siRNA腺病毒载体对兔骨髓基质细胞成脂分化的干扰效应

目的 观察靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因siRNA腺病毒载体阻断乙醇诱导兔骨髓基质细胞(MSCs)的成脂分化.方法 培养兔MSCs随机分为7组:N:对照组,M:模型组,CO:感染空载体组,C1:感染无关siRNA组,S1、S2、S3:干扰1、2、3组.将重组腺病毒载体转染细胞,检测MSCs内PPARγ mRNA、osteocalcin mRNA、PPARγ蛋白表达、甘油三酯、ALP活性和培养液骨钙素含量,并计数脂肪细胞.结果 N、M、CO、C1组PPARγ mRNA和osteocalcinmR-NA表达值分别为(0.39±0.02)、(0.75±0.03)、(0.74±0.03)、(0.73±0.02)和(1.09±0.19)、(0.50±0.10)、(0.46±0.12)、(0.49±0.13),M、CO、C1组脂肪细胞多,甘油三酯高,ALP活性与骨钙素量均低.S1、S2、S3组PPARγ mRNA和osteocalcin mRNA表达值分别为(0.28±0.03)、(0.30±0.03)、(0.31±0.01)和(0.92±0.09)、(0.87±0.32)、(0.93±0.25),脂肪细胞数、甘油三酯量、ALP活性值与骨钙素含量均接近正常,与M、CO、C1组间差异有统计学意义(P<0.05),与N组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 该腺病毒载体能阻断乙醇诱导的MSCs成脂分化.     

靶向特异基因小干扰RNA预防乙醇性股骨头坏死的研究

目的 观察靶向PPARγ基因小干扰RNA(siRNA)预防灌胃法家兔乙醇性股骨头坏死的效果.方法 将96只家兔随机分为4组,每组24只.N组:灌胃法给予生理盐水10ml/(kg·d).M组:灌胃法给予烈性酒(含乙醇度46%,V/V)10 ml/(kg·d);S组:实验1、3、5个月第1天,随机选择侧别手术,穿刺注入股骨头内25 μl siRNA重组腺病毒,同M组灌酒;CO组:同S组手术,同M组灌酒,不注入siRNA重组腺病毒.于2、4、6个月末分批处死家兔,观察血清学和股骨头组织病理学变化.结果　实验6个月时,N、M、CO、S组血清甘油三酯含量分别为(1.21±0.12)、(4.59±1.58)、(4.63±1.17)、(4.32±1.20)mmol/L;总胆固醇含量分别为(2.35±0.33)、(19.59±1.58)、(20.13±1.17)、(18.32±1.20)mmol/L;脂肪细胞平均直径分别为(40.89±2.41)、(48.65±2.93)、(49.45±2.63)、(42.52±2.57)μm;骨小梁面积分数分别为(41.80±2.47)%、(30.70±2.86)%、(29.80±2.69)%、(41.60±2.87)%;空骨陷窝计数分别为(12.30±1.73)%、(22.40±1.52)%、(23.10±1.62)%、(11.70±1.46)%;PPARγ表达量分别为(0.29±0.05)、(0.66±0.12)、(0.61±0.15)、(0.33±0.05);骨钙素mRNA表达量分别为(0.92±0.07)、(0.19±0.11)、(0.23±0.08)、(0.88±0.11);PPARγ蛋白表达量分别为(0.75±0.08)、(1.60±0.11)、(1.55±0.12)、(0.65±0.05).M、CO组病理变化明显,髓内造血组织减少,脂肪细胞增殖肥大,骨小梁变细、稀疏、部分断裂;S组股骨头内最大脂肪细胞平均直径、空骨陷窝计数、骨坏死发生率、PPARγ基因与蛋白表达量均明显低于M、CO组(P＜0.01,P＜0.05),S组与N组差异无统计学意义(P＞0.05).结论　靶向PPARγ基因siRNA腺病毒载体能够有效阻断乙醇诱导的家兔股骨头内MSCs中PPARγ基因表达及成脂分化,预防乙醇性ONFH的发生.

Abstract：

Objective To observe the effect of small interfering RNA (siRNA) adenovirus vectors targeting PPARγto prevent the alcohol-induced osteonecrosis of the femoral head (ONFH) in rabbits.Methods Ninety-six rabbits were randomly divided into four groups. In group N, normal saline ( 10 ml/kg every day) was poured into stomach. In group M, the strong wine (the volume fraction was 46% alcohol,10 ml/kg every day) was poured into stomach. In group S, under the randomly selected side and anesthesia, the animals were injected with 25 μl siRNA adenovirus drip into the femoral head and then the puncture hole was closed on the 1st day at the 1st, 3rd and 5th month of the experiment, and at the same time the strong wine (the volume fraction was 46% alcohol, 10 ml/kg every day) was poured into stomach. In group CO, animals were treated with the same method as the group S, but not injected with siRNA adenovirus drip. The animals were sacrificed in batches at 2nd, 4th and 6th month after the experiment. The serology and pathological changes of the femoral head were studied. Results At the 6th month, the triglyceride (TG, mmol/L) contents in groups N, M, CO and S were (1.21 ±0. 12), (4.59 ± 1.58), (4.63 ±1.17) and (4. 32 ± 1.20), the cholesterol levels ( CHO, mmol/L) were (2. 35 ± 0. 33), ( 19. 59 ±1.58), (20. 13 ± 1. 17) and ( 18.32 ± 1.20), the average diameter of the max adipocyte (μm) was (40. 89 ± 2. 41 ), (48.65 ± 2.93 ), (49. 45 ± 2. 63 ) and ( 42. 52 ± 2. 57 ), the trabeculace area fraction was (41.80 ±2. 47)%, (30. 70 ±2. 86)%, (29. 80 ±2. 69)% and (41.60 ±2. 87)%, the percentage of empty osteocyte lacunae was (12.30 ± 1.73)%, (22.40 ± 1.52)%, (23. 10 ± 1.62)% and (11.70 ±1.46)%, the expreasion levels of PPARγ mRNA were (0.29 ±0.05), (0.66±0. 12), (0.61±0.15) and (0. 33 ± 0. 05 ), the expression levels of osteocalcin mRNA were (0. 92 ± 0. 07 ), (0. 19 ± 0. 11 ), (0. 23 ±0. 08) and (0. 88 ± 0. 11 ), the expression levels of PPARγprotein were ( 0. 75 ± 0. 08 ), ( 1.60 ± 0. 11 ),(1.55 ±0. 12) and (0.65 ±0.05), respectively. In groups M and CO, the pathological changes were obvious; there was decreased hematopoietic tissue, proliferation and hypertrophy of the adipocytes, increased fatty tissue, and thinned, sparse or breoken bone trabeculae in the femoral head; the area fraction of the trabeculae was reduced. In group S, the average diameter of the max adipocyte, percentage of empty osteocyte lacunae, incidence of ONFH, the expressions of PPARγmRNA and protein were obviously reduced as compared with groups M and CO (P ＜0. 01,P ＜0. 05). There was no statistically significant difference between group S and group N (P ＞ 0. 05). Conclusion siRNA adenovirus vectors targeting PPARγcan efficaciously suppress the expression of PPARγ gene and adipogenic differentiation of the MSCs in the femoral head induced by alcohol, which may prevent the development of the alcohol-induced ONFH in rabbits.     

葛根素对乙醇性股骨头坏死的预防作用

目的 探讨葛根素对小鼠乙醇性ONFH的预防作用。方法 4周龄小鼠随机分为3组，A组给予白酒，B组给予白酒和葛根素，C组给水。4、6、8、10个月分批检测动物血清学、肝脏和股骨头组织学、基因表达等变化。结果 实验6个月时：（1）3组血清CHO、TG、ALP分别为：（6．39±0．49）、（3．19±0．11）、（2．98±0．36）mmol／L，（1．01±0．15）、（0．71±0．13）、（0．68±0．22）mmol／L，（161．6±32．44）、（196．5±31．52）、（203．4±22．83）IU。（2）A组出现脂肪肝，股骨头骨小梁变细稀疏，髓内造血组织减少，脂肪与空骨陷窝明显增多。B组股骨头内脂肪稍增加，空骨陷窝比正常C组少。3组最大脂肪细胞平均直径和空骨陷窝计数分别为（40．02±3．25）、（39．15±3．67）、（38．51±3．09）μm，（13．5±1．6）、（9．8±2．2）、（10．3±2．7）％。（3）A组中PPARγ,mRNA呈高表达，Osteoealcin mRNA呈低表达。B组和C组中PPAR＇,／mRNA呈低表达，Osteocalcin mRNA呈高表达。始自6个月，A组各数据和B、C组间差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01），B、C组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 葛根素能够预防小鼠乙醇性ONFH的发生。     

马血清致敏条件下鸡乙醇性股骨头坏死模型的制作

目的 制作马血清致敏条件下鸡乙醇性股骨头坏死的动物模型.方法 取64只健康成年雄性三黄鸡随机分为4组.A组:马血清+乙醇组;B组:单纯乙醇组;C组:单纯马血清组;D组:空白对照组.于灌胃第4、8周末分批处死,取股骨头制作苏木素-伊红(HE)和冰冻切片,光镜观察组织学变化并测算骨小梁面积分数、空骨陷窝计数、最大脂肪细胞平均直径、股骨头坏死发生率等指标.于灌胃第8周末取股骨头制作标本在扫描电镜下观察组织学变化.结果 灌胃第4周末,各组股骨头组织未见明显病理改变.灌胃第8周末,A组股骨头软骨下骨髓内造血组织明显?栽 减少,脂肪细胞增殖肥大,骨小梁明显变细、稀疏,多处断裂,骨小梁面积分数降低,空骨陷窝显著增多,与其他3组比较,P<0.01.A、B、C、D组股骨头坏死发生率分别为87.5%、25.0%、25.0%、0%.扫描电镜下观察可见A组股骨头表面凹陷,伴有多处裂痕,骨小梁失去原有形态,变细、稀疏,多处断裂,空骨陷窝增多,而B、C、D组未见到这些变化.结论 鸡是制作乙醇性股骨头坏死动物模型的理想动物;马血清致敏条件下,可以缩短造模周期,提高造模成功率.     

外源性PTH对摘卵大鼠骨髓PPARγ mRNA表达的影响

目的观察骨质疏松大鼠骨髓微环境PPARγ mRNA表达变化和PTH治疗绝经后骨质疏松症的分子机制。方法雌性大鼠随机分为Sham、OVX和OVX＋PTH（1-34）20μg组，摘卵12周后给药，药后8周处死，观察骨髓脂肪细胞及PPARγmRNA表达变化。结果OVX组大鼠腰椎骨髓腔内脂肪空泡数较Sham组明显增加（P〈0．001），空泡百分面积为Sham组的26．81倍（P〈0．001）。OVX＋PTH20μg组的脂肪空泡数明显减少（P〈0．001），仅为OVX组的18．7％（P〈0．001）；OVX组骨髓PPARγmRNA表达较Sham组明显升高（P〈0．05—0．001），OVX＋PTH（1-34）20μg组PPARγmRNA表达则较不治疗组明显降低（P〈0．05～0．01）。结论OVX骨质疏松大鼠骨髓微环境PPARγmRNA表达上调，PTH对骨质疏松的促进骨形成作用与其抑制骨髓PPARγmRNA表达有关。     

地塞米松对人骨髓间充质干细胞成脂分化的基因调控

目的观察地塞米松对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）内成脂转录因子PPARγmR—NA和成骨基因Osteocalcin mRNA表达的影响。方法取健康自愿者骨髓，通过梯度离心、贴壁分离培养获得hBMSCs。传代培养第2代hBMSCs8d，随机分为两组，实验组给予10^-7mol／L地塞米松，对照组不给予地塞米松，5d后收集细胞，采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测两组细胞中PPARγmRNA和Osteocalcin mRNA的表达。结果用地塞米松处理细胞5d，RT-PCR检测结果显示，实验组hBMSCs内PPARγmRNA呈高表达，对照组hBMSCs内PPARγmRNA呈低表达，两组差异有统计学意义（P〈0．01）。实验组hBMSCs内Osteocalcin mRNA呈低表达，对照组hBMSCs内Osteocalcin mRNA呈高表达，两组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论地塞米松能够调控hBMSCs内成脂转录因子高表达，而抑制其成骨表达，这可能与激素性骨坏死的发生机制有关。     

糖皮质激素诱导骨细胞脂肪化与股骨头坏死的病理机制研究

目的 探讨糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)诱导股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)的发病机制.方法 收集激素性ONFH及骨关节炎患者股骨头离体标本,采用免疫组化染色观察两组成骨转录分化因子Runx2和成脂转录分化因子PPAR-γ表达.大鼠颅骨源性成骨细胞在地塞米松作用下培养,茜素红矿化结节染色,油红“O”染色,RT-PCR检测Runx2 、PPAR-γ、OCN 、Col Ⅰ基因转录水平表达,免疫组织化学染色Runx2和PPAR-γ表达.激素法建立大鼠ONFH模型并确认建模成功,油红“O”染色脂肪细胞,免疫组化染色观察两组Runx2和PPAR-γ表达.结果 与骨关节炎比较,ONFH患者股骨头骨小梁间隙大量脂肪细胞聚集,并且脂肪细胞体积增大,Runx2表达显著下调,PPAR-γ表达上调.大剂量GCs作用下成骨细胞分化过程中未见茜素红矿化结节,油红“O”染色脂肪细胞,RT-PCR检测基因Runx2、OCN 、Col Ⅰ表达下调,PPAR-γ基因表达上调.大鼠ONFH模型股骨头骨小梁间隙脂肪细胞积聚、增大,Runx2表达下调,PPAR-γ表达上调.结论 大剂量GCs作用下,PPAR-γ表达上调、Runx2表达下调,调控骨髓基质细胞向脂肪细胞分化并促进成骨细胞、骨细胞转分化为脂肪细胞,同时抑制成骨细胞的分化、成熟及活性表达,可能是GCs诱发ONFH的主要病理生理机制之一.     

葡萄糖及吡格列酮对大鼠骨髓间充质干细胞脂肪分化的影响

目的观察不同糖浓度下吡格列酮对大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）向脂肪细胞分化的影响，探讨葡萄糖和吡格列酮对骨代谢的影响。方法采用体外细胞培养技术自大鼠股骨和胫骨中分离BMSCs进行纯化，培养，扩增，在诱导成脂培养基（地塞米松、3- 异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）、胰岛素）中诱导BMSCs分化为脂肪细胞，实验分为高糖组（葡萄糖浓度为50mmoYL）及正糖组（葡萄糖浓度为25mmoFL），两组分别用不同浓度的吡格列酮（0，0．1，1μg／ml）干预分化过程各21天，油红O（Oil Red O）染色鉴定分化后的脂肪细胞，光镜下观察橙红色脂滴沉着的细胞比例。实时荧光定量PCR测定脂肪细胞特异性标志LPL，PPAR γ mRNA的表达。结果诱导分化培养21天后，油红O染色结果显示随糖浓度增加脂肪细胞数量增多，PCR结果显示HG＋NC组比NG＋NC组LPL，PPARγ mRNA表达分别增加1．40倍（P〈0．05）和1．63倍（P〈0．05），在两种糖浓度下，分别加入吡格列酮后脂肪细胞分化均显著增加，数量明显增多，体积明显增大。与NG＋NC组相比，NG＋LP组LPL和PPARγmRNA表达分别增加1．43倍（P〈0．05）和1．50倍（P〈0．05），NG＋HP组mRNA水平增加更明显，达2．41倍（P〈0．05）和2．17倍（P〈0．05），HG＋HP组和HG＋LP与HG＋NC组相比，HG4-LP组和HG＋HP组LPL和PPARγmRNA表达递增。结论高糖会促进BMSCs向脂肪细胞分化，可能为糖尿病性骨质疏松形成的重要机制。吡格列酮有显著增加BMSCs向脂肪细胞方向分化的作用，且随药物剂量的增加，其诱导成脂分化的效应越明显。吡格列酮可能通过诱导BMSCs向脂肪细胞分化增多而向成骨细胞分化减少从而导致成骨作用减弱，这可能是吡格列酮致骨质疏松的重要机制。     

酒精性骨坏死发病机制和葛根素对其的预防作用

目的 探讨酒精性骨坏死发病机制和葛根素的预防作用。方法分离培养小鼠骨髓基质细胞（MSCs），随机分为3组：A组（酒精组），给予酒精0、0．03、0．09、0．15mol／L；B组（葛根素组），酒精0．09mol／L和葛根素终浓度为0．01mr,／ml；C组（对照组），无酒精与葛根素。苏丹Ⅲ染色，光镜下脂肪细胞计数；测定细胞内甘油三酯含量、碱性磷酸酶活性和细胞培养液中骨钙素含量。采用完整细胞斑点印迹分子杂交方法检测A组和C组细胞中422（aP2）mRNA和Ⅰ型胶原mRNA的表达。采用RT-PCR技术检测3组细胞中PPARγmRNA和osteocalcin mRNA的表达。结果酒精处理细胞后21d，MSCs分化为脂肪细胞的数量随酒精作用时间延长及浓度增大而增多；细胞内甘油三酯含量明显增高，ALP活性降低，骨钙素含量显著减少。0．09mol／L酒精作用细胞6d，A组中422（aP2）mRNA表达含量显著增高，Ⅰ型胶原mRNA表达含量明显降低。B组和C组细胞中PPARγmRNA表达明显低于A组，osteocalcin mRNA表达明显高于A组，而B组与C组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论酒精能诱导MSCs大量成脂分化，减少其成骨分化，这可能与酒精性骨坏死的发生机制有关。葛根素能够对抗酒精诱导MSCs成脂分化，可能预防骨坏死。     

液氮冷冻犬股骨头坏死过程中细胞因子和组织学的动态变化

目的研究早期犬股骨头缺血坏死（ONFH）发生、发展过程中组织学改变和细胞因子VEGF的动态表达变化,探讨其在股骨头坏死修复中的意义。方法健康比格犬16只,8～12个月龄,体重8～10kg,取其中4只作为正常对照组（A组,共8髋）,其余通过液氮冷冻法制成双侧股骨头坏死模型,作为实验组（B组）。分别于术后4、8、12、18周行CT检查后处死,取股骨头标本行HE染色观察骨小梁形态改变,免疫组化及RT-PCR检测VEGF的表达情况。结果 CT扫描发现术后B组股骨头骨密度首先升高,然后逐渐降低,至第18周出现囊性变和钙化灶。HE染色观察实验组术后4、8周可见关节软骨、骨小梁的结构和形态首先出现部分改善,新骨形成,参与修复,之后坏死紊乱吸收。免疫组化示：B组在术后第4周VEGF蛋白呈阳性表达,至第8周表达最高,这两个时期表达强度均高于A组,此后逐渐降低至第18周仅见微弱阳性表达,与A组无明显差异。RT-PCR检测VEGF mRNA的表达情况进一步显示C组在术后第4、8周VEGF mRNA表达率均高于其他各组。通过SPSS13.0分析,有统计学差异（P〈0.05）。结论在ONFH发生早期,出现VEGF的高表达,有助于促进坏死股骨头内血管的新生和软骨下骨的增殖,此后骨小梁开始修复重建,这可能有利于坏死股骨头的修复;坏死中后期VEGF表达微弱,骨小梁进一步吸收萎缩、排列紊乱,部分坏死股骨头塌陷,这可能最终导致坏死过程的不可逆性。     

酪氨酸激酶抑制剂对多囊肾病PPARγ的影响研究

目的：观察EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）对多囊肾PPARγ的蛋白表达和活性影响,探讨TKI和PPARγ激动剂合并用药治疗多囊肾病的理论依据。方法：免疫组化比对TKI治疗、未治疗与正常表现型Han：SPRD大鼠肾组织中PPARγ蛋白的表达及其磷酸化程度差异。WesternBlot分析不同药物作用MDCK细胞24h后,PPARγ的表达差异。双荧光素酶检测系统检测经TKI干预后PPARγ相对活性的变化。结果：PPARγ在多囊肾较正常表现型大鼠肾组织高表达（0.9175±0.0465,0.0809±0.0762）,TKI治疗2月显著增强其表达（1.3313±0.0233）,但磷酸化PPARγ依次呈降低趋势。TKI（2μmol/L）作用MDCK细胞,与空白组比,显著增加PPARγ表达（1.0889±0.0544,1.069±0.0534）,并随作用时间延长蛋白表达增加。PPARγ活性也随TKI作用时间延长至24h和浓度加大到2μmol/L渐增强,均具有统计学意义。结论：多囊肾病肾组织以及MDCK细胞内,TKI能够增强PPARγ的蛋白表达和活性,且具有时间、浓度依赖性,TKI合用PPARγ激动剂治疗多囊肾病可能增强疗效。     

活血化瘀中药对激素性股骨头缺血坏死模鼠TGF-β1表达的实验研究

目的：观察活血化瘀中药对激素性股骨头缺血性坏死大鼠转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响,进一步探讨其防治激素性股骨头坏死的作用机制。方法：采用清洁级SD大鼠40只,随机分为空白组4只和模型组36只．模型组每周2次腹腔注射醋酸泼尼松龙24．5mg／kg,经6周诱导出早期激素性股骨头缺血坏死的模型,空白组每周2次腹腔注射同等剂量的生理盐水。6周后处死空白组4只和模型组4只,进行光、电镜观察,确定造模成功。随后将其余32只模型组大鼠再随机分为治疗组16只和对照组16只,分别灌服桃红四物汤和生理盐水,于灌胃后第6、8周检测血清中TGF-β1的含量;检测股骨头局部TGF-β1mRNA的转录及股骨头局部TGF-β1的表达。结果：①图像分析仪分析：治疗组股骨头局部TGF—β1较对照组表达明显增强,两组有明显差异（P〈0．01）。②血清TGF-β1含量检测：治疗组血清中TGF-β1的表达增强,与对照组相比有明显差异（P〈0．01）。③股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录：治疗组在第6周时表达即增强,在第8周时表达又降低,而对照组在第6周时表达减少,在第8周时未检测到TGF-β1 mRNA的表达,两组有明显差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：活血化瘀中药可促进激素性股骨头缺血坏死模鼠股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录水平以及股骨头局部TGF-β1的表达,促进坏死股骨头的修复。     

激素性股骨头坏死股骨头内PPARγ及BMP2的动态表达

目的 研究激素性股骨头坏死股骨头内局部过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor γ,PPARγ)和BMP2的基因表达及蛋白合成的动态变化.方法 健康成年新西兰大白兔,共35只,雌雄各半,质量2.6～3.2 kg,平均2.9 kg.完全随机的方法将实验动物分为正常对照组15只,模型组20只.用改进的马血清加甲基强的松龙的方法诱导制成兔激素性股骨头坏死动物模型,HE染色确定模型的成功建立,提取兔股骨头内总RNA及总蛋白进行实时定量PCR及Western blot检测,研究不同时段坏死股骨头内PPARγ及BMP2的基因表达、蛋白合成的动态变化特点.结果 造模后2、4、8周时,模型组动物股骨头内PPARγ的基因表达、蛋白合成较对照组上调,其中PPARγ mRNA的表达量分别为正常组的1.2583、1.4329、2.0135倍,且随时间的推移PPARγ的基因表达、蛋白合成呈进行性上调趋势.模型组动物股骨头内BMP2的基因表达、蛋白合成较对照组下降,其中BMP2 mRNA的表达量在造模后2、4、8周分别为正常组的0.3264、0.1317、0.1253倍.BMP2蛋白合成量与病程的时间呈负相关.结论 素性股骨头坏死早期,股骨头内PPARγ过度表达,而BMP2的表达受到抑制.     

阿魏酸钠对兔激素性股骨头坏死早期促血管生成影响的实验研究

目的探讨药物阿魏酸钠对于激素性股骨头坏死(SANFH)早期干预以及对于血管变化的影响,以达到预防或延缓股骨头坏死的目的。方法利用改良的马血清加甲强龙的方法成功制备兔激素性股骨头坏死早期的动物模型,56只动物随机zhi分为对照,模型和治疗三组。分别选取激素注射后2周、4周、8周、12周共4个时间点,每组随机处死四只动物进行股骨头大体观察、HE染色、VEGF免疫组化染色、透射电镜观察。分析每组各时间点相关指标的变化情况以及各组之间的差异。结果大体观察以及HE染色和透射电镜观察发现早期股骨头坏死动物模型建立成功,且治疗组与模型组相比股骨头坏死表现明显减轻,VEGF表达增强,两组差别有统计学意义(P0.05)。结论阿魏酸钠可以有效地you,治疗e were dividied into 3 groups延缓或降低股骨头坏死的发生。     

罗格列酮抑制环孢素诱导的大鼠肾脏成纤维细胞基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶1组织抑制剂表达

目的 观察罗格列酮(RGZ)对环孢素A(CsA)作用下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性保护作用的分子机制.方法 构建、筛选和扩增PPARγ基因的siRNA载体,并将载体转染至体外培养的NRK细胞.体外培养NRK细胞,随机分组.(1)对照组:不加处理;(2)RGZ组:加RGZ( 10 μmol/L);(3)CsA组:加CsA( 1.0 mg/L);(4)CsA+RGZ 组:同时加CsA( 1.0 mg/L)及RGZ(10 μmol/L);(5)CsA+RGZ+siRNA组:质粒pRNAT- U6.2/LentiPPARγ-236转染NRK细胞,然后同时加入CsA( 1.0 mg/L)及RGZ(10 μmol/L).培养24 h后,用实时荧光定量和RT-PCR法检测各组细胞中PPARγ、MMP-9、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1) mRNA表达,用Western印迹法检测纤连蛋白(FN)的蛋白表达.结果 CsA明显上调PPARγ、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达(均P＜0.05);RGZ与CsA合用后,PPARγ、MMP-9和TIMP-1 mRNA表达下降(均P＜0.05);应用PPARγ siRNA后,与RGZ+ CsA组相比,PPARγ mRNA表达显著下降(P＜0.05),MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达有所增加(均P＜ 0.05).CsA明显上调FN蛋白表达(P＜0.05);RGZ与CsA合用后,FN蛋白表达下降(P＜0.05);应用含PPARγ siRNA后,FN蛋白表达有所增加(P＜0.05).结论 罗格列酮可以显著减轻CsA诱导NRK细胞分泌的FN蛋白及MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达,构建的siRNA质粒转染NRK细胞,能够有效地阻断NRK中PPARγ mRNA的表达,部分阻断罗格列酮对CsA毒性的改善作用.     

雷洛昔芬与苯甲酸雌二醇对人乳腺组织雌激素硫酸转移酶的影响

目的观察雷洛昔芬和苯甲酸雌二醇对植入裸鼠的人乳腺组织雌激素硫酸转移酶（EST）表达的影响。方法15例正常乳腺组织植入75只裸鼠。每例标本分5份,分别植入5只裸鼠后分为5组：对照（Ⅰ组）、苯甲酸雌二醇1mg／kg（Ⅱ组）及雷洛昔芬0．3mg／kg（Ⅲ组）、3mg／kg（Ⅳ组）、30mg／kg（Ⅴ组）。给药30d后取出移植的乳腺组织,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测ESTmRNA的表达。结果与Ⅰ组相比,Ⅱ组EST mRNA表达升高;半定量EST mRNA约为对照组的2倍（P〈0．05）。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ三组ESTmRNA表达与Ⅰ相比无显著性差异（P〉0．05）。结论剂量1mg／kg的雌激素上调EST表达,雷洛昔芬对正常乳腺的EST表达无影响。     

PPARγ活化对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞趋化因子表达的干预作用

目的：观察PPARγ活化对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾脏纤维化中的干预作用。方法：体外培养肾小管上皮细胞HK-2,LDH法检测15d-PGJ2和TGL对HK-2的细胞毒性,应用不同浓度的15d-PGJ2和TGL作用于TGF-β1诱导下的HK-2细胞,应用实时荧光定量PCR技术和ELISA方法检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-8（IL-8）表达的变化。结果：5μmol/L15d-PGJ2和2.5μmol/LTGL不影响HK-2细胞MCP-1和IL-8mRNA基础表达和蛋白分泌。TGF-β1作用24h时,2.5μmol/L和5μmol/L15d-PGJ2及2.5μmol/LTGL均能有效干预TGF-β1诱导的MCP-1mRNA表达和蛋白的分泌（P〈0.05）。IL-8的表达与MCP-1相似,2.5μmol/L和5μmol/L15d-PGJ2能显著抑制TGF-β1诱导的IL-8表达,TGF-β1诱导24h时2.5μmol/LTGL能显著抑制IL-8mRNA表达（P〈0.05）。结论：PPARγ激动剂15d-PGJ2和TGL作用均能有效干预TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞趋化因子MCP-1和IL-8的表达,可能具有有效干预肾间质炎症作用。     

PPARγ激动剂对成人正常皮肤成纤维细胞转分化的作用

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导成纤维细胞转分化的影响,探讨其抗瘢痕纤维化的潜在作用。方法：体外培养成人正常皮肤成纤维细胞,利用免疫荧光细胞化学法观察、分析PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,利用Western blot、实时荧光RT-PCR技术检测PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的α-SMA蛋白及mRNA水平的影响。结果：TGF-β1能显著增加成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞;与TGF-β1诱导组相比,10μM曲格列酮、15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少（P〈0.01）,抑制效应分别为31%、57%;预处理组的α-SMA mRNA水平显著下降（P〈0.01）。结论：PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的成人正常皮肤成纤维细胞的转分化的效应,具有抗皮肤瘢痕化、挛缩的潜在作用。