增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达

目的　构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。　方法　据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶切位点。应用PCR技术,从含有 EGFP的 pAdTrack CMV中扩增 EGFP编码基因。通过 TA连接将其克隆入pGEM T easy载体,经PCR及限制性内切酶鉴定后,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,转化Esche richia coli DH5α感受态细胞,于Amp+ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经 Hind Ⅲ和EcoRⅤ双酶切、PCR鉴定,将该载体转染人喉癌细胞 Hep 2 后 48 h观察 EGFP表达情况。　结果　成功构建了含 EGFP 编码基因的真核表达载体pcDNA3.1(+) GFP,并成功转染Hep 2细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。　结论　获得可产生绿色荧光的 EG FP,能方便地用作报告基因和筛选标记。     

滥用维生素D3导致婴幼儿异位钙化44例分析

【目的】 以大剂量维生素D₃造成婴幼儿脏器损害的严重后果警示临床。 【方法】 通过肾脏B超、颅脑CT检查,发现44例婴幼儿大剂量使用维生素D₃2~3年后出现脏器异位钙化。以健康儿为对照组测定了血清β₂微球蛋白。【结果】 肾脏B超钙质沉着症29例(65.91%),颅脑CT异常9例(20.45%),颅脑CT及肾脏B超均有改变6例(13.64%)。血清β₂微球蛋白异位钙化组与对照组比较有统计学意义(t=4.68,P<0.05)。 【结论】 大剂量维生素D制剂可造成婴幼儿脏器异位钙化和持续性肾脏功能损伤,其远期影响尚需观察。临床必须警惕维生素D制剂的滥用。     

DNA分子杂交检测肝癌病人血清及其肝组织中HBVDNA的应用研究

本文采用目前国内较先进的DNA分子杂交技术,使用~(32)P探针检测92例肝癌病人血清、92例对照病人血清及4例肝癌病人肝组织中的HBVDNA,从分子水平来探讨肝炎与肝癌的关系.肝癌病人血清中HBVDNA的检出率为23.91%,对照病人血清仅4.35%,两组比较P<0.01,差异显著.4例肝组织中HBVDNA检出1例.HBVDNA在肝癌病人血清和肝组织中检出,证明HBVDNA已整合于病人肝细胞中,HBV感染作为肝癌病因之一更加明朗.     

人脂肪干细胞表面抗原的研究

脂肪组织中存在一种具有多分化潜能的间充质干细胞,即脂肪干细胞(AD-SCs),可以分化成为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、骨骼肌细胞及神经元细胞等[1-3].但脂肪组织中除ADSC8外,尚有多种细胞,如脂肪细胞、前脂细胞、平滑肌细胞、内皮细胞等,目前尚未有将AD-SCs高纯度分离的方法,均混杂有其他细胞,这是其定向与多向分化能力的鉴定及构建特定组织均质程度的主要干扰因素.我们通过对各代ADSCs细胞表面抗原的检测,观察其表达.     

肝癌高危险人群口服左旋咪唑预防

扶绥县是全国肝癌高发区之一。1978～82年年均标化死亡率为56.53/10万。其中一些肝大、肝病患者和肝癌高发家庭的肝癌发病率更高为331.3/10万。HBsAg携带者为649.35/10万。因此,我们在1976年底开始对上述高危险人群进行药物预防。经过三年的随访观察,发现左旋咪唑有一定的预防效果。于1981年6月开始,在该县八个高发大队(年均死亡率为92.25～103.54/10万)重新设计,再次进行实验研究。现经三年的随访复查,说明左旋咪唑确有降低肝癌发病率的作用。     

肝癌高危险人群口服左旋咪唑预防肝癌的实验研究

本文报道扶绥县肝癌高发区高危险人群口服左旋咪唑预防肝癌的第二次实验研究结果。实验组1657人,口服左旋咪唑,连服三年;对照组1151人,口服安慰剂,服法与实验组完全相同。三年效果观察发现:肝癌发生率在实验组为2.41‰,对照组则高达16.51‰,为实验组的6.85倍。表明左旋咪唑有降低肝癌发生率的作用。     

北京市场主要食品铅含量的调查

目的 为了预防铅中毒，我们对北京市部分食品的铅含量进行了测定。方法 样品采自北京市超市、国营商场或个体市场供应的食品。铅的测定方法采用美国TJA公司生产的LILS．等离子光谱议测定。结果 本次共采集了八大类及其它食品样品共计134种。经测试铅含量均在国家食品卫生标准范围内。无公害蔬菜铅含量显著低于普通蔬菜(t=6．27，P＜0．001)，超市或商场销售的禽畜肉蛋鱼虾类的铅含量较个体市场的铅含量低，二组比较有显著性差异(t=4．43，P＜0．001)。结论 根据我们本次对北京市部分市售食品中铅含量的测定结果，铅含量均未超标。无公害蔬菜中铅含量较普通蔬菜铅含量更低。在商场和超市购买的禽畜肉蛋鱼虾类的铅含量较个体市场的铅含量要低。建议居民购买食品要去商场或超市，其铅含量低，有利于健康。     

用RT—PCR法分析合肥地区HCV基因型

应用逆转录－ＤＮＡ聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），对合肥地区的１９５例病人的血清进行了ＨＣＶＲＮＡ检测及基因型分析。结果显示，８０例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本中，７０例（８７．５％）为Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ感染，７例（８．８％）为Ⅲ／２ａ型，３例（３．７％）为Ⅱ和Ⅲ型混合感染，未发现Ⅰ／１ａ和Ⅳ／２ｂ型ＨＣＶ感染。     

真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法

目的 真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,SV)融合蛋白(fusion protein,),并完成蛋白纯化及纯度测定.方法 根据编码F蛋白的基因序列设计引物,CR方法扩增出3'端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1( )真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,2 h后再用Westem blot检测目的蛋白的表达.Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度.结果 核酸序列分析证实获得带His标签的RSV F基因序列,没有发生无义突变.转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上.结论 初步建立了真核表达RSV F蛋白的纯化方法,为进一步优化RSV F蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础.