乙型肝炎病毒X基因对大鼠肾小球系膜细胞增殖和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的蛋白HBx对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞增殖的影响.方法 扩增HBV X基因,与pCI-neo载体连接,构建pCI-neo-X真核表达载体.采用脂质体法将其转染大鼠GMC,用Western blot法检测HBx的表达;以半定量RT-PCR测定体外培养大鼠GMC TNF-α mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液中TNF-α的含量;MTT法测定细胞增殖.结果 HBx在转染pCI-neo-X的GMC中表达, 转染后36、48 h HBx表达明显.转染pCI-neo-X组GMC TNF-α mRNA的表达明显高于未转染和空载体转染组.细胞转染pCI-neo-X后培养36、48 h,上清液中TNF-α浓度分别为(185.3±70.7)、(140.3 ±42.1) pg/ml,而未转染组分别为(41.7±10.3)、(43.7±10.6)pg/ml,空载体转染组分别为(44.l±10.1)、(33.3±8.6)pg/ml,均明显低于转染pCI-neo-X组(均P<0.05).转染pCI-neo-X后可诱导GMC出现增生反应,且在转染后36、48 h最明显,与未转染和空载体转染组差异均有显著性意义(P<0.05).结论 HBx可诱导大鼠GMC增生,并在基因和蛋白水平上调GMC TNF-α表达. HBx对GMC的增殖作用可能与其诱导TNF-α的高表达有关.     

乙型肝炎病毒X基因转染大鼠系膜细胞对细胞增殖及IL-1β,IL-6表达的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的蛋白(HBx)对体外培养的大鼠系膜细胞表达白细胞介素(1L)-1β、IL-6及细胞增殖的影响.方法 将HBV X基因扩增,与PCI-neo载体连接,构成PCI-neo-X真核表达载体.采用脂质体法将PCI-neo-X转染给大鼠系膜细胞,Western blot测定HBx的表达;以半定量反转录PCR测定体外培养大鼠系膜细胞IL-1βmRNA、IL-6mRNA袁达;MTT法测定细胞增殖.结果 转染PCI-neo-X的系膜细胞,HBx在36和48 h表达明显.同时IL-1βmRNA、IL-6mRNA表达量较未转染和转染空载体者明显增高.细胞增殖在36和48 h最明显,与未转染和转染空载体组有显著差异.结论 HBx可诱导大鼠系膜细胞高表达IL-1βmRNA和IL-6mRNA,促进系膜细胞增殖.HBx对系膜细胞的增殖作用可能与IL-1β、IL-6的高表达有关.     

乙型肝炎病毒X基因转染大鼠系膜细胞对细胞增殖及白细胞介素-1β、6表达的影响

[摘要] 目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV） X基因表达的蛋白（HBx）对体外培养的大鼠系膜细胞表达白细胞介素（IL）-1β、IL-6及细胞增殖的影响。方法 将HBV X基因扩增,与PCI-neo载体连接,构成PCI-neo-X真核表达载体。采用脂质体法将PCI-neo-X转染给大鼠系膜细胞,Western blot测定HBx的表达;以半定量反转录PCR测定体外培养大鼠系膜细胞IL-1βmRNA、IL-6mRNA表达; MTT法测定细胞增殖。结果 转染PCI-neo-X的系膜细胞,HBx在36～48小时表达明显。同时IL-1βmRNA、IL-6mRNA表达量较未转染和转染空载体者明显增高。细胞增殖在36和48小时最明显,与未转染和转染空载体组有显著差异。结论 HBx可诱导大鼠系膜细胞高表达IL-1βmRNA和IL-6mRNA,促进系膜细胞增殖。HBx对系膜细胞的增殖作用可能与IL-1β、IL-6的高表达有关。     

Y-box结合蛋白-1促进大鼠系膜细胞增生及TGF-β1分泌

目的:观察Y-box结合蛋白-1(Y-box binding protein 1,YB-1)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增生及分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1),构建YB-1真核表达载体,转染系膜细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及细胞计数法检测大鼠MC过表达YB-1后的增生情况,双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1分泌,real-time PCR法测定细胞TGF-β1基因相对表达量?结果:YB-1过表达后MC增生和TGF-β1基因表达增加,同时MC分泌TGF-β1增加?结论:YB-1能促进MC增生及TGF-β1分泌增加?     

曲格列酮对肿瘤坏死因子α诱导肾小球系膜细胞的作用及其机制

目的：探讨曲格列酮对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小球系膜细胞增殖的影响及机制。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为空白组,TNF-α组、TNF-α+曲格列酮组,MTT法检测各组系膜细胞的增殖情况,ELISA法测定各组系膜细胞上清液中细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达,免疫组化法测定各组系膜细胞核因子κB (NF-κB)的表达情况。结果 TNFα组肾小球系膜细胞6 h、12 h、24 h和48 h增殖的OD值分别为(0.198±0.025)、(0.241±0.028)、(0.286±0.030)、(0.267±0.042),空白组分别为(0.159±0.021)、(0.161±0.019)、(0.164±0.023)、(0.170±0.020),TTNF-α+曲格列酮组分别为(0.187±0.023)、(0.184±0.017)、(0.172±0.018)、(0.168±0.026),TNF-α组肾小球系膜细胞增殖的OD值明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率为(62.34±10.26)%,空白组为(29.97±4.88)%,TNF-α+曲格列酮组为(45.67±8.36)%,TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率明显高于空白组,而TNF-α+曲格列酮组则明显低于TNF a组,高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度为(967.8±77.4) pg/mL,空白组为(571.2±69.6) pg/mL,TNFα+曲格列酮组为(787.5±81.2) pg/mL,TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,但仍高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α能够促进肾小球系膜细胞增殖,促进NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达,曲格列酮能够抑制肾小球系膜细胞增殖,降低NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达。     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6 mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

祛风通络方对高糖诱导人肾小球系膜细胞炎性反应的影响机制研究

目的 观察祛风通络方对高糖诱导人肾小球系膜细胞炎性反应的影响.方法 体外培养人肾小球系膜细胞株并采用25.0 mmol/L高糖DMEM诱导其增殖,设立正常组、模型组、抑制剂组、祛风通络组,ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1的表达水平,real-time PCR法测定白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、相对分子量为38×103的促分裂素原活化蛋白激酶(p38 MAPK)mRNA的表达,Western blot法检测ICAM-1、MCP-1、p38 MAPK的表达.结果 与正常组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1水平增加(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1、ICAM-1、MCP-1、p38 MAPK mRNA相对表达水平升高(P<0.05),p38 MAPK、ICAM-1、MCP-1的相对表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,祛风通络组IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1水平下降(P<0.05),IL-1β、TNF-α、TGF-β1、ICAM-1、MCP-1、p38 MAPK mRNA相对表达水平降低(P<0.05),MCP-1的相对表达水平降低(P<0.05).与抑制剂组比较,祛风通络组p38 MAPK、IL-1β、IL-6、TGF-β1 mRNA相对表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)结论祛风通络方可以明显改善高糖诱导人肾小球系膜细胞的炎性反应,减少IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1、MCP-1、ICAM-1的表达,这一过程可能是通过p38 MAPK信号通路实现的.     

IL-6通过调控JAK2/STAT3信号通路减轻急性肺损伤的机制研究

目的探讨IL-6通过调控酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）/信号传导与转录激活因子3（STAT3）信号通路减轻急性肺损伤（ALI）的机制。方法将人肺癌细胞A549细胞分为空白对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+IL-6过表达组、LPS+IL-6干扰组、LPS+空载组。空白对照组细胞正常培养,LPS组LPS处理细胞,LPS+IL-6过表达组LPS处理细胞后转染IL-6过表达质粒,LPS+IL-6干扰组LPS处理细胞后转染IL-6干扰质粒,LPS+空载组LPS处理细胞后转染空载质粒。采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧（ROS）水平,试剂盒检测丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平,ELISA法检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平,qRT-PCR法检测IL-6、JAK2、STAT3mRNA表达水平,Westernblot法检测磷酸化JAK2（p-JAK2）/JAK2、磷酸化STAT3（p-STAT3）/STAT3蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,过表达IL-6可增加LPS诱导的ALI细胞凋亡率、ROS、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,JAK2、STAT3mRNA表达水平,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平,降低细胞增殖率和SOD水平;干扰IL-6则相反。结论IL-6可通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,降低氧化应激和炎症反应,从而减轻ALI。     

BMP-7保护多聚IgA对系膜细胞的损伤作用

目的 BMP-7是否具有保护多聚IgA对系膜细胞的损伤作用.方法 原代培养获得人肾系膜细胞,传至第3代用于本实验.采用不同浓度的BMP-7(125、250、500、1 000ng/L)作用于0.5mg/mL多聚IgA预处理的系膜细胞体外培养体系中,于48h后MTT法测定系膜细胞增殖活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)的方法测定细胞AngⅡ、TGF-β1,TNF-α、IL-6表达.结果 BMP-7明显抑制多聚IgA致系膜细胞的增殖、下调细胞AngⅡ、TGF-β1,TNF-α及IL-6的表达(P<0.01),作用呈剂量依赖性.结论 BMP-7可有效保护多聚IgA对系膜细胞的损伤作用,该作用与下调细胞分泌炎性/纤维化因子有关.     

Akt1/p27kip1途径介导脂氧素A4抑制TNF-α所致的系膜细胞增殖

目的：研究脂氧素A4(LXA4)是否抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所致的肾小球系膜细胞增殖，并探讨LXA4作用的信号转导机制。方法：用不同浓度的脂氧素A4预外理培养的大鼠肾小球系膜细胞，再加入TNF-α(10ng／m1)共同孵育；或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；用RT-PCR法检测细胞周期素E与mRNA表达；用Westemblot检测308位苏氨酸(Thr308)磷酸化的蛋白激酶Aktl及细胞周期负调控蛋白P27^kipl表达量。结果：LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的系膜细胞增殖。在系膜细胞增殖同时TNF-α引起的细胞周期素E的蛋白表达也被LXA4下调。LXA4减少TNF-α诱导的肾小球系膜细胞中308位苏氨酸磷酸化的Akt1蛋白。LXA4呈剂量依赖性地阻止TNF-α所致的P27^kipl表达下调。结论：LXA4能够抑制TNF-α所致的大鼠系膜细胞的增殖，其机制依赖于Akt1／P27^kipl信号转导途径。     

护肾固精方下调核因子-κB活化对系膜细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 :研究护肾固精方 (Hushengujingfang ,HSGJF)对脂多糖 (LSP)刺激大鼠肾小球系膜细胞(mesangialcell,MC)表达炎性细胞因子的影响及其作用机制。方法 :分别以酶联免疫吸附法 (ELISA)检测MCIL 1β、TNF α蛋白水平 ;电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测MC核因子 κB(nuclearfactor κB ,NF κB)的活性 ;反转录多聚酶链反应技术 (RT PCR)检测MCTNF αmRNA表达。结果 :HSGJF能抑制LSP刺激肾小球MC分泌IL 1β、TNF α蛋白质增加的同时 ,亦能抑制LSP刺激肾小球MC中NF κB活化 ,在HSGJF作用下炎性细胞因子表达均呈不同程度减弱。结论 :HSGJF通过抑制MCNF κB的活性 ,下调炎性细胞因子的表达。此结果可作为进一步认识和评价该方对肾脏疾病防治作用的实验依据。     

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制THP-1源性巨噬细胞向M1型极化

目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组：不同浓度的（5、10 μmol/L）穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组：溶媒3‰DMSO;无药对照组：不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达（P<0.05）,同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达（P<0.05）。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强（P<0.05）,且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。     

云南白药在P.g-LPS诱导的炎症环境下对人牙髓细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-1β的影响

目的 研究云南白药在P.g-LPS诱导的炎症环境下对人牙髓细胞分泌IL-6、IL-lβ、TNF-α的影响, 探索云南白药对牙髓炎抑制的影响.方法 采用改良组织块法体外培养人牙髓细胞, 免疫组化鉴定细胞来源, 10μg/m L的P.g-LPS刺激人牙髓细胞24 h后, 分3组, 空白对照组1%FBS培养液, 阳性对照组10μg/m L P.g-LPS, 白药组10μg/m L云南白药.于刺激结束, 换液后1 d、3 d时ELISA检测培养上清中IL-6、IL-lβ、TNF-α水平, 同时换液3 d时定量real-time PCR检测TNF-α、IL-6、IL-lβmRNA的表达.结果 成功培养HDPCs, 波形丝蛋白表达阳性, 角蛋白为阴性.P.g-LPS刺激人牙髓细胞1 d时, 3组之间TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达无差别, 换液后1 d和3 d, 空白对照组和白药组低于阳性对照组 (P<0.05) , 白药组与空白对照组差异无统计学意义 (P>0.05) .然而换液后3 d白药组TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达低于空白对照组 (P<0.05) .结论 在P.g-LPS诱导的炎症环境下, 云南白药作用3 d时, 对HDPCs的TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白分泌没有明显抑制作用, 但抑制TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达.     

脑缺血-再灌注损伤大鼠脑组织中TNF-α，IL-6和IL-1β的表达

［摘要］目的　使用Quantitative Real-time PCR（q-PCR）检测大鼠脑缺血再灌注后不同时间点TNF-α,IL-6和IL-1β基因的表达变化．方法　成年雄性SD大鼠24只随机分为4组:假手术组,脑缺血再灌注损伤3 h组,脑缺血再灌注损伤6 h组和脑缺血再灌注损伤12 h组．各组大鼠于再灌注后相应各时间点取缺血侧大脑皮质进行q-PCR检测,对TNF-α,IL-6和IL-1β基因表达进行定量分析．结果　假手术组TNF-α,IL-6和IL-1β基因mRNA水平较低,脑缺血再灌注损伤后明显升高后又逐渐降低．TNF-α基因mRNA表达于再灌注损伤后3 h显著升高并达峰值（P＜0.01）,损伤后12 h又呈显著下降（P＜0.01）;IL-6基因mRNA表达于再灌注损伤后3 h明显升高,6 h达峰值（P＜0.01）,12 h时较6 h又呈显著下降（P＜0.01）;IL-1β基因mRNA表达于再灌注损伤后3 h升高,6 h达峰值（P＜0.01）,损伤后12 h呈现显著下降（P＜0.01）．结论　大鼠脑缺血再灌注损伤后,TNF-α,IL-6和IL-1β mRNA表达水平在再灌注损伤早期显著升高,达高峰后又逐渐下降,TNF-α,IL-6和IL-1β基因在脑缺血再灌注损伤后的表达变化为脑缺血再灌注损伤的机制研究提供了理论依据．