组胺对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞阿尔茨海默病体外模型的保护作用

目的:观察组胺对β淀粉样蛋白1-42(Aβ42)诱导大鼠肾上腺嗜铬瘤(PC12)细胞损伤的改善作用及其相关的受体亚型。方法:运用PC12细胞,采用Aβ42构建阿尔茨海默病体外模型,以形态学和四甲基偶氮唑盐比色法为指标,观察细胞损伤和药物的改善作用。结果:Aβ42浓度依赖性诱导细胞损伤。组胺在10-7、10-6mol/L浓度时能显著改善Aβ42(5μmol/L)作用24h引起的细胞损伤,10-6mol/L保护作用最大。组胺10-6mol/L的保护作用能被组胺H2受体拮抗剂zolantidine,H3受体拮抗剂clobenpropit所逆转,但不能被H1受体拮抗剂苯海拉明所拮抗。结论:组胺能减弱Aβ42诱发的细胞损伤,可能与组胺H2,H3受体有关。     

米诺环素对大鼠原代神经元和海马脑片缺氧缺糖及NMDA损伤的保护作用

目的:建立神经元和海马脑片缺氧缺糖(OGD)及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)损伤模型,观察抗炎药米诺环素的神经元保护作用及其特点.方法:体外培养大鼠脑皮层神经元,以OGD和NMDA(50 μmol/L)处理,观察损伤前后神经元形态变化,并以MTT检测神经元活性;以透光法检测OGD和NMDA处理引起的大鼠海马脑片透光度(LT)改变;在上述模型中同时观察米诺环素及NMDA受体拮抗剂MK-801的作用.结果:在OGD过程中米诺环素1、10 μmol/L能浓度依赖地提高神经元的活性,改善神经元形态改变;米诺环素10、100 μmol/L对NMDA损伤有保护作用;MK-801 1 μmol/L对两种损伤模型均有保护作用.米诺环素1或10 μmol/L对OGD和NMDA引起的海马脑片LT增加无明显影响;MK-801 1 μmol/L则能显著抑制LT增加.结论:米诺环素对神经元OGD损伤具有保护作用,可能是通过对NMDA受体介导的兴奋性毒性的间接抑制;但对海马脑片OGD和NMDA即刻损伤无保护作用.     

H4受体介导组胺刺激AtT-20细胞分泌ACTH

目的: 阐明介导小鼠垂体前叶瘤细胞株(AtT-20)分泌促肾上腺皮质激素(ACTH)的组胺(HA)受体亚型. 方法: 体外培养AtT-20细胞,ELISA检测各HA受体亚型的激动剂和拮抗剂对AtT-20细胞分泌ACTH的影响;利用RT-PCR方法检测AtT-20细胞中H4受体mRNA的表达. 结果: ① HA (10-8 mol/L)作用于AtT-20细胞6 h,ACTH分泌量(pmol/L)增加 (5.7±1.1),与对照组相比(2.7±0.6)有显著差异(P<0.01); 而组胺H1受体特异性拮抗剂扑尔敏(5.7±0.7)和H2受体特异性拮抗剂雷尼替丁 (5.8±1.0)不能拮抗此效应. ② HA H3和H4受体激动剂R-(α)-甲基组胺(10-7 mol/L)同HA作用相似,能够促进AtT-20细胞分泌ACTH(5.9±1.3). ③ HA H4受体的特异拮抗剂JNJ777120 (1-[(5-Chloro-1H-indol-2-yl)carbonyl]-4-methylpiperazine)能够剂量依赖性拮抗HA促进AtT-20细胞释放ACTH的效应,当浓度为10-5 mol/L时,HA的效应被完全阻断. ④ RT-PCR结果证实,在AtT-20细胞中存在组胺H4受体mRNA的内源性表达. 结论: HA调控AtT-20细胞分泌ACTH的作用由H4受体介导.     

稳定转染H3受体基因的HEK293细胞株的鉴定及新型非咪唑类H3受体拮抗剂的筛选

目的:鉴定转染大鼠组胺H3受体基因的HEK293细胞株受体表达情况,筛选具有H3受体拮抗活性的新型非咪唑类化合物。方法:利用RT-PCR和免疫印迹的方法检测转染细胞株组胺H3受体的表达,以阳性刺激物forskolin诱导细胞内cAMP含量升高为指标,初步筛选具有拮抗作用的化合物。结果:细胞鉴定结果显示,稳定转染H3受体基因的HEK293细胞株高表达大鼠H3受体。H3受体选择性激动剂(R)-α-甲基组胺可浓度依赖性抑制阳性刺激物forskolin(10μmol/L)诱导的cAMP含量升高(P<0.05),当(R)-α-甲基组胺浓度达到30 nmol/L时,抑制率接近平台值(P>0.05)。而H3受体拮抗剂噻普酰胺和新合成的非咪唑类化合物XHA23及XHA25则能够浓度依赖性阻断(R)-α-甲基组胺对forskolin诱导的cAMP含量升高的抑制作用(P<0.05),IC50分别为3.62μmol/L、0.49μmol/L、0.14μmol/L。结论:高表达H3受体的HEK293细胞株可用于有H3受体拮抗活性化合物的筛选,而非咪唑类化合物XHA23和XHA25具有一定的H3受体拮抗剂样活性。     

微孔板神经元NMDA损伤模型的建立及药物神经保护作用评价

[目的]建立96微孔板神经元N-甲基-D-门冬氨酸（NMDA）损伤模型,并评价NMDA受体拮抗剂氯胺酮和抗炎症药米诺环素（minocycline）对神经元NMDA损伤的保护作用。[方法]用96微孔板原代培养的新生大鼠神经元体外培养至第10天（DIV10）时,用不同浓度的NMDA处理不同时间,以形态学和MTT染色为指标观察神经元的损伤情况,并观察氯胺酮和米诺环素对50μmol／L NMDA处理3h造成的皮层神经元急性损伤的作用。[结果]随着NMDA浓度的增加和作用时间的延长,其神经毒性增加。氯胺酮100、10、1μmol／L和minocycline 135、45μmol／L预处理对50μmol／L NMDA处理3h造成的皮层神经元急性损伤有明显的保护作用（P〈0．01）。[结论]96微孔板培养的原代神经元NMDA损伤模型可以用于评价药物对神经元损伤的保护作用。     

塞曲司特对致喘递质诱导的豚鼠气管条和肺条收缩作用的影响

目的:探讨血栓素A2受体拮抗剂塞曲司特对组胺、乙酰胆碱、KCl诱导的豚鼠离体气管条和肺条收缩作用的抑制影响,并与短效β2受体激动剂特布他林比较.方法:用定量药理分析方法测定和记录:①用塞曲司特孵育前后组胺、乙酰胆碱、KCl诱发的豚鼠离体气管条的收缩;②用特布他林孵育前后组胺、乙酰胆碱、KCl诱发的豚鼠离体气管条的收缩;③塞曲司特、特布他林对组胺诱导的豚鼠肺条收缩的影响.结果:①组胺、乙酰胆碱在体外引起了豚鼠离体气管条的浓度依赖性的收缩,pD2分别为(6.19±0.47)和(5.99±0.21),塞曲司特抑制了组胺、乙酰胆碱诱发的收缩,pD2分别为(4.16±0.82)和(3.61±0.57).②对60 mmol/L KCl诱发的气管条收缩,塞曲司特、特布他林均可抑制其最大收缩反应,IC50分别为7.28×10-6 mol/L、3.36×10-6mol/L.③对组胺诱导的肺条收缩,塞曲司特、特布他林均有明显的拮抗作用.结论:塞曲司特对致喘递质诱发的豚鼠离体气管条和肺条收缩有明显的抑制作用,是一种有效的支气管扩张剂.     

白桦脂酸改善氧化应激损伤大鼠血管的内皮依赖性舒张功能

目的:研究白桦脂酸(betulinic acid,BA)舒张血管效应及抗血管氧化应激损伤的血管保护作用,并探讨其内在机制.方法:取胸主动脉进行离体灌流,用累积加药法观察BA对苯肾上腺素(phenylephrine,PE)预收缩的内皮完整血管环和去内皮血管环的舒张作用,并将血管随机分为正常对照组、BA对照组、H2O2组和BA+H2O2组,并在用PE预收缩后,检测血管环对乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)诱导的内皮依赖性舒张反应,血管环张力变化均通过PowerLab生物信号采集系统记录.结果:BA浓度依赖性(10-7 mol/L～10-4 mol/L)舒张PE(10-6 mol/L)预收缩的内皮完整胸主动脉环,pD2值为5.61±0.18,半数有效浓度(EC50)为(2.45×10-6 )mol/L;一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,10-4 mol/L)预处理抑制了该作用,而用吲哚美辛(10-5 mol/L)预处理则无抑制作用.但对PE预收缩的去内皮血管BA无明显舒张作用.H2O2(5×10-4 mol/L)孵育15 min,能降低ACh(10-9 mol/L～10-5 mol/L)诱导的血管舒张作用;EC50的BA孵育30 min,能抑制H2O2氧化应激损伤所致的血管内皮依赖性舒张功能下降.结论:BA具有内皮依赖性舒张血管作用,BA可以减轻H2O2诱导的大鼠胸主动脉内皮依赖性舒张功能降低,这可能与其降低血管内皮氧化应激,维持血管内皮一氧化氮活性有关.     

半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代皮质神经元的作用

目的:观察受体激动剂LTD4对大鼠原代皮质神经元的作用,以及不同拮抗剂对LTD4及缺血性损伤的影响。方法:在大鼠原代培养皮质神经元,以细胞内钙检测、噻唑蓝(MTT)还原反应、碘化吡啶(PI)和Hoechst-33258染色观察神经元损伤;以缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)1.5h和再灌24h诱导神经元损伤。结果:LTD4(0.01~1μmol/L)不能诱导神经元内钙升高,对神经元活性也没有明显的影响。OGD1.5h,再灌24h,可显著降低神经元活性;CysLT1受体拮抗剂普鲁司特(0.2~10μmol/L)和孟鲁司特(0.2~10μmol/L)以及CysLT1/CysLT2受体非选择性拮抗剂BAY u9773(0.02~1μmol/L),对OGD损伤无明显保护作用。结论:半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代神经元及缺血性损伤无明显作用。     

氰戊菊酯的UDS试验结果

UDS试验是检测DNA损伤的短期试验之一.用UDS试验检测三种不同来源的氰戊菊酯,氰戊菊酯№1和№2浓度在5×10~(-8)～10~(-5)mol/L,有或无代谢活化系统时,都无诱发UDS作用.氰戊莉酯№3在不和体外活化系统,浓度为5×10~(-5)mol/L时结果为阳性,并能获得剂量效应关系.加有大鼠肝微粒体制剂时,氰戊菊酯№3浓度在5×10~(-8)～10~(-5)mol/L,无诱发UDS作用.比较三种氰戊菊酯制品的纯度后认为,№3的DNA损伤作用可能是样本中之杂质所引起.     

白介素-6抗N-甲基-D-天门冬氨酸神经毒性作用的研究

目的:利用N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)损伤小脑颗粒神经元的模型,探讨IL-6对神经损伤的保护作用,为临床上应用细胞因子防治脑损伤提供新思路。方法:取出生后8天幼鼠小脑的颗粒神经元做体外培养。用IL-6(10 ng/m l)慢性预处理培养的小脑颗粒神经元,孵育8天后用NMDA(10、100、1000和10000μmol/L)急性刺激小脑颗粒神经元30 m in以造成神经元损伤。用CCK-8试剂盒(Cell Counting K it-8)检测神经元的活性。结果:NMDA能呈浓度依赖性地抑制小脑颗粒神经元的活性。单纯IL-6慢性预处理小脑颗粒神经元,不能改变小脑颗粒神经元的活性。IL-6慢性预处理小脑颗粒神经元可明显改善NMDA对小脑颗粒神经元活性的抑制作用。结论:NMDA对神经元有浓度依赖性的神经毒性作用,IL-6具有抗NMDA神经毒性作用的效应。     

组胺对大鼠脑皮质内血管的作用

目的探讨组胺对大鼠脑片皮质内血管的调控作用和机制。方法免疫组化方法检测H1和H2受体在大鼠脑皮质内血管的表达。采用鉴别干涉对比显微镜观察大鼠脑片额叶皮质血管,实时检测和记录组胺引起的血管内径变化。为观察组胺对脑皮质内血管的收缩作用是否与组胺H1、H2受体有关,用H1受体拮抗剂苯海拉明和H2受体拮抗剂西咪替丁预处理脑片,再观察组胺的作用。结果H1受体和H2受体在脑皮质血管壁呈免疫反应阳性。组胺产生浓度依赖性血管收缩,血管收缩率从(1.48±0.67)%到(32.91±7.91)%。除在高浓度(30、100μmol/L)之间没有显著性差异(P>0.05)外,各浓度间都有显著性差异(P<0.01)。苯海拉明预处理脑片,组胺没有引起血管变化。用西咪替丁预处理脑片,组胺仍引起血管收缩,各浓度组间存在显著性差异(P<0.05)。与单纯加入组胺相比,在10和30μmol/L浓度有显著性差异(P<0.05)。结论组胺可引起脑皮质内血管的收缩,其机制是通过H1受体介导。     

组胺对人角质形成细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的探讨组胺对体外培养人角质形成细胞（HKC）增殖、凋亡和分化的影响及其机制.方法采用MTT法和蓝染色法检测组胺对HKC体外生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡,细胞DNA梯度降解法检测凋亡,激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针技术检测HKC胞内游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）,SABC免疫细胞化学法检测HKC分化标志物角蛋白10（K10）及内披蛋白表达.结果高浓度组胺抑制HKC生长,以10^-4 mol/L抑制率最大（细胞存活率65.6%）;低浓度组胺则促进HKC生长,以10^-8mol/L作用显著（细胞存活率130.7%）.10^-4mol/L组胺致HKCG0/G1期比例增高30.97%,S期比例减少73.81%,抑制G1/S期转换,并明显促进细胞凋亡,早期凋亡率18.64%明显高于对照组（5.60%,P＜0.05）.10^-4mol/L组胺使HKC[Ca^2＋]i上升58.9%,H2组胺受体拮抗剂西咪替丁则使[Ca^2＋]i下降24.5%.10^-4mol/L组胺下调HKC K10及内披蛋白表达,但与对照组无显著性差异（P＞0.05）.结论高浓度组胺阻抑HKC细胞周期进程、诱导[Ca^2＋]i增加及其显著的促凋亡作用可能是使HKC体外生长受抑的部分机制.在生理条件下,组胺可能具有调节表皮组织更新的作用;在炎症、损伤等病理条件下,大量的组胺可能抑制表皮的再生和KC的分化.     

Effects of different subtypes of histamine receptors on proliferation and differentiation of murine colony forming unit granulocyte-macrophage and colony forming unit megakaryocyte.

Ｅｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｓｕｂｔｙｐｅｓｏｆｈｉｓｔａｍｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍｕｒｉｎｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅａｎ...     

组胺对人角质形成细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的 探讨组胺对体外培养人角质形成细胞(HKC)增殖、凋亡和分化的影响及其机制。方法 采用MTT法和蓝染色法检测组胺对HKC体外生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡,细胞DNA梯度降解法检测凋亡,激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针技术检测HKC胞内游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i),SABC免疫细胞化学法检测HKC分化标志物角蛋白10(K10)及内披蛋白表达。结果 高浓度组胺抑制HKC生长,以10^-4mol/L抑制率最大(细胞存活率65.6%);低浓度组胺则促进HKC生长,以10^-8mol/L作用显著(细胞存活率130.7%)。10^-4mol/L组胺致HKCG0/G1期比例增高30.97%,S期比例减少73.81%,抑制G1/S期转换,并明显促进细胞凋亡,早期凋亡率18.64%明显高于对照组(5.60%,P<0.05)。10^-4mol/L组胺使HKC[Ca²⁺]_i上升58.9%,H2组胺受体拮抗剂西咪替丁则使[Ca²⁺]_i下降24.5%。10^-4mol/L组胺下调HKCK10及内披蛋白表达,但与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论 高浓度组胺阻抑HKC细胞周期进程、诱导[Ca²⁺]_i增加及其显著的促凋亡作用可能是使HKC体外生长受抑的部分机制。在生理条件下,组胺可能具有调节表皮组织更新的作用;在炎症、损伤等病理条件下,大量的组胺可能抑制表皮的再生和KC的分化。     

In vitro inhibitory effect of CD_8~ cells from patients with aplastic anemia on normal CFU-GM growth was blocked by cimetidine

ＩｎｖｉｔｒｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆＣＤ＋８ｃｅｌｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｐｌａｓｔｉｃａｎｅｍｉａｏｎｎｏｒｍａｌＣＦＵＧＭｇｒｏｗｔｈｗａｓｂｌｏｃｋｅｄｂｙｃｉｍｅｔｉｄｉｎｅＷａｎｇＭｉｎｇｃｈｕｎ汪明春，ＹａｎｇＬ...     

N-甲基-D-门冬氨酸受体主亚基单克隆抗体抗谷氨酸兴奋毒性的体外实验研究

目的 研究人N一甲基-D-门冬氨酸受体(NMDAR,NR)主亚基(NRl)单克隆抗体mAbN1是否对兴奋毒性脑损害有防护作用。方法 取10只新生大鼠海马神经细胞进行体外原代培养,建立了谷氨酸对培养海马神经细胞兴奋毒性神经损伤模型,观察抗体保护后神经细胞形态,检测细胞存活率(锥虫蓝拒染法)和细胞培养上清乳酸脱氢酶漏出量,每组2个平行皿,实验重复4次。结果经0、3μmoL／LmAbNl预处理后,神经元具有明显抗谷氨酸兴奋毒性损伤能力,存活率提高35％;抗体表位合成肽可以阻断这种保护,提示该抗体的保护功能是特异性的。结论 NRl单克隆抗体mAbNl具有体外抗兴奋毒作用,该研究为兴奋毒性脑损害抗体治疗提供了重要依据。     

The effect of coriaria lactone on NMDA receptor mediated currents in rat hippocampal CA1 neurons

Epileptogenesis of (CL) has been verified bymany studies. We can establish an ideal animalmodel of epilepsy on the basis of these studiesll' ZJ.Homeostasis of cytoplasmic free Ca2 is the basisfor neuron to perform its normal functions. Theabnormal elevation of cytoplasmic free Ca2 is thekey step in the triggering of a series of pathologicalchanges"'. Our past findings showed that CLcould elevate LCa' j, of hippocampal neurons[4].But there was no report about the way thoughwhich CL ele…     

The Effect of Coriaria Lactone on NMDA Receptor Mediated Currents in Rat Hippocampal CAI Neurons

To investigate the exact mechanism of epileptogenesis induced by coriaria lactone (CL), the effect of CL on NMDA receptor mediated current (Iasp) in rat hippocampal CAI neurons was investigated by using nystatin perforated whole-cell patch clamp. 10-6-10-4 mol/L Asp acted on NMDA receptors and elicited an inward current (Iasp) at a holding potential (VH) of -40mV in presence of 10-6 mol/L glycine and absence of Mg2+ extracellularly. CL enhanced NMDA receptor mediated current induced by Asp, but had no effect on threshold concentration, EC50,Hill coefficient as well as maximal-effect concentration and reversal potential of Iasp. The effect had no relationship with holding potential. These results showed that CL could enhance NMDA receptor mediated current to increase [Ca2+]I of neurons by acting on Gly site, thereby inducing epilepsy.