Hh信号通路抑制剂Cyclopamine对Hela细胞增殖、侵袭迁移的影响

目的:研究Hh信号通路抑制剂Cyclopamine作用Hela细胞后Gli1、FoxM1、上皮间质转化(EMT)过程相关标记物表达的改变及对其增殖、侵袭迁移能力的影响,探究Gli1、FoxM1、EMT过程的可能作用关系,以期为宫颈癌的分子靶向治疗提供多个靶点。方法:采用实时定量RT-PCR、Western Blot技术检测Hela、Siha细胞系Hh信号通路中Shh、Ptch1、Smo的表达情况,选择Hh信号通路表达较高的Hela细胞系作为后续实验细胞,利用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测不同浓度Cyclopamine作用Hela细胞后其增殖能力的改变;采用Transwell小室试验检测Hela细胞侵袭、迁移能力的改变,并采用实时定量RT-PCR、Western Blot技术检测Gli1、FoxM1、EMT过程标记物的表达情况。结果:(1)Hela细胞中Hh信号通路成分(Shh、Ptch1、Smo)在mRNA水平显著高于Siha细胞(P<0.01),且相应蛋白的表达强度也高于Siha细胞;(2)Cyclopamine对Hela细胞增殖的抑制作用具有时间、剂量依赖性;(3)Cyclopamine作用Hela细胞48h后,细胞侵袭试验显示,实验组侵袭细胞数较对照组明显降低(P<0.01)。细胞迁移试验显示,实验组细胞迁移细胞数较对照组明显降低(P<0.01);(4)Cyclopamine作用Hela细胞48h后,实验组Gli1、FoxM1、Vimentin在mRNA水平的表达显著低于对照组(P<0.05),且相应蛋白的表达强度也低于对照组;E-cadherin在实验组中mRNA层面的表达显著高于对照组(P<0.05),且相应蛋白的表达强度也高于对照组。结论:抑制Hh信号通路可显著降低Hela细胞系增殖、侵袭迁移能力,FoxM1很可能是Hh信号通路末端转录因子Gli1的下游靶基因,且其对宫颈癌细胞系增殖、侵袭迁移的作用很可能是通过EMT实现的。     

Hsp90特异性抑制剂对宫颈癌细胞存活机制的探讨

目的:研究Hsp90的特异性抑制剂格尔德霉素(GA)在宫颈癌Hela细胞存活中的作用,并对其机制进行探讨。方法:培养人宫颈癌细胞株Hela,MTT法检测GA作用后细胞抑制率,RT-PCR方法检测GA作用后Bcl-2 mRNA的表达。结果:MTT法显示GA对Hela细胞有生长抑制作用,用药浓度越高,抑制率越高。不同浓度的GA处理宫颈癌Hela细胞后,Bcl-2 mRNA呈剂量依赖性降低,10μmol/L的GA抑制作用最强。10μmol/L的GA处理Hela细胞不同时间点后,Bcl-2 mRNA的表达呈时间依赖性降低。结论:在宫颈癌Hela细胞应用特异性Hsp90抑制剂GA,能够抑制宫颈癌细胞的生长,并通过抑制Bcl-2来促进其凋亡,Hsp90可以成为宫颈癌治疗中的一个新靶点     

Apoptin对宫颈癌Hela细胞放疗增敏作用实验研究

目的探讨Apoptin增加宫颈癌Hela细胞的敏感性及作用机制。方法应用脂质体转染方法将表达Apoptin的重组载体pEGFP—Apoptin转染入人宫颈癌Hela细胞。其中转染pEGFP-Apopti为实验组,转染pEGFP—C2组为阳性对照组,未转染组为阴性对照组。上述各组经射线干预后利用平板克隆形成实验、流式细胞术、MTT及蛋白印迹western—blot等方法分别检测细胞凋亡、周期及相关蛋白表达水平。结果pEGFP—Apoptin在人宫颈癌Hela细胞中稳定表达。Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞对放射线的敏感性,Apoptin可使p21、p27的表达量上调,使Rad50及Ku80的表达量下调,而对XLF的表达量则无影响。结论Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞的放疗敏感性,其机制可能与细胞周期阻滞及同源与非同源重组修复相关蛋白的表达水平改变有关。     

内源性NO在人宫颈癌Hela细胞株合成对顺铂敏感性的影响

目的通过细胞因子γ-干扰素（INF-γ）诱导内源性一氧化氮（Nitric Oxide,NO）的产生,探讨其对人宫颈癌Hela细胞株顺铂（DDP）敏感性的影响。方法用NO测试盒检测一定浓度的INF-γ处理人宫颈癌Hela细胞在不同时间NO的产生量及一定作用时间下不同浓度的INF-γ处理Hela细胞NO的产生量;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测经一定浓度及一定时间INF-γ处理后的人宫颈癌Hela细胞在不同浓度顺铂作用后的生存率;分别加入一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase,NOS）的抑制剂NG-甲基-L-精氨酸（L-NMMA）及NO的合成原料L-精氨酸（L-arginine,L-Arg）再次以MTT法检测Hela细胞生存率的变化。结果体外培养的Hela细胞在经INF-γ作用后第8小时NO生成量达高峰,随后呈下降趋势,而不加INF-γ的空白对照组,Hela细胞NO的生成量无明显变化（P〈0.05）;Hela细胞NO的生成量与INF-γ的浓度之间有一定的依赖性。采取MTT法检测：经1nMINF-γ作用8 h的实验组Hela细胞与不加INF-γ的对照组相比,低浓度DDP作用时前者Hela细胞生存率显著下降（P〈0.05）,但随DDP浓度升高后两组的生存率无显著差异;经1nMINF-γ处理8 h的Hela细胞加入L-NMMA组Hela细胞在DDP作用后的生存率显著提高（P〈0.05）,而加入L-Arg组结果则与之相反。结论人宫颈癌Hela细胞在一定剂量、一定时间INF-γ的作用下,能够诱导iNOS产生内源性NO,且NO产生的量与INF-γ存在时间、剂量依赖关系;经INF-γ诱导产生的内源性NO可提高人宫颈癌Hela细胞株对DDP的敏感性。     

β-catenin蛋白在紫杉醇治疗宫颈癌中表达的研究

目的:本研究通过检测β-catenin蛋白在紫杉醇治疗宫颈癌过程中的表达,探讨wnt/β-catenin信号通路在紫杉醇治疗宫颈癌中的作用机制。方法:MTT比色法检测不同浓度紫杉醇对人宫颈癌Caski细胞株增殖的影响,计算抑制率及IC50,对照组未予紫杉醇处理,而实验组则加入紫杉醇(IC50终浓度),采用细胞免疫组织化学法检测两组Caski细胞β-catenin蛋白表达。结果:采用不同紫杉醇溶液浓度分别作用Caski细胞24h、48h及72h后,通过MTT比色法检测结果显示对细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增强,IC50值由IC50专用计算软件求得IC50=(6.04±1.70)nmol/L。实验组和对照组β-catenin蛋白于胞浆胞核中均有表达,实验组β-catenin蛋白表达阳性率为39.3%,对照组β-catenin蛋白表达阳性率为71.7%,实验组中阳性率明显减少(P<0.05)。紫杉醇对Caski细胞增殖的影响呈剂量效应和时间效应关系。实验组β-catenin蛋白表达阳性率为39.3%,对照组β-catenin蛋白表达阳性率为71.7%,实验组中阳性率明显减少(P<0.05)。结论:单纯应用一定浓度的紫杉醇均能抑制Caski细胞的增殖。紫杉醇能够抑制宫颈癌Caski细胞内β-catenin蛋白表达,呈浓度依赖性,从而阻断wnt/β-catenin信号传导通路,同时影响癌基因表达,进而诱导宫颈癌Caski细胞的凋亡。     

蛇床子素对宫颈癌Hela细胞凋亡的作用研究

目的 探讨蛇床子素对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的作用及可能的机制.方法 经不同浓度蛇床子素处理体外培养的宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,半定量RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达.结果 与对照组比较,不同浓度的蛇床子素均可明显抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、诱导细胞凋亡,增高细胞内ROS水平,降低Bcl-2/Bax的表达比例,且具有一定的剂量依赖性.结论 蛇床子素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并促进细胞凋亡,与升高细胞ROS水平、促进激活促凋亡因子Bax的表达和抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达有关.     

鹰嘴豆芽素A对Hela细胞增殖、迁移及Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的:探讨鹰嘴豆芽素A对宫颈癌细胞增殖及迁移能力的调控作用及其可能的分子机制。方法:体外培养Hela细胞,以不同质量浓度的鹰嘴豆芽素A处理宫颈癌Hela细胞,CCK-8法检测鹰嘴豆芽素A对宫颈癌细胞的增殖影响;划痕实验检测对细胞迁移的影响;RT-PCR法检测鹰嘴豆芽素A对Bcl-2/Bax mRNA水平表达的变化。结果:鹰嘴豆芽素A能够抑制Hela细胞的增殖和迁移,呈现剂量和时间依赖性(P<0.05);质量浓度为10、20、40、80、160μmol/L鹰嘴豆芽素A处理Hela细胞24 h、48 h后,抑制Hela细胞增殖和迁移速率明显上升,并且高于对照组(P<0.05);促凋亡蛋白Bax表达水平升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低,呈剂量依赖性。结论:鹰嘴豆芽素A能够抑制宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与下调Bcl-2,上调Bax有关。     

NS398对宫颈癌Hela细胞bcl-2表达的影响

目的 探讨NS398对宫颈癌Hela细胞生长及bcl-2基因和蛋白表达的影响.方法 用不同浓度的NS398(0、25、50、75和100μmol/L)处理宫颈癌Hela细胞不同时间,采用MTT比色法分析细胞生长抑制卒.用不同浓度NS398处理Hela细胞24h,RT-PCR检测COX-2和bcl-2 mRNA表达的变化,Western blot检测COX-2和bcl-2蛋白表达的变化.结果 随着NS398浓度及处理时间的增加.宫颈癌Hela细胞生长抑制率升高;随着NS398剂量的增加,COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平逐渐减少.结论 NS398可呈剂量和时间依赖性抑制Hela细胞的生长,呈浓度依赖性减少COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达.NS398可能通过抑制COX-2和bcl-2的表达,抑制宫颈癌Hela细胞的生长.     

氧化苦参碱对HPV16感染宫颈癌Siha细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨氧化苦参碱对人类乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16感染宫颈癌Siha细胞增殖与凋亡的影响。方法:以人子宫颈鳞癌Siha细胞作为HPV16感染型宫颈癌体外实验模型,常规复苏、培养及传代;加入不同质量浓度氧化苦参碱(0.2 g·L~(-1)、0.4 g·L~(-1)、0.8 g·L~(-1)、1.6 g·L~(-1))作为实验组,加入等体积RPMI-1640作为溶剂对照组,作用24 h、48 h、72 h;噻唑蓝法检测细胞增殖活性改变,流式细胞仪分析细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、P53表达。结果:噻唑蓝结果显示:氧化苦参碱对HPV16感染宫颈癌Siha细胞增殖抑制作用呈质量浓度和时间依赖性(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示:不同质量浓度氧化苦参碱作用48 h后,细胞凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);氧化苦参碱作用48 h后,与对照组比较,实验组Siha细胞G0/G1期比率上升(P0.05),S期和G2/M期比率下降(P0.05),细胞生长周期停滞于G1期。蛋白免疫印迹检测结果显示:不同质量浓度氧化苦参碱作用48 h后,实验组凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达下调,Bax、P53蛋白表达上调,且其上调(下调)呈质量浓度依赖性。结论:氧化苦参碱通过抑制Siha细胞增殖和诱导Siha细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。     

红景天苷对宫颈癌Siha细胞增殖及IM P3表达的影响

目的：检测红景天苷对宫颈癌Siha细胞中胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA 结合蛋白3（IM P3）表达情况的影响及其意义。方法采用CCK‐8法检测不同浓度红景天苷作用Siha细胞24、48、72 h的细胞增殖抑制作用,采用Western blot和RT‐PCR检测宫颈癌Siha细胞中IM P3的蛋白和mRNA的表达水平。结果红景天苷对宫颈癌Siha细胞的增殖抑制率具有时间和浓度双重依赖性（P＜0．05）。IMP3在红景天苷组宫颈癌Siha细胞中的蛋白和mRNA表达均低于对照组（P＜0．05）。结论红景天苷可抑制宫颈癌Siha细胞增殖,同时降低Siha细胞IM P3的表达。     

三氧化二砷对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响

目的 研究1.0、2.0和3.0 μmol/L的三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响,并初步探讨其机制.方法 应用1.0、2.0和3.0 μmol/L As2O3作用于人宫颈癌Hela细胞系,采用MTT比色法检测细胞生长情况;运用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用免疫组化SABC法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 As2O3能抑制宫颈癌Hela细胞的体外生长,诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性(P＜0.05).As2O3能引起细胞内Bcl-2蛋白表达下调和Bax蛋白表达上调(P＜0.05).结论 As2O3对宫颈癌Hela细胞体外生长具有明显抑制作用,并诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,可能与其引起细胞内Bcl-2蛋白表达下调和Bax蛋白表达上调有关.     

姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的作用的研究以及p53表达的影响

目的:主要探讨姜黄素对人类宫颈癌Hela细胞中增殖作用的影响,以及细胞p53蛋白表达的影响.方法:本文通过不同浓度姜黄素干预人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测药物对Hela细胞的增殖抑制率;RT-PCR和Western blot检测细胞凋亡相关蛋白p53表达.结果:MTT发现姜黄素对人宫颈癌Hela细胞有一定的抑制作用,并呈时间-剂量依赖性;RT-PCR结果显示p53mRNA的表达增加;western boltting显示p53蛋白的表达增加.结论:姜黄素可一直Hela细胞增殖,其机制可能是通过增加p53基因的表达而实现.     

姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞抑制及凋亡的影响

目的:探讨姜黄素(curcumin)对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法:选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养,以5～50μmol/L的姜黄素分别处理Hela细胞24～72h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测凋亡,透射电镜进行形态学观察.SABC免疫组化法检测细胞内Bcl-2、Bcl-XL、Caspase-3蛋白表达水平.结果:curcumin对Hela细胞增殖有抑制作用.并呈剂量依赖性.DNA直方图上可见亚"G1"峰;透射电镜观察见部分细胞发生凋亡形态学改变.Bcl-2、Bcl-XL表达均下调,Caspase-3表达增强.结论:姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有明显抑制作用.上调Cas-pase-3,下调Bcl-2、Bcl-XL蛋白的表达,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

Hes-6在宫颈癌中的表达和功能鉴定

目的:研究人宫颈癌组织中Hes-6(Hairy and enhancer of split 6)的mRNA变化以及Hes-6对宫颈癌Hela细胞的生长以及侵袭性的影响。方法:收集临床获得的宫颈癌组织标本,研究正常组织和宫颈癌组织中Hes-6mRNA表达差异;构建含有Hes-6基因片断的真核表达质粒,转染Hela细胞后,检测Hes-6的mRNA和蛋白表达;通过MTT实验检测过表达Hes-6后,Hela细胞的生长;并通过小室迁移实验检测质粒转染后Hela细胞的迁移功能的改变。结果:本研究发现,与正常组织相比较,Hes-6mRNA高表达于宫颈癌组织。将pcDNA3.1-Hes-6转染Hela细胞后,MTT实验结果显示,Hes-6过表达组Hela细胞570nm吸光值显著高于对照组细胞(转染组0.923±0.154,对照组0.695±0.117;小室迁移实验结果显示,Hes-6过表达组Hela细胞迁移能力显著高于对照组细胞(转染组153.5±21.2,对照组98.8±17.6。结论:Hes-6mRNA在宫颈癌组织中表达上调,且该蛋白不仅可促进Hela细胞的生长,还可以增加其侵袭性。     

紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞生长及其claudin-7表达的影响

目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对人宫颈癌HeLa细胞增殖及claudin-7蛋白表达水平的影响.方法 体外培养人宫颈癌 HeLa细胞,采用 MTT法观察不同浓度紫杉醇脂质体（0.01、0.1、1、10、100 μmol/L）对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用Western blot法检测HeLa细胞claudin-7蛋白表达水平在不同浓度紫杉醇脂质体作用下的变化.结果 5个浓度的紫杉醇脂质体均能显著抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性;Western blot显示HeLa细胞经不同浓度紫杉醇脂质体处理48 h后,随着紫杉醇脂质体浓度的增高,claudin-7蛋白表达逐渐减弱.结论 紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用,HeLa细胞claudin-7蛋白的表达在紫杉醇脂质体影响下是下调的.     

小檗碱对宫颈癌Hela细胞Caspase-3基因表达的影响

目的:研究小檗碱(berberine)对人宫颈癌Hela细胞体外增殖、凋亡及凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法:MTT法测定不同浓度(0～40μmol/L)berberine干预Hela细胞后的凋亡率;RT-PCR检测Caspase-3mR-NA表达水平。结果:berberine呈剂量-时间依赖方式抑制Hela细胞的生长(P<0.01);且随着berberine浓度增高,细胞凋亡增加,Caspase-3mRNA表达上调(P<0.001)。结论:berberine抑制人宫颈癌Hela细胞生长、诱导凋亡的机制可能与上调Caspase-3mRNA表达有关。     

氧化苦参碱通过上调miR-485-5p的表达抑制宫颈癌细胞的增殖研究

目的探讨宫颈癌组织中mi R-485-5p的表达情况,从miRNAs的角度研究氧化苦参碱对宫颈癌细胞增殖的影响及其作用。方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于宫颈鳞癌细胞株Siha(HPV16+),应用MTT检测细胞的增殖情况,筛选最佳药物浓度;应用PCR检测不同细胞系中mi R-485-5p的表达量;检测氧化苦参碱处理Siha(HPV16+)后miR-485-5p的表达;应用MTT法检测细胞的生存率。结果筛选出最佳药物浓度为100μmol/L;Siha(HPV16+)细胞株中miR-485-5p的表达量明显低于正常宫颈细胞(P<0.05);氧化苦参碱刺激细胞后miR-485-5p表达上调,氧化苦参碱或miR-485-5p可抑制宫颈癌细胞的Cyclin D1蛋白表达,miR-485-5p可使Cyclin D1蛋白的表达水平上调。结论氧化苦参碱通过上调miR-485-5p的表达抑制宫颈癌细胞的增殖。     

白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞生长抑制及诱导凋亡的作用机制。方法:以不同浓度白藜芦醇处理Hela细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、Caspase-9的表达。结果:经白藜芦醇处理的Hela细胞,增殖作用呈明显时效和量效关系,细胞凋亡率明显增高并呈浓度依赖性;Bcl-2、Bax、Bad表达下降,Caspase-9表达增加。结论:白藜芦醇对Hela细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制与下调Bcl-2、Bax、Bad蛋白、上调Caspase-9蛋白表达有关。     

20(s)-原人参二醇对体外培养Siha细胞caspase-3表达激活的影响

目的：观察20(s)-原人参二醇（PPD）对体外培养人宫颈癌Siha细胞中caspase-9和caspase-3转录表达的影响,以及caspase-3的活化形式cleaved caspase-3含量的变化,阐明其诱导Siha细胞凋亡的机制。方法：体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组（乙醇）和实验组（20　 μgL^-1 PPD）,分别用乙醇和PPD处理体外培养的宫颈癌Siha细胞,48　h后流式细胞仪检测细胞的凋亡峰,半定量RT-PCR、Western blotting和免疫细胞化学染色方法检测PPD处理后Siha细胞中caspase-9和caspase-3基因的转录与表达水平。结果：与阴性对照组比较,20　 μg?L-1 PPD处理48 h后,Siha细胞凋亡率增加(P<0.05),Siha细胞中caspase-9与caspase-3转录水平升高(P<0.01),表达上调(P<0.01),caspase-3的活化形式cleaved caspase-3含量增加(P<0.01)。细胞免疫化学检测可见实验组细胞出现棕色颗粒。 结论：PPD可促进人宫颈癌Siha细胞凋亡,其机制与激活caspase家族级联反应有关。     

尾叶香茶菜二萜类化合物B对人宫颈癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的:观察尾叶香茶菜二萜类化合物B(DB)对人宫颈癌细胞株Hela细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法:处于对数生长期的Hela细胞分为正常对照组,0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg.L-1DB实验组,MTT法观察不同剂量DB作用24和48h后Hela细胞增殖抑制率,相差显微镜观察DB作用后Hela细胞形态的改变,RT-PCR和Western blotting分别观察DB作用后Hela细胞P53、P21、CDK2mRNA和蛋白表达水平。结果:MTT检测,24h时2.0、4.0、8.0DB组Hela细胞增殖抑制率分别为18.18%、28.89%和32.84%,48h时2.0、4.0、8.0DB组Hela细胞增殖抑制率分别为26.64%、47.03%和51.90%,呈时间-剂量依赖性(P<0.05或P<0.01);形态学观察,DB作用后Hela细胞变圆、体积缩小,有部分细胞漂浮;2.0、4.0和8.0mg.L-1DB分别作用Hela细胞24和48h后,P53和P21mRNA和蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),CDK2mRNA和蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:DB可抑制Hela细胞生长,其机制可能与上调细胞周期相关基因p53、p21的表达,下调CDK2表达,从而影响细胞从G1期进入S期有关。