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1.
目的:探讨核糖体小亚基蛋白S7(RPS7)对结肠癌细胞 HCT116迁移的作用及机制。方法以3种基因型人结肠癌 HCT116细胞株(p53野生型,p53‐/‐,p21‐/‐)为研究对象,利用pCDNA3.1‐s7质粒对rps7基因进行过表达,rps7小分子干扰RNA对rps7基因进行沉默,实时定量PCR检测转染前后细胞rps7 mRNA的表达变化,Transwell细胞迁移实验观察细胞迁移能力的改变。结果3种不同的 HCT116细胞株转染了pCDNA 3.1‐s7质粒后,rps7基因的表达均明显上调,且迁移能力均受到显著促进,增幅大小依次为 HCT116(p53‐/‐)> HCT116(WT)> HCT116(p21‐/‐);而转染了rps7 siRNA后,rps7基因的表达均明显下调,且迁移能力均受到显著抑制,减幅大小依次为HCT116(p53‐/‐)> HCT116(p21‐/‐)> HCT116(WT)。结论 RPS7对结肠癌细胞HCT116迁移运动的促进作用显著,且该作用与细胞内的P53水平有关,提示RPS7可能通过P53通路或者其他机制在结肠癌细胞H C T 116的迁移中发挥重要作用。  相似文献   
2.
人notch1—shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的构建人notch1—shRNA慢病毒表达载体,为Notch信号通路的相关研究奠定基础。方法根据人notch1基因mRNA序列设计并合成两条互补的DNA单链寡核苷酸,将退火后形成的双链连接于pENTR/U6质粒,通过与pLenti6/BLOCK—iT—DEST载体的LR重组,构建notch1—shRNA慢病毒表达载体,经脂质体介导人293FT细胞,包装成慢病毒。用该慢病毒感染人神经母细胞瘤系SH—SY5Y细胞,RT-PCR和Westernblot法检测细胞notch1基因的表达。结果目的序列成功连接于载体并包装成较高滴度的慢病毒,细胞mRNA和蛋白质的检测均表明构建的notch1—shRNA慢病毒表达载体LR-ND-A能显著抑制SH-SY5Y细胞notch1基因的表达。结论成功构建人notch1—shRNA慢病毒表达载体。  相似文献   
3.
环硫雄醇(Epitiostanol)学名:2α,3α-环硫-5α-雄甾-17β醇,据报道有抗癌作用。最近我们在国内首次人工合成环硫雄醇纯品,并以免疫抑制小鼠及人乳腺癌细胞株(BCap-37)和子宫颈癌细胞株(HeLa)为模型,进行了抗癌活性的研究。实验方法与结果一、剂量反应试验:BCap-37及HeLa细胞传代并各接种21瓶(3×10~5细胞/瓶),随机分成7组,每3瓶一组;置37℃温箱培养24小时后更换新鲜培养液,分别加入0、50、100、250、500、1000μg/ml的环硫雄醇及50ml蒸馏水;在37℃温箱内作用12小时后以苔盼蓝排除法计算各剂量组的细胞存活率,取存活率50%对应剂量作为实验剂量。细胞存活率=(存活细胞数+修正数)/(3×10~5)×100% (修正数=3×10~5-空白组细胞存活数)本实验结果取500μg/ml为实验剂量。  相似文献   
4.
Notch1和Hes1、Hes5在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨Notch1受体和其下游信号分子Hes1、Hes5在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测62例人脑星形细胞瘤和7例正常人脑组织中Notch1和Hes1、Hes5表达情况。结果星形细胞瘤组Notch1、Hes1和Hes5的表达均显著强于正常脑组织组(P〈0.05)。在各级星形细胞瘤中,Notch1和Hes1的表达水平Ⅱ~Ⅲ级显著高于Ⅳ级(P〈0.05),Hes5的表达在2组间差别无统计学意义(P〉0.05)。在星形细胞瘤组中Notch1的表达与Hes1一致性较好(k=0.503),与Hes5的表达一致性差(k=0.216)。结论Notch1表达与星形细胞瘤的发生有关,与星形细胞瘤的病理分级无关。Notch1可能主要是通过下游分子Hes1而非Hes5发挥作用。  相似文献   
5.
神经节苷脂在神经系统发育过程中的作用   总被引:15,自引:0,他引:15  
1935年,Klenk首先在大脑灰质的Ganglionzellen细胞中发现了一种新物质,命名为ganglioside-神经节苷脂,其种类繁多,至今已分离鉴定出70余种。神经节苷脂是一组含有唾液酸的鞘糖脂,分子由疏水的神经酰胺和亲水的含唾液酸的寡糖链组成,广泛分布于脊椎动物各组织的细胞膜上,其中以神经系统含量最为丰富。通常根据唾液酸数目不同分为GM(单唾液酸神经节苷脂)、GD(二唾液酸神经节苷脂)和GT(三唾液酸神经节苷脂)等。又根据糖基数目不同将GM分为GMl(含4个糖基)、  相似文献   
6.
目的观察臂丛根性撕脱伤后将脊髓源性神经干细胞(neuralstemcell,NSC)移植于脊髓前角后的存活、分化情况及对脊髓前角受损运动神经元的保护作用。方法取新生鼠脊髓,分离获得脊髓源性神经干细胞,体外培养、扩增、鉴定、5溴2-脱氧尿苷(BrdU)标记。取SD大鼠60只,随机分成实验组、对照组和单纯组。从后路制备C5~C7臂丛神经根性撕脱伤动物模型。实验组移植神经干细胞于C6脊髓前角,对照组移植灭活神经干细胞,单纯组不作移植。术后1、2、4、8、12周取脊髓标本进行组织学与免疫组化染色观察。结果神经干细胞移植入脊髓后能存活、分化;臂丛根性撕脱伤后脊髓前角运动神经元数目明显减少;实验组神经干细胞移植后2、4、8、12周各个时间点运动神经元的存活率均高于对照组和单纯组。结论臂丛根性撕脱伤脊髓前角神经干细胞移植后能存活并分化为神经元及星型胶质细胞,脊髓源性神经干细胞移植能明显减少前角运动神经元的继发性死亡,对脊髓前角受损运动神经元有保护作用。  相似文献   
7.
目的 探讨细胞移植过程中麻醉以及细胞植入等操作对中枢神经递质谷氨酸和多巴胺的影响. 方法 体外培养的新生大鼠大脑神经干细胞定位植人正常成年大鼠大脑纹状体.采用脑微透析术结合高效液相色谱(HPLC)动态检测探针置人、麻醉剂氯胺酮和戊巴比妥钠以及移植细胞等操作对谷氨酸和多巴胺水平的影响. 结果 探针置人大鼠纹状体后15 min.纹状体内谷氨酸和多巴胺的水平均明显高于基础值,5~6h后方恢复至基础水平.戊巴比妥钠或氯胺酮腹腔麻醉后15 min均可使大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺水平呈一过性升高.细胞植入本身对大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺水平无明显影响. 结论 常规剂量的戊巴比妥钠或氯胺酮腹腔麻醉均可使脑内谷氨酸和多巴胺水平短暂升高.进行脑微透析术检测谷氨酸和多巴胺应在探针置入至少6h后进行.  相似文献   
8.
背景神经干细胞为神经系统损伤的修复开辟了新的途径,也是发现某些细胞因子和其作用机制的良好模型,神经干细胞的体外培养、增殖和诱导分化的探讨是这些研究的重要基础. 目的分离培养和鉴定人脑神经干细胞. 设计和方法采用无血清培养基分离和培养人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞,并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定. 地点和材料实验在福建医科大学分子医学研究中心实施.实验材料为自然流产的孕龄 6~ 8周的人胚胎脑组织. 主要观察指标人脑神经干细胞在体外培养条件中的增殖、自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能. 结果人胚胎脑组织分离培养的细胞具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖,经诱导可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞. 结论从人胚胎脑皮质成功分离培养出的神经干细胞,是研究神经干细胞诱导分化的良好模型.  相似文献   
9.
采用体外培养不同时间的神经干细胞球 ,间接荧光法标记神经巢蛋白 (nestin) ,以流式细胞术检测神经干细胞球中表达nestin细胞的情况。结果显示 :在培养不同时间的细胞群体中均检出 nestin阳性细胞 ,培养 7d、1月、3月和 6月的细胞群含nestin阳性细胞数百分比分别为 (4 2 .2± 7.6) %、(4 1.7± 7.3 ) %、(3 3 .8± 12 .9) %和 (3 7.1± 5 .0 ) % ,几个时间点的细胞群体所含的 nestin阳性细胞数的百分比之间无显著性差异。提示 ,在体外培养条件下 ,神经干细胞群体可能通过自我更新和分化的调控 ,保持 nestin阳性细胞于一种较为恒定的比例。  相似文献   
10.
目的 从新生大鼠的脊髓中分离培养神经干细胞并观察其增殖和分化能力。方法 采用细胞培养技术结合间接免疫荧光细胞化学法。结果 分离的细胞生长旺盛 ,单克隆化生成的细胞团 ,BrdU掺入呈强阳性。分离培养获得的细胞团呈Nestin强阳性 ,至今已在体外连续传代 8个月。培养的细胞团经 1%小牛血清诱导可分化为神经元和星形胶质细胞。结论 成功分离培养了新生大鼠脊髓神经干细胞  相似文献   
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