miR-369靶向调节SOX4表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:观察微小RNA（miRNA,miR）-369通过调节SOX4对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响。方法:miR-369体外模拟物（mimics）转染，构建miR-369上调表达模型，以转染阴性对照链为对照组，CCK-8法和流式细胞技术分别检测细胞增殖率和凋亡率变化；Real-time PCR法检测SOX4 mRNA表达水平；双荧光素酶活检检测证实miR-369与SOX4相互作用关系；Western-blot法检测不同组间SOX4及Bcl-2家族相关蛋白表达水平变化。结果:miR-369 mimics转染后，MG-63细胞中miR-369表达水平较对照组明显提高(P=0.009)；miR-369 mimic转染后24 h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组；流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率较对照组明显提高（P=0.031）；Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-369 mimic转染后，SOX4在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制；而Bcl-2家族相关蛋白表达水平发生明显变化。结论:miR-369表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡，这些作用与靶向下调SOX4表达有关。     

Ilizarov技术结合有限手术治疗青少年痉挛性马蹄内翻足畸形

目的探讨采用Ilizarov技术结合软组织松解肌力平衡术治疗青少年脑瘫痉挛性马蹄内翻足畸形的疗效。方法回顾性分析2011年6月—2016年9月收治并符合选择标准的29例(33足)青少年脑瘫痉挛性马蹄内翻足畸形患者临床资料。其中,男17例(20足),女12例(13足);年龄13~28岁,平均17.6岁。依据Diméglio分级:Ⅱ级19足,Ⅲ级14足。给予软组织松解肌力平衡术,同时用Ilizarov技术纠正内翻畸形;术后5~7 d开始调节外固定架至达满意足踝形态为止,拆除外固定架后佩戴矫形支具,并逐渐减少佩戴时间至完全弃用。结果 29例(33足)均获随访,随访时间12~22个月,平均18个月。拆除外固定架后均恢复跖行足,无钉道感染及神经血管损伤发生。1足于拆除外固定架后6个月畸形轻度复发,经对症处理后,患者步态恢复正常。其余32足随访期内均无畸形复发。末次随访时,根据国际马蹄足畸形研究学组(ICFSG)评分为(5.21±3.91)分,与术前(36.73±4.80)分比较,差异有统计学意义(t=47.227,P=0.000);获优27足、良3足、中3足,优良率达90.91%。患者自评疗效27足非常满意,6足满意。结论 Ilizarov技术治疗马蹄内翻足疗效确切,同时根据症状体征结合适当软组织手术可有效治疗青少年脑瘫痉挛性马蹄内翻足畸形。     

藻酸钙复合材料构建组织工程化骨修复大鼠股骨缺损

背景：骨形态发生蛋白2可诱导骨髓基质细胞向成骨或软骨系分化。既往多采用外源性给药方法，但其在体内易被代谢，骨诱导时间短，用量大，需反复使用，且成本高。 目的：观察藻酸钙与携带人骨形态发生蛋白2及β半乳糖苷酶基因的重组腺病毒的大鼠骨髓基质细胞复合构建组织工程化骨修复大鼠股骨缺损的效果。 设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照观察实验，于2005-10／2006-12在河南省重点分子实验室完成。 材料：F344近交系大鼠12只和Wistar大鼠12只用于提取骨髓基质细胞，另外F344近交系大鼠48只用于制备股骨缺损模型。方法：扩增携带人骨形态发生蛋白2及β半乳糖苷酶基因的重组腺病毒（Adv-hBMP-2及Adv-β gal），培养大鼠骨髓基质细胞，分为Adv-hBMP-2转染组、Adv-β gal转染组和未转染组。腺病毒转染后与藻酸钠复合形成藻酸钙凝珠。建立大鼠股骨干中段连同骨膜截去6mm的缺损模型。F344近交系大鼠48只按随机数字表法分为6组，每组8只。缺损处分别植入不同的细胞复合物。同系细胞2组，供体为F344近交系大鼠：第1组Adv-hBMP-和Adv-β gal转染的骨髓基质细胞，应用FK506肌肉注射。第2组Adv-hBMP-2和Adv-β gal转染的骨髓基质细胞，未用FK506。同种异体细胞4组，供体为Wistar大鼠：第3组Adv-hBMP-2转染的骨髓基质细胞，应用FK506。第4组Adv-hBMP-2转染的骨髓基质细胞，未用FK506。第5组Adv-β gal转染的骨髓基质细胞，应用FK506。第6组Adv-β gal转染的骨髓基质细胞，未用FK506。FK506肌肉注射共3周，前2周每天1次，后1周隔天1次，每次剂量为1mg／kg。 主要观察指标：①转染后9d观察各组碱性磷酸酶染色阳性情况。②转染后3，6，9，12，15d进行碱性磷酸酶活性定量检测。③转染后21d行Von Kossa染色观察各组钙结节形成情况。④植入后2，4，6，8周摄x射线片检查观察各组新生骨痂和骨缺损愈合情况。⑤植入后8周在大鼠原骨缺损区取材，有明显成骨组织切片在低倍下显微照像并计算新生骨在骨缺损区域所占面积的百分数。 结果：Adv—hBMP-2转染组碱性磷酸酶染色可见多数细胞红染呈阳性，Adv—β gal转染组及未转染组染色阳性细胞少见。Adv-hBMP-2转染组各时间点碱性磷酸酶活性均高于Adv—β gal转染组及未转染组（P〈0．05），Adv—β gal转染组与未转染组间各时点差异均无显著性意义（P〉0．05）。Adv—hBMP-2转染组转染21d后Von Kossa染色显示钙结节形成，其他组未见钙结节。植入后2周起第1，3，4组X射线检查有明显骨痂形成，第1，3组骨痂密度高于第4组。第2，5，6组植入后各时段均无明显骨痂，缺损未愈合。植入后8周，第1，3组组织学检查表明以板层骨为主，第4组以编织骨和类骨质为主，内有炎症细胞浸润；第2，5，6组无明显新骨形成，缺损区内为纤维结缔组织。组织形态计量学分析表明第1，3组修复性新骨占原骨面积百分数大于第4组（P〈0．05）。 结论：Adv—hBMP-2转染同种异体骨髓基质细胞与藻酸钙复合体可用于修复大鼠股骨干节段性骨缺损。     

袢钢板弹性悬吊治疗下尺桡关节脱位的临床疗效

目的探讨袢钢板弹性悬吊下尺桡关节(DRUJ)治疗DRUJ脱位的临床疗效。方法选取于2016年1月至2020年6月于郑州大学第一附属医院收治的确诊为DRUJ脱位的患者15例,随访时间6~18个月,对比其术前术后腕关节评分Gartland-Werley腕关节评分、术后患侧及健侧腕关节功能、术后并发症。术后两侧关节功能比较采用配对t检验。结果随访期间所选患者无切口感染、脱位复发等并发症发生。术后复查X线片示关节脱位得到有效复位且合并患侧尺桡骨远端骨折者骨折均已良好愈合,末次随访时根据Gartland-Werley评分标准评价腕关节功能:优10分,良4分,可1分。术后腕关节主动活动度健侧与患侧比较差异无统计学意义[屈伸活动度为,(109.33±15.91)°比(106.40±16.20)°,t=1.596,P>0.05;尺桡偏活动度为,(61.33±6.67)°比(59.87±7.69)°,t=1.703,P>0.05;旋前旋后活动度为,(111.67±11.44)°比(109.13±13.64)°,t=1.557,P>0.05]。结论带袢钢板弹性悬吊治疗DRUJ脱位患者术后腕关节功能恢复良好,随访疗效满意。     

甲基泼尼松龙对体外培养许旺细胞的促生长作用

量明显多于A组,差异有统计学意义(P<0.01),B、C、D组之间差异无统计学意义(P>0.05);②NGF的检测结果有优于CNTF、GDNF的趋势(P<0.01),CNTF和GDNF的促分泌情况差异无统计学意义(P>0.05).结论 甲基泼尼松龙能促进体外培养许旺细胞的增殖和神经营养因子的分泌.     

改良筋膜蒂皮瓣的临床应用

目的 对四肢筋膜蒂皮瓣手术方法进行改良及总结,进一步提高疗效.方法 应用筋膜蒂皮瓣修复四肢皮肤、软组织缺损48例.其中小腿中下段胫前皮肤缺损16例,足跟部皮肢缺损10例,踝关节皮肤缺损15例,膝关节周围皮肤缺损2例.骶尾部巨大褥疮1例,手腕背部皮肤缺损4例.创面范围4.5 cm×3.0 cm～19.0cm×12.0cm,根据创面不同采取四肢不同部位筋膜蒂皮瓣修复创面,其中前臂内侧皮神经、贵要静脉筋膜蒂皮瓣4例,前臂外侧皮神经、头静脉筋膜蒂皮瓣1例,顺行带隐神经、大隐静脉的筋膜蒂皮瓣3例,右大腿股后皮神经筋膜蒂皮瓣1例,带腓肠神经、小隐静脉逆行筋膜蒂皮瓣22例,带隐神经、大隐静脉筋膜蒂皮瓣7例.皮瓣范围6.0 cm×4.0 cm～18.0 cm×13.0cm.供区创面29例直接缝合,19例取大腿或下腹部全厚皮片6.0 cm×3.0 cm～13.0 cm×6.0 cm植皮修复. 结果 术后15例皮瓣肿胀、淤血,经远端小切口放血3～5d,其中12例皮瓣成活,创面Ⅰ期愈合;3例远端皮缘部分坏死,经再次手术清创植皮后成活.余患者皮瓣均成活,创面愈合.供区创面Ⅰ期愈合,植皮成活.48例患者均获随访1～24个月,平均9.5个月.皮瓣色泽正常,质地柔软,外形和功能满意. 结论 四肢筋膜蒂皮瓣是修复四肢皮肤、软组织缺损的理想治疗方法.通过手术方法的改良,可使皮瓣成活率进一步提高.     

AO锁骨钩钢板联合“∞”钢丝治疗锁骨远端骨折并肩锁关节脱位中期疗效

锁骨骨折临床十分常见,占全身骨折的6%,其中又以中段骨折最为常见[1];锁骨远端骨折相对较少,但由于往往合并肩锁关节脱位和韧带损伤而致复位困难、预后较差。2007年2月~2010年6月我科使用AO锁骨钩钢板(Synthes-stratec Medical,瑞士)联合"∞"钢丝治疗24例锁骨远端骨折并肩锁关节脱位患者,疗效显著。     

黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组(A组)、单纯生长因子诱导组(B组)、单纯黄芪诱导组(C组)和黄芪联合生长因子诱导液(D组),倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.     

黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组(A组)、单纯生长因子诱导组(B组)、单纯黄芪诱导组(C组)和黄芪联合生长因子诱导液(D组),倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.     

改良侧前方减压后路内固定治疗胸腰椎骨折并脊髓损伤23例体会

胸腰椎爆裂骨折，屈曲压缩Ⅱ～Ⅲ型骨折，其骨碎块后移压迫脊髓或马尾神经引起瘫痪。选择前入路可存直视下切除椎管前方致压物并行椎间植骨和内固定。但是前入路对于恢复伤椎体高度，矫正后凸畸形往往不够理想，且手术创伤较大。本院自1995年1月至2000年12月，选择适当病例，采用改良侧前方减压后路内固定，取得了较好效果。