NGF预处理对全脑缺血再灌注沙土鼠脑皮层神经细胞凋亡的影响

目的: 探讨神经生长因子(NGF)预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后脑皮层神经细胞凋亡的影响.方法: 采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑缺血再灌注模型.沙土鼠30只随机分为5组:假手术组(A)、缺血再灌注损伤组(B)、NGF预处理48 h、 24 h、12 h组(C、D、E),B、C、D、E各组分别行脑缺血20 min再灌注72 h后处死取标本,TUNEL法观察沙土鼠脑缺血再灌注后脑皮层神经细胞凋亡的变化.结果: 与缺血再灌注损伤组相比,NGF预处理各组沙土鼠脑皮层神经细胞凋亡数目显著减少(P＜0.05),以NGF预处理48 h组脑保护效果最好.结论: NGF预处理能明显减轻沙土鼠脑缺血再灌注引起的神经细胞凋亡,具有明显脑保护作用,以NGF预处理48 h脑保护效果最好.     

沙土鼠脑缺血预处理对缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 探讨缺血预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响。方法 采用阻断双侧颈总动脉制作沙土鼠全脑缺血模型，96只沙土鼠，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉。沙土鼠随机分为四组：SH组：假手术对照组，未行脑缺血预处理；IC组：预处理对照组，予2min脑缺血后来再次缺血；IP组：预处理缺血组，予2min脑缺血，再灌注24h后，再次脑缺血10min；IR组：脑缺血再灌注组，予脑缺血10min后行再灌注。每组据再灌时间点的不同又分为Ⅰ（1d）、Ⅱ（3d）、Ⅲ（5d）、Ⅳ（7d）4个亚组，每个亚组6只动物。呆用TUNEL法检测沙土鼠脑海马CAI区神经细胞凋亡数目。结果 IP可显著减少沙土鼠脑海马CA1区神经细胞凋亡数量（与IR组相比P〈0．01）。结论 脑缺血预处理可显著提高机体对后续缺血的耐受性，其机制可能是通过抑制缺血诱导的神经细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

托吡酯对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的　观察托吡酯对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后脑神经细胞的病理改变及细胞凋亡的影响。方法　沙土鼠 30只 ,随机分为⑴假手术组 ,⑵缺血再灌注组 ,⑶预防性托吡酯组。采用双侧颈总动脉夹闭法复制沙土鼠脑缺血再灌注模型 ,术后 3d处死动物取材 ,石蜡切片 ,光、电镜观察海马CA1 区神经细胞形态的改变 ;TUNEL法显示凋亡细胞。结果　缺血再灌注组CA1 区神经细胞呈缺血性改变 ,预防性应用托吡酯能明显减轻海马CA1 区神经细胞缺血性损伤 ,细胞凋亡的表达明显减少 ,与缺血再灌注组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　托吡酯能减轻沙土鼠脑缺血再灌注所致的神经细胞损伤及凋亡 ,对缺血再灌注损伤有明显的保护作用。     

神经生长因子预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究

目的:探讨神经生长因子(NGF)预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制.方法:采用四动脉阻断(4VO)法制作大鼠全脑缺血模型.18只大鼠随机分为3组,每组6只.对照组:只分离翼小孔和颈总动脉,未予脑缺血处理;缺血组:未行NGF预处理,只行脑缺血再灌注处理;NGF预处理组:全脑缺血前12 h脑室内注射NGF 20 U,所有大鼠缺血20 min再灌注24 h后取脑组织.采用TUNEL法原位标记DNA片段,观察海马CA1区神经细胞凋亡的变化.结果:NGF预处理组海马CA1区TUNEL阳性神经细胞为(10.83±2.84)细胞/视野,与缺血组(17.69±3.79)细胞/视野比较显著减少(P＜0.05).结论:NGF预处理通过抑制神经细胞凋亡对大鼠全脑缺血再灌注损伤有保护作用.     

亚硒酸钠对脑缺血再灌注损伤的保护作用及对细胞凋亡的影响

目的：探讨亚硒酸钠对脑缺血再灌注所致脑损伤的保护作用及机理。方法：沙土鼠30只，随机分为（1）假手术组，（2）缺血再灌注组，（3）亚硒酸钠预防组。采用双侧颈总动脉夹闭法复制沙士鼠脑缺血再灌注模型，术后48h取材测定血清、脑组织匀浆中GSH－Px活力；光、电镜观察海马CA1区神经细胞形态的改变；TUNEL法显示凋亡细胞。结果：亚硒酸钠组脑组织GSH－Px活力明显增加，与缺血再灌注组比较有显著差异（P＜0．05）；光、电镜观察亚硒酸钠组能使脑缺血再灌注所致海马CA1区神经细胞的损伤明显减轻，细胞凋亡的表达明显减少，与缺血再灌注组比较有显著差异（P＜0．001）。结论：亚硒酸钠对缺血再灌注所致的神经细胞损伤有明显的保护作用。     

亚低温减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CAl区Bax表达变化的关系

目的研究亚低温（33℃,4h）减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CA1区Bax表达变化的关系,探讨亚低温脑保护的可能机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5min前脑缺血／再灌注损伤模型,随机分为假手术组（SH）、常温再灌注组（IR）、低温假手术组（HSH）、低温再灌注组（HIR）,每组根据再灌注的不同时间点（2h、4h、1d、3d、5d）又分为5个对应的亚组（／Z=6）。在预定时间点行开阔法迷宫检查,TUNEL法检测海马CA1区的凋亡细胞,苏木精-伊红染色检测海马存活细胞,免疫组化检测Bax在海马CA1区的动态变化。结果4h亚低温可显著减少缺血沙土鼠1d、3d、5d的探索活动及CA1区的凋亡细胞,增加存活细胞,抑制脑缺血后海马CA1区Bax的早期表达（2h、4h、1d）。结论4h亚低温对沙土鼠5min前脑缺血有确切的保护作用,抑制海马CA1区缺血／再灌注早期Bax的表达可能是其减少海马细胞凋亡、产生脑保护作用的机制之一。     

西比灵对脑缺血再灌注时细胞凋亡及病理形态改变的影响

目的 研究预防性应用西比灵对脑缺血再灌注时细胞凋亡及病理形态改变影响的机理。方法 取沙土鼠21只,随机分为三组,（1）假手术组（2）缺血再灌注组（3）西比灵处理组,采用双侧颈总动脉夹闭法复制沙土鼠脑缺血再灌注模型,于术后3天处死动物取材,石蜡切片,光镜观察,超薄切片,电镜观察,TUNEL法显示凋亡细胞,观察CA1区神经细胞病理形态的改变及细胞凋亡情况,结果 缺血再灌注组可见CA1区细胞呈现缺血性改变,预防性应用西比灵可明显减轻海马CA1区神经细胞缺血性损伤并减少细胞凋亡的表达,统计学处理后,缺血组与西比灵处理组凋亡细胞数有明显差异,P＜0.05,结论 西比灵能减轻缺血再灌注时神经细胞的损伤及凋亡。     

脑泰方提取物预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤作用研究

目的 探讨脑泰方提取物预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法 采用钳夹双侧颈总动脉建立沙土鼠脑缺血模型，将130只沙土鼠随机分为假手术组(SOG)，脑缺血再灌注损伤组(IRG组)、脑缺血预处理组(IPG组)、脑泰方提取物预处理组(NPG组)，根据再灌注不同时间(24、48、72h和7d)。将IRG、IRG组、NPG组各分4个亚组(n＝10)。观察各时相沙鼠，海马CA1区存活神经元数目、脑组织含水量以及脑毛细血管通道性。结果 ①IPG组、NPG组与IRG组同期比较，脑含水量、伊文思蓝含量明显降低(P＜0．05或0．01)，海马CA1区存活神经元数目明显增多(P＜0．05)；②各组不同时相比较：随着再灌注时间延长，脑含水量、伊文思蓝含量测量值于第72h达到最高；海马CA1区存活神经元数目至第7d达最低；③药物预处理组与缺血预处理组比较：海马CA1区存活神经元数目、脑含水量差异不明显(P＞0．05)，脑组织伊文思蓝含量差异有显著性意义(P＜0．05)。结论 脑泰方提取物预处理具有抑制沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用。     

巴曲酶对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的时间效应关系研究

目的：研究巴曲酶对沙土鼠前脑缺血冉灌注损伤后海马CA1区神经元凋亡的影响及时间效应关系，探讨其可能的作用机制。方法：采用双侧颈总动脉夹闭5min后再通建立沙土鼠前脑缺血再灌注的损伤模型，在不同时间点腹腔注射巴曲酶（8BU／kg）对其进行治疗，运州未端脱氧核仔酸转移酶介导的dUTP-生物素切口末端标记法（TUNEL）及免疫组织化学方法，检测沙土鼠海马CA1区神经元中的TUNEL染色阳性细胞数及凋广相关基因Bcl-2、Bax免疫反应阳性细胞数。结果：治疗组TUNEL染色阳性细胞数明显减少，与对照组之间差异有显著性（P〈0．05）；与对照组相比，治疗组海马CA1区Bcl-2表达明显增加，Bax表达降低．尤以缺血再灌注前6h、即刻、缺血再灌注后1、3及6h最明显（P〈0．01）。结论：巴曲酶可减少脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡．发挥脑保护作用．其作用存在明显时效关系．机制可能是增强Bcl-2的表达及抑制Bax的表达有关。     

氟桂嗪对脑缺血再灌注损伤后脑组织中NO和NOS影响

目的：探讨预防性应用氟桂嗪对沙土鼠脑缺血再灌所致脑注损伤中NO和NOS的作用。方法：沙土鼠30只，随机分为（1）假手术组（2）缺血再灌注组（3）氟桂嗪干预组。采用夹闭双侧颈总动脉的方法复制沙土鼠脑缺血再灌注损伤模型，缺血7min再灌注24h，观察沙土鼠脑组织中NO含量和NOS活性的变化及海马CA1区神经细胞的病理改变。结果：缺血再灌注组脑组织中NO含量和NOS活性明显增高，与假手术组比较有显著性差异（P＜0．001），氟桂嗪干预组脑组织中NO含量和NOS活性明显减少，与缺血再灌组比较有显著差异（P＜0．001）。结论：预防性应用氟桂嗪能显著减轻缺血再灌注所造成的神经细胞损伤，抑制NOS活力，减少NO的产生。     

Effects of NGF pretreatment on cerebral injury in gerbils

Objective: To investigate the effects and underlying mechanisms of different doses of nerve growth factor(NGF) pretreatment on neuron apoptosis and the expressions of the apoptosis-related protein, Bcl-2 and Bax, in the gerbil cerebral prefrontal cortex following global cerebral ischemia-reperfusion(FR) injury. Methods: Fifty-four gerbils were randomly divided into five groups, group C: sham operation(n = 6); group I/R(n = 12), group L(n = 12): low-dose NGF+I/R, group M(n = 12): medium-dose NGF+I/R and group H (n = 12): high-dose NGF+I/R. Groups I/R, L, M and H were further divided into 2 subgroups according to the durationof reperfusion(24 h and 72 h). The global cerebral I/R injury model was induced by bilateral carotid artery occlusion for 20 min,followed by removal of the clamps to permit reperfusion. In groups L, M and H, NGF was injected into the lateral ventricle 24 h prior to ischemia. Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end iabeling(TUNEL) and immunohis-tochemical staining were performed to detect neuron apoptosis and the expressions of Bcl-2 and Bax protein in the cerebral cortex,respectively. Results: In the I/R group and NGF pretreatment groups(L, M and H groups), reperfusion for 72 h caused higher percentages of both neurons exhibiting apoptosis and Bax positive cells(P < 0.01), but lower percentages of Bcl-2 positive cells compared with the corresponding 24 h reperfusion groups(P < 0.05). All NGF pretreatment groups exhibited lower percentages of neurons exhibiting apoptosis and Bax positive cells but a higher percentage of Bcl-2 positive-cells relative to the I/R group(P < 0.01).Moreover, the high-dose NGF pretreatment group had a greater decreased neuronal apoptosis and Bax protein expression and increased Bcl-2 protein expression than either the low-or medium-dose groups. Conclusion: Neuron apoptosis participates in the progression of cerebral ischemia-reperfusion injury. The protective effect of NGF pretreatment against ischemia-reperfusion-induced neuron apoptosis seems to be both time-and dose-dependent. This anti-apoptosis mechanism may be associated with upregulation of Bcl-2 protein expression and downregulation of Bax protein expression.     

间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再注后海马神经元的保护作用

目的 探讨间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再注后海马神经元的保护作用.方法 72只健康雄性Wistar大鼠,体重280～300g,随机分为6组,每组12只.分别为假手术组(Sham);间歇性低压缺氧预处理组(IHHP);缺血/再灌注组(I/R);间歇性低压缺氧预处理2次+全脑缺.血/再灌注组( IHHP2+ I/R);间歇性低压缺氧预处理4次+全脑缺血/再灌注组(IHHP4+I/R);间歇性低压缺氧预处理6次+全脑缺血/再灌注组(IHHP6+ I/R).采用四血管闭塞法复制大鼠全脑缺血/再灌注模型,全脑缺血后8 min行再灌注.硫堇染色观察海马CA1区组织学分级及锥体神经元密度;流式细胞技术检测海马神经元凋亡率.结果 与Sham组相比,单纯性间歇性低压缺氧预处理对海马组织形态和神经元凋亡率均无明显影响;I/R组大鼠海马CA1区组织损伤明显,存活的锥体细胞稀疏,排列紊乱,细胞明显缺失.I/R组与Sham组相比,组织学分级明显升高,神经元凋亡率明显增加;间歇性低压缺氧预处理2次、4次和6次+ I/R各组大鼠海马CA1区细胞损伤均明显改善,组织学分级明显降低,存活神经元密度值均明显增加,神经元凋亡率明显降低,其中IHHP4+ I/R组效果最为明显.结论 间歇性低压缺氧本身对大鼠海马神经元无明显损伤作用,但可对其后短期内发生的缺血/再灌注脑组织发挥保护作用,适当的预处理是诱导有效脑保护作用发生的必要条件.     

瑞芬太尼对大鼠全脑缺血再灌注后神经元凋亡和半胱天冬酶-3表达的影响

目的 观察瑞芬太尼对大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马神经细胞凋亡和半胱天冬酶(Caspase)-3表达的影响.方法 80只大鼠随机分为假手术(sham)、NS、REM2、REM6和REM20组,每组16只.NS、REM2、REM6和REM20组分别于缺血再灌注前静脉滴注0.9%氯化钠溶液及瑞芬太尼2、6、20μg·kg~(-1)·min~(-1).采用双侧颈总动脉阻断+低血压法建立大鼠短暂性全脑缺血模型.于全脑缺血前30 min由靶控微量注射泵经股静脉注射瑞芬太尼,并于双侧颈总动脉阻断前及开放后10 min进行动脉血血气分析.再灌注后24 h,每组各取8只大鼠,取其新鲜海马组织,采用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组Caspase-3 mRNA的表达.再灌注后72 h,取剩余大鼠,灌注取脑,制作脑组织切片,采用苏木精伊红(H-E)染色和原位末端标记法(TUNEL法)观察各组大鼠海马退变的神经元数和凋亡细胞数,采用免疫组织化学法检测各组Caspase-3蛋白的表达.结果 ①H-E染色结果:sham组偶可见退变的锥体细胞,缺血再灌注72 h后,NS组及各瑞芬太尼预处理组海马退变的神经元数较sham组显著增加(P值均<0.05),REM6及REM20组海马退变的神经元数较NS组显著减少(P值均<0.05).②TUNEL法检测结果:sham组未见TUNEL阳性细胞,缺血再灌注72 h后,NS组及各瑞芬太尼预处理组海马CAI区的凋亡锥体细胞数较sham组显著增加(P值均<0.05),REM6和REM20组海马CAI区的凋亡锥体细胞数较NS组显著降低(P值均<0.05).③免疫组织化学法检测结果:sham组可见少量Caspase-3免疫阳性细胞,缺血再灌注72 h后,NS组及各瑞芬太尼预处理组海马区Caspase-3蛋白的免疫阳性细胞数较sham组显著增多(P值均<0.05),各瑞芬太尼预处理组Caspase-3蛋白的免疫阳性细胞数显著低于NS组(P值均<0.05),REM6和REM20组Caspase-3蛋白的免疫阳性细胞数显著低于REM2组(P值均<0.05).④实时RT-PCR结果:sham组大鼠海马组织中Caspase-3 mRNA呈低水平表达,缺血再灌注24 h后,NS组及各瑞芬太尼处理组Caspase-3 mRNA的表达水平较sham组显著升高(P值均<0.05),REM6组Caspase-3 mRNA的表达较NS组显著降低(P<0.05).结论 瑞芬太尼预处理(以6 μg·kg~(-1)·min~(-1)为佳)对全脑缺血再灌注后的神经元损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制神经元凋亡及下调Caspase-3基因有关.     

NGF对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的作用

目的　研究神经生长因子 (NGF)对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的形态学影响。方法　采用Pulsinelli闭塞大鼠四动脉全脑缺血模型 ,应用光镜、透射电子显微镜及原位末端标记法 (TUNEL染色法 )观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血 30min再灌注 7d海马神经细胞凋亡的情况。所得数据应用SPSS软件包进行统计学分析。结果　TUNEL染色法显示模型组有大量凋亡细胞 ;给药B、C组的神经细胞凋亡数目接近正常组 ,明显少于模型对照组 ,其差异具有高度显著性P <0 0 1。结论　给予外源性神经生长因子能明显抑制海马神经细胞的凋亡 ,减少缺血再灌注对神经细胞的损害     

葛根素对脑缺血-再灌注损伤细胞凋亡和p53表达的影响

目的 观察葛根素对预处理后大鼠局灶性脑缺血时海马区凋亡细胞和p53蛋白表达的影响.方法 利用大脑中动脉栓线阻断法制作大鼠局灶性脑缺血2h后再灌注损伤模型.72只SD大鼠随机分为假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）和葛根素组（P组）.依术后处死动物时间不同,每组分为3个亚组（n=8）.用免疫组化法检测p53蛋白和TUNEL法检测凋亡细胞的表达.结果 P组P2h组p53蛋白表达增高,P24h组显著增高,P72h组p53蛋白表达有所下降,但仍低于IR组（P＜0.01）;P组凋亡细胞数显著低于相应IR组（P＜0.01）.结论 葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与葛根素抗细胞凋亡、下调p53蛋白有关.     

异氟烷预处理对大鼠全脑缺血损伤的保护作用及递质机制

目的：阐明异氟烷预处理脑保护作用的神经递质机制及其保护作用是否具有限时陛。方法：1．4％异氟烷＋空气连续吸入5d预处理大鼠，最后一次预处理24h后缺血。采用清醒全脑缺血模型。观察清醒、缺血及再灌注后海马组织间液谷氨酸递质浓度改变及再灌注后脑电双频谱指数（BIS）变化，记录翻正反射恢复的时间及运动功能评分。双盲记数海马CA，区锥体细胞数和TUNEL阳性细胞的百分率。结果：全脑缺血10min、15min后预处理组BIS及翻正反射恢复好于对照组；谷氨酸递质浓度变化与对照组无明显差异；全脑缺血15min，预处理组运动功能评分均高于对照组。预处理组缺血10min、15min海马CA1区神经细胞计数及锥体细胞凋亡明显好于对照组。全脑缺血20min两组各指标无明显差异。结论：异氟烷预处理对非致死性全脑缺血再灌注损伤具有保护作用，但有限时陛；其脑保护作用与降低谷氨酸递质浓度无关。     

转bcl-2基因大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区P-P38的表达

目的 观察转bcl-2基因大鼠全脑缺血组再灌注后P-P38蛋白在海马回CA1区的表达. 方法 90只健康雄性SD大鼠,随机分为三组:假手术组(SO组,n=30),暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组(IR组,n=30),采用4-VO法建立全脑缺血再灌注模型,5 min缺血后给予再灌注;转bcl-2基因组(bcl-2组,n=30):大鼠经转基因处理后再缺血再灌注.各组动物于再灌注后2,6,12,24,48,72 h处死,将脑组织切片进行HE染色,免疫组化染色及TUNEL染色,观察海马回神经元形态改变,凋亡细胞数量及P-P38在CA1区表达. 结果 HE染色显示:IR组全脑缺血再灌注后48 h CA1区神经元数目减少,排列紊乱,核膜界限不清,结构模糊;bcl-2组变化不明显.免疫组化染色显示:P-P38在SO组基本呈阴性着色;IR组CA1区2h出现,48 h达高峰,72 h略有下降;bcl-2组P-P38表达趋势同IR组,但各时间点表达强度弱于IR组.TUNEL染色显示:SO组可见到少量凋亡细胞;IR组全脑缺血再灌注后48 h凋亡细胞数达高峰;bcl-2组再灌注后12-72 h凋亡细胞数量较IR组均明显减少. 结论 全脑缺血再灌注后海马CA1区P-P38表达增加,bcl-2可通过抑制P-P38表达抑制脑缺血再灌注后的细胞凋亡.     

尼莫地平对沙土鼠脑缺血后细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的:探讨沙土鼠短暂脑缺血后海马区细胞凋亡与Bcl鄄2表达的改变及尼莫地平的影响。方法:52只健康沙土鼠随机分成3组,假手术组(n=12),尼莫地平组(n=20),对照组(n=20)。采用夹闭双侧颈总动脉制成全脑缺血模型。尼莫地平组及对照组均夹闭双侧颈总动脉5min,随即分别予尼莫地平注射液(1mg/kg)及等量生理盐水腹腔注射。3组分别于再灌注24、48、72、168h断头取脑,海马石蜡切片,原位末端标记法(TUNEL)测定海马CA1区锥体细胞凋亡阳性数及免疫组化法测定Bcl鄄2反应强度。结果:对照组72h见大量凋亡细胞;Bcl鄄2在72h表达最强,168h明显减少。尼莫地平组凋亡细胞数明显减少(P<0.01),Bcl鄄2在24、48、72、168h均有较强表达(P<0.01)。结论:尼莫地平可显著减少沙土鼠脑缺血后海马CA1区细胞凋亡的发生,并可增强Bcl鄄2的表达;脑缺血后及时应用尼莫地平治疗具有明显脑保护作用。