过表达肌浆网钙ATP酶对心肌细胞内质网应激的影响

目的 研究过表达肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)对心肌细胞内质网应激的影响.方法 构建含SERCA2a cDNA的重组腺病毒载体(Adv-SERCA2a),以缺氧和衣霉素诱导内质网应激,随机将体外培养的心肌细胞分为以下6组:正常对照组、缺氧组、衣霉素组、过表达SERCA2a组、SERCA2a+缺氧组和SERCA2a+衣霉素组.采用Western印迹法检测内质网应激蛋白GRP78及C/EBP同源蛋白(CHOP)表达水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,台盼蓝染色检测心肌细胞存活率.结果 过表达SERCA2a+缺氧组GRP78及CHOP蛋白表达较缺氧组分别低49.1%和52.7%,细胞凋亡率较缺氧组低66.0%,细胞存活率较缺氧组高13.4%,差异有统计学意义(均P<0.05);过表达SERCA2a+衣霉素组GRP78及CHOP蛋白表达较衣霉素组分别低50.4%和66.1%,细胞凋亡率较衣霉素组低54.0%,细胞存活率较衣霉素组高6.7%,差异有统计学意义(均P<0.05).结论 过表达SERCA2a通过下调内质网应激蛋白表达,降低心肌细胞内质网应激水平,缓解过度内质网应激介导的细胞损伤.     

内质网应激在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法采用混合酶一步消化法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,以高糖诱导的心肌细胞为模型,将培养的心肌细胞分为3组,甘露醇对照组(对照组)、高糖(25 mmol/L)组和高糖加抗氧化剂组(NAC组),分别检测各组心肌细胞中活性氧(ROS)的含量,利用RT-PCR法检测心肌细胞中内质网应激标志分子GRP78、CHOP和Caspase-12的表达情况。结果与对照组比较,高糖组心肌细胞中ROS含量明显增多,细胞凋亡率升高(P<0.01),与高糖组比较,NAC组ROS含量减少(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01);与NAC组比较,高糖组内质网应激标志分子的mRNA表达显著上调(P<0.01),抗氧化剂能阻断高糖心肌细胞中内质网应激标志分子mRNA的表达,使其表达明显下调(P<0.01)。结论内质网应激凋亡通路可能参与高糖诱导的心肌细胞凋亡。     

高糖对小鼠足细胞(原)肾素受体表达的影响

目的 体外观察高糖刺激肾小球足细胞后(原)肾素受体(prorenin receptor,PRR)的表达变化,及PRR对足细胞凋亡的影响.方法 条件永生性小鼠足细胞用35mmol/L高糖刺激不同时间(0、1、3、6、12h),用不同浓度葡萄糖[35mmol/L甘露醇对照组、正常对照组(含5mmol/L葡萄糖)、10、20、35mmol/L组]刺激3h,Western blot及real-time PCR技术检测PRR的蛋白和mRNA表达;再将细胞分为35mmol/L高糖组、PRR的多肽阻断剂柄区肽(handle region peptide,HRP)(10-6mol/L)预处理组、氯沙坦(10-6mol/L)预处理组、HRP+氯沙坦预处理组,流式细胞仪法检测足细胞凋亡率.结果 (1)35mmol/L高糖刺激3、6、12h细胞PRR蛋白及mRNA表达较正常对照细胞显著上调(P＜0.05).(2)20mmol/L与35mmol/L浓度葡萄糖刺激足细胞PRR蛋白及mRNA表达较正常对照和甘露醇刺激细胞显著升高(P＜0.05).(3)氯沙坦、HRP及HRP+氯沙坦预处理细胞凋亡率较35mmol/L高糖刺激细胞显著降低(P＜0.05),HRP+氯沙坦预处理细胞凋亡率较氯沙坦预处理细胞降低(P＜0.05).结论 高糖刺激足细胞可通过上调PRR导致足细胞凋亡.     

白藜芦醇对高糖状态下大鼠肾小管上皮细胞增殖､凋亡的影响及机制

目的:观察白藜芦醇对高糖状态下大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E增殖?凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制?方法:体外培养大鼠NRK-52E细胞,分为正常对照组(NG组,正常葡萄糖5.6 mmol/L)?NG+白藜芦醇(Res)组(NG+Res组,白藜芦醇20 μmol/L)?高糖组(HG组,葡萄糖30 mmol/L)和高糖+白藜芦醇组(HG+Res组,白藜芦醇20 μmol/L),白黎芦醇预处理6 h,加HG刺激后24 h,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法观察肾小管上皮细胞增殖的改变;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测蛋白烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)?葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白表达变化?结果:①与NG组相比,高糖能明显增加肾小管上皮细胞的增殖和凋亡;与HG组相比,加用白藜芦醇干预能明显抑制肾小管上皮细胞的增殖和凋亡,差异均具有显著性(P值均 < 0.01);②与NG组相比,高糖刺激NRK-52E细胞24 h后NOX4和GRP78蛋白表达明显增加(P值均 < 0.05);与HG组相比,HG加白藜芦醇干预后NRK-52E细胞NOX4和GRP78蛋白表达量明显减少,差异均具有统计学意义(P值 < 0.05)?结论:白藜芦醇可能通过降低肾小管上皮细胞内氧化应激和内质网应激的产生,减少肾小管上皮细胞的增殖和凋亡而对糖尿病肾病起保护作用?     

醛固酮诱导MIN6细胞凋亡及作用机制研究

目的 探讨醛固酮对小鼠胰岛B细胞株MIN6细胞凋亡的影响及可能的作用机制.方法 体外培养的小鼠胰岛B细胞株MIN6分为对照组(加入无血清的DMEM培养基)、醛固酮组(加入10、100、1 000 nmol/L醛同酮进行干预)和醛固酮+拮抗剂组(以100 nmol/L醛固酮和100 nmol/L醛固酮拮抗剂螺内酯共同干预).采用MTT法检测细胞活性;放射免疫分析法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS);流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞培养上清液中Caspas-3活性;Western blotting法检测凋亡相关蛋白细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2、Bax和磷酸化蛋白激酶C(p-Akt)的表达.结果 MIN6细胞增殖活性随醛固酮干预浓度的升高而下降,呈现浓度依赖性.在生理糖浓度(5.6 mmol/L)和高葡萄糖浓度(28 mmol/L)环境中,醛固酮组的GSIS均显著低于与对照组(P＜0.01),而醛固酮+拮抗剂组GSIS显著高于醛固酮组(P＜0.01).醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),而醛固酮+拮抗剂组细胞凋亡率显著低于醛固酮组(P＜0.01).与对照组比较,醛固酮组Caspase-3活性明显升高,Cyt-C表达上调,Bcl-2/Bax下降,p-Akt表达下调(均P＜0.01);而醛固酮+拮抗剂组对醛固酮组的Caspase-3活性升高及相关蛋白表达异常具有明显抑制作用.结论 醛固酮具有促进MIN6细胞凋亡的作用,其作用机制可能与Cyt-C、Bcl-2、Bax和Akt介导的线粒体信号途径有关.     

谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞JNK,pJNK,CHOP,GRP78表达水平的影响

[目的]探讨谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞的保护作用.[方法]取A549细胞进行培养,分为5个组,其中空白对照组培养液中只有A549细胞,衣霉素组培养液中加入A549细胞和衣霉素1mg/L,GLN4组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和4mmol/L谷氨酰胺,GLN8组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和8mmol/L谷氨酰胺,GLN12组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和12mmol/L谷氨酰胺.利用Western blot方法检测各组细胞培养12h后的JNK,pJNK,CHOP及GRP78表达水平.[结果]与空白对照组比较,衣霉素组pJNK,CHOP及GRP78表达水平均明显升高(P<0.001),而JNK表达水平未见明显改变(P>0.05),提示衣霉素诱导A549细胞产生了内质网应激.与衣霉素组比较,GLN4,GLN8及GLN12组pJNK,CHOP,GRP78表达水平均明显降低(P<0.05).[结论]谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞具有保护作用.     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

二氢杨梅素激活磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 探讨二氢杨梅素对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的影响及其与磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的关系.方法 体外培养原代人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为正常对照组(5.56 mmoL/L葡萄糖)、高糖处理组(33.36 mmol/L葡萄糖)、甘露醇高渗对照组(5.56 mmol/L葡萄糖+27.8 mmol/L甘露醇)、AMPK激动剂5-氨基咪唑4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(5-Aminoimidazole-4-carboxamide-1-β-D-ribofuranoside,AICAR)(10 nmol/L)+高糖处理组、二氢杨梅素(1μmol/L)+高糖处理组、AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L) +AICAR+高糖处理组和AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L)+二氢杨梅素+高糖处理组.处理36 h后,CCK-8法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)和p-ACC蛋白水平.结果 与正常对照组比较,高糖处理组细胞活力明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),p-AMPK、p-ACC水平显著降低(P＜0.05);二氢杨梅素或AICAR预处理均明显抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力下降、细胞凋亡增加和p-AMPK、p-ACC水平降低(P＜0.05);Compound C预处理明显抑制AICAR和二氢杨梅素对高糖诱导HUVECs细胞凋亡的保护作用(P＜0.05).结论 二氢杨梅素通过促进AMPK活化抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡.     

牛磺熊脱氧胆酸对棕榈酸诱导的INS-1细胞凋亡的保护作用

目的:探讨牛磺熊脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)对棕榈酸(palmitate)诱导的INS-1细胞凋亡的保护作用?方法:分别用不同浓度棕榈酸(0.25?0.50?1.00 mmol/L)?棕榈酸(0.50 mmol/L)加TUDCA(100 μmol/L)培养INS-1细胞24 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞早期凋亡,Western blot检测内质网应激相关蛋白GRP78的表达?结果:与对照组相比,棕榈酸组(浓度≥0.5 mmol/L)的INS-1细胞凋亡率显著上升(P < 0.05);加TUDCA培养24 h以后,与棕榈酸组相比,INS-1细胞凋亡率显著下降(P < 0.05)?此外,棕榈酸组(0.5 mmol/L)INS-1细胞内质网应激相关蛋白GRP78的表达显著上升(P < 0.05);加TUDCA培养24 h以后,与棕榈酸组相比,INS-1细胞GRP78蛋白表达显著下降(P < 0.05)?结论:TUDCA能够减少游离脂肪酸引起的INS-l细胞凋亡,对INS-1细胞发挥保护作用?而减少内质网应激蛋白的表达,缓解内质网应激可能是其作用机制之一?     

降糖三黄片抑制糖尿病小鼠胰岛细胞的内质网应激和自噬

目的 探讨降糖三黄片对db/db小鼠血糖调节和胰岛细胞损伤的影响以及糖脂毒性诱导的胰岛细胞内质网应激和自噬初期的保护机制。方法 40只db/db小鼠随机分为db/db、db/db+JT(L)（1.32 g/kg）、db/db+JT(H)（2.64 g/kg）、db/db+Met（0.225 g/kg）,以C57BL/6J小鼠为正常组（n=10）。干预8周,检测血糖血脂等代谢指标,观察胰岛细胞形态变化。体外培养小鼠胰岛细胞（MIN6）,将其分为4组：Control组（5 mmol/L葡萄糖）,HH组（22 mmol/L葡萄糖+0.1 mmol/L棕榈酸）,HH+JT组（高脂高糖组条件基础上+5%降糖三黄片含药血清）和HH+JT+SP600125组（降糖三黄片组条件基础上+20 μmol/lSP600125）。流式术检测MIN6凋亡,RT-qPCR和Western blot检测内质网应激与自噬初期水平。结果 与对照组相比,中药有效改善糖脂代谢水平（P<0.05）,延缓体质量持续增长（P<0.05）,但对饮水量改善效果不明显（P>0.05）。HE染色发现降糖三黄片可修复胰岛细胞损伤。体外实验中,流式检验发现HH组胰岛细胞凋亡率显著升高（P<0.05）,HH+JT组可以减缓其凋亡（P<0.05）。Western blot结果显示降糖三黄片含药血清会显著减低由高脂高糖引起的内质网应激相关蛋白以及自噬初期相关蛋白的高表达（P<0.05）。干扰内质网应激可显著降低降糖三黄片含药血清对高脂高糖诱导的MIN6损伤的保护作用以及对胰岛细胞凋亡和自噬的抑制作用（P<0.05）。结论 降糖三黄片对MIN6有保护作用,其机制可能通过抑制内质网应激和自噬实现。     

NFAT2参与高糖诱导的大鼠足细胞凋亡

目的探讨高糖在体外培养足细胞中是否激活NFAT2并导致足细胞凋亡,并探讨其发生机制。方法大鼠足细胞分别在不 同的培养液中（葡萄糖5.3、10、20、30 和40 mmol/L,葡萄糖5.3 mmol/L+Mannitol 14.7 mmol/L,葡萄糖20 mmol/L+11R-vivit 100 nmol/L,葡萄糖20 mmol/L+CsA 500 nmol/L）培养不同的时间（0.5、1、2、4、12、24和48 h）;分别用免疫荧光、Western blot检 测NFAT 2的活化;流式细胞术检测足细胞的凋亡,实时定量PCR和Western blot检测Bax表达;用激光共聚焦动态观察足细胞 内Ca2+水平的变化。结果不同葡萄糖浓度培养的足细胞,足细胞核中NFAT2/Histone3 的比值分别为0.999±0.001;1.652± 0.188;2.405±0.281;1.850±0.397 及2.000±0.381,葡萄糖20 mmol/L（HG）分别作用足细胞0.5、1、2 和4 h,Western blot 显示 NFAT2/Histone 3结果分别为：1.253±0.332、1.656±0.464、2.080±0.319及1.601±0.431,培养2 h时NFAT2的活化达到高峰;经过 CsA或者11R-VIVIT预处理后可见完全阻断NFAT2的核积累,也阻断细胞凋亡;同时,我们发现高糖可增加体外培养足细胞的 钙离子内流,导致NFAT2的核积累和Bax表达。结论高糖可能通过CaN/NFAT2/Bax信号通路介导足细胞的凋亡,阻断CaN/ NFAT2/Bax信号通路可以减少高糖诱导的足细胞凋亡。     

艾塞那肽对高糖诱导INS-1细胞内质网应激及JNK信号通路的影响

目的 探讨艾塞那肽对高糖诱导INS-1细胞的内质网应激(ERS)及对JNK信号通路的影响。方法 小鼠INS-1细胞按不同的处理方式分为4组:对照组(A组,完全培养基)、高糖组(B组,30mmol/L糖培养基)、高糖+100nmol/L艾塞那肽组(C组)、高糖+100nmol/L艾塞那肽+JNK激动剂组(D组)。每天换液前观察各组细胞生存状态,培养7天后,MTT法检测细胞活性;提取细胞总蛋白,Western blot法检测Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3蛋白的表达水平。结果 培养至第4天B组细胞出现死亡,培养至第6、7天B组及D组细胞出现大量死亡;与A组比较,B组和D组的活性(A值)下降(P<0.05);与A组比较,B组高糖刺激后导致内质网应激上调Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3的表达量(P<0.05);与B组比较,C组艾塞那肽可通过抑制内质网应激下调Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3表达量(P<0.05);与C组比较,D组JNK激动剂促进JNK信号通路上调P-SAPK/JNK、caspase-3表达量(P<0.05)。结论 艾塞那肽可以缓解或阻断高糖刺激诱发的INS-1细胞内质网应激(ERS),抑制JNK信号通路,减少细胞凋亡。     

高糖环境对HSkMCs细胞株线粒体融合蛋白2表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨高糖对人骨骼肌细胞株(HSkMCs)线粒体融合蛋白2(mfn2)表达及细胞凋亡的影响。方法:体外培养HSkMCs细胞株,将细胞分别以5.55 mmol/L,11.10 mmol/L,22.20 mmol/L葡糖糖培养48 h,检测mfn2mRNA表达及细胞凋亡情况。RT-PCR法测定基因表达,流式细胞技术检测细胞凋亡。结果:以5.55 mmol/L葡萄糖组培养48 h为基础对照,11.10 mmol/L组mfn2表达较对照组下降12.3%(P<0.05);22.20 mmol/L组mfn2表达较对照组降低47.3%(P<0.05);对照组细胞凋亡率为(1.80±0.57)%,11.10 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率为(13.23±1.47)%,22.20 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率为(24.03±3.05)%,均较对照组显著增加(P<0.05)。结论:高糖可诱导HSkMCs细胞mfn2 mRNA表达下调,增加其凋亡。     

姜黄素通过内质网应激途径诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察姜黄素诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡并探讨其相关机制。方法:在以不同浓度姜黄素处理HeLa细胞后,采用MTT法观察细胞活性并选择姜黄素的最适干预浓度。将等量HeLa细胞分为4组:对照组(Ctrl)不加任何药物干预;对照组+4-苯基丁酸钠组(Ctrl+PBA)采用4-PBA(3mmol/L)对HeLa细胞进行干预;姜黄素组(Cur)采用姜黄素(25μM)对HeLa细胞进行干预;姜黄素+4-苯基丁酸钠组(Cur+PBA)则在姜黄素干预后48h采用4-PBA(3mmol/L)对HeLa细胞进行干预。流式细胞术检测各组HeLa细胞凋亡情况;采用Real-time PCR和Western Blotting检测各组HeLa细胞中内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)以及C/EBP同源蛋白质(CHOP)mRNA及蛋白表达情况。结果:不同浓度姜黄素干预HeLa细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制,并呈现出浓度依赖性;与Ctrl及Ctrl+PBA组相比,Cur组HeLa细胞凋亡率显著升高;与Cur组相比,Cur+PBA组HeLa细胞凋亡率显著降低;与Ctrl组及Ctrl+PBA组相比,Cur组GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与Cur组相比,Cur+PBA组GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:内质网应激途径是姜黄素诱导HeLa细胞凋亡的重要机制之一。     

衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨糖基化抑制剂衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其相关的分子机制。方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制的影响;集落克隆形成法检测药物对细胞集落克隆形成的影响;碘化丙啶单染流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡率的变化;caspase-3活性检测试剂盒检测药物作用后24 h caspase-3的活性变化;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达及葡萄糖调节蛋白78的表达。结果不同浓度衣霉素和/或顺铂对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞具有显著的增殖抑制作用,3μmol/L衣霉素处理人鼻咽癌细胞的24、36、48 h后细胞的存活率分别为72.13%、51.97%、37.56%和85.61%、56.95%、43.66%,3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 24、36、48 h的存活率低于单用衣霉素、顺铂组,分别为67.97%、47.76%、34.68%和56.89%、37.05%、29.30%。0.3μmol/L衣霉素可增强0.6μmol/L顺铂抑制人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的集落克隆形成的作用。3μmol/L衣霉素诱导CNE-1、CNE-2细胞48 h的凋亡率分别为8.89%、8.67%。3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂联合刺激人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 48 h的凋亡率分别为37.02%、32.25%,分别高于顺铂本身诱导的凋亡率7.25%、6.36%。促进凋亡蛋白Bax的表达联合用药组高于单独用药组,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达联合用药组低于单独用药组。衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组caspase-3的活性。结论衣霉素增强顺铂对人鼻咽癌细胞的增殖抑制作用,衣霉素增强顺铂诱导人鼻咽癌细胞的凋亡作用,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加caspase-3的活性。     

毛蕊花糖苷通过抑制AKT/mTOR通路减轻高糖诱导的HK2细胞凋亡

目的 探讨毛蕊花糖苷(acteosides, Act)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK2)凋亡的影响及其作用机制。方法 采用CCK-8法检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和不同葡萄糖浓度组(33,40,50,60 mmol/L)HK2细胞活性，筛选最佳高糖干预浓度；检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(mannitol, Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、不同浓度Act组(50 mmol/L葡萄糖+25,50,75,100,150,200μmol/L Act)和卡托普利(captopril, Cap)组(50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Cap)HK2细胞活性，筛选最佳Act干预浓度。HK2细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、Act组(50mmol/L 50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Act)、卡托普利组(50 mmol/L...     

内质网应激预处理对大鼠急性缺血性肾损伤的保护作用

目的 研究内质网应激预处理对大鼠急性缺血性肾损伤的保护作用. 方法 24只雄性SD大鼠均分为对照组、衣霉素(tunicamycin,TM)处理组、缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)组,衣霉素+缺血再灌注(TM+I/R)组.采用自动生化分析仪检测大鼠血肌酐、尿素氮水平, PAS染色检测肾小管损伤情况,免疫组化和Western blot检测肾组织内质网应激标志物GRP78蛋白表达. 结果 ①与对照组(0.2±0.03)比较,I/R组肾组织GRP78表达(2.4±0.17)增加(P<0.05),与对照组血肌酐、尿素氮[(47.42±6.02)μmol/L、(4.75±1.77)mmol/L]比较,I/R组血肌酐[(186.83±20.21)μmol/L]、尿素氮[(21.73±2.33)mmol/L]水平升高(P<0.05),肾小管损伤评分升高. ②TM组大鼠肾组织GRP78表达升高,但未见明显肾小管损伤,与对照组比较,血肌肝、尿素氮水平无明显变化. ③与I/R组比较,TM+I/R组大鼠GRP78表达(3.2±0.24)升高;肾小管损伤评分降低(P<0.05),血肌酐[(98.72±14.55) μmol/L]、尿素氮[(13.22±2.45)mmol/L]水平降低(P<0.05). 结论 内质网应激预处理对急性缺血性肾损伤有保护作用,其机制可能为通过激活适宜的内质网应激,上调肾组织GRP78表达,从而抑制I/R导致的过度内质网应激,提高肾组织对缺血的耐受性,减轻细胞和组织损伤,实现其对大鼠急性缺血性肾损伤的保护作用.     

P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为4组:对照组、P53抑制剂组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L,P53抑制剂浓度为50μmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为25mmol/L)和高糖+P53抑制剂组(P53抑制剂浓度为50μmol/L).噻唑盐比色法(MTT法)检测心肌细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞P53、BAX和Caspase-3进行半定量分析.结果 与对照组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与P53抑制剂组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多;高糖+P53抑制剂组心肌细胞活力也有所降低,凋亡率升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与高糖组相比,高糖+P53抑制剂组的心肌细胞活力增高,凋亡率明显降低,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达减少.结论 高糖可能通过介导P53转位到线粒体激活凋亡通路,引起心肌细胞凋亡.     

高糖抑制PI3K/AKT通路诱导人冠状动脉内皮细胞凋亡的研究

目的探讨高糖对人冠状动脉内皮细胞凋亡及微颗粒释放的影响及机制。方法根据细胞培养基中葡萄糖浓度不同分为3组：正常对照组（5．5mmol/L）,中糖组（17．6mmo/L）,高糖组（33．3mmol/L）,另设甘露醇对照组（20．0mmol/L）。通过Hoechst 33258荧光染色观察凋亡形态学变化,应用流式细胞术检测内皮微颗粒细胞凋亡率及微颗粒,ELISA法检测人冠状动脉内皮细胞的凋亡相关蛋白Bad、Bax的表达以及PBK、p-Akt蛋白的表达。结果随着葡萄糖浓度增加,人冠状动脉内皮细胞微颗粒的释放及细胞凋亡率逐渐增加,高糖组最高（P〈0．01）;人冠状动脉内皮细胞分泌Bad、Bax逐渐增多,高糖组最高（P〈0．01）;人冠状动脉内皮细胞分泌PBK、p-Akt逐渐减少,高糖组减少最明显（P〈0．01）。与甘露醇对照组比较,正常对照组微颗粒的释放,细胞凋亡率,分泌Bad、Bax、P13K、p-Akt差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高糖可以促进人冠状动脉内皮细胞凋亡及微颗粒的释放．其机制可能同PDK／AKT途径相关。     

胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞凋亡及小窝蛋白-1表达的影响

目的:探讨不同浓度的胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡及小窝蛋白(caveolin,Cav)-1表达的影响?方法:体外培养HUVEC,分为A组(对照组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L)?B组(高糖组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L)?C组(高糖+低浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/+胰岛素浓度20 mU/L)?D组(高糖+高浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L+胰岛素浓度1 000 mU/L)?采用流式细胞仪检测细胞凋亡比例及细胞周期,免疫组化检测HUVEC的Cav-1表达?结果:在高糖条件下,HUVEC凋亡比例显著升高,停滞于G0/G1期细胞增加,Cav-1表达减少;低浓度胰岛素使细胞凋亡比例减少,Cav-1表达增加;加入高浓度胰岛素不能改变细胞凋亡比例及细胞周期,Cav-1表达亦无明显改变?结论:低浓度胰岛素可抑制高糖导致的内皮细胞凋亡,而高浓度胰岛素无此作用,其机制可能与Cav-1表达有关?