氨磷汀对苯诱发小鼠再生障碍性贫血的保护作用

目的探讨建立苯诱发小鼠再生障碍性贫血（再障）模型的方法,观察苯诱发再障的病理改变。方法建立苯诱发小鼠再障模型。（1）于雄性CD1小鼠每周三次注射苯＋玉米油混合液,按给苯剂量不同分为四组：B1组（0．5ml／kg）、B2组（1．0ml／kg）、B3组（1．5ml／kg）、B4组（2．0ml／kg）,以单纯注射玉米油组（A组）为对照组;氨磷汀干预组（C组）,每次给苯半小时前,腹腔注射氨磷汀（200mg／kg）;各组均以玉米油补足4ml／kg;各实验组分别于给苯前及给苯10、15、20、25次两天后,称重动物,观察小鼠一般情况,外周血细胞计数和白细胞分类计数,尸检后取一根胫骨、肝和脾（并称重）,进行组织病理学观察以及PCNA、TUNEL检测。结果（1）与对照组相比,各造模组小鼠均有部分指标改变,但仅有B4组在给苯25次后全部指标与对照组相比有显著性差异。各造模组小鼠外周血细胞计数随给苯剂量及次数增加表现出不同程度的下降趋势;B4组体重和脾体比值分别比对照组A下降18．51％、63．86％（P〈0．01）,白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板和网织红细胞绝对值分别下降74．97％（P〈0．01）、41．66％（P〈0．01）、30．96％（P〈0．01）、24．77％（P〈0．05）和41．47％（P〈0．05）（P〈0．01）;部分骨髓涂片出现油滴,骨髓细胞形态学和组织病理学观察均显示造血细胞减少,非造血细胞增加,肝、脾出现再障的病理改变;（2）氨磷汀干预组与再障组相比,小鼠一般情况、肝脾和骨髓的病理变化等各项指标均有明显改善,PC,NA、TUNEL检测在对照组、再障组和干预组之间结果有显著性差异。结论于CD1小鼠每周3次皮下注射2ml／kg体重的苯,共25次,建立了苯诱发小鼠再生障碍性贫血模型的实验方案;氨磷汀在体内对苯引起的再障具有一定的保护作用。     

苯与环磷酰胺联合建立小鼠再障模型的实验研究

目的探讨苯和环磷酰胺联合建立小鼠再生障碍性贫血模型的方法。方法按2.0mL/kg于昆明种雄性小鼠皮下注射苯油混合液,每天1次,隔日给药;并以环磷酰胺溶液（50mg/kg）腹腔注射,每日1次共7次。于给药前及后观察小鼠大体状况,外周血和骨髓液中细胞形态及数量变化,并进行小鼠肝、脾、胫骨的组织病理学观察。结果与对照组相比该方法诱导的小鼠外周血白细胞,红细胞,血小板,网织红细胞及骨髓有核细胞计数均显著减少,分别下降42.4%（P〈0.O1）,18.4%（P〈0.05）,15.4%（P〈0.05）,23.5%（P〈0.05）,24.4%（P〈0.05）,骨髓象及骨髓病理观察显示骨髓正常造血细胞减少,脂肪细胞等非造血细胞增加,综合以上结果提示本实验利用苯和环磷酰胺联合建立小鼠再障模型成功。结论利用苯与环磷酰胺联合诱导小鼠造血功能障碍结果稳定,发生率高,方法简单易行,各项指标与人的再生障碍性贫血相似,初步建立了苯与环磷酰胺诱发的小鼠再生障碍性贫血模型的实验方案。     

苯诱发小鼠再生障碍性贫血模型建立的初步探讨

目的:通过探讨不同给苯剂量、苯作用时间的小鼠反应,筛选建立苯诱发小鼠再生障碍性贫血模型的方法.方法:予雄性CD1小鼠每周三次皮下注射"苯 玉米油"混合液,按给苯剂量不同分为四组:B1组(0.5 ml/kg)、B2组(1.0 ml/kg)、B3组(1.5 ml/kg)、B4组(2.0 ml/kg),以单纯注射玉米油组(A组)为对照,观察小鼠一般状况、血象、骨髓象、骨髓有核细胞计数,并进行肝、脾和胫骨的组织病理学观察.结果:与对照组相比,B4组在给苯25次后体重和脾脏指数分别下降18.51%和63.86%(P＜0.01),白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板、网织红细胞绝对值和骨髓有核细胞计数分别下降74.97%(P＜0.01)、41.66%(P＜0.01)、30.96%(P＜0.01)、24.77%(P＜0.05)、41.47%(P＜0.05)和61.61%(P＜0.01),骨髓涂片检查和病理形态学观察均显示造血细胞减少、脂肪细胞和淋巴细胞等非造血细胞增加;综合以上结果提示本实验中苯诱发再障模型建立成功.结论:予CD1小鼠每周三次皮下注射2ml/kg体重的苯,累计给苯25次,共50ml/kg,初步建立了苯诱发小鼠再生障碍性贫血模型的实验方案.     

苯、X射线、环磷酰胺联合复制小鼠再障模型实验研究

目的:探讨以苯、X射线、环磷酰胺联合应用的方法建立小鼠再生障碍性贫血动物模型.方法:BALB/c小鼠,采用皮下注射苯油混合液,苯剂量为1 mL/kg,注射总剂量以玉米油补足至4 mL/kg,隔日注射,共8次.第2天X射线2.0 Gy照射后,于试验第6天环磷酰胺80 mg/kg腹腔注射.观察试验小鼠的血象、骨髓象、造血细胞内的线粒体、造血干细胞集落形成及肝脏、脾脏的病理变化;TUNEL及免疫组化法检测小鼠造血细胞凋亡以及相关调控蛋白Fas与Caspase-3的表达.结果:与对照组相比,再障模型组小鼠外周血象三系细胞均有显著降低;骨髓有核细胞数显著降低;造血干细胞集落的形成减低;同类造血细胞内线粒体数目明显减少;促红细胞生成素(EPO)含量升高;骨髓造血细胞凋亡率明显升高;肝脾出现再障的病理改变.结论:采用苯、X射线、环磷酰胺联合应用的方法建立的再生障碍性贫血小鼠模型,外周血和骨髓的病理变化持续、稳定,符合再生障碍性贫血的临床表现,方法简单易行,发生率高,适合于实验血液学研究.     

补肾生血方剂对苯诱发再生障碍性贫血小鼠造血及免疫功能调节的研究

目的：通过观察补肾生血方剂对苯诱发再生障碍性贫血模型小鼠免疫及造血功能的影响,初步探讨中药的调节机制。方法：将清洁级Balb/c小鼠60只随机分为正常对照组、再障模型组和补肾生血方剂治疗组3组各20只;对照组注射玉米油4ml/kg;模型组和治疗组注射苯油混合液（苯剂量为1ml/kg体重）,连注14天;然后治疗组小鼠按临床等效剂量的5倍灌胃给以相当于生药量为5.92g/（kg·d）的补肾生血方药,连续4周。结果：（1）模型组和治疗组小鼠体重及脾指数和胸腺指数较对照组均下降,差异有统计学意义（P〈0.01）;而治疗组小鼠胸腺指数和脾指数明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0.01）。（2）模型组和治疗组小鼠外周血WBC、RBC、Hb、PLT的水平较对照组均明显下降,差异有统计学意义（P〈0.01）,且以模型组最明显;而治疗组与模型组比较,除RBC外,余3项指标均高,差异有统计学意义（P〈0.01）。（3）模型组和治疗组骨髓组织较对照组均有不同程度的病理改变,且以模型组最明显,而治疗组的病理变化较模型组轻微。（4）模型组和治疗组小鼠血清sIL-2含量较对照组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01）;而TNF-α含量略升高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。治疗组sIL-2含量低于模型组,差异有统计学意义（P〈0.01）;但TNF-α含量较模型组无统计学差异（P〉0.05）。结论：补肾生血方剂能明显改善苯诱发再障小鼠模型的骨髓造血功能,并可有效调节血清TNF-α、sIL-2的水平,部分纠正了模型小鼠免疫功能的紊乱。     

参芪扶正注射液对再生障碍性贫血小鼠脾脏T-bet表达的影响

目的观察参芪扶正注射液对再生障碍性贫血(以下简称再障)小鼠的疗效及其对Th1细胞转录因子T-bet的影响,探讨参芪扶正注射液在再障治疗中的免疫调节作用。方法将小鼠随机分成正常组、模型组及用药组,用药组给予参芪扶正注射液腹腔注射治疗,正常组及模型组给予生理盐水对照治疗,治疗第11天观察外周血、骨髓象及T-bet蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠外周血象计数、骨髓造血细胞明显降低,T-bet蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,用药组小鼠外周血象计数、骨髓造血细胞明显升高,T-bet表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪扶正注射液能改善贫血症状,降低再障小鼠脾脏组织中转录因子T-bet的表达水平,逆转Th1型反应,调节免疫异常。     

参芪扶正注射液对化疗后小鼠造血功能影响的实验研究

目的 探讨参芪扶正注射液对化疗后小鼠造血功能的影响.方法 用5-氟尿嘧啶（5-FU）225 mg/kg腹腔注射复制骨髓抑制动物模型,治疗组给予参芪扶正注射液5 ml/kg,对照组给予同剂量生理盐水.治疗1周后,做血细胞计数、各系造血祖细胞集落（CFU-GM、CFU-E、CFU-MK）培养和骨髓病理检查.结果 参芪扶正注射液能升高外周血细胞计数：治疗组小鼠外周血的红细胞、白细胞和血小板计数均高于对照组（P〈0.05）.促进造血祖细胞增殖：治疗组小鼠的CFU-GM、CFU-E、CFU-MK集落数均大于对照组（P〈0.05）.改善骨髓抑制：骨髓病理检查对照组出现大片空白区,造血细胞稀少,而治疗组造血组织结构较完整,造血细胞量丰富.结论 化疗后小鼠在骨髓抑制、造血功能低下时,参芪扶正注射液能通过促进骨髓各系造血祖细胞的增殖,改善骨髓造血组织增生,从而促进血细胞的生成.     

扶正养营颗粒对免疫介导再障小鼠造血细胞凋亡以及相关调控蛋白表达的影响

目的探讨扶正养营颗粒对免疫介导再障小鼠的作用机制.方法BALB/c小鼠40只随机分为正常组、模型对照组、环孢霉素A对照组、扶正养营汤实验组,复制免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型,用TUNEL及免疫组化法检测各组小鼠造血细胞凋亡以及相关调控蛋白Fas与Caspase-3的表达.结果与正常组比较,模型组小鼠骨髓造血细胞凋亡率明显升高,Fas与Caspase-3蛋白表达明显升高,差异有显著性(P＜0.05);与模型组比较,环孢霉素A组、扶正养营颗粒组小鼠骨髓造血细胞凋亡率明显降低,Fas、Caspase-3蛋白表达明显减少,差异有显著性(P＜o.05).结论扶正养营汤可能通过下调Fas及Caspase-3基因蛋白的表达,延缓造血细胞凋亡,发挥其治疗再障的作用.     

骨髓抑制-再生小鼠模型的建立及组织学改变的动态观察

目的 动态观察骨髓抑制-再生模型小鼠的骨髓组织形态学变化并探讨其应用价值.方法 经尾静脉注射肿瘤化疗药物5一氟脲嘧啶（5-Fu）（250 mg/kg）诱导建立骨髓抑制-再生小鼠模型.分别于5-Fu注射前（对照组,n=6）及注射后第3、7、11、14天（模型3 d、7 d、11 d、14 d组,n=6）时,采集血样后分批处死小鼠,截取大腿骨,获取骨髓,一侧制备HE染色骨髓石蜡切片.动态观察骨髓抑制一再生过程中骨髓组织形态学变化特征.结果 对照组小鼠大腿骨髓腔充满大量单核细胞和红细胞,巨核细胞则散布于单核细胞和红细胞之间.在模型3 d组,单核细胞、红细胞和巨核细胞数量急剧减少;模型7 d组,上述细胞数量减少至最低.随后小鼠骨髓开始再生,模型11 d组可观察到骨髓腔内形成一种特征性区域性细胞分布,即骨髓腔下段大量红细胞集聚,中、上段则分别大量集聚单核细胞和巨核细胞;这种特征性细胞分布在模型14 d组开始消失.结论 在5-Fu诱发的小鼠骨髓抑制-再生过程中存在一种特征性细胞再聚集和再分散行为.     

吡非尼酮联合PD-L1抑制剂抑制小鼠异位膀胱肿瘤的生长

目的 通过小鼠肿瘤模型观察吡非尼酮（PFD）联合程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抑制剂对膀胱癌的疗效及对免疫微环境的调控作用。方法 构建C57BL/6小鼠异位膀胱肿瘤模型共40只,根据不同处理随机分为4组（10只/组）：对照组、PD-L1抑制剂组、PFD组、联合治疗组。对照组：建立肿瘤模型正常饮食;PD-L1抑制剂组：建模后腹腔每3 d按12.5 mg/kg注射PD-L1抑制剂;PFD组：建模后每天按500 mg/kg口服PFD;联合治疗组：建模后PFD及PD-L1抑制剂按上述剂量联合应用。对比各组小鼠生存率和肿瘤生长速度,药物干预21 d后留取肿瘤组织及小鼠血清,免疫组化检测肿瘤组织中CD3、CD8、CD45、E-cadherin及N-cadherin的表达;免疫荧光观察骨髓来源抑制细胞（MDSCs）表达;生化分析小鼠血液中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、血尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）及乳酸脱氢酶（LDH-L）的水平。结果 与对照组相比,PD-L1抑制剂组和PFD组小鼠肿瘤相对生长速率及21 d肿瘤体积均减小（P<0.05）,联合治疗组小鼠更加显著（P<...     

Panaxdiol Saponins Component Promotes Hematopoiesis and Modulates T Lymphocyte Dysregulation in Aplastic Anemia Model Mice

Objective: To investigate the potential efficacy of panaxadiol saponins component (PDS-C) in the treatment of aplastic anemia (AA) model mice. Methods: Totally 70 mice were divided into 7 groups as follows: normal, model, low-, medium-, high-dose PDS-C (20, 40, 80 mg/kg, namely L-, M-, H-PDS-C), cyclosporine (40 mg/kg), and andriol (25 mg/kg) groups, respectively. An immune-mediated AA mouse model was established in BALB/c mice by exposing to 5.0 Gy total body irradiation at 1.0 Gy/min, and injecting with lymphocytes from DBA mice. On day 4 after establishment of AA model, all drugs were intragastrically administered daily for 15 days, respectively, while the mice in the normal and model groups were administered with saline solution. After treatment, the peripheral blood counts, bone marrow pathological examination, colony forming assay of bone marrow culture, T lymphocyte subpopulation analysis, as well as T-bet, GATA-3 and FoxP3 proteins were detected by flow cytometry and Western blot. Results: The peripheral blood of white blood cell (WBC), platelet, neutrophil counts and hemoglobin (Hb) concentration were significantly decreased in the model group compared with the normal group (all P<0.01). In response to 3 dose PDS-C treatment, the WBC, platelet, neutrophil counts were significantly increased at a dose-dependent manner compared with the model group (all P<0.01). The myelosuppression status of AA was significantly reduced in M-, H-PDS-C groups, and hematopoietic cell quantity of bone marrow was more abundant than the model group. The colony numbers of myeloid, erythroid and megakaryocytic progenitor cells in the model group were less than those of the normal mice in bone marrow culture, while, PDS-C therapy enhanced proliferation of hematopoietic progenitor cells by significantly increasing colony numbers (all P<0.01). Furthermore, PDS-C therapy increased peripheral blood CD3+ and CD3+CD4+ cells and reduced CD3+CD8+ cells (P<0.05 or P<0.01). Meanwhile, PDS-C treatment at medium- and high doses groups also increased CD4+CD25+FoxP3+ cells, downregulated T-bet protein expression, and upregulated GATA-3 and FoxP3 protein expressions in spleen cells (P<0.05). Conclusion: PDS-C possesses dual activities, promoting proliferation hematopoietic progenitor cells and modulating T lymphocyte immune functions in the treatment of AA model mice.     

骨髓间充质干细胞治疗再生障碍性贫血的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）治疗再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）模型鼠的可行性。方法建立免疫介导AA小鼠模型。输入体外增殖培养的BALB/c小鼠骨髓MSC,作为MSC组,15只;用未治疗的AA模型小鼠作为第一对照组（模型组）,15只;正常BALB/c小鼠作为第二对照组（正常组）,10只。把MSC输注到实验组小鼠体内,分别于第1周、第2周、第3周、第4周观察各组小鼠的存活率、血常规、骨髓形态学变化等各项指标。结果模型组小鼠,3只于第2周内死亡,7只于第3周内死亡,2只于第4周内死亡,28d存活率20.0%;MSC组,4只于第3周内死亡,28d存活率73.3%,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。AA小鼠模型组与MSC组在8d时外周血象明显下降,14d时模型组外周血象仍明显降低,而MSC组开始回升,至28d血象基本恢复正常。骨髓行形态学检查显示模型组骨髓增生明显减低,有核细胞数明显减少,由大量脂肪细胞填充骨髓,而MSC组骨髓增生活跃,脂肪细胞较少。结论骨髓间充质干细胞可以提高再生障碍性贫血小鼠存活率,改善骨髓造血功能,对再生障碍性贫血模型鼠有治疗作用。     

四乙酸铅对小鼠骨髓细胞染色体的损伤作用

目的：为探讨四乙酸铅染毒对细胞内染色体的损伤作用。方法：本试验用四乙酸铅12．5mg／kg、25mg／kg、50mg／kg对小鼠经腹腔注射进行染毒，用生理盐水作对照，每天1次，连续6天，第7天处死染毒小鼠。取小鼠骨髓细胞，对骨髓细胞DNA受损情况进行分析。结果显示，骨髓细胞DNA受损率随四乙酸铅浓度增高而升高，随着四乙酸铅浓度增高骨髓细胞DNA受损情况加重，该结果表明，四乙酸铅对小鼠的骨髓细胞有很强的遗传毒性。     

红斑汤对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠外周血细胞及骨髓细胞CD34、CD45表达的影响

目的：探讨红斑汤对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠外周血及骨髓细胞CD34、CD45表达的影响。方法：除正常组外,其余各组给以环磷酰胺25 mg·kg^-1,隔日1次,腹腔注射2次即可造成骨髓抑制模型,正常组以生理盐水代替。观察红斑汤对小鼠外周血细胞及骨髓细胞CD34、CD45的影响。结果：与正常组相比,模型组小鼠外周血白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板及骨髓细胞CD34、CD45均可见降低,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;红斑汤组及鲨肝醇组小鼠外周血中白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,可以认为红斑汤组与鲨肝醇组,具有促进骨髓抑制小鼠白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板的恢复,且鲨肝醇组疗效不显著优于红斑汤组（P〉0.05）;红斑汤组和鲨肝醇组骨髓细胞CD34、CD45及CD34、CD45的双阳性率也明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）,说明红斑汤组和模型组均能促进骨髓细胞CD34、CD45的恢复,且鲨肝醇组不优于模型组（P〉0.05）。结论：红斑汤具有升高骨髓抑制小鼠外周血中白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板及骨髓细胞CD34、CD45;具有改善环磷酰胺对小鼠骨髓抑制的作用。     

小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立

目的：建立一个德定可靠的异基因骨髓移植（allogeneic bone marrow transplantation,Allo-BMT）急性移植物抗宿主病（acute graft-vetsus-host disease,aGVHD）动物模型,为Allo-BMT中aGVHD研究提供理想的实验平台。方法：以雄性C57BL／6（H-2b）为供鼠,雌性BALB／C（H-2d）为受鼠,受鼠致死性全身照射（total body irradiation,TBI）（8.0Gy）预处理后,在移植物中混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞以引起不同程度的aGVHD。根据存活期、外周血白细胞计数、临床表现及病理检查等判断aGVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现aGVHD,75％的小鼠长期存活（〉30d）。混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞的Allo-BMT小鼠出现aGVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合组小鼠,均可在相对集中的时间内（8-15d）观察到典型的aGVHD临床和病理改变。结论：建立Allo-BMT aGVHD模型需要加入一定比例的脾细胞,供鼠骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合进行的Allo-BMT,可作为理想的aGVHD动物模型。     

龙丹生血颗粒对免疫性血小板减少性紫癜模型小鼠外周血象与骨髓巨核细胞以及血清PAIgG水平的影响

目的 观察龙丹生血颗粒对ITP模型小鼠骨髓巨核细胞和血清PAIgG的影响.方法 70只Balb/c小鼠随机分为对照、模型、升血小板胶囊、泼尼松、龙丹生血颗粒大、中、小剂量7组,除正常组外,其余各组隔日1次腹腔注射豚鼠抗小鼠血小板血清（GP-APS）建立ITP小鼠模型,于造模第8天开始给药,各组均按0.2ml/（10g·d）体积灌胃.其中,正常组、模型组灌服生理盐水,升血小板胶囊组灌胃升血小板胶囊内容物混悬液1.125g/kg,泼尼松按0.0113mg/（10g·d）灌胃,龙丹生血颗粒大、中、小剂量组分别按13.75g生药/千克、6.88g生药/千克、3.44g生药/千克灌胃.连续8天后眼球取血分离血清,进行血液学、血清PAIgG检测,并观察小鼠骨髓巨核细胞形态及分类.结果 与正常组相比,模型组小鼠PLT、WBC、Hb降低,血清PAIgG明显升高,骨髓产板巨核细胞数减低.与模型组相比,龙丹生血颗粒各剂量组小鼠外周血PLT、WBC、Hb数值均有所恢复.大剂量组产板巨核细胞明显增加,PAIgG有所降低.结论 龙丹生血颗粒通过降低血清PAIgG水平、促进骨髓巨核细胞分化而提升ITP模型动物外周血小板数值.     

补心方剂治疗致死量60Coγ射线致小鼠贫血模型的作用研究

目的：观察小鼠灌服补心方剂后对抗致死量60Coγ射线辐射的能力;方法：将BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、干细胞移植组、炙甘草汤组、天王补心丹组、当归补血汤组、参附汤组,每组25只。每组有10只用于观察死亡率,另15只用于检测血象及有核细胞数。结果：5天后模型组死亡率最高,参附汤组死亡率最低。小鼠外周血WBC、PLT、骨髓有核细胞数辐射后数量均降低,与正常对照组比较均有显著差异（P〈0.05）。结论：在对抗致死量60Coγ射线辐射后小鼠的死亡威胁中,以参附汤作用最佳。在改善血象及骨髓有核细胞数方面补心方剂均有一定的作用。