脂联素对高糖介导的大鼠近端肾小管上皮细胞单核趋化蛋白-1表达的影响

目的 体外实验研究脂联素对高糖刺激下的大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）单核趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA及蛋白表达的影响.方法 用含不同浓度葡萄糖的DMEM培养基体外培养NRK-52E细胞,分5组（每组4个样本,此实验重复4次）：A组：含5 mmol/L葡萄糖培养基对照组;B组：含30 mmol/L葡萄糖培养基组;C组：含30 nmol/L葡萄糖培养基＋1 mg/L脂联素组;D组：含30 mmol/L葡萄糖培养基＋5 mg/L脂联素组;E组：含30 mmol/L葡萄糖培养基＋10 mg/L脂联素组.以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot法榆测比较各组细胞MCP-1 mRNA及蛋白表达的变化.组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析.结果 A组细胞MCP-1 mRNA表达量为0.247±0.005,B组为0.691±0.009,显著高于A组（t=72.03,P＜0.01）;C组为0.425±0.013,显著高于A组（t=46.31,P＜0.05）;D组为0.307±0.012,与A组相近（t=73.24,P＞0.05）;E组为0.253±0.011,与A组无差异.不同浓度脂联素各组间比较差异亦具有统计学意义（F=37.15,P＜0.05）.A组MCP-1蛋白表达量为10.25±0.03,B组为58.47±0.02,显著高于A组（t=35.21,P＜0.01）;C组为35.86±0.05,较B组显著下降（t=48.26.21,P＜0.05）;D组为25.63±0.06,较B组显著下降（t=32.34,P＜0.01）;E组为21.53±0.03,较B组显著下降（t=42.26,P＜0.05）,但高于A组（t=64.28,P＜0.01）.不同浓度脂联素各组间比较差异亦具有统计学意义（F=53.15,P＜0.05）.结论 脂联素可呈剂量依赖性地抑制高糖环境下大鼠近端肾小管上皮细胞MCP-1 mRNA及蛋白的高表达.     

罗格列酮通过p-ERK通路抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞表达核因子κB受体激活配体

目的 探讨罗格列酮对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(RA-FLS)核因子κB受体激活配体(RANKL)和骨保护素表达的影响及信号传导通路。方法 原代培养RA-FLS,不同浓度罗格列酮（0、5、10、15、20 μmol/L）干预3 d,检测罗格列酮对RA-FLS增殖及RANKL、骨保护素mRNA和蛋白表达的影响,并检测0、15、20 μmol/L罗格列酮对RA-FLS p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白表达的影响。多组间比.较采用单因素方差分析,两两比较采用Bonferroni法。结果 5、10、15、20 μmol/L罗格列酮干预可抑制RANKL mRNA (0.503±0.005、0.438±0.031、0.161±0.042、0.050±0.018）和蛋白(1.72 ±0.09、1.58±0.05、1.46±0.11、1.22±0.14)表达（F=200.820,F=13.602,均P＜0.01）,上调骨保护素mRNA (2.8±0.5、7.0±3.2、8.4±2.3、25.7±5.1)和蛋白(1.21±0.11、1.52±0.16、1.63±0.11、1.91 ±0.03)表达（F=26.531,F=24.872,均P＜0.01）,RANKI/骨保护素mRNA和蛋白比率降低（F=453.425,P＜0.01;F=4.173,P＜0.05）,且呈剂量依赖性;15、20μmol/L罗格列酮明显抑制p-ERK蛋白表达（0.55±0.06、0.45±0.06,F=6.991,P＜0.05）。结论 罗格列酮可能通过p-ERK信号途径抑制RA-FLS表达RANKL并上调骨保护素的表达。     

胰淀素受体在胰淀素抑制胰岛β细胞功能中的作用

目的分析胰淀素受体在胰淀素抑制胰岛β细胞功能中的作用。方法胰淀素、胰淀素受体拮抗剂AC253单独及联合短时间作用于大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞后,ELISA及RT-PCR检测葡萄糖刺激胰岛素分泌及mRNA转录情况,共聚焦显微镜下观察高糖、磺脲类药物及KCl刺激下细胞内Ca2+浓度的变化,RT-PCR检测胰淀素短时间作用对胰淀素受体成分受体活性修饰蛋白(RAMP)mRNA表达的影响。结果胰淀素短时间孵育高糖刺激下胰岛素分泌由(2.08±0.35)ng/ml降至(0.73±0.24)ng/ml(P0.01),mRNA转录由(1.00±0.12)降至(0.39±0.09)(P0.01),加用AC253后胰岛素分泌升至(1.41±0.32)ng/ml,mRNA转录升至(0.62±0.08),与单用胰淀素组比较,差异有统计学意义(P0.05)。AC253可缓解胰淀素对高糖刺激下Ca2+升高的抑制作用,Ca2+总体变化水平和峰值由(650.155±4.818)和(1.154±0.011)升至(769.795±4.956)和(1.589±0.013)(P均0.01),同样AC253也可缓解胰淀素对磺脲类药物及KCl刺激下细胞内Ca2+升高的抑制作用。胰淀素短时间孵育未改变RAMP mRNA的表达。结论胰淀素受体可能参与了胰淀素抑制胰岛β细胞的胰岛素分泌、合成及对细胞内Ca2+浓度的调节。     

抵抗素对脂肪变性肝细胞核因子κ B和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的 探讨抵抗素(resistin)对脂肪变性肝细胞脂质代谢及核因子κB (NF-κ B)、肿瘤坏死因子(TNF)α表达的影响. 方法 选用软脂酸诱导L02细胞脂肪变性模拟非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)体外模型.分C组(正常对照组),P组(模型组:软脂酸20μg/ml)及分别加入重组人抵抗素50μg/L的CR组和PR组.各组给予相应处理72 h后,观察细胞的脂肪变并测定细胞培养上清液中甘油三酯(TG)、ALT、AST及γ谷氨酰转移酶(GGT)的浓度;采用半定量RT-PCR及Western blot法检测细胞胰岛素受体底物2(IRS-2)、NF-κB、TNFα的基因及蛋白表达水平.根据资料不同应用方差分析或t检验进行统计学分析,P＜ 0.05为差异具有统计学意义. 结果 P组、CR组及PR组细胞培养上清液中TG、ALT、AST、GGT的浓度明显高于C组.分别与C组比较,P组、CR组及PR组NF-κ B mRNA相对表达量0.54±0.04、0.60±0.04及1.00±0.06,与C组的0.10±0.01比较,t值分别为17.64,22.03,26.06;TNFαmRNA相对表达量0.58±0.04、0.61±0.06及1.05±0.09,与C组的0.33±0.06比较,t值分别为5.67,5.38,11.64,相对表达量明显升高,而IRS-2 mRNA (t值分别为8.19,9.23,20.93)明显降低,且P值均＜0.05,差异有统计学意义.P组与CR组间比较,t值分别为1.75,0.58,2.14,P值均＞0.05,差异无统计学意义.蛋白质表达变化趋势与mRNA变化趋势相一致.结论 抵抗素可能通过NF-κ B依赖途径对肝细胞脂肪变性胰岛素抵抗发挥促炎作用,从而促进NAFLD的发生与发展.     

他莫昔芬体外促进HepG2细胞脂肪变性观察

目的：研究他莫昔芬（TAM）对体外培养的HepG2细胞脂肪变性以及脂类代谢调控关键因子表达的影响。方法应用油酸（50μmol/L）处理HepG2细胞,诱导细胞脂肪变性体外模型,同时给予不同浓度的TAM （5～20μmol/L）干预72 h;采用油红O染色和甘油三酯含量测定检测HepG2细胞内脂质聚集情况;应用蛋白印迹法检测固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）、肉酯软脂酰基转移酶（CPT1）和微粒体甘油三酯转移蛋白（MTP）的表达;采用细胞活性检测试剂盒测定细胞活性。结果在干预72 h后,模型组细胞内甘油三酯含量为（16.53＆#177;0.17） mg/100 mg蛋白质,在5μmol/L TAM处理细胞内甘油三酯含量为（17.77＆#177;0.05） mg/100mg蛋白质,与模型组无显著性差异,但在10μmol/L和20μmol/L TAM处理组较模型组分别增加了31%[（21.57＆#177;0.16） mg/100 mg蛋白质]和44%[（23.82＆#177;0.44） mg/100 mg蛋白质],（P＆lt;0.05）;TAM上调细胞内SREBP-1c、FAS、SCD和MTP蛋白表达,但并不改变CPT1蛋白表达;TAM在5～20μmol/L范围内不影响HepG2细胞活性。结论 TAM可促进油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,其主要机制可能是通过上调SREBP-1c及其下游基因,如FAS和SCD的表达而增加了脂肪酸的合成。     

血清胰淀素、ADMA水平与代谢综合征的相关性

测定代谢综合征（MS）患者血清胰淀素和非对称二甲醛精氨酸（ADMA）水平,探讨两者的相关性及二者对MS的影响。方法：70例患者和体检对象根据其存在MS组分的个数分为非MS组（MS组分0~1个,20例）、MS高危组（MS组分2个,23例）和MS组（MS组分〉2个,27例）。分别测定空腹血糖、血脂、胰岛素、腰臀比（WHR）、体重指数（BMI）等指标,同时测定血清胰淀素、ADMA的水平。结果：与非MS组比较,MS高危组,MS组血清胰淀素[（0.41±0.04）g/L比（0.46±0.06）g/L比（0.49±0.06）g/L]、ADMA[（1.28±0.06）μg/L比（1.46±0.07）μg/L比（1.51±0.08）μg/L]的水平明显升高（P〈0.05）,且MS组明显高于MS高危组（P均〈0.05）。Pearson相关分析表明,血清胰淀素与甘油三酯（TG）、空腹胰岛素（FINS）、BMI、WHR、胰岛素抵抗指数（IRI）、ADMA呈正相关性（r=0.441~0.563,P均〈0.05）;与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）呈负相关（r=-0.461,P〈0.05）;ADMA与IRI、BMI、FINS呈正相关（r=0.445~0.483,P〈0.05）。Logistic回归分析显示胰淀素、BMI、ADMA、IRI是MS的独立危险因素（OR=5.573~7.169,P均〈0.05）。结论：血清胰淀素和非对称二甲醛精氨酸的表达与代谢综合征的发生有关,两者都是MS的独立危险因素。     

高脂饮食非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏成脂相关基因表达增强

目的探讨非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝脏成脂相关基因mRNA表达的动态变化.方法模型组SD大鼠给予高脂饮食饲养,分批于实验第4、8、12、16、24周处死,同期设普通饮食饲养大鼠作对照.RT-PCR分别检测肝脏固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）及其靶基因脂肪酸合成酶（FAS）、脂联素、抵抗素mRNA表达.结果模型组大鼠4周肝脏可见散在性肝细胞脂肪变性,8周为单纯性脂肪性肝炎,12～24周从脂肪性肝炎进展为脂肪性肝炎伴肝纤维化.从实验第4周起,模型组大鼠肝脏SREBP-1c和FAS mRNA表达逐渐增强,至24周时分别较对照组升高5～6倍和2～2.5倍;模型组大鼠肝脏从第12周起出现脂联素和抵抗素mRNA表达,两者表达量均随造模时间延长而增强.相关分析显示,SREBP-1c、FAS、脂联素、抵抗素mRNA表达量均与肝脂肪变程度呈正相关（r值分别为0.808、0.834、0.592、0.577,P值均＜0.01）.结论高脂饮食NAFLD大鼠肝脏SREBP-1c、FAS、脂联素、抵抗素等成脂基因表达增强,提示脂肪变性的肝细胞可能部分具有脂肪细胞的特征,即发生了成脂性改变.     

重组人脂联素基因在L02细胞中的表达及其对肝脂肪变的预防作用

目的 观察携带人脂联素(AdipoQ)基因真核表达载体是否能在人正常肝细胞株L02中表达,并探讨其对体外诱导肝细胞脂肪变的预防作用及其意义,为AdipoQ在非酒精性脂肪肝病的基因治疗中奠定基础.方法 将构建含人AdipoQ重组载体pEGFP-N1-AdipoQ转染L02细胞(L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,n=10),与pEGFP-N1空质粒转染L02细胞(L02/pEGFP-N1组,n=10)以及L02正常细胞株(L02组,n=10)为对照,分别加入浓度为20 μg/ml的油酸进行培养72h,用油红O染色观察细胞内脂滴,并检测细胞内甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和甘油的含量.采用SAS8.2软件进行统计分析,3组之间总体差异的检验采用单因素方差分析,3组之间两两比较采用SNK-q检验.结果 含人AdipoQ重组载体pEGFP-N1-AdipoQ能够在L02细胞株中表达,油红O染色显示72 h L02组和L02/pEGFP-N1组分别比L02/pEGFP-N1-AdipoQ组脂肪变性更为明显.L02组,L02/pEGFP-N1组和L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,TG含量分别为(89.23±18.45)μmol/L、(78.66±16.38)μmol/L和(26.58±7.65)μmol/L,FFA含量分别为(85.39±17.26)μmol/L、(75.63±12.25)μmol/L和(25.37±8.73)μmol/L,甘油含量分别为(62.29±13.59)μmol/L、(57.35±18.43)μmol/L和(15.37±7.53)μmol/L,F值分别为50.58、59.37、34.32,P值均<0.01.在L02/pEGFP-N1组中TG、FFA和甘油含量均明显高于L02/pEGFPN1-AdipoQ组,t值分别为7.81、8.50、6.75,P值均<0.01.在L02组中TG、FFA和甘油含量均显著高于L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,t值分别为9.39、10.15、7.54,P值均<0.01.TG、FFA和甘油含量在L02/pEGFP-N1组和L02组之间,差异无统计学意义.结论 携带人脂联素基因真核表达载体能够在L02细胞株中表达,而且具有预防肝脂肪变性的作用.     

胰岛素样生长因子基因在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达及其意义

目的 研究胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)及胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)基因在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达变化及其意义. 方法 用油酸诱导永生化人肝细胞(IHH)建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型,油红O染色和细胞内甘油三酯含量检测观察细胞脂肪变情况.IHH细胞分为对照组和NAFLD组,对照组细胞以DMEM/F12培养基培养,NAFLD组给予油酸0.5 mmol/L处理72 h.采用逆转录酶-聚合酶链反应及Western blot和免疫荧光染色方法检测IGF-1和IGFBP-3在两组细胞中的mRNA及蛋白质表达变化.组间均数比较采用t检验. 结果 0.5 mmol/L油酸可成功诱导IHH细胞脂肪变性,油红O染色显示细胞内脂肪滴明显增多,细胞内甘油三酯含量从对照组的(150.2±15.6)μg/ng升高到(275.7±27.2) μg/mg (t=21.67,P＜0.01).油酸诱导后,NAFLD组细胞中IGF-1和IGFBP-3的mRNA相对表达量(分.别为0.76±0.04和1.58±0.93)均较对照组(分别为4.82±1.51和5.41±1.37)明显下降,t值分别为17.915和12.893,P值均＜0.01;IGF-1和IGFBP-3的蛋白质相对表达量(分别为1.00±0.29和0.65±0.36)也较对照组(分别为2.56±0.71和1.23±0.91)明显下降,t值分别为29.17和32.12,P值均＜0.01.免疫荧光染色结果也证实NAFLD组细胞中IGF-1和IGFBP-3的蛋白质表达较对照组明显下降. 结论 非酒精性脂肪变性肝细胞模型的IGF-1和IGFBP-3表达下降,为深入研究临床上部分非酒精性脂肪肝病儿童身高受限的机制提供了实验基础.     

胰淀素抑制高糖刺激INS-1细胞内钙离子浓度升高的作用机制

 目的 分析阐明胰淀素短时间作用于INS-1细胞、抑制高糖刺激的细胞内钙离子浓度（［Ca²⁺］_i）升高的机制。方法 采用钙离子荧光指示剂Fluo-4/AM负载细胞后,激光共聚焦显微镜下连续动态观察INS-1细胞经胰淀素孵育前后在葡萄糖、KCl、咖啡因和卡巴胆碱存在条件下［Ca²⁺］_i荧光强度变化。结果 （1）单纯16.7 mmol/L葡萄糖刺激使细胞内钙离子荧光强度变化的曲线下面积（AUC）为990±16;0.5 μmol/L胰淀素使16.7 mmol/L葡萄糖刺激的胞内荧光强度有所下降（AUC为831±10）, 1.0、5.0、10.0 μmol/L胰淀素均可使细胞内荧光强度显著降低（AUC分别为555±9、535±6、531±5）,与单纯葡萄糖刺激组比较差异有统计学意义,且呈现剂量依赖趋势。（2）10.0 μmol/L胰淀素可使30 mmol/L KCl刺激的荧光强度明显减低,与单纯KCl刺激组相比（AUC：168±5比311±11）差异有统计学意义。（3） 10.0 μmol/L胰淀素预处理后咖啡因和卡巴胆碱刺激的胞内荧光强度与单纯咖啡因和卡巴胆碱刺激组相比差异无统计学意义。结论 高浓度胰淀素的短时间作用对INS-1细胞经咖啡因和卡巴胆碱刺激的内质网鱼尼丁受体(ryanodine receptor,RyR)、三磷酸肌醇(IP₃)钙库释放没有影响,但可使高糖及KCl刺激的胞内荧光强度降低。推测胰淀素短时间作用使 ［Ca²⁺］_i减少的现象,主要是通过影响膜上钙通道实现的,与胞内钙库的释放无直接相关性。     

胰岛素抵抗大鼠血糖正常阶段肝脏早期纤维化的观察

目的研究胰岛素抵抗（IR）大鼠血糖正常阶段肝脏的形态学改变。方法高糖高脂饲料（2H）和高糖高脂高盐（3H）饲料喂养SD大鼠4月，复制IR大鼠模型，普通饲料喂养的SD大鼠为正常对照，用HE、VG染色光镜和透射电镜下观察肝脏形态学变化。结果2H组出现弥漫性肝细胞脂肪变性，肝小叶内有炎细胞浸润，肝窦周围、汇管区见红染的胶原纤维。3H组发现肝索排列紊乱，肝细胞点状坏死，炎细胞浸润；弥漫性肝细胞脂肪变性，大小不一的脂滴呈弥漫性聚集在肝细胞内，脂褐素沉积。肝细胞问、肝窦周嗣、汇管区见大量红染的胶原纤维。2H组和3H组透射电镜观察发现肝Kupffer细胞增生，肝细胞胞质内有许多大小不一的脂滴，Disse间隙内胶原纤维多见，有淋巴细胞、浆细胞活化增生，另外．观察到浆细胞和肝星状细胞联系紧密。结论IR大鼠血糖正常阶段肝脏已有早期纤维化现象．可能与免疫系统激活有关。     

Th17细胞与肝细胞脂肪变性的相互作用初探

目的探讨Th17细胞在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病中的作用。方法以油酸和软脂酸（2：1）混合液处理人Chang氏肝细胞株,建立肝细胞脂肪变性模型,干预组予IL-17（100nM）处理。以油红染色及三酯酰甘油含量测定来评价细胞内脂质含量;ELISA法检测IL-17对脂肪变性肝细胞IL-6分泌的影响。分离成年雄性C57BL6小鼠脾脏淋巴细胞,加入瘦素（250μg/mL）干预培养,流式细胞仪检测Th17细胞的变化。结果 IL-17可明显增加脂肪变性肝细胞内脂滴形成和三酯酰甘油含量（P〈0.05）,IL-6水平也较其他两组显著增高（P〈0.05）;瘦素可促进脾脏淋巴细胞中Th17细胞的生成。结论 IL-17可促进肝细胞IL-6的产生并加重肝细胞脂肪变性;而作为NAFLD关键因子的瘦素可促进小鼠Th17细胞产生。肝内脂肪变性与Th17细胞之间可能存在相互促进的关系。     

中青年高血压患者颈动脉粥样硬化病变与C反应蛋白及血脂水平的变化

目的:研究中青年高血压患者的颈动脉粥样硬化病变与C反应蛋白及血脂水平的变化。方法:入选100例中青年高血压患者为观察组,80例血压正常者为正常对照组,测定两组CRP及血脂水平,用超声多普勒检测颈动脉粥样硬化程度。结果:与正常对照组比较,观察组患者颈动脉动脉壁内中膜增厚率(7.5%比33%),扁平斑块(5%比16%)、软斑块发病率(2.5%比10%),CRP[(2.35±2.03)mg/L比(13.85±2.12)mg/L]、总胆固醇[(4.37±1.00)μmol/L比(5.35±1.12)μmol/L]、甘油三酯[(1.25±0.81)μmol/L比(1.95±0.92)μmol/L]、低密度脂蛋白胆固醇[(1.56±0.7)μmol/L比(3.65±0.9)μmol/L]水平均明显升高(P<0.05～<0.01)。结论:中青年高血压患者颈动脉粥样硬化病变明显。     

血清胆红素及尿酸水平与冠心病的相关性研究

目的探讨血清胆红素及尿酸水平与冠心病之间的关系。方法经选择性冠状动脉造影确诊为冠心病的225例患者作为冠心病组,同期行冠状动脉造影后排除冠心病的206例患者作为对照组,入选者均检测血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、尿酸及血脂水平,并进行比较分析。结果与对照组比较,冠心病组患者总胆红素、直接胆红素和间接胆红素水平明显下降[(11.16±2.12)μmol/L比(16.45±2.36)μmol/L,(2.53±1.21)μmol/L比(3.35±2.11)μmol/L,(7.63±2.48)μmol/L比(9.52±3.27)μmol/L],尿酸、总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平明显升高[(369.82±95.62)μmol/L比(302.69±72.53)μmol/L,(5.13±1.48)mmol/L比(4.35±1.32)mmol/L,(1.65±0.23)mmol/L比(1.12±0.17)mmol/L,(3.26±1.24)mmol/L比(2.59±1.06)mmol/L],差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论血清胆红素水平的降低和尿酸水平的升高与冠心病发生相关。     

男性慢性乙型肝炎患者肝细胞脂肪变危险因素分析

目的：比较男性慢性乙型肝炎（CHB）合并肝脂肪变患者与单纯 CHB 患者临床特征，寻找影响肝细胞脂肪变的危险因素。方法2010年3月～2013年3月期间，住院初治且有肝活检病理学检查的男性 CHB 患者209例，根据肝组织中有无脂质沉积分为 CHB 合并脂肪变组及单纯 CHB 组，比较两组患者血脂、血尿酸、血糖、饮酒、体质量指数和病毒载量情况，进行二元 Logistic 回归分析，了解肝脂肪变的危险因素。结果在209例男性 CHB 患者中，合并脂肪变121例（57.9%），单纯 CHB 88例（42.1%）；CHB 合并脂肪变患者尿酸、低密度脂蛋白和甘油三酯分别为（352.5±87.1）mmol/L、（2.8±0.8）mmol/L 和（1.8±0.1）μmol/L，均显著高于单纯 CHB 患者[（310.3±69.1） mmol/L、（2.2±0.6） mmol/L 和（1.2±0.7）μmol/L，P〈0.01）]；体质量指数和低密度脂蛋白水平升高是男性 CHB 患者合并肝脂肪变的危险因素（P〈0.05）。结论肥胖、血脂紊乱等代谢综合征相关表现是男性 CHB 患者肝组织脂肪变的危险因素，而饮酒或病毒载量可能不是肝脂肪变的危险因素。     

红芪多糖对高糖条件下人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究红芪多糖（HPS）对高糖条件下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）合成和释放一氧化氮（NO）和内皮素-1（ET-1）的影响及作用机制。方法从新鲜脐带中分离HUVEC进行鉴定、培养,细胞分为正常对照组、高糖组（30mmol／L葡萄糖）和HPS干预组。MTT比色法分析HPS对高糖诱导HUVEC增殖率的影响,流式细胞术Annexin—V／PI双染法检测细胞凋亡,硝酸盐还原酶法检测上清液中NO的水平,分光光度法检测细胞内一氧化氮合酶（NOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的浓度,酶联免疫吸附（ELISA）法检测上清液中ET-1的含量,实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、ET-1和c-Jun氨基末端激酶l（JNKl）mRNA的表达水平。组间差异显著性检验使用单因素方差分析,组间两两比较使用LSD法。结果高糖组在6h[（82．4±3．5）％]、24h[（68．2±1．4）％]、48h[（63．0±2．9）％]的细胞增殖率显著低于对照组（100％,P〈0．05）;HPS干预组细胞增殖率随浓度变化呈现先上升后下降的趋势,其中50mg／L[（85．34-4．6）％]、100mg／L[（89．6±1．1）％]、200mg／L[（88．8±3．6）％]HPS干预组较高糖组增加,差异具有统计学意义（均P〈0．05）;高糖组NO[（24．84±1．34）μmol／L]、NOS[（0．54±0．06）U／m1]含量较正常对照组呈现下降的趋势,iNOS[（0．133±0．015）U／m1]和ET_l[1（0．740±0．070）ng／m1]含量则在各时间点均高于对照组,HPS干预组升高不同时间点HUVEC内NO[（23．20±0．55）p．mol／L]、NOS[（0．46±0．10）U／m1]、以及降低iNOS[（0．08±0．020）U／m1]和ET-1[（0．710±0．030）μg/L]的变化,P〈0．05,使其趋向正常水平;HPS可提高高糖所致内皮细胞eNOSmRNA的水平[（0．33±0．02）比（0．23±0．04）],降低ET-1mRNA的水平（2．28±0．31比2．79±0．29）;高糖组细胞内JNK1mRNA水平表达（2．95±0．05）较正常对照组（1．00±0．00）显著增加（P〈0．05）,而HPS干预组（1．45±0．05）则较高糖组（2．95±0．05）明显减少（P〈0．05）。结论HPS对体外高糖诱导HUVEC损伤具有保护作用,这一作用可能与抑制JNK信号通路有关。     

葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶siRNA对7702肝细胞增殖的影响及机制研究*

目的 探讨糖鞘脂合成代谢在肝细胞增殖中的可能作用机制。方法 体外培养肝细胞株7702细胞,利用UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶（UGCG）siRNA转染肝细胞。采用MTT法检测细胞增殖,采用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax和Caspase 3基因水平,采用Western blot法检测肝细胞Caspase 3蛋白表达情况。结果 UGCG siRNA干扰组细胞糖化神经酰胺合成酶基因水平比对照组明显下调（P<0.05）;干扰糖化神经酰胺合成酶基因表达后,转染组细胞Bcl-2 mRNA水平显著下降（P<0.05）,Bax mRNA水平显著升高,Caspase 3 mRNA及其蛋白表达水平均上调（P值均<0.05）。结论 糖化神经酰胺合成酶的缺乏引起的鞘脂代谢改变可能参与肝细胞的增殖的过程中,这可能与BCL2/BAX调节的细胞信号通路有关。     

经胃肠道给予氯化血红素对压力负荷性心衰大鼠氧化应激状态的影响

目的探讨经胃肠道给予氯化血红素后体内血红素氧合酶-1(HO-1)-CO-胆红素的反应和对大鼠慢性压力负荷性心力衰竭进程中氧化应激的影响。方法成年雄性SD大鼠63只,随机分为血红素组、心衰组和对照组,每组21只,各组再分为4、8、12周三个小组,每小组7只。心衰组、氯化血红素组行腹主动脉缩窄术,对照组行假手术。从术后3周开始血红素组以60mg/(kg·d)氯化血红素灌胃,对照组和心衰组同时间灌以同体积生理盐水。各小组在相应的时间点检测血清HO-1、碳氧血红蛋白(COHb)、丙二醛(MDA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的含量,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果 (1)氯化血红素组在给药后4、8、12周血清HO-1含量明显高于心衰组,分别是(6.80±0.92)μg/Lvs(2.5±0.22)μg/L;(10.70±0.69)μg/Lvs(4.50±0.28)μg/L;(13.30±0.99)μg/Lvs(6.07±0.71)μg/L(P0.01);COHb含量均明显高于心衰组,分别为(4.34±0.31)%vs(1.68±0.11)%;(6.32±0.44)%vs(2.46±0.20)%;(7.80±0.39)%vs(3.01±0.42)%(P0.01)。(2)氯化血红素组在给药4、8、12周血清MDA含量均低于心衰组,分别为(8.3±1.3)μmol/Lvs(14.2±2.3)μmol/L(P0.05);(9.6±0.5)μmol/Lvs(20.2±3.2)μmol/L(P0.01);(11.8±1.1)μmol/Lvs(26.1±3.7)μmol/L(P0.01);(3)氯化血红素组SOD活性在4、8、12周均高于心衰组,分别是(125±6)kU/Lvs(95±10)kU/L(P0.01);(109±9)kU/Lvs(67±5)kU/L(P0.01);(72±10)kU/Lvs(40±6)kU/L(P0.01)。(4)氯化血红素组ox-LDL含量在4、8、12周均低于心衰组,分别为(1.14±0.16)μmol/Lvs(1.80±0.22)μmol/L;(1.38±0.14)μmol/Lvs(2.34±0.25)μmol/L;(1.83±0.16)μmol/Lvs(3.17±0.31)μmol/L(均P0.01)。结论经胃肠道给予氯化血红素可以对体内的HO-1产生诱导作用;HO/CO-胆红素系统的诱导可改善压力负荷心衰大鼠的体内氧化/抗氧化失衡状态。