反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的：阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性，表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法运用改良的端粒酶活性定量检测法，测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性；用台盼蓝染色法，观察胃癌细胞的活力。结果：三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达，但其活性的高低与其分化程度没有显著关系。在指定的浓度下，端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后，MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制，但在同样浓度条件下，MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。错义序列对照组则无明显变化。结论：端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性，其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性，其作用机制是通过抑制端粒酶活性，端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的。     

毛兰素对胃癌细胞SGC-7901端粒酶活性的影响

目的探讨毛兰素对胃癌细胞端粒酶活性的影响。方法MTT法检测毛兰素对人胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用,AnnexinⅤ/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率,TRAP实时荧光定量PCR检测端粒酶活性。结果毛兰素能抑制胃癌细胞SGC-7901增值,48小时IC50值为0.056μg/ml;毛兰素抑制胃腺癌SGC-790细胞端粒酶活性早于诱导凋亡,且都表现为时间和浓度依赖性。结论毛兰素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,可能与其对端粒酶活性的抑制有关。     

榄香烯乳对胃癌SGC—7901细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的 探讨榄香烯乳治疗胃癌细胞的作用机制。方法 应用四唑盐比色试验、端粒重复扩增--微孔板杂交法、TUNEL染色研究榄香烯乳对胃癌细胞SGC-7901的细胞生长、端粒酶活性及诱导凋亡的作用。结果 榄香烯乳对胃癌SGC-7901细胞生长具有较强的抑制作用。榄香烯乳抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡有关。榄香烯乳抑制端粒酶活性的效果与浓度及时间相关。结论 榄香烯乳对胃癌细胞生长具有很强的抑制作用,与抑制端粒酶活性、诱导凋亡有关。     

尿苷三磷酸通过PTEN/Vimentin抑制胃癌细胞的侵袭

目的 研究尿苷三磷酸(uridine triphosphate,UTP)对胃癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 采用细胞划痕实验检测UTP对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901迁移能力的影响;Transwell检测UTP对正常人胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞MKN-45、SGC-7901侵袭能力的影响;Western blot检测UTP对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901 PTEN磷酸化水平及Vimentin表达的影响.结果 细胞划痕实验表明UTP组抑制胃癌细胞MKN-45和SGC-7901迁移(P＜0.05).Transwell实验结果显示UTP组抑制胃癌细胞MKN-45和SGC-7901侵袭(P＜0.01),但对正常人胃黏膜细胞GES-1无影响(P＞0.05).Western blot实验证实UTP组可增强胃癌细胞MKN-45和SGC-7901 PTEN磷酸化水平,同时下调Vimentin的表达.结论 UTP抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,可能是与其上调PTEN磷酸化水平,抑制Vimentin表达有关.     

miR-221异常表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-221反义寡核苷酸（miR-221ASO）对胃癌细胞增殖的调控作用。方法转染miR-221ASO,MTT实验观察miR-221ASO对胃癌细胞调控产生的系列效应,采用茎环RT—PCR检测胃癌细胞株SGC-7901和MKN-45中miR-221的表达变化。结果miR-221ASO转染可显著抑制胃癌细胞SGC～7901和MKN-45表达（P=0．027、0．013）,miR-221ASO对胃癌细胞的生长抑制率显著减少。结论miR-221ASO对胃癌细胞miR-221水平降低具有靶向特异性．转染miR-221ASO可有效抑制miR-221的促癌效应．利用反义核酸技术的高度特异性开展针对促癌miRNA分子的靶向治疗将可能为胃癌的基因治疗开辟新的途径。     

端粒酶反义寡核苷酸及其联合顺铂对胃癌细胞的影响

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸及其联合顺铂对胃癌细胞的影响。方法利用脂质体将端粒酶反义寡核苷酸导入SGC7901胃癌细胞。TRAP—ELISA法检测端粒酶活性，噻唑蓝（MTT）法测定端粒酶反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC7901的抑制；过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测癌细胞凋亡指数。结果经端粒酶反义寡核苷酸处理的胃癌细胞端粒酶活性显著下降，端粒酶反义寡核苷酸明显抑制胃癌细胞的生长和诱导胃癌细胞的凋亡，端粒酶反义寡核苷酸联合顺铂，能增强对胃癌细胞生长的抑制和诱导胃癌细胞的凋亡。结论端粒酶反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞生长，与顺铂协同作用，效果更为明显。     

人参皂甙Rg3在体外对胃癌细胞生长和凋亡的影响

目的 研究人参皂甙Rg3在体外对低、中分化胃腺癌细胞株MKN-45和SGC-7901生长及凋亡的影响.方法 取处于对数生长期的MKN-45和SGC-7901细胞,加入不同终浓度(20、30、40、50 μg/mL)的人参皂甙Rg3分别培养24、48 h或24、48和72 h,以不加药细胞作为阴性对照.MTT法检测MKN-45和SGC-7901细胞生长抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测SGC-7901细胞凋亡率;流式细胞仪分析SGC-7901细胞周期;透射电子显微镜观察50 μg/mL人参皂甙Rg3处理组SGC-7901细胞的形态学改变.结果 人参皂甙Rg3各处理组SGC-7901和MKN-45细胞生长抑制率均明显高于对照组(P<0.05),且随药物浓度的增加和作用时间的延长而上升(P<0.05).与对照组比较,人参皂甙Rg3各处理组SGC-7901细胞凋亡率和G0/G1期细胞百分比均明显上升,且呈浓度和时间依赖性.透射电子显微镜观察50 μg/mL人参皂甙Rg3处理组SGC-7901细胞,可见典型的凋亡细胞结构.结论 人参皂甙Rg3在体外对胃癌细胞生长具有抑制作用,且呈现一定的时效和量效关系,其机制可能与诱导胃癌细胞凋亡有关.     

刺梨提取单体CL-1对胃癌细胞系增殖的抑制作用

目的观察刺梨提取物CL-1对抗胃癌细胞系SGC-7901和MKN-45体外增殖的抑制作用.方法采用MTT检测法和生长曲线的绘制,观察CL-1对胃癌SGC-7901和MKN-45细胞增殖的影响.结果MTT法检测显示,CL-1(10-8-10-4mol·L-1)对SGC-7901和MKN-45细胞生长的抑制作用均呈现剂量依赖性和时间依赖性.细胞生长曲线显示:随CL-1剂量的增加,SGC-7901和MKN-45细胞的生长曲线逐渐右移.结论CL-1具有体外抗肿瘤作用.     

苦参碱诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究苦参碱对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法苦参碱处理人胃癌细胞株SGC-7901后，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应，显微镜下观察胃癌细胞形态变化，应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡，用PCR-ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果不同浓度的苦参碱对SGC-7901有明显抑制作用，且呈时间依赖性及剂量依赖性，形态学观察也发现大量神经细胞的染色质凝聚，核碎裂，凋亡小体产生，细胞即出现明显的凋亡形态特征，FCM检测结果显示苦参碱作用后，G0／G1期细胞比例增高，S期、G2／M期细胞比例下降，苦参碱在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调，且随苦参碱浓度增大和时间延长，抑制作用逐渐增强。结论苦参碱对人胃癌细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一。     

稳定转染ShRNA-TRAP对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响

目的探讨稳定转染靶向端粒酶调节相关基因TRAP的小发夹RNA对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建特异性作用于TRAPmRNA的小发夹RNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选的阳性克隆细胞继续压力培养3个月,采用RT-PCR法检测TRAPmRNA的表达,MTT法检测细胞生长,同时检测细胞凋亡、hTERTmRNA、端粒酶活性。结果稳定转染ShRNA-TRAP后,SGC-7901细胞的TRAPmRNA表达明显下降,hTERTmRNA和端粒酶活性降低;细胞增殖能力降低,细胞凋亡率增加。结论ShRNA-TRAP能长效的抑制TRAPmRNA的表达,下调hTERTmRNA转录及端粒酶活性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,可作为抑制端粒酶的肿瘤基因治疗策略的补充。     

端粒酶突变体对肝癌细胞端粒酶活性的作用

目的　观察端粒酶突变体对肝癌细胞端粒酶活性和生长抑制的作用。方法　利用质脂体转染法在培养的肝癌细胞中导入端粒酶突变体，并与维甲酸和人参皂甙对照，利用TRAP－银染方法对不同时期肝癌细胞进行了端粒酶活性的测定，并观察各期细胞生长情况。结果　在加入端粒酶突变体后肝癌细胞端粒酶活性明显降低，细胞出现明显凋亡现象，其作用效果与维甲酸基本相同。结论　端粒酶突变体对肝癌细胞的抑制作用可能是通过抑制端粒酶活性途径实现的。     

端粒与端粒酶

端粒是现代生物学的研究热点,与肿瘤发生、基因表达调控、衰老有着密切的关系。端粒维持过程中有两类重要的蛋白端粒相关蛋白和端粒酶。端粒相关蛋白是直接或间接与端粒结合的蛋白,在维持端粒稳定性方面有重要作用。端粒酶,特别是其催化亚基hTERT,在端粒延长过程中起着不可替代的作用,与细胞永生化和癌变密切相关。对hTERT的调节也是治疗肿瘤的一个主要手段。     

端粒酶的研究进展

端粒/端粒酶系统可以调节细胞的增殖。通过抑制端粒酶的活性而抑制细胞的增殖,是一种肿瘤治疗的策略;通过激活端粒酶的表达而促进细胞增殖,可以治疗某些退形性疾病。近年来对此系统的研究成为热点,本文就端粒酶的作用、调节及其与肿瘤、细胞永生化方面进行综述。     

端粒酶与恶性肿瘤

目的　探讨端粒酶活性在恶性肿瘤发生中的作用机制及端粒酶控制对恶性肿瘤的治疗作用。方法　参阅国外相关文献就端粒酶与恶性肿瘤之间的密切关系作一综述。结果　端粒酶活性是保持绝大多数恶性肿瘤继续生长的必须之酶 ,抗肿瘤药物建立在抑制端粒酶活性的基础上可能会得到高效治疗效果和最低副作用。结论　端粒酶活性在恶性肿瘤的发病机制中起重要作用 ,该酶活性检测有可能为早期恶性肿瘤的治疗带来希望。     

端粒酶与结肠癌

端粒酶激活与肿瘤发生关系密切，端粒酶活性增高可能是结肠组织癌变的重要因素，综述了端粒酶在结肠癌的发生、诊断、治疗及预后判断等方面的研究现状，分析了目前存在的问题以及未来的临床应用前景。     

端粒酶活性调控研究进展

端粒酶的激活可能与端粒酶活性催化亚单位的表达、调控有关。端粒酶的活性受多种因素的影响,端粒结合蛋白、端粒酶激活剂、端粒酶抑制剂等通过不同途径调节端粒酶的活性。端粒酶在细胞的增殖、衰老及肿瘤诊断、治疗中起重要作用,对它的活性的研究会有很好的发展前景。     

端粒酶与鼻咽癌

鼻咽癌是我国常见的耳鼻咽喉恶性肿瘤，在其诊断和治疗方面尚未取得突破性进展。端粒酶作为一种新的肿瘤标记物及抗癌靶点，具有重要的生物学意义，它可作为诊断指标和治疗方法的研究对象应用于鼻咽癌研究中。     

端粒酶的研究现状

近有研究发现 90 %的肿瘤细胞都呈端粒酶阳性 ,而大多数正常人体组织细胞中却无端粒酶阳性表达 ,提示端粒酶可能在肿瘤的发展过程中起重要作用 ,并有可能成为一种肿瘤标记物[1] 。肿瘤细胞永生化的“端粒 -端粒酶假说”也为越来越多的研究结果所证实。本文就端粒、端粒酶的现状、临床意义进行综述。1　端粒、端粒酶的结构与生物学特性端粒是真核细胞染色体末端富含Ｇ的ＤＮＡ重复序列 ,由ＤＮＡ及其相关蛋白组成 ,人类端粒序列为平均长度 12～ 15Ｋｐｂ的 (5′ -ＴＴＡＧＧＧ - 3′)ｎ。端粒的重要功能在于维持染色体稳定和ＤＮＡ的完整复制…     

端粒酶与再生医学

端粒和端粒酶是决定基因扩增和稳定的主要因素,调控着细胞增殖活性和细胞寿命。干细胞也能高水平表达端粒酶。正是这个原因使得干细胞能存活更长时间并且能转变为血液细胞、皮肤细胞和内脏细胞等。端粒酶在人永生化细胞中的特异性表达对维持干细胞自我更新能力和复制潜能具有重要意义;在再生医学领域的应用研究中为探索人体器官的再造提供了新思路。