VEGFR-3、LYVE-1在胃癌中的表达研究

目的比较VEGFR-3、LYVE-1在胃癌组织中的表达,选择较为可靠的淋巴管内皮标志物。方法利用免疫组织化学方法检测CD34、VEGFR-3和LYVE-1在53例胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达,并进行微淋巴管密度（lymphatic vessel density,MLD）及微血管密度（microvessel density,MVD）计数;与公认的血管内皮标志物CD34作比较,评价VEGFR-3和LYVE-1两种淋巴管内皮标志物的表达情况。结果 CD34和VEGFR-3阳性脉管密度具有相关性（r=0.387,P=0.003）;而LYVE-1与CD34阳性管数不相关（r=-0.181,P=0.232）,表明VEGFR-3阳性管多数是血管,LY-VE-1阳性管多数是淋巴管而极少数是血管,提示LYVE-1是较为特异的淋巴管内皮标志物。结论 LYVE-1是较为特异的淋巴管内皮标志物,肿瘤瘤周淋巴管生成可能促进了淋巴结转移的发生。     

CD25单克隆抗体对大鼠角膜移植术后房水中细胞因子表达的影响

目的 研究CD25单克隆抗体对大鼠角膜的毒性以及对同种异体大鼠角膜移植后房水中细胞因子的影响.探讨其对大鼠角膜移植免疫排斥反应的防治效果.方法 ①将12只SD大鼠随机分为生理盐水对照组、50μg CD25单克隆抗体结膜下注射组、100μg CD25单克隆抗体结膜下注射组、200μg CD25单克隆抗体结膜下注射组,每组3只.各组大鼠均右眼用药.分别于0、2、4、6、8d结膜下注射生理盐水及不同剂量的CD25单克隆抗体,共5次.每日行裂隙灯显微镜检查.观察角膜有无水肿、混浊发生.并于第9天取右眼角膜行病理及透射电镜观察角膜各层的变化.②以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体建立角膜移植实验模型.将93只SD大鼠随机分为五组,A组:正常组;B组:角膜移植对照组;C组:CD25单克隆抗体治疗组;D组:CD25单克隆抗体联合地塞米松治疗组;E组:地塞米松治疗组.B组术后给予生理盐水;C组术后给予CD25单克隆抗体100 μg;D组术后给予CD25单克隆抗体100μg联合地塞米松50 μg治疗;E组术后给予地塞米松100μg;各共用5次,分别于术后0、2、4、6、8 d经球结膜下注射给药.用裂隙灯观察移植排斥情况.利用逆转录-多聚酶链反应检测植片内IFN-γmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测房水中IFN-γ和IL-4的浓度.结果 ①50μgCD25单克隆抗体和100μgCD25单克隆抗体对角膜基本无影响;200μg的CD25单克隆抗体组透射电镜检查发现角膜基质细胞及内皮细胞有不同程度的肿胀.②C、D、E组发生排斥反应时间分别为(13.167±1.169),(17.333±2.160),(16.417±1.379)d较B组发生排斥反应时间(10.583±1.084)a明显延迟,差异有统计学意义(p＜0.05).正常角膜无IFN-γmRNA的表达,术后11天.B组移植角膜植片内IFN-γmRNA的表达较C、D、E组明显增强(p＜0.05).C、D、E组术后6 d及11 d房水巧N叫的含量明显低于同期的B组(p＜0.05);同C组相比,术后11d D、E组房水IFN-γ的含量明显降低(P＜0.05).术后6 d和11 d,与B组相比,同期C组IL-4含量明显升高(P＜0.05),而同期D、E组IL-4含量明显降低(P＜0.05);术后6 d和11 d,与C组相比,同期D、E组IL-4含量明显降低(P＜0.05).结论 50μg CD25单克隆抗体和100 μgCD25单克隆抗体对角膜基本无影响.IFN-γ和IL-4在角膜移植免疫排斥反应过程中发挥重要的作用.CD25单克隆抗体通过抑制Th1因子(IFN-γ)、促进Th2因子(IL-4)表达降低角膜移植免疫排斥反应的发生率,从而延长角膜植片存活时间;而CD25单克隆抗体联合地塞米松治疗通过同时抑制Th1因子(IFN-γ)、Th2因子(IL-4)表达,却更能延长角膜植片的存活时间,具有重要的临床应用价值.     

基质细胞衍生因子-1与趋化因子受体4在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）与基质细胞衍生因子-1（CXCR4）在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植术后 免疫排斥反应中的作用。方法取15只Wistar大鼠作为正常对照组;取22只Wistar大鼠行自体角膜移植术作为自体组;取22只 SD大鼠与44只Wistar大鼠,以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体行穿透性角膜移植,术后随机抽取22只归入典必殊组,术眼滴 典必殊眼液（每日2次）,剩余22只归入异体组,术眼滴同等量生理盐水,共一个月。参照Larkin法对各组角膜植片进行临床评 估;分别于术后第5、9天取术眼角膜植片,行组织病理学观察、免疫组化检查、实时荧光定量PCR检测。结果自体组不发生排 斥反应,典必殊组角膜存活时间为24±0.32 d,远高于异体组10±0.36 d（P<0.001）。组织病理学检查发现异体组角膜有大量炎 性细胞浸润以及新生血管形成。SDF-1和CXCR4 mRNA在异体组角膜组织中表达水平明显升高（第5天P<0.001,第9天P< 0.01）,典必殊组较异体组明显降低。免疫组化检查发现SDF-1/CXCR4主要表达在角膜植片的上皮层与基质层,异体组角膜组 织SDF-1和CXCR4含量明显升高。结论SDF-1/CXCR4可能参与了大鼠角膜移植术后早期的排斥反应,其机制可能为SDF-1 特异性诱导CXCR4+细胞成熟和朝着排斥部位趋化,并促进角膜新生血管形成。     

Stewart-Treves syndrome angiosarcoma expresses phenotypes of both blood and lymphatic capillaries

Background The development of angiosarcoma in oedematous tissue is referred to as Stewart-Treves syndrome (STS).This rare and fatal complication is associated with chronic post mastectomy lymphoedema a...     

Immunological studies on the cellular phenotype involved in corneal allograft rejection

ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｅｌｕｌａｒｐｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃｏｒｎｅａｌａｌｏｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎｕｓｉｎｇｗｈｏｌｅｍｏｕｎｔｓａｎａｌｙｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｏｒｎｅａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ...     

TLR2在大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应中的作用

目的 通过采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)动态检测大鼠角膜组织TLR2 mRNA的表达,研究TLR2在穿透性角膜移植术后免疫排斥反应中的作用.方法 实验分四组:正常对照组(N)、同种同体角膜移植组(A)、同种异体角膜移植组03)和同种异体角膜移植激素抗排斥组(C),A、B、C三组大鼠给予穿透性角膜移植术,术后裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管并用排斥反应指数评分;分别于术后第5、7、9天取材,行组织病理学检查和荧光实时定量PCR检测,动态观察角膜组织TLR2 mRNA的表达.结果 术后随时间变化角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊、新生血管生长.B组大鼠角膜排斥反应指数平均在术后第7天符合排斥反应的诊断并获病理学支持:A组和C组大鼠角膜的排斥反应指数计分未达到诊断标准.正常的角膜组织可见TLR2 mRNA表达;三个手术干预组TLR2 mRNA表达差异倍数均明显高于正常对照组,同种异体角膜移植组角膜TLR2 mRNA的表达较同种同体角膜移植组显著增加,激素抗排斥组角膜TLR2 mRNA表达较同种异体角膜移植组显著降低(P<0.05).结论 TLR2可能作为天然免疫识别受体识别移植抗原,参与角膜移植术后免疫排斥反应.

Abstract：

Objective To gain insight into the role of Toll-like receptor 2 (TLR2) in graft rejection following penetrating keratoplasty, and investigate the expression of TLR2 mRNA in the corneal graft. Methods Penetrating keratoplasty was performed in 3 groups of rats for orthotopic autologous corneal transplantation (group A), allograft corneal transplantation (group B), or allograft corneal transplantation with hormone treatment (C). The transparency and neovascularization of the cornea were observed using a slit-lamp microscope and scored according to the rejection index, with normal cornea serving as the control. The corneal tissues were sampled at 5, 7, and 9 days after the transplantation for histopathological examination and detection of TLR2 mRNA expression using RT-PCR. Results With the passage of time, edema, opacities and neovascularization of the comeal graft occurred after the operation in all the groups. Seven days after the operation, the rejection index of group B, but not that of groups A and C, met the diagnostic criteria for graft rejection with also support by histopathological evidence. The expression of TLR2 mRNA was detected in normal corneas and augmented in the corneal grafts in the 3 transplantation groups. TLR2 mRNA expression in group B was significantly higher than that of group A, and the expression in group C decreased significantly in comparison with that in group B (P<0.05). Conclusion As the recognition receptors of native immune system, TLR2 in the rejected corneal grafts may recognize the allograft antigen and play a role in acute graft rejection after penetrating keratoplasty.     

角膜内皮层培养及后板层移植的实验研究

目的探讨体外构建角膜内皮层并进行移植的可能性。方法体外培养的兔角膜内皮细胞种植于羊膜基底膜上,形成单层角膜内皮层,并进行形态学、组织学及超微结构的观察。将构建的角膜内皮层对切除后板层的兔角膜进行移植,同时以无培养内皮细胞的羊膜移植作为对照,术后观察角膜透明度及厚度,对内皮层进行形态学和组织学观察。结果角膜内皮细胞在羊膜上生长呈单层,细胞为多角形,排列紧密,其形态及结构与正常兔角膜内皮组织相似。培养内皮层移植后,角膜维持相对透明及薄度;而对照眼角膜严重水肿、混浊,厚度明显大于实验眼角膜(P<0.01)。培养内皮移植后具正常内皮层的结构和功能。结论羊膜是培养角膜内皮细胞移植的良好载体,培养角膜内皮移植有望治疗角膜内皮失偿疾病。     

角膜缘干细胞移植治疗烧伤后角膜血管翳的临床研究

目的治疗眼烧伤后角膜血管翳。方法采用自体或异体角膜缘干细胞移植联合新角膜移植治疗43例烧伤后角膜血管翳。结果自体角膜缘干细胞移植24例，视力增进22眼，新生血管消退。异体角膜缘干细胞移植19例，全部病例新生血管未见消退，视力增进不明显。自体角膜缘干细胞移植可为烧伤患者提供上皮再生来源，有效的阻止新生血管侵入角膜。     

同种异体神经移植中环孢素A的最短有效时间

目的 :研究同种异体神经移植中环孢素A(cyclosporinA ,CSA)的最短有效时间。方法 :72只SD鼠分为A组 ,自体原位移植 ;B组 ,异体移植应用CSA免疫抑制 3周 ;C组 ,异体移植应用CSA免疫抑制 4周 ;D组 ,异体移植应用CSA免疫抑制 5周 ;E组 ,异体移植应用CSA免疫抑制 6周 ;F组 ,异体移植无免疫抑制。各组分别于术后 6周和 12周对实验动物的功能学指标 (步态分析 )、电生理学指标 (潜伏期、运动神经传导速度 )、形态学指标 (腓肠肌湿重 ,坐骨神经光镜、电镜观察 )进行检测。结果 :6周时各组实验动物神经再生不完全 ,功能未恢复。 12周时A ,D ,E组动物在功能学指标、电生理指标及光镜、电镜指标上均优于其它各组。而A ,D ,E组间在上述各指标上无显著性差异。结论 1.0cm缺损的异体神经移植动物实验中 ,应用CSA 5mg/ (kg·d) 5周为最短有效疗程     

Effect of a cyclosporine A delivery system in corneal transplantation

目的　探讨前房内植入含环孢素A的缓释系统 (CsADDS)抑制高危角膜移植术后免疫排斥反应的有效性和可行性。方法　角膜新生血管化的近交系Wistar大鼠作为受体 ,供体取自SD大鼠 ,行穿透性角膜移植的大鼠随机分为 4组 :(1)对照组 ;(2 )CsADDS前房植入组 ;(3)CsADDS结膜下植入组 ;(4) 1%CsA橄榄油滴眼组。植片每 3天行裂隙灯显微镜检查并加以评估。分别于术后 1、2、4周行房水中CsA浓度的检测。移植后的 1、2、4周取眼球行组织病理学检查。结果　角膜植片平均存活时间分别为 :对照组 8 2± 1 4 8天 ;CsADDS结膜下植入组 11 4± 2 5 0天 ;前房植入CsADDS组 17 0± 2 0 0天。前房植入组与其它各组相比 ,有显著统计学差异 (P <0 0 5 )。相对于其它治疗组前房植入组的眼内CsA浓度明显增高 ,并且发现CsA聚合物的植入体在前房中只引起轻微而短暂的炎症反应。结论　前房植入CsA聚合物可明显延长高危角膜移植术后的植片存活时间 ,这一眼内缓释系统对于抑制高危角膜移植术后的免疫排斥反应不失为一种有效方法。     

角膜干细胞对大鼠角膜碱烧伤后的保护性作用

探讨角膜干细胞对角膜烧伤后的保护性作用。分别对大鼠角膜不同区域进行碱烧烧灼，造成不同程度的角膜干细胞损害，连续观察五周。结果：缘部干细胞完全破坏者，角膜以新生血管化愈合，而保留全部或部分干细胞者，角膜无新生血管化。提示角膜干细胞对碱烧伤后阻止角膜的新生血管化，并重建角膜表面的完整性具有重要意义，可能与产生某些抗新生血管因子有关。     

Ipsilateral Lymphadenectomy to Inhibit Corneal Allograft Rejection in Rats

Immunological rejection is the major cause ofcorneal allograft failure. Looking for safe and fea sible therapies to inhibit the rejection is vital inclinical practice. Yamagami[1] succeeded to inhibitcorneal allograft rejection of rats with failure in theinduction of delayed type hypersensitivity (DTH)reactivity by bilateral cervical lymphadenectomy.However, this therapy may be associated with se rious surgical trauma and complication. On the ba sis of Yamagamis' research, …     

重组人肝细胞生长因子对心脏移植冠状血管内膜iNOS表达的影响及意义

目的:探讨重组人肝细胞生长因子(rh-HGF)对大鼠心脏移植冠状血管内膜诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响及意义。方法:近交系健康雄性Wistar大鼠和SD大鼠,建立腹腔异位心脏移植模型。实验分3组:同系移植组,异系移植包括对照组(CsA组)和实验组(HGF组)。分别于术后15d、60d采集各组标本,沿冠状动脉切取心肌组织,免疫组化检测冠状血管内膜iNOS的表达,RT-PCR检测冠状血管内膜iNOSmRNA表达,观测冠状血管病理变化。结果:实验组移植心脏冠状动脉内皮细胞完整,内膜轻度增厚,管腔轻度狭窄,病理改变明显轻于对照组。iNOS在移植心脏冠状动脉内膜的表达,实验组均明显高于对照组及同系移植组(P<0.01)。结论:rh-HGF通过上调移植心脏冠状血管内膜iNOS表达,可保护冠状血管内皮功能,预防移植心脏血管病的发生。     

LYVE-1及Podoplanin在小鼠Lewis肺癌模型肿瘤内表达情况的初步研究

目的 检测两种淋巴管标志物LYVE-1及Podoplanin在小鼠Lewis肺癌模型肿瘤中的表达,并比较其表达特异性.方法 建立小鼠Lewis肺癌肿瘤模型,检测LYVE-1、Podoplanin在肿瘤内淋巴管的表达,并利用CD34标记肿瘤内的毛细血管以便与淋巴管进行区分.结果 LYVE-1及Podoplanin染色结果并不完全重叠,Podoplanin阳性表达结果除与LYVE-1相同部分外,尚存在大量棕黄色条带状及阳性细胞结构染色,且CD34表达阴性.结论 LYVE-1较podoplanin对Lewis肺癌淋巴管的识别更为特异,背景更为清晰,与CD34联合应用可准确区分毛细淋巴管与毛细血管.     

局部使用TNP-470后兔眼房水中药物分布及对兔高危角膜移植术后新生血管的影响

探讨局部使用TNP-470[O-(氯乙酰氨甲酰基)烟曲霉醇]后兔眼房水中的药物质量浓度,观察其对兔眼高危角膜移植术后新生血管增殖的影响。方法健康新西兰白兔30只,其中10只兔角膜作为供体、20只兔进行高危角膜移植受体动物模型的制备。将成功建立高危角膜移植动物模型的16只兔按随机数字表法分为4组,每组4只:A组术后不用药,术后第1天B、C、D组分别予质量浓度为100、500、1 000ng.mL-1的TNP-470滴眼液,6次.d-1,1滴.次-1,共观察90d。用药后1、2、7、14、28、56d用高效液相色谱法(HPLC)检测4组兔眼房水中TNP-470的质量浓度;术后第2天开始隔日观察术眼新生血管长入情况,并在术后2、6、9、12周记录新生血管指数(NI)。结果 3组各时间点兔眼房水中均可检测到TNP-470,且各组药物质量浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。术后2周A组NI一直呈上升趋势,6周后维持在较高水平;B、C、D组在术后6、9、12周一直维持在较低水平,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论局部用TNP-470具有抑制兔眼高危角膜移植后新生血管增殖的作用。     

熊果酸对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用

目的探讨熊果酸对大鼠角膜移植排斥反应的治疗效果。方法以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,将48只Wistar大鼠
随机分为4组。A组为正常角膜对照组,B组为Wistar鼠自体原位角膜移植,C、D 组为SD-Wistar大鼠之间进行同种异体角膜移
植。术后当天腹腔给药,A、B、C三组分别给予生理盐水作为空白对照,D组给予熊果酸（UA）（20 mg·kg-1·d-1）,连续给药12 d。
根据Larkin等角膜排斥反应评分系统,判断术后植片排斥情况。比较角膜植片的存活时间和植片存活率。术后14 d检测各组
中IL-2、IFN-γ、NF-κBp65、VEGF及ICAM-1的表达含量,并对角膜植片进行组织学检查与Western blot分析。结果D组角膜
植片的存括时间为29.12±9.58 d,与C组9.67±2.16 d 相比,两组间差异有显著性意义（P<0.01）。术后14 d D组角膜植片中的
IL-2、IFN-γ、NF-κBp65、ICAM-1及VEGF的相对含量明显下降,而IκB-α蛋白含量较高。未见明显淋巴细胞浸润和新生血管形
成。结论熊果酸作为NF-κB的核因子抑制剂,可以抑制角膜新生血管的形成与排斥反应,从而显著延长大鼠角膜植片的存活
时间。
     

B7-H1对同种异体小鼠角膜移植免疫反应的影响

目的探讨B7-H1在同种异体小鼠角膜移植术后眼球组织表达情况,及其对角膜免疫赦免的影响。方法建立同种异体小鼠角膜移植实验模型。按Sonoda方法对角膜混浊及新生血管指数进行评分,8周后将实验小鼠分为存活组和排斥组,并取8只正常小鼠为对照组。取3组小鼠眼球组织行免疫组化检测B7-H1表达情况。结果正常小鼠角膜及虹膜睫状体表达B7-H1,移植术后存活小鼠角膜及虹膜睫状体高度表达B7-H1,而移植术后排斥的小鼠角膜及虹膜睫状体未见明显表达B7-H1。结论B7-H1可能参与了同种异体小鼠角膜移植术后的免疫反应,可能在免疫赦免现象中发挥重要作用。     

人胰腺癌组织LYVE-1表达与癌组织淋巴管转移关系研究

目的观察胰腺癌组织淋巴管内皮细胞LYVE-1的表达,为研究癌淋巴管转移的分子机制提供形态学依据。方法用免疫组化的方法对人胰腺癌和正常胰腺组织中LYVE-1的表达情况进行观察,用LYVE-1来标记淋巴管,检测癌组织中微淋巴管密度（LMVD）。结果胰腺癌组织血管内皮细胞LYVE-1不染色,淋巴管内皮细胞LYVE-1阳性表达,经计数微淋巴管数量,癌组织中的LMVD明显高于癌旁正常胰腺组织（P〈0.01）,并且LMVD的表达与VEGF-C、VEGF-D的表达具有显著相关性（P〈0.01）。结论LYVE-1可选择性的表达在胰腺癌组织淋巴管内皮上,能明确的区分血管及淋巴管成分,可作为一个淋巴管内皮细胞较特异的标记物。由于LMVD在癌组织中的表达明显增高,说明淋巴管数量的增加可能与胰腺癌的淋巴转移有关。