TRAIL联合三氧化二砷对HL-60细胞生长及凋亡的影响

目的　研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL) 联合三氧化二砷 (As2O3) 诱导急性早幼粒白血病细胞株HL 60凋亡, 探讨其应用于临床的可行性。方法　在对数生长期的 HL 60 细胞中分别加入不同浓度的TRAIL和1μmol/L的As2O3, 采用MTT比色法测定TRAIL和 As2O3 单独和联合应用时对细胞的生长抑制率, 并用流式细胞术检测细胞凋亡。结果　TRAIL联合 As2O3 可协同降低 HL 60 细胞活力, 抑制细胞增殖, 诱导细胞凋亡。当TRAIL浓度小于100μg/L时, 其作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强 (P<0 .05), 而当 TRAIL浓度再增高时, 对细胞生长抑制率和凋亡率的增强作用不明显 (P>0 .05)。结论　TRAIL与 As2O3 具有协同作用, 能高效杀灭白血病细胞。TRAIL是一种有望应用于白血病临床治疗的新型生物制剂。     

沙利度胺对子宫内膜异位症患者内膜间质细胞的影响及其机制

目的 探讨沙利度胺对子宫内膜异位症(EMT)患者内膜间质细胞(ESC)的增殖、迁移运动、修复及体外侵袭能力的影响及其作用机制.方法 体外原代培养EMT患者的ESC,加入不同浓度沙利度胺(500.00、250.00、125.00、62.50、31.25μg/ml)分别作用24 h、48 h后,应用噻唑蓝法测定ESC的抑制率.另取ESC分为空白组(沙利度胺0μg/ml)、15 μg/ml沙利度胺组、30 μg/ml沙利度胺组,分别应用划痕实验、Transwell小室实验测定沙利度胺对ESC迁移运动及修复能力、体外侵袭能力的影响,流式细胞仪检测在沙利度胺作用24 h后ESC的凋亡率,酶联免疫吸附试验实验检测沙利度胺对ESC血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响.结果 15、30 μg/ml沙利度胺组细胞的迁移及修复能力、穿膜细胞数较空白组下降,细胞凋亡率较空白组升高(P＜0.05);细胞抑制率随沙利度胺作用的浓度升高而升高(P＜0.05);15、30 μg/ml沙利度胺组细胞VEGF蛋白表达量明显低于空白对照组(P＜0.05).结论 沙利度胺可抑制人EMT患者ESC的增殖、迁移运动和体外侵袭能力,并可以诱导细胞凋亡,其机制可能是下调细胞VEGF蛋白分泌.     

As2O3对ALL Caspase-3原代细胞的作用及作用机制的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对急性淋巴细胞白血病(ALL)原代白血病细胞的作用及作用机制,为As2O3在急性淋巴细胞白血病中的应用提供实验依据.方法 采用MTT法检测As2O3对ALL原代白血病细胞生长的抑制作用;结果As2O3浓度为1.0-10.0μmol/L的As2O3可以明显抑制ALL原代白血病细胞的生长,并呈时间与浓度依赖性.结论 As2O3可诱导ALL原代细胞凋亡; As2O3通过激活Caspase-3诱导ALL原代细胞凋亡.     

三氧化二砷抑制U266细胞增殖、诱导凋亡及与血管内皮生长因子表达的关系

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡的影响及与血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系.方法 四唑盐比色法(MTT)观察As2O3对U266细胞增殖的影响;缺口末端标记法(TUNEL)分析As2O3对U266细胞凋亡的影响;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测2 μmol/L AS2O3不同处理时间后U266细胞VEGF mRNA表达的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测As2O3不同浓度不同处理时间对U266细胞VEGF蛋白表达的变化. 结果 (1)As2 Q3明显抑制U266细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为2 μmol/L;(2)As2O3能诱导U266细胞凋亡,呈剂量依赖性;(3)As2O3(2,5,10μmol/L)分别处理72 h后细胞培养上清中VEGF量呈剂量依赖性减少;(4)考虑细胞增殖对VEGF分泌的影响,2 μmol/L As2O3处理组的上清VEGF量与对照组的差别无统计学意义,RT-PCR显示2μmol/L As2O3处理的U266细胞个体VEGF mRNA的表达无变化.结论 As2O3可以诱导骨髓瘤细胞凋亡,抑制其增殖.As2O3可以通过抑制细胞增殖、诱导凋亡,减少肿瘤负荷,减少VEGF总量,但是不改变细胞个体VEGF的表达.     

FOLFOX方案联合沙利度胺体外抑制人肝癌HepG2细胞VEGF、Caspase-3基因表达的研究

目的研究沙利度胺联合FOLFOX(folinic acid fluorouracil oxaliplatin)作用肝癌细胞HepG2后VEGF、Caspase-3的表达,以及探讨沙利度胺联合FOLFOX诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法应用MTT法和流式细胞仪体外研究沙利度胺对HepG2细胞增殖的影响;采用western blot法,观察沙利度胺联合FOLFOX作用HepG2细胞48h后VEGF、Caspase-3的表达情况。结果沙利度胺对肝癌HepG2细胞有抑制作用,且沙利度胺联合FOLFOX显著提高了对肝癌细胞生长的抑制作用,沙利度胺联合FOLFOX作用于HepG2细胞48h后,细胞表面Caspase-3的表达均增强,VEGF的表达均降低。结论沙利度胺联合FOLFOX诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能可能通过调节VEGF蛋白表达激活caspase-3,从而诱导HepG2细胞凋亡。     

VPA联合As2O3对NB4细胞VEGF及Survivin表达的影响

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞株血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡抑制蛋白Survivin表达的影响。方法:NB4细胞分为对照组、As2O3组及As2O3联合VPA组,RT-PCR方法检测NB4细胞VEGF、Survivin mRNA的表达。结果:As2O30.1μmol/L组NB4细胞VEGF mRNA的表达明显高于对照组、Survivin mRNA的表达明显低于对照组(P<0.05);与As2O30.1μmol/L组比较,As2O30.1μmol/L+VPA 1.0mmol/L组NB4细胞VEGF mRNA、Survivin mRNA的表达均明显降低(P<0.05)。结论:VPA联合小剂量As2O3可以降低单独应用As2O3导致的NB4细胞VEGF表达的升高、并进一步降低Survivin的表达,As2O3联合VPA可降低As2O3治疗急性早幼粒细胞白血病时的不良反应。     

沙利度胺对内毒素刺激大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响

目的探讨沙利度胺对内毒素刺激大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响。方法分离、培养Wistar大鼠腹腔巨噬细胞，贴壁后的腹腔巨噬细胞分为空白对照组、内毒素（LPS）组、沙利度胺处理组、沙利度胺对照组。空白对照组不予任何处理；沙利度胺处理组提前2h加入不同浓度的沙利度胺，2h后加入内毒素；LPS组加入LPS，沙利度胺对照组仅加入沙利度胺80μg／mL。细胞培养4h后取上清液测TNF-α和IL-6浓度。结果空白对照组大鼠腹腔巨噬细胞上清TNF-α和IL-6含量均很低，沙利度胺对照组与空白组无显著性差异。大鼠腹腔巨噬细胞经LPS诱导后，细胞上清中TNF-α及IL-6含量显著增高，提前2h沙利度胺预处理后，TNF-α和IL-6的释放明显受到抑制，抑制作用随沙利度胺预处理浓度的增大而增强。结论沙利度胺能抑制大鼠巨噬细胞对TNF-α和IL-6等促炎细胞因子的释放，可能是其对抗脓毒症的机制之一。     

长效干扰素联合亚砷酸对急性淋巴细胞白血病细胞株IM-9生长的抑制作用

目的观察长效干扰素（PEG-IFN-α-2a）、亚砷酸（As2O3）及其两者联合对急性淋巴细胞白血病细胞株IM-9的生长抑制作用。方法以MTT法测定IM-9细胞的增殖活性,并观察不同浓度长效干扰素和亚砷酸分别对IM-9细胞生长的影响以及两者联合对IM-9细胞的协同作用。结果PEG—IFN—α-2a和As2O3对IM-9生长均有轻度抑制作用;两者联合对IM-9细胞株生长抑制作用显著增强（P〈0．01）。结论PEG—IFN—α-2a联合As2O3对急性淋巴细胞白血病细胞株IM-9生长有显著性抑制作用,为临床应用这两种制剂治疗急性淋巴细胞白血病提供了初步的实验依据。     

不同浓度As2O3对293t细胞和HeLa细胞的凋亡及增殖的影响

目的初步研究三氧化二砷(As2O3)作为急性早幼粒细胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)的治疗剂和环境污染物的毒副作用.方法用As2O3作用于293t细胞和HeLa细胞不同时间后,用流式细胞仪、Hoechst33258染色、形态学和超微结构观察检测细胞凋亡和增殖;检测293t细胞增殖用细胞记数板连续记数6天.结果 3～5μmol/L As2O3作用24h可诱发HeLa细胞发生凋亡,而293t则不发生明显的凋亡.低浓度As2O3(<2μmol/L)可抑制293t细胞增殖.结论不同浓度的As2O3对HeLa细胞和293t细胞的增殖和凋亡作用不同.     

三氧化二砷、顺铂对人卵巢癌细胞联合作用研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)、顺铂(DDP)对人卵巢癌细胞HO-8910的联合作用及其相关机制。方法采用形态学方法研究As2O3、DDP对细胞增生的影响,用流式细胞术分析细胞周期,免疫细胞化学染色法检测p53基因表达。结果1.As2O3、DDP协同作用时,浓度分别在1.5μmol/L以上、2μmol/L以上时,有显著性差异;当三氧化二砷、顺铂浓度分别是12μmol/L、4μmol/L时,72h时癌细胞接近100%死亡。2.As2O3、DDP引起HO-8910细胞S期阻滞、p53基因表达增强。结论As2O3、DDP对人卵巢癌细胞HO-8910的生长有协同抑制作用;As2O3、DDP联合作用引起卵巢癌细胞凋亡的机制与S期阻滞、p53基因表达增强有关。     

三氧化二砷和顺铂对大肠癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响(英文)

目的探讨三氧化二砷（As2O3）和顺铂（DDP）对人大肠癌细胞株CCL-187端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法大肠癌细胞株CCL-187与空白培养液，含1．0μmol／L As2O3、0．2μg／mL,DDP、1．0μmol／L As2O3，合用0．2μg/ml DDP的培养液共同孵育1～6d。MTT法计算细胞生长抑制率，电镜下观察细胞形态学变化，RT-PCR法检测细胞端粒酶hTERT-mRNA的表达，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果1．0μmol／L As2O3能促进细胞分化，0．2μg/mL DDP和合用组均能诱导细胞凋亡，同时都下调端粒酶hTERT-mRNA的表达，降低端粒酶的活性，且具有时间依赖性。用药组与对照组相比差异有极显著性（P〈0．01）；合用组与单药组相比差异有极显著性（P〈0．01）。细胞生长抑制率与细胞端粒酶hTERT-mRNA的表达、端粒酶活性的下调呈负相关。细胞端粒酶hTERT-mRNA的表达与细胞端粒酶活性呈正相关。结论1．0μmol／LAs2O3对人大肠癌CCL-187细胞有促进分化的作用，0．2μg／mL DDP和合用组有诱导凋亡的作用，其机制可能是下调细胞端粒酶hTERT-mRNA的基因表达，从而抑制端粒酶的活性。     

反应停对HL-60细胞马利兰耐药的逆转作用

目的:研究反应停对HL -60细胞马利兰耐药的逆转作用。方法:低剂量马利兰反复刺激HL- 60细胞造成 HL -60马利兰耐药细胞株,联合应用反应停加马利兰观察反应停对马利兰耐药HL- 60细胞的逆转作用,并检测细胞谷 胱甘肽(GSH)、血管内皮生长因子(VEGF)和细胞色素C水平。结果:马利兰对HL 60细胞的IC50为5.44mmol/L,对 马利兰耐药HL 60细胞的IC50>100mmol/L;反应停单独应用对马利兰耐药HL 60细胞生长无影响,但能使马利兰对 马利兰耐药HL -60细胞的IC50降至14.34mmol/L,同时降低细胞GSH、VEGF和升高细胞色素C水平。结论:反应停 对HL- 60细胞马利兰耐药有逆转作用,其机制可能与降低细胞GSH、VEGF和升高细胞色素C水平有关。     

沙利度胺对小鼠食管癌血管形成的影响

目的 研究沙利度胺对食管癌血管形成的影响,并初步探讨其抑瘤机制.方法 建立裸鼠食管癌原位移植瘤模型,将30只小鼠随机分为3组,每组10只.种植后3d开始,分别腹腔注射生理盐水(0.5 ml/d,对照组)、环磷酰胺[30 mg/(kg·d),环磷酰胺组]、沙利度胺[50 mg/ (kg·d),沙利度胺组],1次/d,持续...     

三氧化二砷联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能分子机制的探讨简

目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能的分子机制.方法 常规培养黑色素瘤细胞株A375,分为空白对照组（不含药物的DMEM处理）、As2O3组（10μmol/LAs2O3）、全反式维A酸（at-RA）组（10 μmol/L at-RA）、As2O3＋at-RA组（10.μmol/LAs2O3联合10 μmol/L at-RA）.MTT法检测细胞活力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western-blot法检测MMP-2、Caspase-2的蛋白水平.结果 ①As2O3＋at-RA组的细胞活力为（35.8±7.3）％,低于As2O3组的（62.4±10.3）％和at-RA组的（59.3±11.3）％,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;②As2O3＋at-RA组的迁移能力相对值为（21.3±6.3）％,低于As2O3组的（55.4±9.5）％和at-RA组的（57.1±10.4）％,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;③As2O3＋at-RA组的Caspase-2蛋白含量为（274.1±42.4）％,高于As2O3组（175.2±29.4）％和at-RA组（181.4±23.8）％;As2O3＋at-RA组的MMP-2蛋白含量为（36.2±8.2）％,低于As2O3组（64.2±10.4）％和at-RA组（62.7±9.4）％.结论 As2O3和at-RA联合应用能够抑制黑色素瘤细胞株A375的增殖和迁移能力,这一作用可能是通过上调Caspase-2、下调MMP-2来发挥的.     

姜黄素抗As2O3诱变作用的实验研究

目的：研究姜黄素抗三氧化二砷（As2O3）的诱变作用。方法：分别采用小鼠骨髓细胞和人外周血淋巴细胞微核（MN）实验,计数含有MN的嗜多染红细胞和淋巴细胞数,计算MN率。观察As2O3细胞诱变性及不同浓度姜黄素对As2O3诱变性作用的影响。结果：①小鼠骨髓MN试验：与As2O3组比较,As2O3＋1.2mg/mL,2.4mg/mL,4.8mg/mL姜黄素组小鼠骨髓细胞MN率显著降低（P〈0.05,P〈0.01）。②人外周血淋巴细胞MN试验：与空白对照组比较,1μg/mL、2μg/mL、4mg/mLAs2O3组人外周血淋巴细胞MN率升高（P〈0.01）;与1μg/mL（2μg/mL、4μg/mL）As2O3组比较,5μg/mL,10μg/mL,20μg/mL姜黄素＋1μg/mL（2μg/mL,4μg/mL）As2O3组MN率降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论：As2O3具有剂量相关的致突变作用,姜黄素具有明确的抗As2O3诱变性作用。     

柚皮苷通过Fas膜受体通路调控髓核细胞凋亡的机制研究

[目的]观察中药骨碎补单体柚皮苷（Naringin）对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响,为治疗椎间盘退变提供理论依据。[方法]对体外培养的人退变椎间盘髓核细胞利用番红O染色和甲苯胺蓝染色进行鉴定,并对P3代细胞分别用柚皮苷0 g/mL （对照组）、柚皮苷20 g/mL、柚皮苷40 g/mL、柚皮苷80 g/mL的培养基培养人髓核细胞48 h,噻唑蓝（MTT）法选择其抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡的最佳浓度,并用流式细胞仪测定各组细胞凋亡率。实时定量聚合酶链锁反应（qRT-PCR）检测Fas、FasL、Caspase-8基因表达。蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测Fas蛋白表达。[结果]MTT法和流式细胞检测均测定20 g/mL柚皮苷为抑制髓核细胞凋亡的最佳浓度（P<0.05）。qRT-PCR检测20 g/mL柚皮苷能够抑制Fas、FasL、Caspase-8 mRNA表达（P<0.05）。Western-blot检测显示20 g/mL柚皮苷能够抑制Fas、FasL、Caspase-8蛋白表达。[结论]柚皮苷可能通过调控Fas/Fasl死亡受体凋亡通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡。     

血管内皮生长因子干扰RNA对人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达调控的实验研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)的特异性小片段干扰RNA(siRNA)对低分化人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达的抑制作用,为鼻咽癌的治疗提供新的途径。方法体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2Z,并分成正常氧状态培养组(20%)和低氧(1%)培养组。采用脂质体(LF2000)将VEGFsiRNA转染两组细胞,并采用RT-PCR、ELISA检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGFmRNA和蛋白质表达的差异。结果与未转染组和转染空载体组相比,在正常氧和低氧状态下,VEGFsiRNA均能明显抑制VEGFmRNA的表达(P<0.01);正常氧状态下VEGFsiRNA的抑制效率比低氧状态高。正常氧状态下:未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为:423.92、419.68和328.86pg/mL;低氧状态下VEGF165的含量分别为:813.62、799.89和500.96pg/mL,转染VEGFsiRNA组VEGF的表达下调。结论VEGFsiRNA能有效地、特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGFmRNA和蛋白质的表达,因而有望成为治疗鼻咽癌的一种有效方法。     

血管内皮生长因子干扰RNA对人鼻咽癌CNE一2Z细胞VEGF表达调控的实验研究

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）的特异性小片段干扰RNA（siRNA）对低分化人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达的抑制作用，为鼻咽癌的治疗提供新的途径。方法：体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2Z，并分成正常氧状态培养组（20％）和低氧（1％）培养组。采用脂质体（LF2000）将VEGF siRNA转染两组细胞，并采用RT—PCR、ELISA检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGF mRNA和蛋白质表达的差异。结果：与未转染组和转染空载体组相比，在正常氧和低氧状态下，VEGFsiRNA均能明显抑制VEGFmRNA的表达（P〈0．01）；正常氧状态下VEGFsiRNA的抑制效率比低氧状态高。正常氧状态下：未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为：423．92、419．68和328．86pg／mL；低氧状态下VEGF165的含量分别为：813．62、799．89和500．96pg／mL，转染VEGF siRNA组VEGF的表达下调。结论：VEGF siRNA能有效地、特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达，因而有望成为治疗鼻咽癌的一种有效方法。