抗戾饮对呼吸道冠状病毒感染雏鸡模型的保护作用

目的:研究抗戾饮对呼吸道冠状病毒--传染性支气管炎病毒(IBV)感染的雏鸡模型的保护作用.方法:利用滴鼻、点眼方式接种IBV的7日龄雏鸡分层随机分为5组:模型组、治疗组(抗戾饮高、中、低3个剂量组)、阳性对照组(更昔洛韦组),另设用生理盐水接种7 d龄的雏鸡为空白对照组.将所有攻毒组与生理盐水组雏鸡隔离放置在可调控的低温高湿环境中.从攻毒后第1天开始,分别灌胃给予模型组、空白对照组无菌生理盐水,治疗组高、中、低剂量组分别每天每只给予抗戾饮水煎剂10 g/kg、20 g/kg、40 g/kg,阳性对照组每天每只给予更昔洛韦0.004 g/kg.实验时间为5～7 d.观察IBV感染模型临床症状、体温变化及死亡率.结果:与模型组相比,抗戾饮各组均能显著降低IBV模型升高的体温,使体温恢复正常,同时明显改善IBV模型的一般症状和呼吸道症状,降低模型死亡率.结论:抗戾饮对人工致雏鸡IBV感染模型具有改善一般症状和呼吸道症状、降低体温、改善中医证候、降低感染雏鸡死亡率的作用.     

脉络宁注射液醇沉废弃物对雏鸡免疫系统和生长性能的影响

目的探讨脉络宁注射液醇沉废弃物(简称MFP)对雏鸡免疫系统和生长性能的影响。方法将1日龄雏鸡随机分为4组,即空白组予以正常饮水,实验组饮水中分别给予醇沉物浓度为1%、3%、5%,每组20羽雏鸡,连续饲养42 d。雏鸡7日龄和21日龄进行新城疫活疫苗免疫;分别于3、10、17、24、31、38日龄测定各组雏鸡的平均体质量(每周/次)、料肉比,观察雏鸡的生长性能;21日龄和42日龄雏鸡的血清总蛋白、血清球蛋白、新城疫抗体水平和免疫器官指数,并观察21日龄及42日龄各组雏鸡的胸腺、脾和法氏囊组织结构。结果实验各组与空白组比较,体质量离散程度明显减小,集中趋势增强;血清总蛋白、球蛋白和新城疫抗体水平均增高,且21日龄雏鸡实验组的球蛋白及新城疫抗体水平显著高于空白组(P0.05);免疫器官淋巴细胞排列更紧密,数量增多。结论脉络宁注射液醇沉废弃物可用于雏鸡的饲养,每日在饮水中添加1%~5%的醇沉物可显著提高雏鸡的免疫力,减少其生长过程的个体差异。此外,本研究为中药废弃物的资源化利用提供了一条可供参考的途径。     

酸枣仁汤组分配方对高架十字迷宫大鼠神经肽Y及细胞因子的影响

目的:观察酸枣仁汤组分配方酸枣仁汤Ⅰ、酸枣仁汤Ⅵ对高架十字迷宫大鼠杏仁核、下丘脑神经肽Y及血清细胞因子的影响,探讨其抗焦虑作用的机理及物质基础.方法:采用国际上通用的高架十字迷宫焦虑动物模型,观察酸枣仁汤组分配方对大鼠行为学的影响,用放射免疫法检测大鼠杏仁核、下丘脑神经肽Y及血清IL-1β、IL-2、TNF-α的含量.结果:与对照组比较,组分配方酸枣仁汤Ⅰ、酸枣仁汤Ⅵ组大鼠进入开放臂次数比(OE%)、在开放臂停留时间比(OT%)均显著升高;酸枣仁汤Ⅰ、酸枣仁汤Ⅵ组大鼠杏仁核神经肽Y含量均显著升高(P<0.01、P<0.05),酸枣仁汤Ⅵ组大鼠下丘脑神经肽Y含量显著降低(P<0.05),酸枣仁汤1组亦降低,但无显著性差异(P>0.05),组分配方组与地西泮组一致;酸枣仁汤Ⅵ组大鼠血清IL-2含量明显降低(P<0.05).酸枣仁汤Ⅰ、酸枣仁汤Ⅵ组大鼠血清TNF-α含量均明显升高(P<0.05、P<0.01).结论:在抗焦虑方面,酸枣仁汤组分配方与地西泮具有某些相同的作用机制,提高杏仁核神经肽Y含量可能是地西泮、酸枣仁汤Ⅰ和酸枣仁汤Ⅵ发挥抗焦虑作用的机制之一;同时,组分配方对大鼠的免疫功能有一定影响,提示其可能较地西泮有着更广泛的调节机制;酸枣仁汤所含的多糖和黄酮类成分可能是提高大鼠杏仁核神经肽Y含量和影响其血清细胞因子水平的物质基础.     

IBV感染中医证候模型的建立及抗戾饮对其保护作用的研究

目的:研究建立呼吸道冠状病毒感染雏鸡的中医证候模型,观察抗戾饮对其的保护作用.方法:利用鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)接种雏鸡并置于低温高湿环境中饲养,建立模型,并观察抗戾饮的保护作用.结果:IBV感染雏鸡出现高热及典型呼吸道症状,符合湿热壅滞、肺失宣降的中医证候特点,第7天死亡率为70%,病理学表现为典型的肺与支气管病变.死亡率抗戾饮高剂量组、抗戾饮中剂量组、抗戾饮低剂量组均较低,与模型组、更昔洛韦组比较,差异均有显著性意义(P＜0.05).抗戾饮高剂量组、抗戾饮中剂量组、抗戾饮低剂量组均在第4天体温明显降低、第5～6天基本恢复正常,与模型组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论:在低温、高湿环境下利用IBV感染雏鸡,可建立较为符合中医证候特点的模型;抗庆饮对该感染模型具有改善全身症状和呼吸道症状、降低体温、改善中医证候、降低死亡率的作用.     

枇杷叶乙醇提取物降血糖的实验研究

目的:观察枇杷叶乙醇提取物时正常小鼠及肾上腺素和葡萄糖引起的高血糖动物模型的作用.方法:采用注射肾上腺素和葡萄糖引起的高血糖动物模型及正常ICR小鼠,分别以枇杷叶提取物低、中、高剂量进行灌胃,给药结束后测定血糖水平.结果:提取物中、高剂量组在0.5h时有对抗肾上腺素的升血糖作用(P<0.05-0.01),高剂量组在1 h时能降低肾上腺性高血糖(P<0.05);提取物中、高荆量组对葡萄糖引起的血糖升高有抑制作用(P<0.05-0.01),提取物对正常小鼠的血糖值作用明显(P<0.05-0.01).结论:枇杷叶乙醇提取物对多种动物模型具有较好的降血糖作用.     

酸枣仁提取物急性毒性实验研究

目的 观察酸枣仁醇提取物的急性毒性反应.方法 ①小鼠尾静脉注射不同剂量的酸枣仁醇提取物,连续观察14 d,记录小鼠的急性毒性反应,并计算LD50及LD50 95%可信限;②小鼠灌胃给药,测定一次给予酸枣仁醇提取物的安全剂量.结果 ①静脉注射酸枣仁醇提取物后,部分小鼠出现中毒反应并死亡,测得LD50为27.5 g·kg-1,LD50 95%可信限为25.1～30.1 g·kg-1,死亡动物尸检,其主要脏器未见病理改变.14 d后存活小鼠体重平均增加20.4%,略高于生理盐水组(18.2%).②小鼠灌胃给药(340 g·kg-1,相当于成人一次用量的326倍)后,连续观察14 d,小鼠全部存活,无明显毒性反应,小鼠体重平均增长17.2%.结论 酸枣仁醇提取物毒性很低,临床给药安全可靠.     

丹酚酸A对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生作用的影响

目的:探讨丹酚酸A对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响.方法:将无菌8日龄鸡胚制备CAM模型,随机分成6组:PBS对照组,丹酚酸A(150,50,16.67,5.56 mg·L-1)组及VEGF组,培养3 d后采集数据进行分析.结果:丹酚酸A5.56,16.67,50 mg·L-1组血管新生面积明显高于PBS对照组(P<0.05,P<0.001,P<0.01).结论:丹酚酸A可明显促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生.     

加味青麟丸提高老龄大鼠免疫能力作用的研究

目的:观察加味青辟丸(JL)对老龄大鼠免疫能力的影响.方法:选用Wistar大鼠120只,随机分为6组,即4月龄空白对照组(4C组)、14月龄空白对照组(14C组)、14月龄加味青麟忙丸组(14JL组 24月龄空白对照组(24C组)、24月龄加味青辟九组(24JL组)和14.24月龄加味青麟丸组(14～24JL组),每组各20只,雌雄各半.空白对照各组:在4月龄时先剖检4C组大鼠,用于对照.其余40只大鼠用普通饲料喂养,每晨灌喂与加味青麟丸等量的生理盐水.当喂至14月龄时剖检14C组大鼠;同法,当喂至24月龄时剖检24C组大鼠.加味青麟丸各组:每晨灌喂加味青辟丸水溶液,其生药量按人与大鼠体表面积换算的等效剂量0.54g/(kg·d),每周称1次体重.14JL组即从4月龄每晨灌喂加味青麟丸至14月龄;24JL组即从4月龄每晨灌胃加味青辟丸至24月龄;14～24JL组即先普食喂养至14月龄.然后开始每晨灌喂加味青辟丸至24月龄.测定血清IL-2水平、胸腺指数、脾脏指数.结果:14C组和14JL组大鼠脾脏指数、胸腺指数、血清ID2水平均低于4c组(P<0.05),14C组大鼠与14JL组比较无明显差异(P>0.05).24C组、24JL组和14～24JL组大鼠胸腺指数、脾脏指数、血清ID2水平均明显低于4c组(P<0.01).24JL组明显高于24C组(P<0.01),14～24JL组亦明显高于24C组(P<0.01),24JL组与14～24JL组比较无明显差异(P>0.05).结论:加味青麟丸具有提高免疫力从而达到抗衰老的作用.     

酸枣仁对阴虚小鼠焦虑行为的影响

目的:观察酸枣仁对阴虚小鼠焦虑行为的影响,筛选活性物质并探讨其抗焦虑机制。方法:采用320mg/kg甲状腺片混悬液给小鼠连续灌胃9 d造阴虚模型,以高架十字迷宫实验和明暗箱实验观察阴虚模型小鼠焦虑行为状态以及酸枣仁的干预作用。实验后立即取脑,薄层扫描法测定脑GABA和Glu的含量;免疫组化法观察GABAAR1和NMDAR1的表达。结果:①与阴虚模型组比较,地西泮组和醇提物中剂量组小鼠在高架十字迷宫实验中进入开臂的时间比和次数比显著增加(P<0.05),在明暗箱实验中穿箱次数显著增加(P<0.05)。②与阴虚模型组比较,地西泮组和醇提物中剂量组小鼠脑内GABA含量显著升高(P<0.05)、Glu含量显著降低(P<0.05)。③与阴虚模型组比较,地西泮组和醇提物中剂量组小鼠脑内GABAAR1平均积分光密度值显著升高(P<0.05)、NMDAR1平均积分光密度值显著降低(P<0.05)。结论:酸枣仁醇提物具有明显的抗焦虑作用。其抗焦虑机制可能与提高小鼠脑内GABA含量,增强GABAAR1表达,降低Glu含量和NMDAR1表达有关。     

金银花提取物体外抗甲型流感病毒FM1株的研究

目的观察金银花提取物体外抑制甲型流感病毒FM1株的作用。方法采用血凝试验方法,测定不同浓度金银花提取物体外和鸡胚内抑制流感病毒效价,分析金银花提取物对病毒增殖的影响。结果与病毒对照组比较,金银花提取物组血凝效价降低,其抑制作用时间可从1h持续到24h,其对病毒的抑制作用随着药物浓度的降低而逐渐减弱;金银花提取物在100、50、25mg/mL时,对感染流感病毒鸡胚具有预防和保护治疗作用(P<0.001),而在100mg/mL时的预防作用明显优于阳性对照病毒唑组(P<0.05)。结论金银花提取物可有效抑制甲型流感病毒FM1株。     

Histological investigations on the effects of feeding a diet containing red hot pepper on the reproductive organs of the chicken

In the present study the growth and reproductive organ differences in chickens fed a diet containing 1% red hot pepper (10 g/kg diet) from the first day of age were investigated. In birds fed with the experimental diet it was observed that the abdominal fat content decreased. During the experiment the increase in weight gain in the treated group in the first 4 months was reversed in favour of the control group in month 5. Follicular development in the treated group was faster and laying started 11 days before the control group, and the epithelial and muscular development of the oviduct was always greater than that of the control group.The results indicated that red hot pepper consumed in lower concentrations during the development period in the chickens caused faster development of the reproductive system organs. Laying started 11 days earlier in chicks fed with the red hot pepper added diet, an important economic aspect for egg producers, but which may have implications for other animals. A decrease in abdominal fat content and disorders of lipid metabolism are still under investigation.     

六味地黄丸对肾虚型老年痴呆动物模型的改善作用

目的:研究六味地黄丸对肾虚型老年痴呆动物模型的改善作用.方法:48只小鼠随机分为对照组、模型组、六味地黄丸组、塞络通组;各试验组按照15 mg·kg-1连续sc氢化可的松40 d,第20天时侧脑室注射β-淀粉样蛋白(25-35)(Aβ25-35)6μg建立肾虚型老年痴呆动物模型,对照组给予等量生理盐水.从第21天开始,六味地黄丸组小鼠按8 g·kg-1 ig六味地黄浓缩丸,塞络通组小鼠按32 mg· kg -1 ig塞络通,对照组和模型组以相同体积每日ig蒸馏水.从第31天开始观察、检测各组小鼠的体重及状态、学习记忆能力、自主活动、抗疲劳能力、血清皮质酮含量、免疫学指标及脑组织病理学变化.结果:与对照组相比,模型组小鼠出现体重增长缓慢,自主活动受到抑制,水迷宫学习记忆能力受损,跑步力竭时间缩短,胸腺和脾指数降低,脾细胞刺激指数降低,血清皮质酮值降低.与模型组比较,六味地黄丸组小鼠的体重增长、自主活动、水迷宫上台潜伏期及游出率、跑步力竭时间、胸腺和脾指数、脾细胞刺激指数、血清皮质酮值等得到明显改善(P＜0.05,P＜0.01),而塞络通组小鼠各项指标改善不明显.结论:六味地黄丸对肾虚型老年痴呆症状具有显著改善作用,而塞络通不适合用于改善肾虚症状.     

热暴露对大鼠应激器官重量的影响及枸杞多糖的干预作用

目的:探讨不同时间长度的热暴露对大鼠体温、体重及应激器官重量的影响及枸杞多糖的干预作用。方法:选用雄性Wistar大鼠,随机分为对照组、热暴露组及热暴露+枸杞多糖组。对照组:置于室温24℃的环境中;热暴露组与热暴露+枸杞多糖组:环境温度为32℃,分别进行7、14、35天的热暴露;采用体温遥感技术监测大鼠体温变化,并摘取其脑垂体及肾上腺等器官为实验标本。结果:不同时间长度的热暴露各组对大鼠的体温和体重均无影响;7天热暴露可增加大鼠脑垂体和肾上腺的相对重量,而14和35天的热暴露对大鼠脑垂体及肾上腺的相对重量无影响。结论:长时间的热暴露可使机体产生热适应,枸杞多糖对急性热应激引起的应激器官相对重量的增加无缓解作用。     

加味当归补血汤对阿霉素肾病大鼠肾脏足细胞保护机制的研究

目的 利用阿霉素肾病模型研究加味当归补血汤对肾小球足细胞作用的影响。方法 实验动物分为正常组、模型组、贝那普利组和加味当归补血汤组。分别在造模第7、28、42、56天留取尿液标本,观察尿白蛋白定量的动态变化;取肾组织进行光镜、电镜和足细胞表达蛋白nephrin、podocin的免疫荧光检测,并进一步应用分子生物学（RT-PCR及Wetern blot）的方法对肾组织中足细胞裂孔膜表达蛋白的表达情况进行分析。结果（1）尿白蛋白：各治疗组治疗7天尿白蛋白减少不明显,但在28、42、56天表现为非常明显的下降,贝那普利组和加味当归补血汤组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而且加味当归补血汤最为明显;（2）肾脏组织和足细胞的影响：光镜和电镜观察结果显示加味当归补血汤治疗组与贝那普利治疗组和模型组比较,系膜细胞增生情况、肾小管-间质病变情况、足细胞融合和足细胞表达蛋白nephrin、podocin的表达情况均较轻,尿白蛋白定量相对模型组明显减少的情况下仍然存在与肾脏纤维化相关的肾脏病理进展,说明肾脏病变程度相比模型组较轻但不是逆转;（3）治疗第56天肾脏组织足细胞RT-PCR及Wetern blot检测 nephrin、podocin表达;各治疗组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味当归补血汤对于阿霉素肾病模型具有治疗作用,作用主要是通过减少尿白蛋白,抑制系膜细胞增生和减轻肾小管-间质损伤,保护足细胞裂孔膜结构的完整性。     

补中益气汤退热作用及机制的探讨

目的:探讨补中益气汤退热作用机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脾虚发热组、补中益气汤组共3组,每组10只.采用饮食失节+过度疲劳+注射LPS法复制脾虚发热模型.每周测体温1次.第18天开始补中益气汤组每天ig(6.83 g·kg-1),正常组和脾虚发热组给予同体积蒸馏水,每天1次,连续5d.第22天AM 8:00脾虚发热组和补中益气汤2组大鼠ip脂多糖(LPS,80μg·kg-1)诱导发热,正常组ip等体积生理盐水.测量各组大鼠ip LPS后30,60,120,180,220 min肛温及绘制体温曲线,测定下丘脑环磷酸腺苷(cAMP)、前列腺素E2(PGE2).结果:与正常对照组相比,脾虚发热组大鼠体温曲线明显上抬,各观察点体温均明显升高,下丘脑PGE2和cAMP明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与脾虚发热组比较,补中益气汤组大鼠体温曲线明显下移,下丘脑PGE2和cAMP均明显下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:补中益气汤对脾虚发热模型大鼠具有明显的退热效用,其退热作用可能与降低中枢发热介质PGE2和cAMP有关.     

加味黄芪赤风汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾脏皮质SOD和MDA的影响

目的:探讨加味黄芪赤风汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿治疗及抗自由基损伤的作用。方法:大鼠尾静脉注射阿霉素制作阿霉素肾病模型,于实验第2、4、6、8周末收集24h尿液并测24h尿蛋白定量,于实验第8周末取血和肾脏组织,进行血清ALB、TP、TCH以及肾脏皮质SOD、MDA的测定。结果:2倍剂量加味黄芪赤风汤组与同期模型组相比,实验第4、6、8周末24h尿蛋白定量均降低(P<0.05),肾脏皮质SOD显著升高(P<0.01)及MDA降低(P<0.05);正常剂量加味黄芪赤风汤组与同期模型组相比,实验第4周末24h尿蛋白定量减少(P<0.05),肾脏皮质SOD显著升高(P<0.01)。结论:加味黄芪赤风汤能够明显改善阿霉素肾病大鼠蛋白尿,提高抗自由基能力,改善肾脏自由基损伤。     

半夏泻心汤改善伊立替康致小细胞肺癌荷瘤鼠脾虚的作用

目的:观察半夏泻心汤对伊立替康(Irinotecan,CPT-11)致于小细胞肺癌(Small-cell lung cancer,SCLC)荷瘤鼠脾虚的改善作用。方法:取荷瘤鼠,按高、中、低剂量灌胃给予半夏泻心汤,对照组给水,连续8天,第3天开始尾静脉注射CPT-11,连续4天,观察荷瘤鼠全身情况及活动能力、体重及腹泻,第8天眼球取血,酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,EL ISA)测定血清中胃泌素含量。结果:空白组荷瘤鼠活动能力下降,半夏泻心汤给药组荷瘤鼠活动能力有明显改善,体重下降减缓,并能减少腹泻的发生,但对血清胃泌素的影响无统计学差异。结论:半夏泻心汤对CPT-11作用于SCLC荷瘤鼠后的脾虚具有改善作用。     

剪刀股中多糖的提取及其对糖尿病小鼠的降糖作用研究

目的:建立剪刀股多糖的提取与含量的测定方法,探讨剪刀股多糖对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的降血糖作用。方法:通过正交试验优化剪刀股多糖提取条件,采用苯酚-硫酸法对剪刀股多糖的含量进行测定;尾静脉注射四氧嘧啶,建立糖尿病小鼠模型,并随机分为正常对照组、模型对照组及剪刀股多糖、高、中低剂量组,高、中、低剂量组分别以9、6、3 mg/10g(体质量)每天的剂量灌胃,正常对照组和模型对照组灌胃0.3 m L生理盐水,连续灌胃27天,分别于第0、3、9、15、21、27天测小鼠的血糖和体质量。结果:剪刀股多糖最佳提取条件为提取温度80℃,液料比20∶1,提取150(50×3)mi n。剪刀股多糖的平均提取率为9.64%,RSD为0.87%。给药27天,剪刀股多糖高、中、低剂量组小鼠血糖显著降低,体质量显著升高。结论:剪刀股中多糖含量较高,剪刀股多糖能较明显降低小鼠血糖值,改善糖尿病小鼠的消瘦症状。     

霍山石斛不同提取物对肾阴虚证和肾阳虚证小鼠温度趋向性、环核苷酸及甲状腺激素的影响

目的:研究霍山石斛不同提取物对肾阴虚证、肾阳虚证小鼠温度趋向性、环核苷酸及甲状腺素水平的影响,探讨霍山石斛寒凉药性的物质基础。方法:180只小鼠随机分为15组,每组12只。连续14d分别灌服甲状腺素(160mg/kg)、氢化可的松溶液(25mg/kg)制备肾阴虚、肾阳虚动物模型,观察各组小鼠的一般状态、体质量和温度趋向性,检测血清cAMP、cGMP、T3、T4水平,计算cAMP/cGMP比值。结果:与肾阴虚模型组比较,实验第14天,霍山石斛水提物及醇提物可增加小鼠的体质量和热区停留比例(P<0.05,P<0.01),降低cAMP含量和T4的含量(P<0.05,P<0.01),霍山石斛水提物及醇提物高剂量组能降低cAMP/cGMP值(P<0.01),降低T3含量(P<0.05,P<0.01);与肾阳虚模型组比较,实验第14天,霍山石斛水提物高剂量可增加小鼠的体质量(P<0.01),降低其热区停留比例(P<0.05),升高cAMP值、cAMP/cGMP值及T3、T4含量(P<0.05,P<0.01)。结论:霍山石斛水提物对肾阴虚证和肾阳虚证的机体状态、环核苷酸水平及甲状腺激素水平均有调节作用,表现出平性药的药性特点;霍山石斛醇提物仅对肾阴虚证有调节作用,表现出寒凉药性;由此推断,霍山石斛醇提物是其寒凉药性的物质基础,水提物和醇提物综合作用使霍山石斛显现微寒之性。     

In vivo antitumoral effect of Plantago major L. extract on Balb/C mouse with Ehrlich ascites tumor

The aim of this study is to investigate the antitumor activity of Plantago major L. extract in Ehrlich ascites tumor (EAT) bearing Balb/C mice in vivo. Thirty male Balb/C mice were divided into 5 groups: 3 treatment groups and 2 control groups (6 per group). Treatment groups and the negative control group were injected with EAT (1 x 10(6) cells) intraperitoneally to develop ascites tumor. P. major L. extract (1%, 2% and 3% concentration extracts, 0.1 ml/day/mouse) were given p.o. for 10 alternate days. The control group was treated with 0.9% NaCl solution (0.1 ml/day/mouse). The changes of body weight in animals were recorded. On the 11th day, all of the mice were sacrified and their tissues were stained with haematoxylen and eosin for pathological studies. Body weights of in 3 treatment groups and the negative control group were elevated because of tumor burden. The maximal weight gain was recorded in the negative control group and the minimal weight gain was recorded in Group I. Pathological studies showed that P. major L. extract (especially 1% concentration) has inhibitive effect on EAT. P. major has an inhibitory effect on EAT in a dose dependent manner.