发酵的人参提取物BST204对脂多糖激活的鼠巨噬细胞中iNOS表达和NO生成的抑制作用

诱生型NO合酶（iNOS）只有在细胞暴露于特殊的刺激剂，如细胞因子、细菌性脂多糖类（LPS）和钙离子载体时，才能够表达。而它一旦被表达，将产生大量的NO，从而介导各种急、慢性炎症发生。人参皂苷Rh2和Rg3具抗肿瘤和抗炎作用，但合成困难。作者研究了发酵人参提取物（BST204）对iNOS表达和NO产生的作用，并与人参粗提物（GE）做比较。     

中药人参、黄芪、黄芩水提物增加血管平滑肌细胞NO与cGMP

以往实验研究表明,黄芪、人参、黄芩(根)的水提物可诱导培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中一氧化氮(NO)的形成。此次对其作用机理作进一步探讨。 取Sprague-Dawley200～300g雄性大鼠的胸主动脉,酶解分离血管平滑肌细胞。在含有10％灭活小牛血清,100IU/ml青霉素     

黄芪、当归对血管平滑肌细胞粘着斑激酶表达和细胞凋亡的影响

目的：探讨黄芪,当归对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）粘着斑激酶（FAK）表达和细胞凋亡的影响。方法：应用RT-PCR,Western blot检测黄芪,当归对FAK表达的影响;应用Greiss试剂检测VSMC培养液中NO2^-含量;应用流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2和caspase-3表达活性。结果：黄芪,当归注射液可以显著抑制由碱性成纤维细胞生长因子所诱导的FAK表达。增加细胞培养液中的NO2^-含量,诱导cas-pase-3表达,下调bcl-2表达,促进体外培养的VSMC凋亡。结论：黄芪,当归诱导VSMC凋亡与其促进NO合成,抑制FAK表达,诱导促凋亡基因caspase-3表达及下调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

大黄素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察大黄素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及机制。方法:斑贴法培养大鼠主动脉VSMC,AngⅡ刺激VSMC建立细胞增殖模型。采用MTT法检测细胞增殖,观察大黄素(10,20,40,80μmol.L^-1)、亚硝基-精氨酸甲酯(L-NAME,100μmol.L^-1)对AngⅡ诱导VSMC增殖的影响。免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达;硝酸还原酶及化学比色法测细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMC iNOS mRNA的表达。结果:大黄素在10~80μmol.L^-1呈剂量及时间依赖性抑制VSMC增殖,但可被100μmol.L^-1的L-NAME部分抵消;大黄素能减少PCNA阳性细胞表达,升高NO,NOS,iNOS水平,增加iNOS mRNA的表达。结论:大黄素对AngⅡ诱导的VSMC增殖有抑制作用,抑制VSMC PCNA的表达,上调iNOS基因表达,升高NO水平可能是其发挥作用的机制。     

丹参对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶和骨桥蛋白基因表达及细胞增殖的影响

目的：探讨丹参（SAL）对氧化低密度脂密度（ox-LDL)诱导体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）基质金属蛋白酶（MMP）和骨桥蛋白（OPN）基因表达的影响，以提示SAL抑制VSMC增殖和迁移的作用机理。方法：应用Northern,Western印迹和斑点杂交检测SAL对MMP-2，MMP-9和OPN表达的影响；采用^3H-TdR掺入实验，检测VSMC增殖活性。结果：SAL或复方丹参（SALC）注射液对ox-LDL诱导的MMP-2和MMP-9表达以及OPN的合成与分泌具有明显的下调作用。且可显著抑制VSMC的DNA合成；将ox-LDL与SAL或SALC注射液共孵育1h后再处理VSMC，ox-LDL对上述基因表达和VSMC增殖的诱导作用基因消化。结论：SAL抗VSMC增殖与迁移的作用与其调整基质代谢有关。     

生药水提取物对血管平滑肌细胞中一氧化氮合成的诱导作用

研究了21种生药的水提取物对培养血管内皮及平滑肌细胞中一氧化氮(NO)合成的作用。结果发现,黄芪、人参和黄芩的水提取物对大鼠血管平滑肌中NO的合成有诱导作用,但对牛颈动脉内皮细胞中NO的合成没有明显的作用。当黄芪和人参水提取物的浓度超过400μg/ml时,其对血管平滑肌细胞中NO合成的诱导作用呈剂量依赖性。当浓     

葛根素抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及c-fos和bcl-2蛋白表达

目的：观察葛根素对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及对c-fos和bcl-2蛋白的表达作用,旨在认识葛根素作用的分子机制。方法： 建立凝血酶（T）诱导VSMC增殖的模型,以细胞计数和流式细胞仪DNA含量测定、细胞周期分析法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。T及葛根素等各处理因素作用24 h后,用免疫印迹法（Western blot）检测c-fos蛋白和bcl-2蛋白表达。结果：T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24 h 末达峰,且T在0.1～1.0 U·L^-1有剂量依赖关系；葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖、DNA合成以及 VSMC c-fos和bcl-2蛋白的表达。结论： 葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c-fos和bcl-2蛋白表达有关。     

虫草菌丝药物血清对白细胞介素-1β损伤胰岛细胞的保护作用的实验研究

目的通过白细胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）损伤离体胰岛细胞，研究虫草菌丝（Cordyceps sinensis，CS）含药血清对胰岛细胞的保护作用以及其机制与抗氧化酶和一氧化氮（Nitricoxide，NO）的关系。方法离体培养乳鼠胰岛细胞，用IL-1β损伤胰岛细胞，与不同浓度CS含药血清共同孵育，应用MTT法检测细胞活性，放免法检测基础和高糖胰岛素分泌量，比色法检测细胞培养上清液中一氧化氮（NO）的含量，诱生型一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase，iNOS）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione perioxidase，GSH—Px）的活性。结果CS含药血清显著提高IL-1β损伤的胰岛细胞活性，并且胰岛细胞基础和高糖刺激胰岛素分泌量明显提高。IL-1β作用后细胞培养上清液中NOS活性升高，NO含量增加，而SOD，GSH—Px的活性水平降低，经与不同浓度CS含药血清共同孵育后，细胞培养上清液中NO含量减少、iNOS活性降低，SOD，GSH—Px的水平明显升高，呈剂量依赖性，具有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论CS含药血清对IL-1β损伤的胰岛细胞分泌功能和细胞活性有保护作用，其机制与降低iNOS的活性，从而减少NO生成以及提高SOD，GSH—PX的活性水平有关。     

芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察芍药苷对血管紧张素Ⅱ刺激下离体大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响和基质金属蛋白酶-2活性的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、芍药苷干预血管平滑肌细胞,采用MMT法检测细胞增殖,硝酸还原酶及化学比色法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,应用酶谱法测基质金属蛋白酶-2活性的变化.结果 AngⅡ能明显促进平滑肌增殖、提高基质金属蛋白酶-2活性,芍药苷在125～1000 μg/mL能显著提高NO、NOS、iNOS水平,抑制平滑肌增殖,并呈剂量及时间依赖性;能显著抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌基质金属蛋自酶-2活性的升高.结论 芍药苷可能通过升高NO和NOS水平抑制AngⅡ诱导的平滑肌胞增殖.     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia，HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型，与不同浓度的ICA共同培养48h后，用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多，s期细胞数明显减少，与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）；CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

复方中药861对大鼠肝星状细胞系一氧化氮合酶表达及其活性的影响

目的：研究复方中药861对大鼠肝星状细胞系（HSC－T6）一氧化氮合酶（NOS）表达及其酶活性的影响，并探讨该药预防、治疗早期门脉高压的可行性。方法：细胞密度为1×10^5/ml的HSC－T6接种于细胞培养皿中，95％O2，5％CO2，37℃，培养24h进行以下分组实验，每组重复6皿，继续培养24h。1组：HSC－T6空白对照组；2组：HSC－T6加复方中药861（2mg/ml)；3组：HSC－T6加复方中药861（4mg/ml)；4组：HSC－T6加复方中药861（8mg/ml)；5组：HSC－T6加复方中药861（4mg/ml)加L－硝基精氨酸甲酯（L－NAME,4mg/ml)。采用化学比色法测定NOS活性，采用硝酸还原酶法测定培养液一氧化氮（NO）水平。4％多聚甲醛固定细胞2h，采用免疫细胞化学法观察HSC－T6诱导型一氧化氮合酶（iNOS)表达。结果：复方中药861能增加HSC－T6 NOS活性（P＜0．01），上清液NO水平也平行增加（P＜0．01），L－NAME不能抑制复方中药861刺激的HSC－T6合成、分泌NO增加（P＞0．05）。免疫细胞化学研究发现活化的HSC－T6细胞浆有iNOS表达，复方中药861能增加HSC－T6 iNOS表达。结论：活化HSC－T6iNOS表达阳性，与自分泌NO有关；复方中药861能明显增加HSC－T6iNOS表达及其酶活性，NO合成、分泌增加。复方中药861可能通过增加肝星状细胞分泌NO途径，抑制肝星状细胞的收缩，从而降低肝窦阻力。因此，复方中药861在预防、治疗早期门脉高压中可能具有重要作用。     

野菊花超临界二氧化碳萃取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的保护作用

摘要：目的 研究野菊花超临界二氧化碳萃取物（SCFE）对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症反应的保护作用。方法 体外培养RAW264.7细胞,LPS（100 ng.mL-1）诱导炎症模型,采用SCFE（75、150、300 μg.ml-1）进行干预。MTT法测定细胞活性,Griess 法测定细胞内一氧化氮（NO）水平,ELISA测定细胞内趋化因子PEG2及细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）的产量,RT-PCR法测定相关细胞因子和合成酶的mRNA表达。结果 与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7 细胞中NO、PEG2以及TNF-α、IL-1β、IL-6的产量,而SCFE 干预后上述指标含量均明显降低（p<0.05）。SCFE干预组中细胞内一氧化氮合成酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）、及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA 表达水平较LPS 单独刺激组显着下降。结论 SCFE对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应具有显著保护作用。     

白藜芦醇对脂多糖诱导一氧化氦和肿瘤坏死因子生成的影响

目的：探讨白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞激活时所分泌的一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法：采用LPS诱导的小胶质细胞活化模型，用ELISA法测定细胞外液中的炎症介质NO和TNF-α的含量。结果：LPS能高度激活小胶质细胞并且能使NO和TNF-α分泌增加，白藜芦醇明显抑制NO和TNF-α的含量。结论：白藜芦醇有抑制炎症介质NO和TNF-α的分泌作用。     

一氧化氮和水杨酸依次介导内生真菌诱导子促进苍术细胞中苍术素生物合成的信号转导

目的 研究介导内生真菌诱导子促进苍术悬浮细胞中苍术素生物合成的信号分子及信号转导途径,并探讨诱导子对苍术素合成途径关键酶活性的影响。方法 采用植物细胞悬浮培养法,考察内生真菌诱导子处理下苍术细胞中一氧化氮（NO）、水杨酸（SA）及苍术素量的变化。结果 内生真菌诱导子通过诱导苍术细胞中一氧化氮合酶（NOS）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）以及乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的活性,显著促进苍术细胞的NO迸发、SA和苍术素的合成。NOS抑制剂PBITU可以阻断诱导子对NO、SA和苍术素合成的促进作用,外源NO供体SNP及外源SA单独处理也能促进苍术素的合成,说明NO和SA是参与苍术素合成的信号分子,且NOS是参与诱导子诱发苍术细胞NO迸发的主要途径。NO猝灭剂cPITO可以有效清除诱导子诱发苍术细胞的NO迸发,显著阻断诱导子对苍术细胞中SA和苍术素合成的促进作用,外源SNP可以逆转cPITO对PAL、ACC活性以及SA、苍术素合成的抑制作用,表明NO是介导内生真菌诱导子诱发苍术细胞中苍术素和SA生物合成所必需的上游信号分子。结论 NO主要通过SA信号途径介导内生真菌诱导子激活ACC,显著促进苍术细胞中苍术素的生物合成。     

淫羊藿苷与葛根素诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：研究淫羊藿苷（icariin，ICA）与葛根素（puerarin）对同型半胱氨酸（homocysteinemia，HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）凋亡的影响。方法：建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型，与不同浓度的淫羊藿苷与葛根素共同培养48h后，用TUNEL法检测凋亡细胞，荧光显微镜形态学观察并进行凋亡指数分析。结果：淫羊藿苷与葛根素各组凋亡细胞数明显增多，与HCY组相比，差别有统计学意义（P〈0．01）。结论：淫羊藿苷与葛根素联用可拮抗HCY诱导的兔VSMC增殖，促进其凋亡。     

喜树碱对结肠癌细胞SW480诱导性一氧化氮合酶合成的影响

目的:研究喜树碱对结肠癌细胞SW480诱导性一氧化氮合酶(iNOS)合成的影响,以探讨喜树碱抗肿瘤的新的可能的机制.方法:培养结肠癌SW480细胞系,用脂多糖和IL-1β诱导诱导性一氧化氮合酶的产生.用不同浓度的喜树碱作用于SW480细胞系,MTT法检测细胞毒作用,Griess法检测NO生成量,RT-PCR法检测iNOS mRNA的表达, Western blot检测iNOS蛋白质的表达.结果:喜树碱能减少SW480细胞NO的生成量,并且呈时间和剂量相关性.SW480细胞经0.032μg/ml、0.125μg/ml的喜树碱处理24小时后,iNOS mRNA转录量和iNOS蛋白表达量减少,并呈剂量相关性.结论:喜树碱能特异性地减少结肠癌SW480细胞NO的生成量、降低iNOS mRNA和蛋白质的表达,这可能是喜树碱抗肿瘤的一个新的作用机制.     

生脉散对LPS诱导急性肝衰竭大鼠一氧化氮的影响

目的探讨生脉散对脂多糖（LPS）诱导急性肝衰竭大鼠一氧化氮的影响。方法采用D-氨基半乳糖腹腔注射法制作急性肝衰竭大鼠模型。生脉散灌胃2h及8h后,检测血清大肠杆菌LPS、肿瘤坏死因子（TNF-α）与一氧化氮（NO）、总一氧化氮合酶（zNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）等水平。结果生麦散作用2h后可显著降低急性肝衰竭大鼠LPS、TNF-α和iNOS水平与对照组比较有统计学差异（P〈0.001）,LPS诱导8h后急性肝衰竭大鼠血清NO、zNOS和iNOS显著升高（P〈0.001）,生脉散能显著降低急性肝衰竭大鼠血清NO、iNOS水平（P〈0.001）,而对zNOS水平无明显影响。结论SD大鼠在急性肝衰竭状态下,存在严重内毒素血症,并引起一氧化氮水平变化的炎症级联反应,生脉散可通过调节一氧化氮水平起到治疗作用。     

滋补肝肾、益气活血方药对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:采用血清药理学方法研究滋补肝肾、益气活血方药对内皮素(ET)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及相关基因表达的影响。方法:采用3HTdR掺入实验检测VSMC增殖状态,应用Northern杂交、反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测中药血清对VSMC诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因和ET诱导的cjun、增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达活性的影响。结果:中药血清可明显抑制ET对VSMC的促丝裂作用(P<005);抑制原癌基因cjun和PCNA基因表达,促进iNOS转录。结论:滋补肝肾、益气活血方药通过调节iNOS和细胞增殖相关基因的表达活性进而阻止VSMC增殖。     

三七皂苷R1对血管平滑肌细胞迁移及p38MAPK蛋白的影响

目的 观察三七皂苷R1对血管平滑肌细胞（VSMC）迁移及p38 MAPK蛋白的影响。方法 用AngⅡ诱导VSMC迁移建立细胞迁移模型，将迁移的VSMC随机分为对照组和三七皂苷R1低、中、高剂量组（5、10、20μmol/L）。用细胞划痕实验检测VSMC迁移面积，Western blotting法检测MMP2、MMP9、磷酸化p38 MAPK及p38 MAPK蛋白表达。结果 与对照组相比，三七皂苷R1中、高剂量组均能明显减少VSMC的细胞迁移面积及MMP2、MMP9迁移蛋白表达（P <0.05），且呈剂量依赖性；与对照组相比，三七皂苷R1中、高剂量组均能明显减少p38 MAPK蛋白磷酸化（P <0.05），且呈剂量依赖性。结论 三七皂苷R1抑制了AngⅡ诱导的VSMC迁移面积，同时下调MMP2和MMP9迁移蛋白，且呈剂量依赖性，其机制可能与降低p38 MAPK蛋白磷酸化有关。     

瓜子金皂苷己抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活作用

摘要: 目的 观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F, PGSF）对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质瘤细胞激活的作用及其作用机制。方法 以0.1μg?mL LPS刺激BV-2 细胞构建炎症模型,以酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养基上清中的白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF-α）浓度、以Griess法检测一氧化氮（NO）的浓度;以免疫印迹法（Western Blot）或逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶-2（COX-2 ）的蛋白和mRNA表达,以及其炎症信号受体TLR4 mRNA表达。结果 PGSF（10、1、0.1μmol/L）可浓度依赖性地降低LPS诱导的BV-2细胞培养基中TNF-α（P<0.01、P<0.01）、IL-1β（P<0.05、P<0.05）和NO的浓度（P<0.05）,同时下调细胞内iNOS蛋白（P<0.05、P<0.05）和mRNA（P<0.01、P<0.05）表达以及COX-2的蛋白（P<0.05）和mRNA（P<0.05）表达,此外逆转TLR4 mRNA表达的上调(P<0.05)。结论 PGSF能够负调控LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放炎性介质,抑制小胶质细胞激活,发挥对抗神经炎症的作用,此抗炎作用可能由TLR4受体介导。