酒精对骨髓基质细胞成脂与成骨分化的影响

目的观察酒精对小鼠骨髓基质细胞中脂肪细胞特异性基因422(aP2)和Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法采用原代骨髓基质细胞体外培养技术,取小鼠双侧股骨骨髓细胞,通过细胞贴壁、分离,获取骨髓基质细胞。以0.09mol/L的酒精浓度作为诱导剂处理细胞。采用完整细胞斑点印迹分子杂交方法检测实验组和对照组细胞中422(aP2)mRNA和Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果对实验组和对照组的422(aP2)mRNA的完整细胞斑点印迹扫描值进行比较,实验组中422(aP2)基因杂交信号明显增强,斑点印迹扫描值为7207.8±331.3,对照组斑点印迹扫描值为652.2±62.6,实验组为对照组的11倍,两组比较差异有非常显著性意义(P<0.001)。对实验组和对照组Ⅰ型胶原mRNA的完整细胞斑点印迹扫描值进行比较,实验组基因杂交信号较对照组明显减弱,斑点印迹扫描值为3 567.3±300.9,对照组斑点印迹扫描值为7487.0±488.4,为实验组的2倍,两组比较差异有非常显著性意义(P<0.001)。结论酒精能诱导骨髓基质细胞向脂肪细胞分化,而减少骨髓基质细胞向成骨细胞分化。这可能与酒精性骨坏死的发生机制有关。     

双支撑骨柱移植术治疗股骨头坏死的远期疗效分析

目的分析双支撑骨柱移植术治疗股骨头坏死的远期疗效。方法从1988年3月以来,采用双支撑骨柱移植术治疗成人股骨头坏死366例466髋,获5年以上随访者186例206髋,平均年龄32.2(20~60)岁。按病因分类:激素性者60例68髋,酒精性者86例96髋,激素加酒精者30例32髋,外伤性者10例10髋。ARCOⅡB、ⅡC、ⅢA、ⅢB、ⅢC、Ⅳ期患者分别为36、30、40、40、32、28髋。参照百分法进行疗效评价。结果术后所有患者的髋关节疼痛均获得明显缓解或消失,股骨头高度有不同程度增加,关节活动度有改善。平均随访时间10.5(5~16)年,手术前与随访时临床评价(疼痛、功能、关节活动度)、X线评价、总分数比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结果显示ⅡB~Ⅳ期优良率分别为83.3%、80.0%、75.0%、65.0%、40.6%、28.6%,总优良率为63.6%。Ⅱ期效果好(81.8%),Ⅲ期早期(ⅢA、ⅢB)效果较好(70%),ⅢC、Ⅳ期者效果差(35%)。期别间疗效依次降低,差异有统计学意义(P=0.0001)。30岁以内患者术后股骨头内植骨愈合较快,平均为3.2(2.9~3.5)个月。50~60岁患者植骨愈合需时较长,平均为5.5(4.4~6.4)个月。结论该术式治疗股骨头坏死的远期疗效良好,治疗效果与股骨头坏死期别有关,尤其适用于股骨头坏死Ⅱ期和Ⅲ期的早期病例。     

应用关节镜治疗急性化脓性膝关节炎18例体会

膝关节是全身大关节中最易发生化脓性炎症的关节.急性化脓性膝关节炎传统常采用关节切开关节内病灶清除并关节腔内置管冲洗术,该方法疗程长且易出现关节强直等并发症[1].2002年1月至2003年6月,作者采用关节镜技术治疗急性化脓性膝关节炎18例,疗效满意,报道如下.     

糖皮质激素对骨髓基质细胞增殖及分化的影响

目的 观察糖皮质激素对骨髓基质细胞增殖及分化的作用,探讨糖皮质激素导致继发性骨质疏松的病理学机制。方法 以1×10-7M地塞米松加入骨髓基质细胞培养物中,测定增殖的骨髓基质细胞数及培养液中骨钙素含量。通过苏丹Ⅲ脂肪细胞染色计数观察地塞米松作用时间对脂肪细胞分化的影响。结果 实验组骨髓基质细胞数及培养液中骨钙素含量明显低于对照组,脂肪细胞的数量随地塞米松作用时间延长而增多。结论 糖皮质激素抑制骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化,促进其向脂肪细胞分化,这可能与糖皮质激素引起继发性骨质疏松时骨量减少、髓内脂肪组织增多有关。     

关节镜在膝关节骨性关节炎中的应用

目的探讨关节镜治疗膝关节骨性关节炎的临床效果。方法对265例膝关节骨性关节炎患者行关节镜清理治疗,观测临床效果。结果术后随访3~56个月,优良率为84.2%。结论关节镜手术可以有效地改善关节功能、缓解疼痛,是膝关节骨性关节炎的一种有效的治疗方法 。     

转化生长因子β1基因克隆及重组真核表达质粒的构建*★

背景：通过基因转移方法研究某一外源性基因在细胞中的作用是目前分子生物学常用的技术手段，与病毒载体相比，应用pcDNA4.0-TGF-β1真核表达质粒的转染方法无遗传毒性和细胞毒性，有更高的安全性。 目的：通过克隆转化生长因子β1基因，观察构建重组转化生长因子β1基因真核表达质粒的可行性。 设计、时间及地点：以细胞为观察对象的体外实验，于2007-03/2008-02在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成。 材料：2月龄清洁级健康SD大鼠，雌雄不拘，用于分离细胞中RNA。 方法：从大鼠骨髓细胞中分离提取转化生长因子β1的mRNA，反转录-聚合酶链反应扩增后，克隆入pGEM-T载体，PCR鉴定重组子；酶切下目的基因转化生长因子β1，再亚克隆入载体pcDNA4.0质粒，酶切鉴定亚克隆重组子并进行DNA序列分析。 主要观察指标：TGF-β1cDNA、pGEM-T-TGF-β1和重组子pcDNA4.0-TGF-β1的表达。 结果：经过反转录-聚合酶链反应扩增得到TGF-β1 cDNA条带；PCR扩增鉴定得到pGEM-T-TGF-β1。酶切鉴定得到亚克隆重组子pcDNA4.0-TGF-β1，经测序鉴定证实插入DNA序列与设计完全一致。 结论：成功克隆大鼠转化生长因子β1基因，并构建出重组转化生长因子β1真核表达载体。     

Ki-67蛋白在人骨肉瘤中表达的研究

目的:探讨ki-67蛋白在人骨肉瘤中的表达及其与骨肉瘤发生、发展和病理分型的关系。方法:采用免疫组化S-P蛋白的表达情况。结果:ki-67蛋白在骨肉瘤中阳性表达率为66.67％,在骨软骨瘤中阳性表达率为10％,比较骨肉瘤和骨软骨瘤染色阳性率和染色强度,差异均有显著性(P<0.05)。ki-67蛋白在骨肉瘤高分化组阳性表达率为28.57％,在骨肉瘤低分化组的阳性表达率为78.26％,两组染色阳性率及染色强度的差异均有显著性(P<0.05)。而ki-67蛋白在骨肉瘤各病理亚型的染色结果,差异无显著性(P>0.05)。结论:ki-67蛋白表达与骨肉瘤发生、发展密切相关,其阳性表达率和表达程度是判断骨肉瘤恶性程度的一个指标。     

藻酸钙复合材料构建组织工程化骨修复大鼠股骨缺损

背景：骨形态发生蛋白2可诱导骨髓基质细胞向成骨或软骨系分化。既往多采用外源性给药方法，但其在体内易被代谢，骨诱导时间短，用量大，需反复使用，且成本高。 目的：观察藻酸钙与携带人骨形态发生蛋白2及β半乳糖苷酶基因的重组腺病毒的大鼠骨髓基质细胞复合构建组织工程化骨修复大鼠股骨缺损的效果。 设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照观察实验，于2005-10／2006-12在河南省重点分子实验室完成。 材料：F344近交系大鼠12只和Wistar大鼠12只用于提取骨髓基质细胞，另外F344近交系大鼠48只用于制备股骨缺损模型。方法：扩增携带人骨形态发生蛋白2及β半乳糖苷酶基因的重组腺病毒（Adv-hBMP-2及Adv-β gal），培养大鼠骨髓基质细胞，分为Adv-hBMP-2转染组、Adv-β gal转染组和未转染组。腺病毒转染后与藻酸钠复合形成藻酸钙凝珠。建立大鼠股骨干中段连同骨膜截去6mm的缺损模型。F344近交系大鼠48只按随机数字表法分为6组，每组8只。缺损处分别植入不同的细胞复合物。同系细胞2组，供体为F344近交系大鼠：第1组Adv-hBMP-和Adv-β gal转染的骨髓基质细胞，应用FK506肌肉注射。第2组Adv-hBMP-2和Adv-β gal转染的骨髓基质细胞，未用FK506。同种异体细胞4组，供体为Wistar大鼠：第3组Adv-hBMP-2转染的骨髓基质细胞，应用FK506。第4组Adv-hBMP-2转染的骨髓基质细胞，未用FK506。第5组Adv-β gal转染的骨髓基质细胞，应用FK506。第6组Adv-β gal转染的骨髓基质细胞，未用FK506。FK506肌肉注射共3周，前2周每天1次，后1周隔天1次，每次剂量为1mg／kg。 主要观察指标：①转染后9d观察各组碱性磷酸酶染色阳性情况。②转染后3，6，9，12，15d进行碱性磷酸酶活性定量检测。③转染后21d行Von Kossa染色观察各组钙结节形成情况。④植入后2，4，6，8周摄x射线片检查观察各组新生骨痂和骨缺损愈合情况。⑤植入后8周在大鼠原骨缺损区取材，有明显成骨组织切片在低倍下显微照像并计算新生骨在骨缺损区域所占面积的百分数。 结果：Adv—hBMP-2转染组碱性磷酸酶染色可见多数细胞红染呈阳性，Adv—β gal转染组及未转染组染色阳性细胞少见。Adv-hBMP-2转染组各时间点碱性磷酸酶活性均高于Adv—β gal转染组及未转染组（P〈0．05），Adv—β gal转染组与未转染组间各时点差异均无显著性意义（P〉0．05）。Adv—hBMP-2转染组转染21d后Von Kossa染色显示钙结节形成，其他组未见钙结节。植入后2周起第1，3，4组X射线检查有明显骨痂形成，第1，3组骨痂密度高于第4组。第2，5，6组植入后各时段均无明显骨痂，缺损未愈合。植入后8周，第1，3组组织学检查表明以板层骨为主，第4组以编织骨和类骨质为主，内有炎症细胞浸润；第2，5，6组无明显新骨形成，缺损区内为纤维结缔组织。组织形态计量学分析表明第1，3组修复性新骨占原骨面积百分数大于第4组（P〈0．05）。 结论：Adv—hBMP-2转染同种异体骨髓基质细胞与藻酸钙复合体可用于修复大鼠股骨干节段性骨缺损。     

阿仑膦酸钠/磷酸钙骨水泥释放体系结构及体外释放规律的研究

目的 制备不同浓度的阿仑膦酸钠/磷酸钙骨水泥释放体系,观察阿仑膦酸钠对磷酸钙骨水泥结构的影响及复合释放体系体外释放的规律.方法 分别制备1wt％、3wt％和5wt％的载阿仑膦酸钠磷酸钙骨水泥释放体系,分别采用傅氏转换红外线光谱分析仪、扫描电子显微镜和高效液相色谱仪研究载阿仑膦酸钠磷酸钙骨水泥的结构和药物体外释放规律.结果 阿仑膦酸钠的载入没有改变磷酸钙骨水泥相成分的官能团;扫描电镜下各实验组微观结构相似,均呈珊瑚样状结晶体相互交织成网状结构;各组药物在同一时间点释放量(％)的差异无统计学意义(P＞0.05),各组药物的释放均分为48 h前的突释阶段和48 h后的缓释阶段,符合Higuchi机制扩散释放模型.结论 阿仑膦酸钠的载入对磷酸钙骨水泥的晶体结构基本没有影响,且在磷酸钙骨水泥释放体系中能够持续、稳定的释放.