热变性法处理HCVRNA模板直接扩增

采用低浓度２－巯基乙醇作为裂解剂，配合高热变性处理血清等标本中丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶＲＮＡ）模板，将裂解上清直接逆转录，使ＨＣＶＲＮＡ转变为ｃＤＮＡ，再行套式多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增．５８份抗－ＨＣＶ阳性血清标本中，可检出３２份（５５．２％）ＨＣＶＲＮＡ，虽与常规的酸胍酚抽提方法所检出相当（即３０份被检出ＨＣＶＲＮＡ阳性，５１．７％），由于这种直接法省去了用酚及氯仿抽提和醇类沉淀等步骤，具有明显的实用价值。     

逆转录—多聚酶链反应检测丙型肝炎病毒RNA方法的建立及实…

对逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）的方法学进行了探讨，逆转录与多聚酶反应是否在同一反应管内进行，对ＨＣＶＲＮＡ检测结果没有明显影响，但在操作难易程度，ＴａｑＤＮＡ聚合酶的选择等方面有差别，在防止污染的前提下，套式ＰＣＲ可提高ＨＣＶＲＮＡ检出率（７．８３％）这对于极低水平ＨＣＶ感染的诊断十分重要，本文对受检标本的贮存方法也进行了初步探讨。     

荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸

对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８例阴性，阳性率为７４．２％。１０例助血员血样ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，阳性ＰＣＲ产物为ＨＣＶ－ＲＮＡ所特异。作者认为，采用高保守区核苷酸序列引物作套式ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ，可提高实验的敏感性和特异性。     

RT－PCR检测HCV RNA假阳性结果分析

ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ假阳性结果分析宋燕斌，崔晓红，潘卫，王锦红，戚中田丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是新近认识的一种单股正链ＲＮＡ病毒，在感染者外周血中的含量低［１］，目前认为逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ是诊断ＨＣＶ感染的最敏...     

丙型病毒逆转录套式多聚酶链反应检测技术假阳性结果分析

丙型病毒逆转录套式多聚酶链反应检测技术假阳性结果分析高广甫关琦苏英郑州市第六人民医院（４５００５２）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ逆转录套式多聚酶链反应技术（ＨＣＶ—ＲＮＡ—ＲＴ—ｎｅｓｔｅｄ—ＰＣＲ）已成为丙型肝炎，诊断上不可缺少的直接检测ＨＣＶ及观...     

肝癌患者肝组织中丙型肝炎病毒的基因分型

用逆转录－聚合酶链反应检测了４２例肝细胞癌患者肝组织中的丙型肝炎病毒ＲＮＡ，对１８例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用ＨＣＶ非结构区－５（ＮＳ５区）型特异性引物进一步做了ＰＣＲ分型。     

肝癌患者肝组织中丙型肝炎病毒的基因分型

肝癌患者肝组织中丙型肝炎病毒的基因分型［崔晓红等．中华医学杂志，１９９５；７５（２）：９２］用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌患者肝组织中的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，对其中１８例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用ＨＣＶ非结构区－５（Ｎ...     

肝细胞癌和癌旁肝组织中HCVRNA正,负链的检测

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正，负链，结果显示，肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正，负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％，ＨＣＶＲＮＡ的正链和负链在肝癌和癌旁肝组织中，同时阳性的患者分别占４５．２％和３１．０％，血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性埂肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的检出率仍有５１．３％，肝组织ＨＣＶＲＮＡ与乙型肝炎     

丙型肝炎病毒的母婴垂直传播探讨

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）母婴间垂直传播，对６４例抗ＨＣＶ（＋）和／或ＨＣＶＲＮＡ（＋）孕妇分娩的６５例新生儿取出生当时脐静脉血，用ＥＬＩＳＡ检测抗ＨＣＶ，用逆转录ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ。结果：ＨＣＶＲＮＡ（＋）孕妇，无论抗体阳性与否，垂直传播率９３９％，合并ＡＬＴ增高者，新生儿多ＡＬＴ增高。ＨＣＶＲＮＡ（－），抗ＨＣＶ（＋）孕妇，新生儿抗ＨＣＶ检出率１００％，但ＲＮＡ未检出（＋），不能作为感染ＨＣＶ的依据。结论：ＨＣＶ确实存在母婴垂直传播。     

HCV对HBV干扰作用的研究

应用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ技术，分析ＨＣＶ ＲＮＡ阳性及阴性标本的ＨＢＶ ＤＮＡ及ＨＢｓＡｇ的感染状况，以探讨ＨＣＶ对ＨＢＶ的干扰作用。结果发现当ＨＢｓＡｇ阳性时，无论ＨＣＶ ＲＮＡ是否阳性，ＨＢＶ ＤＮＡ的阳性率分别为５３．８５％和５９．０９％无明显差异，（Ｐ〉０．０５）；当ＨＢＶ ＤＮＡ阳性时，两驵ＨＢｓＡｇ的转阴率分别为３３．３３％和２３．５３％，无明显差异，（Ｐ〉０．０５）。实验表明ＨＣＶＣＦ     

武汉地区献血员血清TTV等几种肝炎相关病毒的基因检测

了解武汉地区不同献血员血清ＴＴＶ感染特点及其与其它几种肝炎相关病毒感染之间的关系。方法采用ＰＣＲ及巢式ＰＣＲ对５４例武汉市城区义务献血员及７４例既往乡村献血者分别进行血清ＴＴＶ ＤＮＡ,ＨＣＶ ＲＮＡ及ＨＧＶ ＲＮＡ等检测。结果：ＴＴＶ ＤＮＡ、ＨＣＶ ＲＮＡ及ＨＧＶ ＲＮＡ指标阳性率在既 往乡村个体献血员为４３．２％、２３．０％与２．７％,城区义务献血员为５．６％、１．９％与１．９％,前者ＴＴＶ     

柯萨奇B组病毒逆转录聚合酶链反应检测方法的建立

根据柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）基因组５’非编码区核苷酸序列，选用了一对组特异性引物，用于逆转录聚合酶链反应检测ＣＢＶ－ＲＮＡ。结果显示该法可检出ＣＢＶ１～６型ＲＮＡ，灵敏度为１０ＰＦＵ，不能检出其他病毒ＲＮＡ。采用的碘化钠－异硫氰酸胍－氯仿法提取ＣＢＶ－ＲＮＡ与传统的蛋白酶Ｋ－酚－氯仿法及异硫氰酸胍－酚－氯仿法比较，具有快速、简便、稳定、可靠的特点。应用该法检测ＣＢＶ－５感染鼠外周血ＲＮＡ，第３ｄ即为阳性，提示本法可用于ＣＢＶ感染的早期诊断     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV-RNA检测

目的 :了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞 (PBMC)中HCV RNA存在情况及其意义。方法 :采用套式PCR检测 38例急性丙型肝炎和 36例慢性丙型肝炎患者血清和外周血PBMC中HCV RNA。结果 :74例丙型肝炎患者血清HCV RNA阳性 6 8例 ,PBMC阳性 44例 ;急性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA阳性 15例 (39.5 % ) ,慢性丙型肝炎患者PBMC中阳性 2 9例 (80 .6 % )。慢性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于急性丙型肝炎患者 (P <0 .0 1)。 3例血清HCV RNA阴性 ,而PBMC中HCV RNA均阳性 ;8例患者血清抗 HCV阴性 ,而血清HCV RNA均阳性。结论 :PBMC可能为HCV肝外贮存和复制场所 ,PBMC中的HCV感染在丙型肝炎慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用 ;血清HCV RNA检测有助于抗 HCV阴性丙型肝炎的诊断。     

RT-PCR半定量法检测人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1 mRNA表达

目的 建立一种敏感的检测组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）及其抑制剂（ＰＡＩ－１）基因表达的方法。方法 用异硫氰酶胍一步法提取细胞总ＲＮＡ。用单管ＲＴ＿ＰＣＲ法逆转录－扩增ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ－１和内参照三磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡ，扩增产物经电泳分离后，用凝胶图像分析仪照相和扫描分析，测定各条带分子量和光密度值。结果 ＰＣＲ产物均与预期长度相吻合，且ＰＣＲ产一与扩增初始模板量之间存在良好的     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

2种提取大鼠肝RNA方法的比较

目的建立大鼠肝RNA的提取方法,为逆转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)、Northern blot以及cDNA文库构建等分子生物学实验奠定基础。方法用Trizol法和异硫氰酸胍提取法提取大鼠肝RNA,紫外分光光度计测定RNA产量及纯度,琼脂糖凝胶电泳验证RNA的完整性。结果采用Trizol方法提取的RNA的OD260/OD280比值为2.28,异硫氰酸胍方法提取的RNA OD260/OD280比值为1.74。采用Trizol法提取RNA的产量高于异硫氰酸胍提取法,电泳分析18 s、28 s条带完整。结论Trizol提取的大鼠肝RNA纯度、收率都优于硫氰酸胍方法提取的RNA。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关，而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

套式PCR法检测慢性丙肝患者PBMC及血清中HCV-RNA的意义

目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）内HCV－RNA与血清中HCV－RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR（RT－nested-PCR)对124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV－RNA进行检测。结果 124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者中,PBMC及血清中HCV－RNA阳性率分别为53．23％（66／124）和64．52％（80／124）,经χ^2检验,两者差异无显著性（P＞0．05）。各慢肝组PBMC与血清HCV－RNA阳性率相比,差异均无显著性（P＞0．05）。结论 HCV可隐匿于患者PBMC中;PBMC中HCV－RNA与血清中HCV－RNA似有一致性倾向。PBMC中HCV－RNA检测不仅是对常规血清检测的重要补充,而且是HCV肝外感染的直接证据,是导致丙型病毒性肝炎患者易于慢性化的重要原因之一。