雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖的抑制及其胞浆内cGMP浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide, Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cell, BLECs)增殖及其细胞内cGMP浓度变化的机制.方法:取第4代BLECs,分3组培养.空白对照组:以DMEM培养;增殖对照组:以DMEM 50 μg/L rhEGF培养;雷公藤内酯醇组:增殖对照组 20 μg/L雷公藤内酯醇.用MTT比色法检测增殖抑制率来测定Tri 20 μg/L对细胞增殖的影响,用放射免疫法测定BLECs内cGMP浓度.结果:浓度为20 μg/L的Tri、作用在处于增殖状态的BLECs时间分别为6,12,24,48,72 h,均出现明显的增殖抑制作用, 其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性.而雷公藤内酯醇组细胞内cGMP含量比增殖对照组明显降低.结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,而该作用可能通过降低细胞内cGMP浓度来完成.     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞内Ca~(2+)浓度的影响及在细胞增殖中的意义

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine Lens epithelial cell,BLECs)增殖及其机制。方法:取第4代BLECs,用MTT比色法检测增殖抑制率,观察Tri浓度为20μg/L,不同时间(6,12,24,48,72h)对细胞增殖的影响,用荧光指示剂Fura-2/AM测定Tri对胞浆内游离Ca2+的影响。结果:同一浓度的Tri,于不同时间作用在处于增殖状态LECs,均出现明显的增殖抑制作用,其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性。而增殖抑制组细胞内Ca2+浓度明显升高。结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,它影响细胞增殖的作用机理之一可能是通过胞浆内游离Ca2+。     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖及胞浆内cAMP浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide, Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cell, BLECs)增殖及其机制.方法:取第4代BLECs,用MTT比色法检测增殖抑制率来测定Tri 20 μg/L对细胞增殖的影响,用放射免疫法测定BLECs内cAMP浓度.结果:Tri 20 μg/L,时间6,12,24,48,72 h作用在处于增殖状态BLECs,出现明显的增殖抑制作用, 其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性.而增殖抑制组细胞内cAMP含量明显增加.结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,而该作用可能通过影响细胞内cAMP等第二信使物质浓度来完成.     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine Lens epithelial cell,BLECs)增殖细胞核抗原的影响和对BLECs增殖的作用。方法:取第4代对数生长期的牛LECs,培养24h后,加入重组人表皮生长因子(Recombinant Human Epithelial Growth Factor,rhEGF)(终浓度50μg/L)和不同浓度的Tri(40,20,10μg/L),再分别作用6,12,24,48,72h后,采用流式细胞仪检测增殖细胞核抗原(PCNA)在LECs的阳性表达率及增殖抑制率。结果:不同浓度Tri(40～10μg/L)抑制处于增殖状态的LECs,PCNA表达率在6～72h内随浓度增高和作用时间延长有明显的下调,10μg/L组6hPCNA表达是(76.74±0.8),与同时间增殖对照组比较有显著性差异(P<0.05),12h(70.32±1.6),24h(61.96±2.1),48h(54.98±2.0),72h(42.15±1.6);20μg/L组6hPCNA表达是(68.58±3.2),12h(55.34±2.6),24h(49.59±1.6),48h(36.61±0.5),72h(30.00±1.1);40μg/L组6hPCNA表达是(60.96±1.2),12h(46.45±1.7),24h(32.10±0.5),48h(27.15±1.1),72h(19.16±1.5),以上各组与同时间增殖对照组比较均有非常显著性差异(P<0.01),呈明显的时间—效应关系和剂量—效应关系。结论:雷公藤内酯醇使牛晶状体上皮细胞内PCNA的表达率下降,改变细胞周期,从而抑制细胞增殖。     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖及胞浆内游离Ca2+浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Tri)对牛晶状体上皮细胞(1ens epithelial cell,LECs)增殖的影响及可能的机制.方法:取体外培养的第4代牛LECs,分5组培养.空白对照组:以DMEM培养;增殖对照组:以DMEM 50μg/L rhEGF培养;Tri高、中、低剂量组分别以含50μg/L rhEGF和40μg//L、20μg/L、10μg/L Tri的DMEM培养.分组培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用MTT比色法及流式细胞仪检测细胞增殖抑制率和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达率;用荧光指示剂Fura-2/AM测定空白对照组、增殖对照组、Tri中剂量组分组培养48 h后胞内游离Ca2 浓度.结果:随着作用时间的延长和浓度的增加,Tri对rhEGF诱导的LECs增殖的抑制率逐渐增大;Tri各剂量组PCNA阳性表达率低于增殖对照组;Tri中剂量组胞内Ca2 浓度高于增殖对照组和空白对照组.结论:Tri对LECs的增殖有明显的抑制作用,该作用可能通过影响胞内Ca2 浓度来完成.     

白黎芦醇对人晶状体上皮细胞增殖的影响

探讨白黎芦醇(Res)对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的影响。体外培养HLEC 24h,加入重组人碱性成纤维细胞生长因子(终浓度20μg/L)使HLEC处于增殖状态。MTT比色法检测不同浓度Res作用于增殖状态的HLEC 24h及25mg/L Res作用于增殖状态HLEC 6h、12h、24h、48h对细胞增殖的影响。结果表明不同浓度的Res,25mg/L Res于不同时间对增殖状态的HLEC有明显的抑制作用,并具有时间及剂量依赖关系。提示Res能够明显抑制HLEC增殖,有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

雷公藤甲素对人晶状体上皮细胞生长影响的实验研究

目的 研究雷公藤甲素（Triptolide，Tri）对人晶状体上皮细胞（Human Lens Epithelial Cells，HLEC）增殖抑制作用。方法 原代培养人晶状体上皮细胞，Tri不同浓度、不同作用时间后吖啶橙试剂（AO）染色，荧光显微镜下观察细胞核的形态变化；MTr法测定人晶状体上皮细胞增殖抑制率。结果 雷公藤甲素对细胞的生长有明显的抑制作用，且呈浓度时间依赖性。结论 一定剂量的Tri可抑制体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖，为预防后囊混浊提供了新途径。     

雷公藤内酯醇对红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对人类红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响。方法运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果雷公藤内酯醇能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用24h时其半数抑制浓度IC50为25nmol/L。且经雷公藤内酯醇处理后K562细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用48h,其浓度的变化与K562细胞凋亡率具有相关性(r=0.97,P<0.05),而作用24h时,则无明显诱导凋亡的作用。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰K562细胞周期,上调细胞G/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对成年牛晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和表皮生长因子 (EGF)对成年牛晶状体上皮细胞增殖的影响。　方法　按正交表 L16 (4 5)进行正交设计 ,将不同浓度 b FGF和 EGF共同作用于体外培养的成年牛晶状体上皮细胞 ,采用 MTT法测定细胞的增殖能力。　结果　单用 b FGF、EGF均可促进成年牛晶状体上皮细胞增殖。0 .75 ng/ m L 的 b FGF开始对晶状体上皮细胞有促增殖作用 ,1～ 10 0 ng/ m L 的 EGF对成年牛晶状体上皮细胞均有明显的促增殖作用 (P<0 .0 1) ,但 b FGF和 EGF无交互作用。　结论　 b FGF和 EGF是诱导成年牛晶状体上皮细胞增殖的重要因素 ,但两者无交互作用     

雷公藤内酯醇抑制白血病干细胞自我更新的研究

目的:检测在雷公藤内酯醇作用下,白血病干细胞的NANOG、β-catenin和OCT-4蛋白表达的水平,从抑制白血病干细胞细胞自我更新方面探讨其机制。方法:首先使用免疫磁珠法进行分选白血病干细胞。实验共设4组,分为:对照组、雷公藤内酯醇3个浓度(低中高)组。4个组均加入K562/A02细胞悬液100μL,对照组加入RPMI1640培养液100μL,雷公藤内酯醇低中高浓度组终浓度分别为10、50、100ng/mL。进行各组细胞增殖率的检测、并采用蛋白印迹法检测各组细胞NANOG、β-catenin和OCT-4蛋白的表达水平。结果:对各组细胞增殖率检测结果显示,3个不同浓度雷公藤内酯醇组,处理24h后都可以观察到K562/A02干细胞增殖受抑,并呈浓度依赖性。与对照组比较,3个不同浓度雷公藤内酯醇度组的β-catenin蛋白表达水平降低,且与对照组间存在统计学差异(P0.05)。中剂量组中OCT-4蛋白表达水平较对照组有统计学差异,而NANOG蛋白的表达在这4个组中,没发现显著差异。结论:中剂量组的雷公藤内酯醇能够调控β-catenin/OCT-4蛋白表达水平,表明该浓度剂量对抑制白血病干细胞自我更新作用最强;而试验中发现的其具有抑制白血病干细胞增殖的浓度依赖性,表明白血病干细胞受到高浓度雷公藤内酯醇抑制可能存在其他机制。     

Effects of Lutein on the Growth and Migration of Bovine Lens Epithelial Cells In Vitro

The effects of lutein on the growth and migration of bovine lens epithelial cells （BLECs） in vitro were observed in an attempt to find a drug that can prevent after-cataract. BLECs were cultured in vitro and different concentrations of lutein were added to the BLECs cultures of the second and third generations. The effects of lutein on the proliferation of BLECs in vitro were examined by the MTT method, and the migration of BLECs was evaluated by a scratch wound assay. The results showed that： （1） Lutein at concentrations of 1 to 16 μmol/L could inhibit the proliferation of BLECs in a dose-and time-dependent manner （P〈0.01）; （2） The migration of BLECs was evaluated by wound healing rate. As compared with the control group, the wound healing rate in the experimental groups was decreased from 0.672±0.164 to -0.234±0.144 and -0.597±0.063 （P〈0.01） at 1 and 2 μmol/L lutein, respectively. It was concluded that lutein at concentration of 〉1 μmol/L inhibited the proliferation and migration of BLECs in vitro, Lutein may become an effective drug to prevent after-cataract.     

雷公藤单体对胶质瘤细胞体外抑制作用的实验研究

目的：研究雷公藤单体对胶质瘤细胞的体外抑制作用。方法：MTT法测定3种雷公藤单体对胶质瘤细胞株SHG44、C6、U251的体外抑制作用；免疫组化法观察雷公藤甲素与雷公藤红素对SHG44胶质瘤细胞bax,bcl-2蛋白表达的变化。结果：雷公藤二萜类单体雷公藤甲素对胶质瘤细胞有极明显的抑制作用；雷公藤三萜类单体雷公藤红素的抑制作用次之。两者均使SHG44细胞bax表达增加，bcl-2表达下降。结论：雷公藤甲素与雷公藤红素对胶质瘤细胞有明显的抗肿瘤作用，其作用与促进bax表达，抑制bcl-2表达，促进细胞凋亡有关。     

The Apoptosis of Bovine Lens Epithelial Cells Induced by Proteasome Inhibitor MG132

To investigate the effect of proteasome inhibitor MG132 on the apoptosis of bovine lens epithelial cells （BLECs）, the cells were treated with MG132 at different concentrations for12, 24 and 36 h. The cell viability was analyzed by MTT assay and the effect of MG132 on the apoptosis of BLECs was assessed by flow cytometry （FCM）. The results showed that after treatment for the same period, the inhibitory effect of MG132 on BLECs proliferation was enhanced with the increment of the concentration of MG132 （0, 2, 5, 10, μmol/L） （P〈0.05）. The 50% inhibiting concentration （IC50） was 2.03 μmol/L when the BLECs were treated with MG132 for 36 h. MG132 also induced the apop- tosis of BLECs obviously. FCM showed that the apoptosis index of the cells treated by MG132 at 2 μmol/L for 12 h was （20.24±1.51）%, and that of the control was （0.98±0.20）% respectively （P〈0.01, n=3）. It was concluded that MG132 could lead to apoptosis of BLECs. The decrease of proteasome activity may play an important role in the formation and development of cataract.     

雷公藤内酯醇抑制胰腺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：探讨雷公藤内酯醇（TL）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：胰腺癌细胞SW1990与TL共同孵育,采用MTT法观察TL对胰腺癌细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪AnnexinⅤ/碘化丙啶（PI）双染法检测TL对SW1990细胞的凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果：TL抑制SW1990细胞增殖和促进细胞凋亡,呈现为浓度和时间依赖性,TL阻滞胰腺癌细胞周期于G0/G1期。结论：TL能抑制胰腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡及干预胰腺癌细胞周期,TL具有潜在的肿瘤治疗作用。     

苦参碱诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡作用

目的:研究不同浓度的苦参碱(Mat)对宫颈癌Hela细胞株的体外增殖抑制作用。方法:采用体外细胞培养技术,以不同浓度的Mat作用于宫颈癌Hela细胞,相同条件下培养24h、48h、72h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定Mat对Hela细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:不同浓度Mat在体外均能不同程度抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并且作用呈现时间-剂量依赖性;苦参碱诱导Hela细胞凋亡率增加。结论:Mat有抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡作用。     

金雀黄素对子宫内膜癌细胞体外生长影响的研究

目的 研究金雀黄素抑制人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞体外增殖作用机理.方法 人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞进行体外培养,用MTT法检测细胞增殖作用,用流式细胞仪检测细胞周期情况.结果 金雀黄素能明显抑制Ishikawa细胞体外增殖,并且随着药物浓度增加其抑制作用更加明显,呈剂量依赖性,金雀黄素对Ishikawa细胞体外增殖抑制最显著的时间是加药48 h,加药后72 h的抑制率虽然有所上升,但不甚明显,加药96h其抑制率稍低,加药后120 h其抑制率明显降低;金雀黄素处理的Ishikawa细胞明显阻滞于G2-M期.结论 金雀黄素通过阻滞细胞于G2-M期,从而抑制Ishikawa细胞体外增殖.     

雷公藤甲素对血管内皮细胞迁移活性的作用

目的观察雷公藤甲素对血管内皮细胞迁移活性及尿激酶型纤溶酶原激活物(u—PA)表达的影响,探讨雷公藤甲素抑制血管生成的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,传至第三代。接种于琼脂凝胶立体细胞培养系统后,加入不同质量浓度的雷公藤甲素(0,5,10,20,30μg／L),培养48h,观察内皮细胞的迁移活性;荧光定量RT—PCR检测u—PAmRNA的表达;免疫组织化学染色检测内皮细胞u—PA蛋白表达量。结果雷公藤甲素可明显抑制内皮细胞的迁移活性,使细胞游走距离缩短;可减少内皮细胞u—PAmRNA和蛋白的表达。结论雷公藤甲素可能通过基因水平干扰内皮细胞u—PAmRNA的表达,抑制u—PA蛋白的表达,从而有效地抑制血管内皮细胞迁移,这可能是雷公藤甲素抑制血管生成的主要机制之一。