三氧化二砷对人大肠癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨三氧化二砷（As₂O₃）对人大肠癌细胞株 CCL-187 端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法：CCL-187 细胞分为对照组、1.0 μmol•L^-1As₂O₃ 组和 2.5 μmol•L^-1As₂O₃ 组，共同孵育1～6 d。MTT 法计算细胞生长抑制率，电镜下观察细胞形态学变化，RT-PCR 法检测细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达，TRAP-PCR-ELISA 法检测细胞端粒酶活性。结果：1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组细胞分化明显，2.5 μmol•L^-1As₂O₃ 组出现细胞凋亡。同时2组端粒酶 hTERT-mRNA 的表达均下调，端粒酶活性降低，且具有时间依赖性，与对照组比较差异有显著性（P<0.01 或 P<0.05）；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组与 1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组比较差异也有显著性（P<0.01）。细胞生长抑制率与细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达呈负相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.803，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.697，P<0.01），与端粒酶活性的下调呈负相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.836，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=－0.792，P<0.01）；细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的表达与细胞端粒酶活性呈正相关（1.0 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=0.956，P<0.01；2.5 μmol•L^-1 As₂O₃ 组 r=0.988，P<0.01）。结论：As₂O₃ 对 CCL-187 细胞有促进分化及诱导凋亡的作用，其机制可能是下调细胞端粒酶 hTERT-mRNA 的基因表达，从而抑制端粒酶的活性。     

三氧化二砷对人大肠癌细胞生长的抑制作用

目的探讨不同浓度的三氧化二砷对人大肠癌细胞株CCL-187细胞生长抑制率的影响。方法大肠癌细胞株CCL-187分别与1·0,2·5μmol/LAs2O3共同孵育1~6d,电镜下观察细胞形态学变化,MTT法计算细胞生长抑制率。结果MTT法显示1·0,2·5μmol/LAs2O3均能抑制大肠癌CCL-187细胞的生长增殖,且具有时间依赖性。As2O3对CCL-187细胞增殖的抑制程度随As2O3浓度的加大而加强。透射电镜显示:1·0μmol/LAs2O3促进细胞分化,但2·5μmol/LAs2O3能诱导细胞凋亡。结论不同浓度的三氧化二砷对人大肠癌CCL-187细胞生长均可产生抑制作用,作用机制为1·0μmol/LAs2O3促进癌细胞分化,而2·5μmol/LAs2O3则诱导细胞凋亡。     

As2O3对乳腺癌细胞的生长及端粒酶活性的影响

目的：探讨不同浓度As2O3对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231端粒酶及其亚单位hTERT-mRNA活性表达的影响,为临床治疗乳腺癌提供理论和实验依据。方法：将不同浓度的As2O3与MDA-MB-231细胞共培养不同时间后,MTT比色法检测As2O3对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用;TRAP-PAGE-银染法检测As2O3作用后细胞端粒酶活性的改变;RT-PCR法测定MDA-MB-231细胞hTERT-mRNA的表达。结果：As2O3可显著抑制MDA-MB-231细胞生长,且存在浓度、时间效应关系,其24 h IC50为24.73μmol/L,48 h IC50为6.99μmol/L;用终浓度分别为10、20、40μmol/L的As2O3与MDA-MB-231细胞作用24h、48 h,银染条带显示出端粒酶活性显著下降;RT-PCR产物电泳条带显示出hTERT-mRNA的表达明显下降。结论：As2O3在体外可显著抑制MDA-MB-231细胞的生长,具有较明显的细胞毒作用;As2O3能显著抑制MDA-MB-231细胞端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶的活性,且抑制作用具有明显的时间和浓度依赖关系。     

维生素C增强As2O3诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:探讨维生素C是否能影响三氧化二砷(As2O3)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)法筛选出维生素C的最佳浓度250μmol.L-1,并用该浓度联合不同浓度的As2O3同时处理HeLa细胞后,用光镜、MTT法和流式细胞术研究细胞生长和凋亡的情况,用TRAP-ELISA法检测细胞内端粒酶活性的变化。结果:单独1μmol.L-1As2O3处理过的细胞生长未受到明显抑制,但联合250μmol.L-1维生素C处理细胞,则细胞生长受到抑制,且部分细胞出现凋亡形态学特征。2、51、0μmol.L-1As2O3联合维生素C用药组的细胞凋亡率也比单独用As2O3组明显增高,且出现凋亡的时间提早。端粒酶活性检测结果提示,联合用药组细胞内端粒酶活性均明显比单独用As2O3组低。结论:小剂量维生素C能增强As2O3诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,并能增强As2O3对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

三氧化二砷诱导T淋巴细胞白血病细胞株凋亡研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对T淋巴细胞白血病细胞株的作用及其机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对细胞株的生长抑作用,流式细胞仪测定细胞凋亡峰,端粒重复扩增法检测端粒酶活性,实时RT-PCR测定端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达.结果2～6μmol/L As2O3可抑制Molt-4细胞生长,且随着时间的延长和药物剂量的增大,这种抑制作用更为明显(P<0.05).药物作用72h,As2O3对Molt-4细胞生长抑制半数致死量为4.68μmol/L.2～6μmol/L浓度范围内,As2O3诱导Molt-4细胞的凋亡率随时间的延长和药物剂量的增大而升高(P<0.05).6μmol/L药物作用96h,K562细胞和Molt-4细胞的凋亡率分别为83.44%±18.04%和77.93%±6.00%.As2O3能显著抑制Molt-4细胞株端粒酶活性,下调hTERT mRNA表达.结论As2O3有明显抑制T淋巴细胞白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用.通过下调hTERT mRNA表达,从而抑制端粒酶活性可能是As2O3的主要作用机制之一.     

三氧化二砷对Hela细胞hTERTmRNA表达的调节和对端粒酶活性的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌细胞(Hela细胞)端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)表达的影响。方法：以2μmoL／L的As2O3作用于人宫颈癌Hela细胞，在不同时间点用MTT法检测Hela细胞活力的变化，用流式细胞仪检测细胞周期的变化，用RT-PCR法检测hTERTmRNA表达的变化，用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果：随着As2O3作用时间的延长，Hela细胞的活力逐渐降低，G0／G1期细胞所占比例升高，S期细胞所占比例减少，hTERTmRNA表达水平逐渐降低，端粒酶活性逐渐下降。结论：As2O3可引起Hela细胞周期阻滞，hTERTmRNA的表达水平下调，端粒酶活性降低。     

As2O3对胃癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对SGC－7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响及其机制。方法 细胞凋亡、细胞周期分布及相关蛋白的表达采用流式细胞术;端粒酶活性的检测采用端粒末端重复序列扩增－ELISA法（TRAP－ELISA）,端粒酶亚单位mRNA及c-myc mRNA的表达采用RT－PCR技术。结果 As2O3可明显抑制SGC-7901细胞的生长,细胞凋亡率明显增加,C0/G1期细胞减少,S和G2／M期细胞增加,Bcl-2、c-myc、PCNA蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,端粒酶活性明显下降;端粒酶亚单位hTR是TP1 mRNA无明显变化,hTRT mRNA表达减少,同时,c-myc mRNA的表达亦减少。结论 As2O3对SGC－7901细胞的抑制作用可能是通过二条途径实现：一个是诱导细胞凋亡,另一个是通过下调hTRT mRNA的表达来下调端粒酶活性,其机制有可能与c-myc和Bcl-2基因的减少以及Bax基因的增加有关。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响

目的 探讨As2O3诱导细胞凋亡时对其端粒酶活性的影响及其作用机制.方法 采用光镜、电镜,PCRELISA,RT-PCR等技术,检测细胞凋亡,端粒酶活性及其催化亚单位的表达.结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,但存在作用浓度,细胞株类型差异性;端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱,同时伴随hTERT mRNA表达水平的下降.结论 端粒酶活性和hTERT mRNA表达在As2O3诱导SKOV3、3AO细胞凋亡过程中共同发挥作用,两者有密切关系,是诱导细胞凋亡的分子机制之一.     

维生素C对顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡的影响

目的探讨维生素C是否能影响顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法MTT法和流式细胞术检测细胞生长和凋亡的情况,TRAP-ELISA法测定端粒酶活性变化。结果DDP联合AA作用组比单独用DDP组细胞凋亡率明显增高,端粒酶活性明显降低。单独10μmol/LDDP处理组细胞生长未受到明显抑制,但联合AA后其生长受到抑制。结论AA能增强DDP诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,并增强DDP对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

端粒在As2O3致L02和HepG2细胞凋亡及染色体畸变中的作用

目的 探索端粒、端粒酶活性及端粒逆转录酶基因表达在As2O3诱导L02和HepG2细胞凋亡及染色体畸变过程中的作用.方法 12μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞24、48、72 h,以处理0h作为对照组,流式细胞仪检测细胞凋亡;应用以PCR为基础的端粒重复序列扩增(TRAP-PCR)银染法检测端粒酶活性;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测端粒逆转录酶(hTERT)mRNA表达;0.625 μmol/LAs2O3处理L02和HepG2细胞2、4、6周,以处理0周作为对照组,染色体核型分析检测细胞染色体畸变;检测端粒酶活性及端粒逆转录(hTERT)mRNA表达.结果 12 μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞凋亡率较对照组增加(P＜0.05);端粒酶活性及hTERTmRNA的表达较对照组均明显下降(P＜0.05).0.625 μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞,染色体端-端融合及双微体的畸变率较对照组增加(P＜0.05);端粒酶活性及hTERTmRNA的表达增加(P＜0.05).结论 高浓度As2O3短期处理L02和HepG2细胞可诱导其凋亡.而低浓度As2O3长期处理L02和HepG2细胞可导致染色体畸变,畸变可使基因组不稳定是细胞癌变的基础.端粒、端粒活性及hTERTmRNA表达在此过程中的不同变化也许可部分解释As2O3抗癌和致癌的矛盾作用.     

Gleevec诱导顺铂耐药卵巢癌细胞COC1凋亡的形态学研究

目的探讨Gleevec对顺铂耐药卵巢癌细胞COC1的诱导凋亡作用。方法用Gleevec处理COC1细胞，采用MTT法检测Gleevec联合顺铂对细胞增殖的影响。HE染色显微镜下观察细胞，电镜下观察细胞形态学的变化。结果Gleevec显著提高了COC1／DDP对顺铂的敏感性（P〈0．05）；2．5～10μg／ml顺铂与1．0μmol／L Gleevec合用表现为协同作用，2．5～10μg／ml顺铂与2．5～10μmol／L Gleevec合用表现为相加作用。在Gleevec的作用下COC1细胞呈现明显的凋亡改变，形成凋亡小体。结论Gleevec能够诱导顺铂耐药卵巢癌细胞COC1的凋亡。     

三氧化二砷联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能分子机制的探讨简

目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能的分子机制.方法 常规培养黑色素瘤细胞株A375,分为空白对照组（不含药物的DMEM处理）、As2O3组（10μmol/LAs2O3）、全反式维A酸（at-RA）组（10 μmol/L at-RA）、As2O3＋at-RA组（10.μmol/LAs2O3联合10 μmol/L at-RA）.MTT法检测细胞活力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western-blot法检测MMP-2、Caspase-2的蛋白水平.结果 ①As2O3＋at-RA组的细胞活力为（35.8±7.3）％,低于As2O3组的（62.4±10.3）％和at-RA组的（59.3±11.3）％,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;②As2O3＋at-RA组的迁移能力相对值为（21.3±6.3）％,低于As2O3组的（55.4±9.5）％和at-RA组的（57.1±10.4）％,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;③As2O3＋at-RA组的Caspase-2蛋白含量为（274.1±42.4）％,高于As2O3组（175.2±29.4）％和at-RA组（181.4±23.8）％;As2O3＋at-RA组的MMP-2蛋白含量为（36.2±8.2）％,低于As2O3组（64.2±10.4）％和at-RA组（62.7±9.4）％.结论 As2O3和at-RA联合应用能够抑制黑色素瘤细胞株A375的增殖和迁移能力,这一作用可能是通过上调Caspase-2、下调MMP-2来发挥的.     

中药复合物得力生注射液可提高顺铂对肺癌PGCL3细胞株的治疗效果

Objective:To investigate the effect of Delisheng Injection(得力生注射液 DLS),a Chinese medicinal compound,DLS combined with cis-platinum(DDP),an active agent used in lung cancer chemotherapy,on a human highly metastatic giant lung carcinoma cell line PGCL3.Methods:The suspended PGCL3 cells at10~5/mL cultured in 96-well tissue culture plates were divided into 4 groups:DLS treatment group(2 μL/mL,5 μL/mL,10 μL/mL,25 μL/mL),DDP treatment group(1 μg/mL,2 μg/mL,5 μg/mL,15 μg/mL),combined DLS with DDP treatment group(DLS:DDP 2 μL/mL:1 μg/mL,5 μL/mL:2 μg/mL,10 μL/mL:5 μg/mL,25 μL/mL:15 μg/mL)and a control group.The cytotoxicity of DLS with different concentrations(2 μL/mL,5 μL/mL,10 μL/mL,25 μL/mL)on PGCL3 cells was determined by 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide(MTT) assay.Effect of DLS on adhesion of PGCL-3 cells was tested by cell-matrigel adhesion assay.Chemotactic movement model of transwell camerula was used to determine the effect of DLS on invasion and migration of PGCL-3 cells.Results:Compared with the control group,DLS(2 μL/mL,5 μL/mL,10 μL/mL,25 μL/mL) could significantly decrease cell proliferation,adhesion,invasion and migration abilities(P0.05).Cell adhesion,invasion and migration abilities were significantly decreased after combination treatment of DLS:DDP(2 μL/mL:1 μg/mL,5 μL/mL:2 μg/mL,10 μL/mL:5 μg/mL,25 μL/mL:15 μg/mL) compared with DDP single-agent treatment(1 μg/mL,2 μg/mL,5 μg/mL,15 μg/mL,P0.05),respectively.Conclusions:DLS single-agent has a satisfying inhibition effect in PGCL3 cell line and DLS might enhance the inhibition effect of DDP on cancer metastasis.Our research provided a experimental basis about the treatment on highly metastatic lung caner.     

五味子提取物对HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax基因转录的影响

目的观察五味子提取物（SCEs）对肝癌细胞HepG2生长的影响,考察Bcl-2、Bax基因表达的变化,探讨SCEs致HepG2细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,并给予不同浓度SCEs进行干预,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测用药后HepG2细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测细胞Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果随着各药物浓度增加,细胞抑制率有增加的趋势;五味子甲素（SchA）、五味子乙素（SchB）、SCEs及DDP的IC50分别为41.91μmol/L、350.00μmol/L、236.52μg/mL、1 792μmol/L;流式细胞术结果显示SchA、SchB及顺铂（DDP）组均能有效地诱导或促进HepG2的凋亡,SCEs质量浓度≥200μg/mL可明显诱导或促进HepG2细胞凋亡。SchA、SchB及一定质量浓度的SCEs作用后细胞内Bcl-2及Bax mRNA表达水平均显著降低（P〈0.05）,DDP则可同时上调Bcl-2及Bax mRNA的表达。结论 SCEs能抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞凋亡,下调Bcl-2及Bax mRNA的表达,其诱导及促进HepG2细胞凋亡的分子机制尚需进一步研究。     

三氧化二砷对人骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞的作用

目的:研究不同浓度三氧化二砷(As2O3)对人骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型(MDS-RAEB)细胞株MUTZ-1细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用MTT法分析细胞生长曲线,用细胞形态学观察细胞凋亡。结果:低浓度As2O3(0.05～0.25μmol/L)对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用,高浓度As2O3(1.0～20.0μmol/L)对MUTZ-1细胞有明显生长抑制作用,且呈浓度、时间效应-依赖关系(P<0.01)。结论:低浓度As2O3(0.05～0.25μmol/L)对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用。高浓度As2O3(1.0～20.0μmol/L)对MUTZ-1细胞有明显生长抑制作用,且呈浓度、时间效应依赖关系。     

沙利度胺联合三氧化二砷对急性非淋巴细胞白血病细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究沙利度胺和三氧化二砷(As2O3)对急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并研究两者是否有协同作用.方法 收集23例ANLL患者的骨髓液,用Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞(MNC),于37℃、5%二氧化碳CO2饱和湿度条件下于RPMI1640培养液中传代培养.取对数生长期细胞以2×106/mL的细胞浓度加入24孔培养板上,沙利度胺以75、150和300μg/mL的浓度加入培养体系中,As2O3以12.5,25和50μmoL/L的浓度加入培养体系中,并将300μg/mL的沙利度胺和50μmol/L的As2O3联合加入培养体系中,同时设空白对照.上述各组分别培养48、72、96和120 h.用ELISA法检测上清液VEGF浓度.结果 沙利度胺和As2O3均可抑制ANLL细胞分泌VEGF,其抑制程度具有剂量-时间依赖性.两药联用的抑制作用更加明显.结论 白血病细胞能自分泌VEGF;沙利度胺和As2O3均能抑制ANLL细胞分泌VEGF;两者联合应用起协同作用.