c-fos在肢体缺血预处理抗脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨c-fos在肢体缺血预处理(LIP)抗脑缺血再灌注损伤中的作用。方法将54只凝闭椎动脉大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和LIP+脑缺血组。依据脑缺血后再灌注时间不同,将脑缺血组和LIP+脑缺血组进一步分为16、、247、2 h组,每组大鼠6只。采用免疫组织化学方法检测海马c-fos蛋白的变化。结果假手术组海马各区神经元中未见明显的c-fos蛋白表达阳性产物。脑缺血组海马CA1区再灌注后各个时间点均未见明显的c-fos阳性表达,而海马CA3区再灌注6 h时锥体细胞和齿状回颗粒细胞核中出现大量c-fos蛋白阳性表达产物,再灌注24h时,c-fos的表达开始减弱,72 h时消失。在LIP+脑缺血组,再灌注1 h海马CA1区出现少量c-fos的弱阳性表达;再灌注6 h时,CA1区c-fos表达明显增强,阳性细胞数、阳性细胞总面积和平均吸光度均较假手术组显著升高(P<0.01);再灌注24 h时,CA1区c-fos表达趋于减少;至再灌注72 h时,CA1区c-fos表达恢复至假手术组水平(P>0.05)。结论LIP诱导CA1区c-fos的表达上调可能参与LIP抗脑缺血再灌注损伤作用。     

肢体反复短暂缺血再灌注后脑组织一氧化氮的动态变化

目的：观察大鼠短暂肢体缺血再灌注后脑组织一氧化氮含量动态变化，探讨一氧化氮在肢体缺血预处理脑保护中的作用。方法：实验于2003-08／2004-09在新乡医学院生理教研室和河北医科大学病理生理研究室完成。选择健康雄性Wistar大鼠72只，随机分成假手术组，短暂肢体缺血再灌注(limb ischem&;#237;a reperfusion，LIR)组和NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)+LIR组，观察LIR后不同时间点血清和海马CA1区脑组织中一氧化氮含量和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)活性的变化。结果：LIR后即刻血清一氧化氮生成明显增加，达到高峰，与假手术组比较升高显著(P&;lt;0．01)。6h降低，48h又有一定程度的回升。而LIR后即刻海马CA1区组织一氧化氮生成开始升高，6h达到高峰，24h降至接近假手术组水平，48h又有明显的升高。LIR后血清和海马CA1区NOS活性的变化规律与一氧化氮生成相似。结论：肢体反复短暂缺血再灌注后脑组织一氧化氮这种动态变化可能发挥对脑的保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠肺纤维化的影响及其机制的研究

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对博莱霉素(BLM)所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其作用机制。方法:将SD大鼠随机分对照组、BLM+NS组和BLM+GbE组,每个时间点每组6只。各组分别于给药后14,30 d处死动物。光镜下观察肺组织损伤(HE染色)和肺组织纤维化(M asson染色)的程度;采用生化法测定肺组织中胶原蛋白含量及血浆MDA含量;采用免疫组织化学法和免疫细胞化学法观察肺组织和支气管肺泡灌洗液细胞(BALF)中TGF-β1蛋白表达的变化。结果:与对照组大鼠相比,BLM+NS组大鼠各时间点各指标呈明显变化,提示模型制作成功。与BLM+NS(14 d)组大鼠相比,BLM+GbE(14 d)组大鼠血浆MDA含量,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞TGF-β1蛋白表达显著减少;与BLM+NS(30 d)组大鼠相比,BLM+GbE(30 d)组大鼠肺组织损伤、肺组织纤维化显著减轻,肺胶原含量和血浆MDA含量显著减少,肺组织TGF-1β蛋白表达显著减少,但BALF细胞TGF-β1蛋白表达无明显变化。结论:银杏叶提取物具有抗BLM诱导的大鼠肺纤维化作用,其机制可能与减少纤维化早期(14 d)肺泡巨噬细胞和纤维化期(30 d)肺非炎症细胞TGF-β1蛋白表达及减轻BLM所致的氧化应激有关。     

甲醛诱导的伤害性感受过程中神经元型和诱导型一氧化氮合酶表达的上调

目的:观察大鼠甲醛炎性痛过程中,脊髓神经元型一氧化氮合酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化.方法:免疫组织化学方法观察SD大鼠脊髓nNOS和iNOS的表达.结果:注射甲醛后1、 12、 24、 48h和72h,大鼠腰5脊髓后角浅层nNOS和iNOS表达均上调,且其上调趋势与大鼠甲醛实验中的痛行为反应相一致.脊髓后角深层和后角周围白质区也可见一些iNOS免疫反应阳性细胞,其表达变化趋势与上述浅层的免疫阳性细胞的表达变化相似.结论:nNOS和iNOS共同参与了甲醛诱导的伤害性感受过程.     

NMDA受体激活诱导甲醛炎性痛大鼠脊髓HO-1蛋白表达增加

目的本实验通过在甲醛炎性痛大鼠鞘内注射N-甲基-D-d门冬氨酸(NMDA)受体抑制剂地卓西平马来酸盐(MK-801)以及在正常大鼠鞘内注射NMDA受体激动剂NMDA,观察二者对甲醛炎性痛大鼠以及正常大鼠脊髓血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响,探讨甲醛炎性痛诱导的大鼠脊髓HO-1蛋白表达改变是否受NMDA受体激活的影响。方法采用右后掌足底注射甲醛复制炎性痛模型,采用免疫组织化学方法观察脊髓HO-1蛋白表达。结果甲醛炎性痛大鼠L5脊髓后角Ⅰ-Ⅱ板层HO-1蛋白免疫反应阳性细胞数目、平均光密度值均明显大于正常对照组,预先鞘内注射MK-801可明显抑制甲醛炎性痛诱导的大鼠双侧脊髓后角Ⅰ-Ⅱ板层HO-1蛋白的表达,正常大鼠鞘内注射NMDA可诱导脊髓后角HO-1蛋白表达增加。结论 NMDA受体激活可促进脊髓神经元HO-1蛋白的表达。     

间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再注后海马神经元的保护作用

目的 探讨间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再注后海马神经元的保护作用.方法 72只健康雄性Wistar大鼠,体重280～300g,随机分为6组,每组12只.分别为假手术组(Sham);间歇性低压缺氧预处理组(IHHP);缺血/再灌注组(I/R);间歇性低压缺氧预处理2次+全脑缺.血/再灌注组( IHHP2+ I/R);间歇性低压缺氧预处理4次+全脑缺血/再灌注组(IHHP4+I/R);间歇性低压缺氧预处理6次+全脑缺血/再灌注组(IHHP6+ I/R).采用四血管闭塞法复制大鼠全脑缺血/再灌注模型,全脑缺血后8 min行再灌注.硫堇染色观察海马CA1区组织学分级及锥体神经元密度;流式细胞技术检测海马神经元凋亡率.结果 与Sham组相比,单纯性间歇性低压缺氧预处理对海马组织形态和神经元凋亡率均无明显影响;I/R组大鼠海马CA1区组织损伤明显,存活的锥体细胞稀疏,排列紊乱,细胞明显缺失.I/R组与Sham组相比,组织学分级明显升高,神经元凋亡率明显增加;间歇性低压缺氧预处理2次、4次和6次+ I/R各组大鼠海马CA1区细胞损伤均明显改善,组织学分级明显降低,存活神经元密度值均明显增加,神经元凋亡率明显降低,其中IHHP4+ I/R组效果最为明显.结论 间歇性低压缺氧本身对大鼠海马神经元无明显损伤作用,但可对其后短期内发生的缺血/再灌注脑组织发挥保护作用,适当的预处理是诱导有效脑保护作用发生的必要条件.     

Spantide抑制大鼠甲醛试验中脊髓中央管周围区域NOS表达的上调(英文)

目的：本实验观察非选择性NK受体拮抗剂［D-Arg1, D-Trp7,9, Leu11］-substance P (spantide)对大鼠甲醛实验诱导的脊髓中央管周围灰质区域NOS表达的影响。 方法： 右后掌足底皮下注射甲醛(5%，0.2 mL)诱导持续性痛及痛过敏，用缩足反射实验测定大鼠痛反应。应用NADPH-d组织化学法观察NOS的表达。Spantide于甲醛注射前5 min经L5-L6腰椎间隙鞘内注射。 结果： (1)足底注射甲醛引起大鼠疼痛行为反应，包括抓、咬、舔、注射侧后爪抬离盒底等。伴随着这些行为反应，脊髓L5节段中央管周围灰质区(第X板层)NOS表达上调。(2)预先给予spantide能抑制大鼠甲醛试验第二时相注射侧肢体的自发性退缩反射，同时抑制了脊髓中央管周围灰质区NOS表达的上调。 结论： SP在大鼠甲醛试验中脊髓中央管周围区域NOS表达上调中起着重要的作用。     

改进病理生理实验课教学加强学生能力培养

素质教育是教育的核心,能力的培养比知识的灌输更为重要。病理生理学实验课具有理论与实践相结合,动手与动脑相结合的特点,在实验课上对学生进行能力培养比理论课更具有优势,我们通过在实验课上强化动手能力的培养、利用出现的问题作为培养学生解决问题能力的机会、利用分析实验结果培养学生科学思维等措施,在病理生理学实验课上对医学生进行能力培养。     

HIF-1α基因转染对β-淀粉样蛋白25-35诱导原代培养海马神经细胞凋亡的影响

目的 构建人类缺氧诱导因子-1α(human hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因真核表达载体pSNAV-HIF-1α,并观察其对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导原代培养海马神经细胞凋亡及细胞内游离钙离子浓度的影响.方法 采用基因重组技术,将pBSKhHIF1αT7原核表达载体上HIF-1α基因序列克隆至真核表达载体pSNAV2.0,磷酸钙共沉淀法介导转染pSNAV-HIF-1α,Aβ25-35诱导原代培养海马神经细胞凋亡.Western blot检测HIF-1α蛋白表达,流式细胞术分析细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度.结果 酶切、PCR及DNA测序结果均表明成功构建了重组质粒pSNAV-HIF-1α,磷酸钙共沉淀法介导的pSNAV-HIF-1α质粒转染显著增加了海马神经细胞HIF-1α蛋白表达(P＜0.05),同时可显著降低Aβ25-35诱导海马神经细胞凋亡百分率及细胞内游离钙离子浓度上调(P＜0.05).结论 缺氧诱导因子-1α基因转染可能通过抑制细胞内游离钙离子浓度上调使海马神经细胞对Aβ25-35产生抗凋亡作用.