疫组化观察小鼠额叶皮层小胶质细胞活化情况,Western Blot检测小鼠额叶皮层TNF-α的表达含量。结果：“通督启神”法不同电针均可显著改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力（P<0.05）,降低AD小鼠额叶皮层小胶质细胞标记物Iba-1的表达（P<0.05）及TNF-α蛋白的表达（P<0.05）,且音乐电针组均优于脉冲电针组（P<0.05）。结论：“通督启神”法不同电针可有效改善APP/PS1小鼠学习记忆能力,抑制小胶质细胞活化、减少TNF-α的分泌,且音乐电针在改善额叶皮层炎性反应方面优于脉冲电针,对AD有更好的治疗效果。     

夹脊电针不同时间点干预对ALS-SOD1G93A小鼠腰髓TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的：观察通督调神针法对APP/PS1小鼠学习记忆行为及海马Aβ淀粉样沉积、炎症因子TNF-α的影响,探讨通督调神针法治疗AD的作用机制。方法：4月龄APP/PS1小鼠共16只,随机数字表达法分组,模型组8只,电针组8只。同龄野生型小鼠8只为对照组,以“百会”“印堂”“人中”三穴进行电针干预,每次30min,每天1次,共4周。水迷宫实验检测各组小鼠干预前的学习记忆功能情况,干预后,新物体识别实验的偏好指数检测各组小鼠学习记忆功能的表现,Western blot法测定海马区淀粉样蛋白(Aβ)、核因子激活的B细胞的κ-轻链增强(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α蛋白(TNF-α)表达水平。结果：干预前,与对照组相比,在训练的第三、四天,模型组逃避潜伏期明显增加(P<0.01, P<0.05),穿越第三象限次数减少(P<0.01)；各组小鼠的游泳速度无统计学差异。与对照组相比,实验第三、四天时,干预前电针组逃避潜伏期明显增长(P<0.01, P<0.01),穿越第三象限次数减少(P<0.01)。而模型组与电针组之间没有差异。干预后与模型组相比,电针组对新物体偏好指数增加(P<0.05, P<0.05),脑内海马Aβ表达水平降低(P<0.01),海马中TNF-α和NF-κB分别显著降低(P<0.01, P<0.05)。结论：通督调神针法可通过抑制NF-κB通路,减少炎症因子TNF-α蛋白表达,减少Aβ沉积,提高学习记忆,从而延缓AD的发展。     

APP/PS1小鼠肠道菌群特点及补肾法干预对其的影响

目的:探究不同月龄APP/PS1双转基因模型小鼠的肠道菌群特点及补肾法对其肠道菌群失衡的影响。方法:将8只6个月龄雄性APP/PS1小鼠随机分为模型组和补肾组;4只6个月龄雄性C57BL/6小鼠作为正常对照组。补肾组小鼠给予补肾法中药灌胃3个月,模型组和正常对照组小鼠均予以等体积羧甲基纤维素(CMC)溶液灌胃。留取小鼠灌胃干预前后的粪便,运用16SrDNA技术检测各组肠道菌群的组成结构。从肠道微生态方面,探讨补肾中药对APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群构成的影响。结果:6个月龄时模型组和正常对照组小鼠的肠道菌群差异无统计学意义;与9个月龄正常组比较,模型组小鼠肠道内芽孢杆菌纲丰度明显升高。与模型组比较,补肾组肠道内芽孢杆菌纲丰度明显下降,疣微菌门丰度呈上升趋势。结论:APP/PS1小鼠体内均存在肠道菌群失衡的情况,主要与芽孢菌纲、疣微菌门的丰度水平的变化相关。补肾法可以通过降低芽孢菌纲、升高疣微菌门的丰度来进一步改善AD小鼠肠道菌群失衡状态。     

“通督启神”针法对APPswe/PS1dE9小鼠海马铁死亡相关因子表达的影响

目的：观察“通督启神”针法对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及铁死亡相关因子的影响，探讨其提高阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的机制。方法：APPswe/PS1dE9小鼠随机分为模型组和针刺组，以C57BL/6小鼠作为对照组，每组各12只。针刺组予电针“百会”“印堂”并点刺“水沟”，每日1次，每次20 min，共28 d。采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力；尼氏染色和透射电镜观察小鼠海马组织神经细胞的形态学及超微结构变化；分别采用WST-1法和TBA法检测小鼠海马组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量；实时荧光定量PCR法检测小鼠海马组织中前列腺素内过氧化物合酶2(ptgs2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA的表达水平。结果：与对照组相比，模型组小鼠第2—5天逃避潜伏期显著延长（P<0.05），原平台象限游泳时间和穿越原平台次数显著减少（P<0.05）,SOD活性降低（P<0.05）,MDA含量升高（P<0.05）,ptgs2 mRNA表达水平升高（P<0.05）,GPX4 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与模型...     

补骨脂改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的血清代谢组学研究北大核心CSCD

通过血清代谢组学方法探讨补骨脂改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的作用机制,筛选补骨脂对APP/PS1小鼠的差异代谢物,并揭示其对APP/PS1小鼠代谢通路的影响。选取30只3月龄的APP/PS1小鼠随机分为模型组和补骨脂提取物组,另取15只同月龄的C57BL/6小鼠作为空白组。采用水迷宫和新物体识别实验评价小鼠学习记忆能力,随后用代谢组学方法对小鼠血清中代谢物进行分析。水迷宫实验结果显示,补骨脂对缩短APP/PS1小鼠的逃避潜伏期效果显著(P<0.01),对增加平台穿越次数和靶向限停留时间效果显著(P<0.01);新物体识别实验结果显示,补骨脂可明显提高APP/PS1小鼠的新物体识别指数(P<0.01)。代谢组学实验筛选出18个血清差异代谢物,其中花生四烯酸、色氨酸、甘油磷脂水平给药后降低,谷氨酰酪氨酸水平给药后上升,涉及的代谢通路包括花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢、色氨酸代谢、亚油酸代谢、α-亚麻酸代谢、甘油脂代谢等。因此补骨脂对APP/PS1小鼠的学习记忆能力具有改善作用,其作用机制可能与促进能量代谢、降低氧化损伤、保护中枢神经系统、减少神经炎症、降低Aβ沉积的作用有关。这将为补骨脂治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)提供帮助,进一步解释其治疗AD的作用机制。     

人参蛋白对阿尔茨海默病小鼠肠道菌群及BDNF/TrkB信号通路的影响

目的 探讨人参蛋白对阿尔茨海默病小鼠肠道菌群及BDNF/TrkB信号通路的影响。方法 采用D-半乳糖/AlCl₃联合诱导建立阿尔茨海默病模型，小鼠随机分为正常一组、正常二组、模型一组、模型二组、人参蛋白组、菌群移植组，采用Morris水迷宫实验评价学习记忆能力，Western blot法检测脑组织APP、p-Tau、BDNF、TrkB、p-TrkB蛋白表达，16S rDNA检测粪便菌群多样性。结果 人参蛋白、菌群移植可缩短小鼠逃避潜伏期(P<0.05),增加穿越平台次数(P<0.05),降低脑组织APP、p-Tau蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高BDNF、p-TrkB、p-TrkB/TrkB蛋白表达(P<0.05,P<0.01),减少拟普雷沃菌属、瘤胃球菌科＿UCG-014、普雷沃氏菌科＿UCG-001、瘤胃球菌属＿1丰度(P<0.05,P<0.01)。结论 人参蛋白抗阿尔茨海默病的作用机制可能是调节肠道微生物多样性激活BDNF/TrkB信号通路。     

“通督启神”法电针对APP/PS1双转基因小鼠海马区COX-2、TGF-β_1表达的影响

目的:观察"通督启神"法电针对阿尔茨海默病(AD)小鼠空间学习记忆能力和海马区COX-2、TGF-β_1表达的影响,探讨其治疗AD的作用机制。方法:将24只7月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、药物组和电针组,以8只相同遗传背景的C57BL/6小鼠作为正常对照组。采用Morris水迷宫观察各组小鼠的行为学变化;免疫组化DAB染色法观察各组小鼠海马区COX-2、TGF-β_1表达情况;Western blot检测各组小鼠海马区COX-2、TGF-β_1表达含量。结果:药物组和电针组在隐蔽平台试验中逃避潜伏时间均低于模型组(P0.05或P0.01),在空间探索试验中目标象限游泳时间占比均高于模型组(P0.05或P0.01);免疫组化DAB染色结果表明,药物组和电针组COX-2、TGF-β_1表达均低于模型组(P0.01);Western blot检测结果表明,药物组和电针组COX-2、TGF-β_1表达均低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:"通督启神"法电针治疗能够提高APP/PS1小鼠的空间学习记忆能力,抑制海马区COX-2、TGF-β_1表达。     

生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路的影响

目的?观察生慧汤对APP/PS1痴呆小鼠海马酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）/信号传导及转录激活因子3（STAT3）/细胞因子信号抑制物1（SOCS-1）信号通路的影响，并探讨其改善阿尔茨海默病（AD）突触可塑性的机制。方法?将36只APP/PS1小鼠随机分为APP/PS1组、多奈哌齐（donepezil）组和生慧汤（SHD）组，另将12只C57BL/6JNju小鼠设为空白（WT）组。Donepezil组按0.92 mg / （kg·d）的剂量灌胃多奈哌齐配置的混悬液，SHD组按13.5 g / （kg·d）的剂量灌胃生慧汤水煎液，WT组和APP/PS1组灌胃等体积的纯水。各组连续治疗4周，采用Morris水迷宫实验和跳台实验评价小鼠的认知功能。尼氏染色观察小鼠海马区神经元病理形态；高尔基染色观察小鼠海马区神经元树突棘的变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测小鼠海马中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的含量及其mRNA表达水平；采用蛋白免疫印迹（Western Blot）检测小鼠海马离子钙结合蛋白（IBA1）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、JAK2、p-JAK2-Tyr1007、STAT3、p-STAT3-Tyr705、SOCS-1的蛋白表达水平。结果?与WT组比较，APP/PS1组小鼠平台潜伏期、游泳总路程和出错次数增加（P<0.01），穿越平台次数、目标象限停留时间和潜伏期减少（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠平台潜伏期、游泳总路程和出错次数减少（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数、目标停留象限时间和潜伏期增加（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马CA3和DG区神经元数量及树突棘密度显著减少（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马CA3和DG区神经元数量及树突棘密度增加（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马中TNF-α和IL-1β的含量及mRNA水平增加（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马中TNF-α和IL-1β的含量及mRNA水平减少（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马中IBA1、GFAP、p-JAK2-Tyr1007/JAK2、p-STAT3-Tyr705/STAT3和SOCS-1的蛋白表达水平升高（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马中IBA1、GFAP、p-JAK2-Tyr1007/JAK2、p-STAT3-Tyr705/STAT3和SOCS-1的蛋白表达水平减少（P<0.05，P<0.01）。结论?生慧汤可通过抑制神经炎症改善APP/PS1小鼠海马突触可塑性，其机制可能与其抑制JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路有关。     

五味子醇甲对APP/PS1小鼠学习记忆和NF-κB p65的影响

目的研究五味子醇甲(SCH)对APP/PS1双转基因痴呆小鼠行为学和NF-κB p65的影响。方法将35只APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型(APP/PS1)组、五味子醇甲(SCH+APP/PS1)组;另以同背景同月龄的C 57 BL/6 J阴性小鼠为空白(WT)组。SCH+APP/PS1组给予SCH悬浊液灌胃(2.6 mg·kg^-1·d^-1),模型组和空白组给予等量蒸馏水灌胃。各组灌胃30 d进行Mirror水迷宫空间探索试验后取材。HE染色法观察皮层及海马CA1区神经细胞的形态结构。运用DCFH-DA法检测脑组织活性氧(ROS)含量。Western印迹检测法检验磷酸化核转录因子(NF-κB p65,pp65)的表达。结果与APP/PS 1组相比,APP/PS 1+SCH组有效区停留距离及时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);APP/PS 1+SCH组穿越有效区次数和平台区停留距离增加,均差异有统计学意义(P<0.01)。APP/PS 1+SCH组HE染色观察皮层有部分神经细胞萎缩、减少,较APP/PS1组明显好转,海马细胞排列整齐度尚可、较均匀。与APP/PS1组相比,APP/PS1+SCH组能降低ROS含量,差异有统计学意义(P<0.05)。APP/PS 1+SCH组皮层及海马pp65蛋白相对表达量下调(P<0.05,P<0.01)。结论SCH可能通过降低ROS含量和抑制pp65保护脑组织形态结构和提高APP/PS1鼠空间探索记忆能力。     

“通督启神”针法治疗AD的动物实验研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种以记忆与认知功能障碍为主要临床表现的中枢神经系统退行性疾病,其病因复杂且发病机制尚未明确,具有高发病率、高致残率和高医疗成本的特点,成为当今公共卫生的一大难题。本研究立足于“通督启神”针法治疗AD的基础研究,对近5年“通督启神”针法治疗AD的动物实验相关文献进行整理,从提高脑能量代谢和脑血流量、抑制神经胶质细胞活化和神经炎症反应、良性调节Aβ生成与清除、抗衰老与抗氧化4个方面总结“通督启神”针法的实验效应及作用机制。最后指出未来可结合胆碱能神经、胰岛素信号转导、线粒体结构和功能以及手针、脉冲电针和音乐电针的异同深入研究,为今后“通督启神”针法治疗AD的基础研究提供新的思路与方法。     

督脉电针对APP/PS1双转基因痴呆小鼠行为学和海马区Aβ沉积的影响

目的观察督脉电针对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠行为学和海马区β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)表达的影响,探讨针刺疗法抗痴呆的作用机制。方法 7月龄雄性APP/PS1小鼠共20只,随机分为模型组,电针组,每组10只。以相同遗传背景的C57BL/6小鼠10只作为正常对照组,选取"百会""印堂""人中",隔天针刺干预1次,共15次。采用Morris水迷宫观察各组小鼠学习记忆能力变化,采用免疫组化法观察各组小鼠海马区Aβ表达含量。结果与对照组比较,模型组逃避潜伏期增长(P<0.01),游泳距离增加(P<0.01),游泳速度无统计学差异,首次跨越原平台时间延长(P<0.01),距原平台平均距离增加(P<0.01),海马区Aβ表达增多(P<0.01);与模型组比较,电针组逃避潜伏期缩短、游泳距离减少(均P<0.01),游泳速度无统计学差异,首次跨越原平台时间减少、距原平台平均距离缩短(均P<0.05),海马区Aβ表达减少(P<0.01)。结论督脉电针干预可降低Aβ沉积,而提高APP/PS1双转基因小鼠学习记忆和空间探索能力。     

“通督启神”法电针对APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层HIF-1α、BNIP3表达的影响

目的：观察“通督启神”法电针对阿尔茨海默病（AD）模型小鼠空间学习记忆能力和大脑皮层HIF-1α、BNIP3表达的影响，探讨其治疗AD的作用机制。方法：30只6月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、电针组、电针+抑制剂组，用10只相同遗传北京的C57BL/6小鼠作为正常对照组。采用Morris水迷宫观察各组小鼠行为学变化；免疫组化DAB染色方法观察各组小鼠大脑皮层HIF-1α、BNIP3、Beclin1表达情况；Western blot检测各组小鼠大脑皮层HIF-1α、BNIP3、Beclin1、PI3K的表达含量。结果：在隐蔽平台实验中，电针组逃避潜伏期低于模型组（P＜0.05）和电针+抑制剂组（P＞0.05），电针+抑制剂组较模型组有下降趋势（P＞0.05）；在空间探索实验中，电针组目标象限进入次数和游泳距离明显大于模型组和电针+抑制剂组，电针+抑制剂组较模型组有上升趋势（P＞0.05）；免疫组化DAB染色结果表明，电针组HIF-1α、BNIP3表达高于模型组和电针+抑制剂组（P＜0.05），电针+抑制剂组较模型组有上升趋势（P＞0.05）；WesternBlot检测结果表明，电针组HIF-1α、BNIP3表达均高于模型组和电针+抑制剂组（P＜0.05），电针+抑制剂组较模型组相比有上升趋势（P＞0.05）。结论：“通督启神”法电针能够提高APP/PS1小鼠的空间学习记忆能力，并增加大脑皮层HIF-1α、BNIP3的表达，可能与增加线粒体自噬机制相关。     

电针对APP/PS1转基因AD鼠Morris水迷宫学习记忆及脑皮层Aβ水平的影响

目的：探讨电针对5月龄APP/PS1转基因AD模型鼠学习记忆行为学及脑皮层Aβ水平的影响。方法：20只APP/PS1转基因阳性雄鼠随机分为模型组、电针组,每组各10只,APP/PS1转基因阴性雄鼠10只为对照组,电针组针刺＂百会＂、＂涌泉＂后接电针仪,疏密波,每次针刺持续15 min,隔日1次;对照组、模型组以相同方法用鼠袋束缚15 min,隔日1次,3组都持续5周,以Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,用免疫组化方法检测脑皮层Aβ1-40、Aβ1-42的表达。结果：3组间的逃避潜伏期差异有统计学意义（P〈0.05）,电针组与模型组之间的差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫组化电针组Aβ1-40、Aβ1-42的表达降低。结论：电针或许通过减少Aβ的生成来提高APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力。     

地黄饮子对APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群的影响

目的 采用16S rRNA测序技术，检测地黄饮子对5月龄APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群多样性、相对丰度等差异。方法 将转基因APP/PS1(-)小鼠设为正常组，其余转基因阳性APP/PS1(+)分为模型组、中药组和西药组。中药组灌胃给予地黄饮子24g·kg^-1,西药组灌胃给予安理申0.8mg·kg^-1,正常组ig给予同等体积的生理盐水，1次/d,连续28 d。提取试剂盒抽提各组粪便样本中DNA,对V3-V4区进行PCR扩增，再使用Illumina Miseq PE300高通量测序平台进行Paired-end测序。最后对数据进行生物信息学分析，结果 本研究共得到1003个OTUs。物种累积曲线表明本研究所收集的样本量充足。Alpha多样性分析，中药组与其余组相比显著提高了菌群的多样性，Beta多样性分析，各组数据组间差异明显，物种韦恩图显示，中药组和西药组均能降低APP模型小鼠的微生物菌群OTU丰度，但较正常组增加了OTU丰度。菌种分类水平提示地黄饮子更倾向提升菌群的多样性，尤其是在厚壁菌门的菌种，优势菌种的比例更接近正常组；LEfSe分析...     

基于16S rRNA高通量测序技术探究补中益气加减方对胃癌荷瘤小鼠肠道菌群的影响

目的:基于16S rRNA高通量测序技术观察补中益气加减方对胃癌荷瘤小鼠肠道菌群结构组成和多样性的影响,探讨该中药复方治疗胃癌的潜在作用机制。方法:取24只小鼠采用腋下皮下注射MKN-28人胃癌高转移细胞悬液的方法制作胃癌荷瘤小鼠模型,待瘤块长到5 mm³时视为造模成功。将造模成功的小鼠随机分为模型组、补中益气加减方组(中药组)和程序性死亡受体1(PD-1)抗体组(阳性药物组),每组8只,另取8只正常小鼠作为正常组。中药组按每日25 g/kg剂量灌胃给药,连续灌胃24 d;阳性药物组按每次10 mg/kg,每3 d腹腔注射1次给药,共给药8次;正常组和模型组给予每日1次等体积生理盐水灌胃,连续24 d。给药期间监测各组小鼠体质量,给药结束后收集小鼠粪便颗粒,运用16S rRNA高通量测序技术检测小鼠粪便中的肠道菌群结构组成和多样性,随后分离肿瘤并称重。结果:给药期间各组小鼠体质量波动不大,给药结束后各组小鼠体质量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。给药结束后,中药组和阳性药物组小鼠瘤质量均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01)。各组小鼠肠道菌群的操作分类单元(OTUs)共有17 905个,每组特异性OTUs分布为正常组1309个,模型组6236个,中药组1110个,阳性药物组462个。α多样性方面,模型组小鼠肠道菌群丰富度指数和多样性指数均显著升高(P<0.01,P<0.05),而中药组、阳性药物组小鼠肠道菌群上述指数均较模型组显著降低(P<0.01);β多样性方面,模型组和正常组小鼠的肠道菌群微生物群落构成差异明显,而中药组和阳性药物组与正常组接近。在门水平方面,与正常组比较,模型组小鼠肠道菌群中拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度降低,厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)丰度升高,差异均无统计学意义(P>0.05);Firmicutes/Bacteroidetes值(F/B值)显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中药组和阳性药物组小鼠肠道菌群中Bacteroidetes、Proteobacteria丰度升高,Firmicutes丰度降低,差异均无统计学意义(P>0.05);F/B值显著降低(P<0.05,P<0.01)。在属水平方面,与模型组比较,中药和阳性药物可共同调节胃癌荷瘤小鼠肠道菌群Muribaculum、Enterorhabdus、Anaerostipes、Barnesiella、Clostridium、Lacrimispora、Lactonifactor、Dorea、Streptococcus、Mediterraneibacter10个菌属(P<0.05)。结论:补中益气加减方对胃癌荷瘤小鼠瘤体有抑制作用。胃癌造模使小鼠肠道菌群结构发生变化,补中益气加减方与PD-1抗体均能有效改善胃癌荷瘤小鼠肠道菌群多样性,维护肠道微生态平衡,这可能是两种药物抑制胃癌进展的共同靶点。     

麦冬多糖MDG-1对膳食诱导肥胖模型小鼠肠道益生菌群多样性影响的研究

目的:研究麦冬多糖MDG-1对膳食诱导肥胖小鼠肠道益生菌群多样性的影响,特别关注肠道益生乳酸菌多样性的变化。方法:选取8周龄雄性C57BL/6J小鼠60只,给予高脂饲料(research diets,D12492)喂养6周及适应性灌胃2周,剔除体重低于30 g和灌胃体重降幅超过10%的动物,将诱导成功的肥胖模型小鼠按体重和血糖随机分为DIO模型组(diet-induced obesity,DIO)以及MDG-1高(300 mg·kg-1)、中(150 mg·kg-1)、低(75 mg·kg-1)剂量给药组;模型组及MDG-1不同浓度治疗组用高脂饲料喂养,对照组小鼠始终给予低脂饲料(research diets,D12450B)喂养,每组各12只。治疗组小鼠分别以不同浓度的MDG-1溶液灌胃,模型组和对照组小鼠以对照溶剂(生理盐水)灌胃,持续16周,于治疗终点收集各组小鼠直肠内容物。通过传统培养方法结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)法对小鼠的肠道益生菌进行培养,统计菌落数量,分析模型动物口服不同浓度的MDG-1前后肠道益生菌群的变化,通过16S r DNA测序,建立系统发育树以及利用PCR-DGGE技术等分子鉴定手段确定小鼠肠道菌群变化的优势菌群。结果:不同浓度的MDG-1均可增加小鼠肠道益生菌群数量,尤其是鼠乳杆菌和台湾乳杆菌,且随浓度增加作用逐渐增强。结论:不同给药剂量的MDG-1可在一定程度上增加小鼠肠道益生菌的数量,尤其是台湾乳杆菌和鼠乳杆菌,同时改善肠道菌群多样性,促进肠道益生菌的增殖。     

天麻粉预防痴呆小鼠模型发病及其对抗氧化作用的影响

目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有关,进一步探讨天麻粉的神经保护作用机制以及对AD预防和治疗的作用。方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,将实验小鼠分为5组,正常组,正常给药组,模型组,天麻粉预防组,天麻粉治疗组。正常给药组,天麻粉预防组在小鼠8周龄时每日灌胃同等剂量的天麻粉(1.5 g·kg^-1);正常组、模型组同时期给予等量的生理盐水,直至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,天麻粉治疗组待小鼠22周龄时,连续2周每天灌胃同等剂量天麻粉(1.5 g·kg^-1),灌胃至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠穿越平台次数、逃避潜伏期及平台停留时间;提取小鼠海马组织RNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2,HO-1,Keap1的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马组织中Nrf2,HO-1,Keap1蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,水迷宫检测结果显示,模型组小鼠的学习记忆能力显著降低(P<0.01);与模型组比较,天麻粉预防组、天麻粉治疗组小鼠学习记忆能力显著提高(P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,天麻粉预防组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的增高(P<0.05,P<0.01),天麻粉治疗组Nrf2,HO-1 mRNA水平显著增高(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平变化差异无统计学意义,各组间Keap1的mRNA及蛋白水平变化无统计学差异。结论:Morris水迷宫及其他结果显示天麻粉能够改善APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,且其可能通过调控Keap1-Nrf2/HO-1通路,增强下游抗氧化基因的表达发挥抗氧化功能,进而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。     

红景天破壁饮片对小鼠肠道菌群影响的初步研究

初步研究并对比红景天破壁饮片﹑常规饮片和传统粉末对正常小鼠肠道菌群的影响。分别给药灌胃小鼠14 d后取小鼠粪便进行传统细菌培养和PCR-DGGE(聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳)分析。细菌培养结果表明1/8剂量破壁饮片组的肠球菌和大肠杆菌的数量比常规饮片组和传统粉末组少,而乳酸杆菌和双歧杆菌显著增加(P<0.05)。PCR-DGGE结果表明,1/8剂量破壁饮片组肠道菌群的多样性系数(H)和物种丰度(S)高于其他各组,物种丰度(S)与正常组对比具有极显著意义(P<0.01),与常规饮片组和传统粉末组相比具有显著性意义(P<0.05),组内相似度也较高。长期服用1/8剂量破壁饮片会有一定的调节肠道的作用,且很可能是通过促进乳酸杆菌和双歧杆菌等益生菌的生长来进行调节,所形成的肠道菌群群落也会更稳定。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠突触 相关蛋白表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白突触后致密蛋白-95(postsynaptic densityprotein-95,PSD-95)和骨架蛋白Shank1表达的影响。方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮阳性对照组(10 mg.kg-1.d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,100 mg.kg-1.d-1),正常对照组为相同背景非转基因小鼠。灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法进行检测。结果:行为学检测,治疗组与模型组相比定位航行实验和空间探索实验存在不同程度的差异(P<0.01或P<0.05)。PSD-95和Shank1免疫组化,模型组小鼠大脑海马CA1区较对照组阳性细胞明显减少(P<0.01),姜黄素干预组有所恢复。Western blot检测海马PSD-95的蛋白结果显示,模型组小鼠海马PSD-95的蛋白表达条带均比对照组小鼠明显变细、颜色变浅(P<0.01);姜黄素干预组小鼠海马PSD-95的蛋白表达条带均明显增粗、颜色加深(P<0.05)。结论:姜黄素增加APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白shank1和PSD-95表达,改善APP/PS1双转基因小鼠突触的结构和可塑性,提高空间学习记忆能力。     

楮实子对APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生的影响

目的探讨楮实子对APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生的影响。方法 40只APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性药组(10 mg/kg多奈哌齐)及楮实子低、高剂量组(1.8、3.6 g/kg),C57BL/6小鼠作为对照组,每组10只,灌胃给药6周。然后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,TUNEL法检测小鼠海马区神经细胞凋亡,免疫荧光染色法检测小鼠海马区NeuN/BrdU阳性细胞表达,Western blot法检测GSK-3β、β-catenin蛋白表达。结果与模型组比较,楮实子高剂量组学习记忆能力显著改善(P<0.05),凋亡细胞数显著减少(P<0.01),NeuN/Brdu阳性细胞数显著增加(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著降低(P<0.05),β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论楮实子能促进APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。