针刀干预对膝骨性关节炎模型兔股直肌Akt/mTOR通路的调控作用

目的:观察针刀治疗后Akt/mTOR及4E-BP1、p70s6k的基因表达变化,分析针刀修复膝骨性关节炎(KOA)模型兔股直肌细胞的机制。方法:SPF级新西兰兔随机分为正常组、模型组、针刀组和电针组,每组9只。正常组不予处理,其余3组参照改良的Videman左后腿伸直位固定制动法造模。针刀组和电针组分别治疗4周后,通过实时荧光定量PCR法检测股直肌细胞中的Akt、mTOR、4E-BP1、p70s6k基因表达。结果:造模后模型组Akt、mTOR、4E-BP1、p70s6k基因表达较正常组均明显下降(P 0. 05或P 0. 01);电针、针刀干预后,电针组mTOR、p70s6k基因表达较模型组明显上升(P 0. 01),但Akt基因表达无显著差异(P 0. 05);针刀组Akt、mTOR、p70s6k基因表达较模型组均明显上升(P 0. 05或P 0. 01)。正常组、模型组、针刀组和电针组4EBP1基因表达均无显著差异(P0. 05)。结论:针刀干预可通过上调股直肌Akt、mTOR和p70s6k的基因表达对兔KOA发挥治疗作用。     

针刀干预对膝骨关节炎兔股二头肌细胞凋亡的影响

目的:探讨针刀松解股二头肌对膝骨关节炎(KOA)兔肌细胞凋亡的影响。方法:6月龄新西兰兔48只随机分为正常组(N)、模型组(M)、电针组(EA)和针刀组(A),KOA模型采用改良后维德曼左后肢伸直位固定制动法制动8周,于造模成功1周后分别对A组、EA组进行针刀和电针干预3周。干预结束1周后取股二头肌进行HE染色观察、TUNEL检测阳性凋亡细胞核数和Western blot检测Bax、 Caspase-3蛋白表达水平。结果:A组细胞核和间质组织的水肿、炎性肌细胞与M组相比显著改善,改善程度优于EA组。M组兔股二头肌阳性细胞核数较N组明显升高(P0.01);EA组较N组明显升高(P0.01);EA组较M组有所降低(P0.05);A组较N组明显升高(P0.01);A组较M组明显降低(P0.01);A组较EA组明显降低(P0.05)。M组兔股二头肌Caspase-3蛋白表达水平较N组明显升高(P0.01);EA组与N组比较差异无统计学意义(P0.05);A组与N组比较差异无统计学意义(P0.05);EA组较M组有所降低(P0.05);A组较M组明显降低(P0.01);A组与EA组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:针刀干预对KOA股二头肌细胞的凋亡有良好的调节作用,为针刀“调筋治骨”提供了新的理论依据。     

针刀干预对膝骨关节炎模型兔股直肌p16、p21表达的影响

目的:观察针刀治疗后膝骨关节炎(KOA)兔股直肌内p16、p21蛋白表达的变化，探讨针刀治疗对KOA兔股直肌细胞衰老的抑制作用。方法:清洁级新西兰雄兔24只随机分为针刀组、电针组、正常组和模型组，每组6只。采用改良Videman左后肢膝关节制动制备KOA兔模型。针刀组和电针组各干预3周后，用改良Lequesne MG指数评分和膝关节被动活动度(PROM)进行行为学评价，HE染色法观察光镜下股直肌肌肉及肌腱病理学变化并用Western blot法检测股直肌中p21、p16的蛋白表达。结果:与正常组相比，模型组兔Lequesne MG评分显著升高，PROM显著降低(P <0.01);光镜下股直肌肌束排列紊乱，有炎细胞浸润，肌纤维横截面积显著减少(P <0.01)，肌细胞数量显著增多(P <0.01); p16和p21的蛋白表达上调(P <0.01,P <0.05)。与模型组相比，针刀组与电针组Lequesne MG评分显著降低，PROM显著升高(P <0.01);光镜下见肌细胞再生，炎细胞浸润减轻，肌纤维横截面积显著增多，肌细胞数量显著减少(P <0.01)。p16和p21蛋白均呈不同程度降低(P <0.01,P <0.05)。结论:针刀干预可改善膝关节周围骨骼肌力学性能，促进KOA的恢复，其机制可能与下调p16、p21表达和抑制股直肌细胞衰老以修复萎缩的股直肌有关。     

针刀对膝骨关节炎兔韧带细胞中TGF-β1/Smads信号通路的影响

摘要：目的:探讨针刀松解股二头肌对膝骨关节炎（KOA）兔肌细胞凋亡的影响。方法:6月龄新西兰兔48只随机分为正常组（N）、模型组（M）、电针组（EA）和针刀组（A）,KOA模型采用改良后维德曼左后肢伸直位固定制动法制动8周,于造模成功1周后分别对A组、EA组进行针刀和电针干预3周。干预结束1周后取股二头肌进行HE染色观察、TUNEL检测阳性凋亡细胞核数和Western blot检测Bax、 Caspase-3蛋白表达水平。结果:A组细胞核和间质组织的水肿、炎性肌细胞与M组相比显著改善,改善程度优于EA组。M组兔股二头肌阳性细胞核数较N组明显升高（P<0.01）;EA组较N组明显升高（P<0.01）;EA组较M组有所降低（P<0.05）;A组较N组明显升高（P<0.01）;A组较M组明显降低（P<0.01）;A组较EA组明显降低（P<0.05）。M组兔股二头肌Caspase-3蛋白表达水平较N组明显升高（P<0.01）;EA组与N组比较差异无统计学意义（P>0.05）;A组与N组比较差异无统计学意义（P>0.05）;EA组较M组有所降低（P<0.05）;A组较M组明显降低（P<0.01）;A组与EA组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:针刀干预对KOA股二头肌细胞的凋亡有良好的调节作用,为针刀“调筋治骨”提供了新的理论依据。     

膝关节炎模型体重与病理形态相关性及针刀干预的实验研究

目的:观察膝骨关节炎(KOA)兔模型以及针刀治疗前后体重与软骨病理形态的改变及相关性,预期初步揭示针刀治疗KOA的相关机制。方法:40只6月龄雄性新西兰兔,按随机数字表法分成空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只。以改良后Videman左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型。针刀组针刺同侧股内侧肌肌腱止点、股外侧肌肌腱止点进行松解,每周2次,连续3周;电针组针刺同侧"血海""梁丘""内膝眼"和"外膝眼",每次20 min,每周3次,连续3周。分别于造模前1天、造模后1天及治疗结束后1天监测体重,随即取材进行HE染色光镜观察关节软骨病理形态学改变。结果:解剖及HE染色显示:模型组关节软骨明显失去原有光泽,甚至缺损,关节边缘纤维性粘连,关节液量明显增多;电针及针刀组均明显改善关节炎性症状;且针刀组较电针组改善更明显;其中与空白组比较,模型组、针刀组、电针组病理改变的Mankin评分显著升高(P 0. 01);与模型组对比,针刀组、电针组的Mankin评分均显著降低(P 0. 01);与电针组对比,针刀组Mankin评分显著降低(P 0. 05)。体重比较:与造模前比较,各组造模后体重均显著升高(P 0. 01);而各组造模期体重增长率组间比较未见显著差异(P 0. 05);与干预前比较,各组体重干预后均显著升高(P 0. 01);其中,与空白组比较,模型组、电针组及针刀组的体重增长率显著降低(P 0. 05);与模型组比较,针刀组的体重增长率显著降低(P 0. 05);造模期与干预期比较:空白组、模型组期间均未见显著统计学差异(P 0. 05),电针组、针刀组干预期增长率均比造模期显著降低(P 0. 05或P 0. 01)。体重比较:膝关节炎模型体重与病理形态改变存在相关趋势(P 0. 05)。结论:针刀和电针均可改善KOA兔模型膝关节早期炎性病理改变,该效应可能与其对体重增长的控制有关。     

针刀、电针和圆利针对膝骨关节炎模型兔股直肌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响

目的:从细胞凋亡角度探讨不同干预方法对制动致关节损伤的治疗机制。方法:6月龄新西兰兔随机分为正常组、模型组、针刀组、电针组和圆利针组,每组9只,用改良的Videman左后肢伸直位固定制动法建立兔膝关节损伤模型。电针组电针左侧"阳陵泉"-"阴陵泉""内膝眼"-"外膝眼",每次20min,隔日1次,每周3次,共3周;针刀组从兔左侧内、外侧副韧带及髌韧带的中点前缘进针,刀口线与韧带方向平行,分别松解5次,每周1次,共3次;圆利针进针点与针刀组一致,分别松解5次,每周1次,共3次。分别于造模后4、8和12周各时间窗评定各组兔双侧膝关节被动活动范围。采用Western blot法检测各组兔患肢股直肌B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:造模后4周出现稳定的实验性膝骨关节炎兔模型。造模后4、8、12周时,与正常组比较,模型组兔患侧膝关节被动活动度明显降低(P0.01);治疗结束后,与模型组相比,针刀组、电针组和圆利针组兔患侧膝关节被动活动度显著提高(P0.01)。各组患肢股直肌Bcl-2蛋白表达的变化差异无统计学意义(P0.05)。模型组患肢股直肌Bax、Caspase-3蛋白表达较正常组明显升高(P0.05),Bcl-2/Bax比值明显降低(P0.05);针刀组、圆利针组Bax、Caspase-3蛋白表达较模型组明显降低(P0.05),Bcl-2/Bax比值明显升高(P0.05);电针组上述各指标的变化与模型组相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:针刀、圆利针和电针干预膝骨关节炎兔均有治疗效果,针刀和圆利针可通过下调Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2/Bax比值抑制膝骨关节炎兔股直肌细胞凋亡,从而发挥治疗作用,这与电针治疗关节损伤的机制存在差异。     

健脾消癌方对结肠癌细胞中Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨健脾消癌方含药血清对人结肠癌HCT116细胞蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。方法:以15%健脾消癌方含药血清处理结肠癌HCT116细胞,采用Transwell侵袭实验检测HCT116细胞迁移、侵袭作用,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞中Akt,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),mTOR,磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR),核糖体S6蛋白激酶(S6K1),磷酸化核糖体S6蛋白激酶(p-S6K1),真核细胞始动因子4E结合蛋白(4EBP1),磷酸化真核细胞始动因子4E结合蛋白(p-4EBP1)等蛋白的表达,正常血清组设立相同浓度正常血清组(15%),10%胎牛血清组(FBS)。结果:与正常血清组比较,健脾消癌方含药血清组迁移细胞数与侵袭细胞数均显著降低(P 0. 01);与正常血清组比较,Akt蛋白表达无明显下调,p-Akt蛋白表达显著下调(P 0. 01);与正常血清组比较,mTOR蛋白表达无明显下调,p-mTOR蛋白表达显著下调(P 0. 01);与正常血清组比较,S6K1蛋白表达无明显下调,p-S6K1蛋白表达显著下调(P 0. 01);与正常血清组比较,4EBP1蛋白表达无明显下调,p-4EBP1蛋白表达显著下调(P 0. 01)。结论:健脾消癌方抗结肠癌复发转移的机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路的激活有关。     

针刀干预对KOA兔关节软骨病理学及股四头肌收缩性能的影响

目的:通过观察针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔HE染色及Mankin评分、股四头肌收缩性能的影响,探讨针刀治疗KOA的作用机制。方法:28只清洁级新西兰雄兔,随机分成正常组、模型组、电针组和针刀组。采用改良Videman左后肢伸直位固定制动法复制KOA模型,针刀组、电针组分别采用针刀和电针疗法治疗4周。采用光镜、电生理的方法对软骨形态学情况、股四头肌收缩性能进行检测。结果:造模后,模型组兔膝关节软骨HE染色显示软骨结构紊乱、破坏,Mankin评分较正常组明显升高(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较正常均显著降低(P 0. 05或P 0. 01)。电针、针刀干预后,电针组兔膝关节软骨HE染色较模型组有所改善,Mankin评分较模型组显著降低(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较模型组无显著差异(P 0. 05);针刀组兔膝关节软骨HE染色较模型组改善明显,Mankin评分较模型组显著降低(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较模型组显著升高(P 0. 05或P 0. 01),且与电针组相比Mankin评分显著降低(P 0. 05),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较电针组显著升高(P 0. 05)。结论:针刀干预能改善关节软骨退变,促进关节软骨修复,并能提高股四头肌的收缩性能。提高股四头肌的收缩性能是针刀干预KOA的重要机制。     

六点式针刀松解术配合强膝通痹汤治疗大骨节病膝关节炎的临床研究

目的:探究六点式针刀松解术联合强膝通痹汤对大骨节病膝关节炎的作用和机理。方法:大骨节病膝关节炎患者220例随机分为针刀组和针刺组,各110例;针刀组采用六点式针刀松解术联合强膝通痹汤,针刺组采用针刺联合强膝通痹汤; 4周后观察疗效、检测指标。结果:针刀组总有效率明显高于针刺组(P 0. 05);治疗后两组WOMAC评分、ISOA积分均明显降低(P 0. 01),且针刀组明显低于针刺组(P 0. 05);经治疗后两组的血清TNF-α、IL-1β表达水平、血清NO含量均显著下降(P 0. 01)。结论:六点式针刀松解术联合强膝通痹汤,对于大骨节病所致的膝关节肿胀、疼痛、功能障碍等,能明显予以改善和缓解。其作用机理是对膝关节力学平衡予以调整和恢复,降低血清炎性细胞因子TNF-α、IL-1表达水平、NO含量等途径起作用的。     

电针对PTEN/mTOR信号通路在脊髓损伤中表达的影响

目的观察电针对脊髓损伤小鼠PTEN/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。方法 64只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、针刺组和电针组(疏密波2/100 Hz,强度0. 2 mA,15 min),每组16只,选择督脉大椎、命门穴进行治疗,1次/d,治疗28 d,免疫荧光,蛋白印迹法测定脊髓PTEN、pmTOR蛋白表达。结果与脊髓损伤组同期比较,电针组3、7、14 d小鼠脊髓中PTEN的表达降低(P 0. 05,P 0. 01,P 0. 01)。针刺组3、7、14 d小鼠脊髓中PTEN的表达降低(P 0. 05,P 0. 05,P 0. 05);电针组3 d、7 d、14 d、28 d小鼠脊髓中mTOR磷酸化水平增高(P 0. 01,P 0. 05,P0. 01,P 0. 01);针刺组3 d、7 d、28 d小鼠脊髓中mTOR磷酸化水平增高(P 0. 01,P 0. 05,P 0. 05)。结论督脉电针可促进脊髓损伤小鼠pmTOR水平,抑制PTEN蛋白的表达。     

代谢重编程对攻毒治法靶向治疗肺癌干细胞的影响

目的:观察攻毒治法代表药物纳米雄黄靶向肺癌干细胞缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIF)效应分子驱动代谢重编程的作用,探究肺癌干细胞、代谢重编程在肺癌转移过程中的效应机制,验证攻毒治法防治肺癌转移的有效性。方法:体外培养肺癌A549细胞,分选肺癌干细胞并鉴定。按空白组,顺铂(5 mg·L~(-1))组,纳米雄黄低、中、高剂量(100,200,400 mg·L~(-1))组分别干预,采用葡萄糖氧化酶法检测纳米雄黄对肺癌干细胞糖代谢的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot),酶联免疫吸附测定(ELISA)分别检测纳米雄黄对肺癌干细胞代谢重编程相关基因缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),C-myc,p53表达的影响,对相关蛋白HIF-1α,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响,对相关酶葡萄糖转运蛋白1(GLUT1),丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1),M型丙酮酸激酶(PKM),磷酸果糖激酶(PFK),丙酮酸脱氢酶(PDH),乳酸脱氢酶(LDH)表达的影响。结果:与空白组比较,纳米雄黄可降低肺癌干细胞葡萄糖消耗,随剂量增加葡萄糖消耗不断降低,呈时间剂量依懒性(P 0. 01);纳米雄黄可抑制肺癌干细胞代谢重编程关键因子HIF-1α mRNA表达(P 0. 05,P 0. 01),并可下调C-myc mRNA,上调p53 mRNA表达(P 0. 05,P 0. 01),抑制相关蛋白PI3K,Akt,mTOR的表达(P 0. 05,P 0. 01),抑制相关酶GLUT1,PDK1,PFK,PKM,PDH,LDH的表达(P 0. 05,P 0. 01),且纳米雄黄随剂量增加调控能力不断增强。结论:攻毒治法可通过靶向HIF效应分子驱动肺癌干细胞代谢重编程,进而抑制肺癌侵袭转移。     

肝豆汤对Wilson病模型高铜诱导的SH-SY5Y细胞自噬效应的影响及其作用机制

目的:研究肝豆汤对高铜诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞自噬效应的影响及其作用机制,为中医药防治脑型Wilson病(Wilson disease,WD)提供新的治疗靶点和研究思路。方法:噻唑蓝(MTT)比色法筛选硫酸铜(CuSO_4)造模浓度(0,100,200,400,800,1 600μmol·L-1)及时间; MTT比色法筛选含药血清浓度(5%,10%,15%,20%)及时间;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞LDH漏出率;流式细胞法检测细胞内活性氧(ROS)的含量;荧光染料JC-1检测细胞线粒体膜电位;流式细胞仪对自噬进行定量分析。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝激酶B1(LKB1),腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),自噬微管相关蛋白轻链3A/B(LC3A/B),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),unc-51样激酶1(ULK1),磷酸化ULK(p-ULK),磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白的表达。结果:MTT结果显示,CuSO_4对细胞的损伤呈现一定的量效和时效关系(P 0. 01),随着CuSO_4作用浓度及时间的增加,细胞存活率呈现下降趋势; 10%含肝豆汤兔血清可显著抑制CuSO_4诱导的细胞死亡(P 0. 01)。LDH释放实验显示,与正常组比较,CuSO_4作用细胞后LDH漏出率显著增加(P 0. 01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清明显降低CuSO_4损伤细胞的LDH漏出率(P 0. 05)。DCFH-DA荧光染色显示,与正常组比较,CuSO_4可显著增加细胞内ROS生成(P 0. 01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清可显著抑制CuSO_4诱导的细胞内ROS产生(P 0. 01)。JC-1染色结果显示,与正常组比较,CuSO_4诱导细胞线粒体膜电位Δψm显著降低(P 0. 01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清明显抑制CuSO_4诱导的线粒体膜电位降低Δψm(P 0. 05)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组细胞内LKB1,AMPK,LC3A/B,ULK1及p-AMPK蛋白的表达显著增加,mTOR及p-ULK蛋白的表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,含肝豆汤兔血清组LKB1,AMPK,LC3A/B,ULK1及p-AMPK蛋白表达显著降低,mTOR及p-ULK蛋白表达显著增加(P 0. 01)。结论:高铜可通过诱导细胞内线粒体氧化应激,上调自噬相关蛋白LKB1,p-AMPK,AMPK,LC3A/B及ULK1的表达,下调自噬相关蛋白mTOR及p-ULK的表达,导致细胞发生自噬性死亡,而肝豆汤可通过调控LKB1/AMPK信号通路,下调自噬相关蛋白LKB1,p-AMPK,LC3A/B,ULK及AMPK的表达,上调自噬相关蛋白及基因mTOR及p-ULK的表达,抑制自噬的发生,阻断高铜诱导的神经元损伤,从而发挥神经保护作用。     

从AMPK/mTOR通路探讨人参-三七-川芎提取物对糖尿病小鼠心脏老化的保护作用机制

目的:从AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的活化及心脏病理形态学变化、相关衰老蛋白的改变,探讨人参-三七-川芎提取物(GNC)对糖尿病小鼠心脏老化的保护作用机制。方法:C57BL/6雄性小鼠,SPF级,随机分为正常组和高糖组。高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)联合喂食高脂饲料,造模成功后再次随机分为模型组,GNC低剂量组(0. 819 g·kg~(-1)),GNC高剂量组(1. 638 g·kg~(-1))及二甲双胍组(150 mg·kg~(-1))。每天1次,灌胃给药,连续9周,监测血糖变化。4周龄雄性C57BL/6小鼠正常喂养1周,为青年组。观察小鼠一般情况,苏木素-伊红(HE)染色结合透射电镜(TEM)观察小鼠心脏病理形态学变化,冯库萨(Von Kossa)染色判断小鼠心脏微血管钙盐沉积程度,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心脏组织中AMPK/mTOR信号通路活化状态,以及衰老相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2),抑癌基因p53(p53),磷酸化抑癌基因p53(p-p53)表达。结果:与正常组比较,模型组血糖显著升高(P 0. 01);与模型组比较,各给药组血糖明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。HE,TEM,Von Kossa 3个病理形态学实验结果显示:与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞肥大,心肌纤维排列紊乱、灶性溶解坏死,线粒体肿胀、变性、嵴断裂、空泡变,心脏微血管结构紊乱、染色不均匀、中内膜有大量钙盐沉积;与模型组比较,各给药组小鼠病理形态学变化均有不同程度的改善。与正常组比较,模型组MMP-2,p53和p-p53蛋白表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01),p-肝激酶B1 (LKB1)/LKB1,p-AMPK/AMPK蛋白明显降低(P 0. 05,P 0. 01),p-mTOR/mTOR,p-核糖体蛋白S6激酶p70S6K/p70S6k蛋白显著升高(P 0. 01);与模型组比较,各给药组MMP-2,p53和p-p53蛋白表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01),p-LKB1/LKB1,p-AMPK/AMPK蛋白明显升高(P 0. 05,P 0. 01),p-mTOR/mTOR,p-p70S6k/p70S6k蛋白明显降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:STZ联合高脂饲料能够诱导小鼠心脏老化,GNC能够改善糖尿病小鼠心脏老化,其作用机制可能与调控AMPK/mTOR通路相关蛋白表达有关。     

电针介入时机对腰多裂肌损伤模型大鼠Foxo1、Myostatin、Myod蛋白表达的影响

目的:观察不同电针介入时机对腰多裂肌损伤大鼠多裂肌叉头蛋白(Foxo1)、肌肉生长抑制素(Myostatin)、成肌分化因子(Myod)蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、即刻电针组、24 h电针组、48 h电针组,每组8只。以多裂肌肌注0. 5%布比卡因复制腰多裂肌损伤模型。各电针组分别在造模后即刻、24 h、48 h开始电针双侧"委中""肾俞",连续干预7 d。以Western blot检测各组多裂肌Foxo1、Myostatin、Myod蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组Foxo1、Myod蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,即刻电针组、48 h电针组Foxo1、Myostatin蛋白表达水平降低(P 0. 01,P 0. 05),24 h电针组Foxo1、Myostatin蛋白表达水平显著降低(P 0. 01),Myod蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与24 h电针组比较,即刻电针组Myostatin蛋白表达水平升高(P 0. 05)、Myod蛋白表达水平显著降低(P 0. 01),48 h电针组Foxo1蛋白表达水平显著升高(P 0. 01)、Myod蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。结论:电针促进多裂肌修复的最佳介入时机可能为损伤后24 h。     

“通督启神”法两种电针对AD模型小鼠行为学及大脑皮层COX-2、TGF-β1表达的影响

目的:观察"通督启神"法两种电针干预对AD模型小鼠行为学及大脑皮层炎性因子表达的影响,阐释两种电针治疗AD的机理及疗效差异。方法:40只AD模型小鼠随机分为模型组(AD)、药物组(M)、脉冲电针组(EA)、音乐电针组(MEA),同背景C57BL/6小鼠为正常对照组(N),每组10只; EA组、MEA组束缚后针刺印堂、百会20 min,水沟点刺不留针,M组灌胃给药(盐酸多奈哌齐0. 92 mg/kg)后同等条件束缚,AD组和N组同等条件束缚; Morris水迷宫观察小鼠行为学变化,Western blot检测小鼠大脑皮层炎性因子表达情况。结果:EA组、MEA组的逃避潜伏期较AD组均下降(P 0. 01),目标象限游泳时间/总时间、穿越平台次数均增加(P 0. 05或P 0. 01); EA组、MEA组大脑皮层COX-2、TGF-β1的表达较AD组均下降(P 0. 01)。结论:"通督启神"法两种电针干预均能改善AD模型小鼠的空间学习、记忆能力,其机理可能与抑制MG活化、降低大脑皮层COX-2、TGF-β1的表达有关,但两者比较无统计学差异(P 0. 05)。     

不同针刺干预膝骨关节炎模型大鼠对NF-κB信号通路的调控影响

目的:探讨不同针刺治疗KOA的作用机制及对NF-κB信号通路的调控状态。方法:木瓜蛋白酶法建立KOA模型,将40只大鼠随机分为正常组、造模组、针刀组、圆利针组,每组10只。正常组正常饲养,不做任何干预;造模组造模后不做任何干预;针刀组采用针刀干预;圆利针组采用与针刀相同直径的圆利针干预,两种干预均每周1次,共治4周。治疗前后对各组大鼠进行行为学评价。治疗结束后,取出右后膝滑膜组织,用于PCR检测,另取软骨,评价软骨破坏情况。结果:干预前各组间行为学评分造模组、针刀组、圆利针组均显著高于正常组(P 0. 01);干预后针刀组、圆利针组均显著低于造模组(P 0. 01)。软骨组织学评分针刀组与圆利针组差异无统计学意义(P 0. 05),造模组、针刀组、圆利针组均显著高于正常组(P 0. 01),针刀组、圆利针组均显著低于造模组(P 0. 01)。PCR表达水平:NF-κBp65 mRNA表达在针刀组、圆利针组和造模组均显著高于正常组(P 0. 01),IKB-αmRNA表达在针刀组、圆利针组均高于造模组(P 0. 05),针刀组高于圆利针组和造模组(P 0. 05)。结论:针刀干预可改善滑膜组织NF-κB信号通路的高调控状态,从而抑制滑膜炎性因子和介质的合成与分泌,这有可能是针刀实现其治疗KOA的作用机制之一。     

加减薯蓣丸通过Akt/GSK3β/Nrf2通路改善APP/PS1小鼠神经元凋亡

目的:探讨加减薯蓣丸对APP/PS1模型小鼠神经保护的效应和作用机制。方法:5月龄雄性APP/PS1小鼠20只和野生型小鼠10只,分为空白组、模型组、加减薯蓣丸组(14 g·kg-1·d-1),灌胃28 d,空白组、模型组给予等体积生理盐水;APP/PS1背景和野生型背景原代神经元,分为空白组、模型组、加减薯蓣丸组、衣霉素组和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)抑制剂组,空白组、模型组给予10%空白血清,加减薯蓣丸组给予5%加减薯蓣丸含药血清干预,衣霉素组和PI3K/Akt抑制剂组分别在加减薯蓣丸基础上加用2 mg·L-1的衣霉素和10μmol·L-1的LY294002。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达; Western blot检测内质网应激相关蛋白糖调节蛋白78(GRP78),蛋白激酶样内质网激酶(PERK),磷酸化(p-) PERK,凋亡通路蛋白真核生物的翻译起始因子2的α亚基(e IF2α),p-eIF2α,增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和p-Akt,Akt,糖原激酶3β(GSK3β),Nrf2蛋白表达。结果:体内实验中,与空白组比较,模型组APP/PS1小鼠学习记忆能力显著下降(P 0. 01),海马Nrf2表达显著下调(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸干预4周后,加减薯蓣丸组APP/PS1小鼠学习记忆能力明显提升,海马Nrf2表达水平显著增加(P 0. 01)。体外实验中,与空白组比较,模型组GRP78,p-PERK/PERK,p-eIF2α/e IF2α,CHOP,cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸含药血清明显降低GRP78,p-PERK/PERK,p-eIF2α/e IF2α,CHOP,cleaved Caspase-3蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01);而衣霉素抑制加减薯蓣丸对内质网应激诱导凋亡的保护效应(P 0. 05);与空白组比较,模型组p-Akt/Akt,Nrf2蛋白表达显著下降,GSK-3β表达显著增加(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸含药血清干预后p-Akt/Akt,Nrf2蛋白表达显著增加,GSK-3β表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01); LY294002抑制加减薯蓣丸对p-Akt/Akt,Nrf2和GSK3β蛋白表达的影响(P 0. 05,P 0. 01)。结论:加减薯蓣丸通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路上调Nrf2蛋白表达,减轻内质网应激诱导的神经元凋亡,改善APP/PS1模型小鼠学习记忆能力。     

基于Wnt3a/β-catenin信号通路探讨针刀对膝骨关节炎兔股直肌纤维化的影响

目的:观察针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔股直肌Wnt3a/β-catenin信号通路调控作用及纤维化的影响,探讨针刀治疗KOA的可能作用机制.方法:24只健康雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组,每组8只.改良Videman法左后肢伸直位石膏固定制动6周复制KOA模型,Lequesne MG膝关节级别评分、X线...     

透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR信号通路的影响

目的：研究透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞H3k/Akt/mTOR蛋白表达的影响,探讨透骨草提取物对SKOV-3细胞作用的分子机制.方法：免疫组化法检测透骨草提取物对SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白表达的影响.结果：37.8 μg/mL透骨草提取物作用于SKOV-3细胞24h后,SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白表达明显低于与对照组（P＜0.05）,表明透骨草提取物可下调SK-OV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白的表达.结论：透骨草提取物可能通过PI3k/Akt/mTOR途径抑制SK-OV-3细胞增殖.     

推拿改善T2DM大鼠糖脂代谢性炎性损伤的分子机制研究

目的:观察推拿对2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)大鼠腹直肌组织腺苷酸活化蛋白激酶_(α2)(AMPK_(α2))、核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)基因转录及蛋白表达的影响,探讨其改善T2DM大鼠代谢性炎性损伤的分子机制。方法:选取40只Wistar大鼠,随机取出6只为空白组,其余高脂高糖饮食联合低剂量(35 mg/kg)链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM模型,成模大鼠32只随机分入模型组、西药组、推拿组及西药推拿组。空白组及模型组每日灌胃蒸馏水,西药组每天以250 mg/kg标准进行二甲双胍灌胃1次,推拿组每日给予推拿手法治疗1次,西药推拿组在相同给药标准基础上每日加用推拿治疗1次。共干预8周,分别记录第2、4、8周的空腹血糖(Fast Blood Glucose,FBG)值,并运用realtime-PCR测定腹直肌AMPK_(α2)、NF-κB及IL-6基因转录,Western-blot测定腹直肌AMPKα2及NF-κB蛋白含量,ELISA测定IL-6蛋白含量。结果:与模型组比较,西药组及西药推拿组FBG在第2、4、8周时显著下降,差异有统计学意义(P 0. 05,P 0. 01),推拿组FBG在第4、8周时显著下降,差异有统计学意义(P 0. 05);与西药组比较,西药推拿组在第4周降糖效果更为显著,差异有统计学意义(P 0. 05);与推拿组比较,西药推拿组在第4、8周时降糖效果更为显著,差异有统计学意义(P 0. 05);与0周时比较,各观察组FBG在第2、4、8周时,均显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,模型组AMPK_(α2)mRNA转录及蛋白表达均下降,差异有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,西药组、推拿组、西药推拿组AMPK_(α2)mRNA转录及蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P 0. 05)。与空白组比较,模型组NF-κBmRNA转录显著升高,差异有统计学意义(P 0. 01),蛋白表达升高,差异有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,西药组NF-κBmRNA转录下降,差异有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,推拿组NF-κBmRNA转录及蛋白表达均下降,差异有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,西药推拿组NF-κBmRNA转录和蛋白表达显著下降,差异有统计学意义(P 0. 01,P 0. 05);与空白组比较,模型组IL-6 mRNA转录升高,差异有统计学意义(P 0. 05),蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P 0. 01);与模型组比较,西药组、推拿组及西药推拿组IL-6基因转录均显著下降,差异有统计学意义(P 0. 05,P 0. 01),蛋白表达均显著下降,差异有统计学意义(P 0. 01)。结论:推拿可改善T2DM大鼠的空腹血糖,并通过上调骨骼肌AMPK_(α2)基因转录与蛋白表达,下调NF-κB、IL-6基因转录与蛋白表达,发挥其改善糖脂代谢性炎性损伤的手法效应。