免疫磁珠法纯化小鼠CD34^＋造血干细胞

目的 探讨免疫磁珠法（MiniMACS)能否用于纯化小鼠骨髓CD34^ 造血干细胞。方法 应用免疫磁珠纯化小鼠骨髓CD34^ 细胞，流式细胞仪（FACS）评估纯化效率，检测纯化后的细胞活力。结果 纯化后CD34^ 细胞纯度81．5％（范围76．80％－85．38％），回收率47．54％（范围40．50％－54．31％），纯化前后细胞活力不受影响（P＝0．169）。结论 应用MiniMACS纯化小鼠骨髓可获得高纯度CD34^ 细胞，并不影响细胞活力。     

免疫磁珠法分离提纯骨髓造血干细胞方法的建立

目的 :为了建立免疫磁珠法体外分离提纯骨髓造血干细胞的方法。方法 :采用免疫磁珠阴性选择法分选 CBA(H - 2 K)小鼠骨髓细胞的 CD34+ CD38- Scal+ 细胞群 ,台盼蓝染色观察活力 ,流式细胞仪检测荧光标记的 CD34+ CD38- Scal+ 表达阳性率 ,骨髓造血干细胞 (HSCs)在体外克隆形成的分析 ,HSCs在体内造血功能重建的分析。结果 :分选后 CD34+ CD38- Scal+ 表达阳性细胞纯度达 (86 .5± 3.2 ) % ,细胞活力为 (95 .8± 2 .2 ) %。结论 :免疫磁珠阴性选择法分选系统是一种有效的骨髓造血干细胞分离提纯方法 ,省时、简便、纯度高并对细胞的生物活性无明显影响 ,提纯的细胞可直接用于后续实验     

免疫磁珠法分离骨髓CD34~+细胞的方法研究

目的 探讨免疫磁珠法分离CD34 细胞的方法. 方法 应用密度梯度离心法分离骨髓单一核细胞,后采用免疫磁珠法从单一核细胞中分选出CD34 细胞,流式细胞仪鉴定其纯度. 结果 各样品分离出的CD34 细胞占骨髓单一核细胞含量的(2.19±0.12)%,经流式细胞仪鉴定应用免疫磁珠分离的CD34 细胞纯度为(94.6±2.1)%. 结论 免疫磁珠法是分离CD34 细胞较理想的方法.     

CD34+造血干细胞混合CD3+T细胞移植分离移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应

目的探讨在异基因造血干细胞移植中能否采用纯化CD34+造血干细胞混合一定量纯化CD3+T细胞移植达到既控制移植物抗宿主病(GVHD)又保留移植物的抗白血病效应(GVL). 方法 (C57BL/6×615)F1代接种L615白血病细胞株建立小鼠白血病模型作为移植受鼠,利用免疫磁珠纯化骨髓CD34+造血干细胞及脾脏CD3+细胞,流式细胞仪分析纯化前后CD34+、CD3+细胞百分比,观察单纯移植CD34+细胞及混合不同数量级CD3+细胞后受鼠生存时间、GVHD、GVL效应,移植后骨髓造血重建细胞来源. 结果纯化CD34+细胞1×10+6移植组100%死于白血病复发;CD34+细胞+纯化CD3+细胞(1×10+7)移植组生存期明显延长,50%死于白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(5×10+7)移植组长期存活,无白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(1×10+8)移植组62.5%死于GVHD,37.5%长期存活;CD34+细胞+CD3+细胞(1.5×10+8)移植组100%死于GVHD.移植后生存时间>60 d的受鼠骨髓造血重建细胞y染色体检出率为100%. 结论移植物中CD3+细胞数量与GVHD和GVL效应密切相关,通过限定移植物中的CD3+淋巴细胞的含量能够保留GVL作用而有效控制GVHD发生.     

多发性硬化患者造血干/祖细胞及其亚群富集纯化的研究

目的：获得高纯度造血干／祖细胞(HSC／HPC)及其亚群,用于多发性硬化(MS)造血干细胞移植治疗和生物学特性的研究．方法：用免疫磁珠法(MiniMACS)从MS患者骨髓中富集CD34^ 细胞后再用荧光激活细胞分选(fluorescent acti—vated cell sorter,FACS)纯化CD34^ ／CD38^ 和CD34^ ／CD38^-细胞亚群．结果：MiniMACS分选的CD34^ 细胞群纯度达91％,FACS分选的CD34^ ／CD38^-和CD34^ ／CD38^ 两细胞亚群纯度可达98％以上．结论：MiniMACS和FACS两者结合可迅速大量纯化HSC／HPC及其重要细胞亚群,可用于临床MS造血干细胞移植、基因治疗和研究HSC／HPC及其亚群生物学特征．     

CD34+造血干/祖细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

目的探讨骨髓(BM)和动员后外周血(MPB)CD34 细胞的蛋白质差异表达情况。方法应用免疫磁珠法分离、纯化正常人骨髓和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后外周血单个核细胞(MNCs)中的CD34 细胞,冻融法提取CD34 细胞的全细胞蛋白质进行双向电泳,并对电泳结果进行图像分析。结果纯化后CD34 细胞的平均纯度为(92.33±2.65)%;每次纯化获得的CD34 细胞数平均为(1.12±0.42)×106个。优化的双向电泳技术获得较为理想的蛋白质组图谱,显示出不同来源的CD34 细胞存在不同的蛋白质表达。结论免疫磁珠联合双向电泳适用于造血干/祖细胞的蛋白质组研究,骨髓和动员后外周血CD34 细胞的蛋白质表达存在差异。     

搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中富集CD34^＋干细胞的方法

目的为便于进行心肌干细胞移植的临床研究,探索一种搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中快速富集CD34+干细胞的方法.方法搭桥手术患者11例,男6例,女5例,平均年龄(65.4±8.9)岁,平均体重(60.8±14.6)kg.术中从胸骨和肋股骨髓中多点抽取骨髓,MiniMACS分选系统分离纯化骨髓CD34+干细胞,流式细胞术检测富集的CD34+细胞纯度,镜检细胞活力,计数富集干细胞的时间.结果本方法抽取的骨髓液20～30ml,可富集(1.7±0.8)×107个CD34+干细胞,纯度(95.8±1.6)%,活力(95.3±1.6)%;从抽取骨髓到富集到可用的CD34+细胞用时3.5～4 h.结论搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中可快速富集理想的CD 34+干细胞,获取细胞隐蔽,患者无痛苦,分选时间短,可在搭桥手术结束前提供心肌注射使用,为心肌干细胞移植的临床试验提供依据.     

应用免疫磁珠法富集慢性髓性白血病骨髓CD34^＋细胞

利用免疫磁珠法 (MACS)富集慢性髓性白血病骨髓单个核细胞 (MNC)中的CD34 细胞 ,用流式细胞术检测富集前后CD34 细胞纯度。结果表明 ,富集前CD34 细胞纯度为 2 .3 %± 0 .4% ( x±SD ,下同 ) ,富集后纯度为 90 .68%± 3 .0 2 % ,仍保持细胞活力。该法简便、快速、富集纯度高 ,为分离纯化CML骨髓中的CD34 细胞提供了有效方法。     

免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞及初步鉴定

目的:应用免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞,观察其分选效果,建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,在自制培养基下贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,锥虫蓝拒染实验计数MACS分选前后细胞活力.流式细胞仪鉴定分选后细胞纯度;流式细胞仪分析培养细胞CD29、CD44、CD34和HLA-DR表达情况.结果:通过MACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5～10)×104/ml hMAPCs,分选后的hMAPCs细胞生长良好,最长传代到第20代.分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;流式细胞仪分析获取的CD45-、GlyA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪检测hMAPCs中CD29阳性表达细胞比率为99.2%,CD44阳性细胞比率为98.3%,CD34阳性细胞比率为1.2%,HLA-DR阳性细胞比率为5.3%.结论:CD45、GlyA免疫微磁珠负分选可从骨髓中分离高纯度的hMAPCs;分选后hMAPCs在自行研制的培养基中有较强的增殖能力.     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4+T细胞体外增殖的影响

目的 探讨小鼠脾脏CD4⁺T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4⁺T细胞体外增殖的影响.方法 以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4⁺T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力.将10～20μg/ml Kou分别作用于经刀豆蛋白A或植物血凝素刺激的小鼠T淋巴细胞,四唑盐比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫法检测细胞上清中IL-2的含量.结果 经过流式细胞仪测定分离后的小鼠脾脏CD4⁺T细胞纯度达到90.%±5.8%:0.2%台盼兰染色细胞活力为94.9%±.6%;增殖试验表明分离后未加Kou的CD4⁺T细胞对刀豆蛋白A、植物血凝素的刺激保持了良好的增殖能力,当浓度范围为20～20μg/ml时,Kou均能抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05),且表现出一定的剂量相关性;不同浓度的Kou(20、100、200μgm1)作用后,CD4⁺T细胞培养上清中的IL-2水平明显低于对照组(P<0.05).结论 免疫磁珠阴性分选法操作简单、快速,可获得较高纯化率、有活性的CD4⁺T细胞;Kou明显抑制小鼠CD4⁺T淋巴细胞增殖反应,此抑制作用可能与Kou抑制小鼠CD4⁺T细胞IL-2的分泌及免疫抑制作用相关.     

急性髓系白血病患者白血病细胞CD34和CD38抗原的表达及其临床意义

目的:探讨初诊急性髓系白血病(AML)患者白血病细胞CD34和CD38抗原表达与预后的关系,阐明CD34和CD38抗原表达在预测AML患者预后中的作用。方法:收集初诊AML患者94例,采用流式细胞术检测AML患者白血病细胞CD34和CD38抗原的表达,依据CD38抗原表达将患者分为CD34⁺ CD38^-组(n=36)和CD34⁺CD38⁺组(n=58)。2组患者诱导方案均为IA方案。比较2组患者完全缓解率(CRR)、复发率、中位总生存时间(OS)、中位无病生存时间(DFS)和生存率。结果:CD34⁺ CD38^-组患者CRR为77.8%,CD34⁺CD38⁺组为86.2%,2组患者诱导治疗后CRR比较差异无统计学意义(P>0.05);CD34⁺ CD38^-组患者总复发率和1年内复发率(53.8%和36.0%)均高于CD34⁺CD38⁺组(27.9%和14.3%)(P<0.05);CD34⁺ CD38^-组患者中位OS(13.60个月)小于CD34⁺CD38⁺组(20.33个月)(P<0.05);CD34⁺ CD38^-组患者中位DFS(12.87个月)小于CD34⁺CD38⁺组(33.93个月)(P<0.05)。CD34⁺ CD38^-组患者1年和2年生存率(52.8%和38.9%)低于CD34⁺CD38⁺组(75.9%和48.3%)(P<0.05)。结论:白血病细胞CD34⁺ CD38^-抗原的表达为初诊AML患者提供一个新的预后指标,表达CD34⁺ CD38^-抗原患者预后不良。     

Expression of CD123 and CD114 on the bone marrow cells of patients with myelodysplastic syndrome

Background Recent studies have shown that interleukin-3 receptor α （CD123） is highly expressed on leukemia stem cells of patients with acute myeloid leukemia, and is correlated with tumor load and poor prognosis.The expression of CD123 may also be high in patients with myelodysplastic syndrome （MDS）.In this study, the expression and clinical significance of CD123 and granulocyte colony stimulating factor （G-CSF） receptor （CD114） on the bone marrow cells of patients with MDS were investigated to explore the molecular marker of the malignant clone of MDS.Methods Forty-two patients with MDS, who were diagnosed in the Hematological Department of General Hospital of Tianjin Medical University from 2008 to 2009, and twelve normal controls were enrolled in this study.Fluorescence activiated cell sorter （FACS） was used to measure the expression of CD123 on CD34＋CD38- cells and CD114 on CD34＋cells of the bone marrow of these patients and controls and the clinical significance was analyzed.The expression of CD114 on CD123＋CD34＋CD38- cells was further measured to explore the molecular marker of the malignant clone in MDS.Results MDS patients displayed significantly higher proportion of CD34＋CD38-/CD34＋ （（14.03±5.27）%） than normal controls （（7.70±4.36）%, P 〈0.05）.The expression rate of CD123＋CD34＋CD38-/CD34＋CD38- was significantly higher in MDS patients （（48.39±28.15）%） than that in normal controls （（8.75±11.71）%, P 〈0.01）.The expression level of CD123 was significantly correlated with the proportion of bone marrow blasts （r=0.457, P 〈0.05）.The expression rate of CD114＋CD34＋/CD34＋ was lower in MDS patients （（33.05±21.71）%） than that in normal controls （（38.99±19.07）%） but was not statistically significant （P 〉0.05）.The expression of CD114 on CD123＋CD34＋CD38- cells （（34.82±29.58）%） was significantly lower than that on CD123-CD34＋CD38- cells （（53.48±27.41）%） of M DS patients （P 〈0.05）.Conclusions MDS patients displayed higher proportion of CD34＋CD38-/CD34＋ than normal controls.CD123 was highly expressed in the bone marrow of the patients with MDS, significantly correlated with the proportion of bone marrow blasts, and thus might be the marker of MDS malignant clone.CD123＋CD34＋CD38- cells exhibited lower expression of G-CSF receptors, which might partly explain why MDS clone responds worse to G-CSF in vitro and in vivo.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面造血因子受体的表达

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面干细胞因子受体(SCF-R)、红细胞生成素受体(EpoR)、粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)及血小板生成素受体(TpoR)的表达情况及其意义.方法 采用流式细胞术检测2008年7月至2010年3月天津医科大学总医院新诊断的45例MDS患者(17例低危患者、28例高危患者)及30名对照组原代骨髓CD34+CD38+及CD34+CD38-细胞亚群及其表面SCF-R、EpoR、G-CSFR及TpoR的表达率.结果 高危组CD34+细胞比例[0.53%(0.10%～1.68%)]明显高于对照组[0.13%(0.08%～0.32%),P＜0.01],其他2组间比较差异无统计学意义.低危组和高危组CD34+CD38+细胞比例(86.3%±8.5%、82.6%±11.1%)显著低于对照组(92.3%±3.4%,均P＜0.05),而CD34+CD38-细胞比例(13.7%±8.5%、17.4%±11.0%)显著高于对照组(7.7%±3.4%,均P＜0.05).对照组骨髓CD34+CD38+细胞亚群EpoR表达率(18.7%±18.3%)显著低于CD34+CD38-细胞亚群(63.6%±20.0%,P＜0.01),两亚群之间SCF-R、G-CSFR及TpoR表达率差异无统计学意义.在CD34+CD38+细胞亚群中,3组间SCF-R和TpoR表达率差异无统计学意义,而低危组和高危组EpoR的表达率[9.0%(1.4%～12.7%)、5.2%(1.1%～14.1%)]明显低于对照组[9.6%(5.1%～30.1%),均P＜0.05],G-CSFR的表达率(29.8%±19.1%、28.7%±21.1%)明显低于对照组(44.4%±23.4%,均P＜0.05);在CD34+CD38-细胞亚群中,3组间SCF-R和G-CSFR表达率差异无统计学意义,低危组和高危组EpoR的表达率(42.2%±21.9%、25.7%±15.6%)明显低于对照组(63.6%±20.0%,均P＜0.01),TpoR的表达率(5.4%±4.7%、4.1%±4.0%)明显低于对照组(10.1%±8.3%,均P＜0.05).MDS患者骨髓CD34+CD38+和CD34+CD38-细胞亚群表面受体表达率低的患者其外周血血红蛋白水平、中性粒细胞及血小板计数减低的发生率明显高于受体表达率不低的患者(均P＜0.05).结论 MDS患者的原代骨髓CD34+细胞亚群分化异常,膜表面部分造血细胞因子受体表达减低,这可能与MDS患者血细胞减少有关,有望用于辅助诊断MDS.

Abstract：

Objective To detect the abnormalities of differentiation and expression of membrane hemopoietic cytokine receptors on CD34 + bone marrow cells in patients with myelodysplastic syndromes (MDS). Methods Forty-five newly diagnosed MDS cases from July 2008 to March 2010 in our hospitaland 30 normal controls were enrolled. There were 17 low-risk and 28 high-risk patients. The CD34 + CD38 +and CD34 + CD38- bone marrow cells and the expressions of stem cell factor receptor (SCF-R),erythropoietin receptor (EpoR), granulocyte colony-stimulating factor receptors (G-CSFR) and thrombopoietin receptor (TpoR) on those cells were measured by flow cytometry. Results The mean percentage of CD34+ in karyocyte of MDS cases in high-risk patients [0. 53% (0. 10% - 1.68% )] was significantly higher than that of control group [0. 13% ( 0. 08% - 0. 32% ), P ＜ 0. 01] . The mean percentages of CD34 + CD38 + cells were significantly lower in low and high-risk groups (86. 3% ± 8.5% and 82. 6% ± 11.1% ) than those in control group (92. 3% ± 3.4% ). And the percentage of CD34+ CD38-cells was significantly higher in either low-risk or high-risk group ( 13.7% ±8. 5% and 17.4% ± 11.0% )than that in control group (7.7% ± 3.4%, both P ＜ 0. 05 ). In control group, the mean percentage of antigen expression of EpoR was significantly lower in CD34 + CD38 + cells than that in CD34 + CD38 - cells ( 18.7% ± 18. 3% vs 63. 6% ±20. 0%, P ＜0. 01 ). The expressions of SCF-R, G-CSFR and TpoR were not significantly different between two cell populations. The expressions of EpoR on CD34 + CD38 + cells of low and high-risk MDS groups [9.0% ( 1.4% - 12. 7% ), 5. 2% ( 1.1% - 14. 1% )] were significantly lower than those of control group [9. 6% (5.1% - 30. 1% ), both P ＜ 0. 05]. The expressions of G-CSFR on CD34+CD38+ cells of low and high-risk MDS groups (29.8% ± 19. 1%, 28.7% ± 21.1%) were significantly lower than those of control group (44.4% ± 23.4%, both P ＜ 0. 05 ). The quantities of EpoR on CD34 + CD38 - cells of low and high-risk MDS groups ( 42. 2% ± 21.9%, 25.7% ± 15. 6% ) were significantly lower than those of control group ( 63. 6% ± 20. 0%, both P ＜ 0. 01 ). The expressions of TpoR on CD34+ CD38- cells of low and high-risk MDS groups (5.4% ± 4.7%, 4.1% ± 4.0%) were significantly lower than those of control group ( 10. 1% ± 8. 3%, both P ＜ 0. 05 ). The incidence of cytopenia with low expression rates of hemopoietic cytokine receptors on CD34 + cells was higher than that of MDS with high expression rates. Conclusion The abnormalities of differentiation and membrane hemopoietic cytokine receptors expression of CD34 + bone marrow cells in MDS are associated with MDS cytopenia and may be useful for the diagnosis of MDS.     

骨髓增生异常综合征中骨髓CD34~+、CD34~-细胞凋亡和增殖的实验研究

目的:分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞和CD34-细胞凋亡和增殖情况,从该角度探讨MDS的发病机制。方法:流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34+细胞的比例,CD34+细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡/增殖(A/P)比。结果:(1)MDS患者CD34+细胞的比例明显高于对照组,其中高危组CD34+细胞的比例明显高于低危组(P<0.05),而低危组与对照组比较无显著差异;(2)CD34+,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组,在低危组中,CD34-细胞的凋亡率(80.36±1.82)%明显高于CD34+细胞(54.75±2.18)%(P<0.05),而在高危组中,CD34+,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;(3)CD34+细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异,在高危组中,CD34+细胞的增殖率(50.67±3.37)%明显高于CD34-细胞的(30.99±1.96)%(P<0.05);(4)无论CD34+,CD34-细胞的A/P值在MDS低危组中均明显高于高危组和正常对照组,而在MDS各亚组中,CD34-细胞的A/P值明显高于CD34+的A/P值(P<0.05)。结论:CD34+细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34+细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。     

免疫磁珠分选白血病KG1a细胞中CD34~+CD38~-干细胞及其特性研究

目的从白血病KG1a细胞中分选CD34+CD38-干细胞并研究其生物学特性。方法免疫磁珠法分选CD34+CD38-细胞,流式细胞术分析细胞表面膜抗原、细胞周期,甲基纤维素培养体系观察其克隆性;以HL60、K562、CD34+CD38+细胞为对照,甲基偶氮唑蓝法检测柔红霉素对CD34+CD38-细胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接种,观察体内成瘤能力。结果分选的CD34+CD38-细胞纯度达95%以上,(69.03±3.25)%处于G0期,克隆形成率为(38.64±2.68)%,明显抵抗柔红霉素;不同浓度柔红霉素作用后,CD34+CD38-、CD34+CD38+、HL60、K562细胞的活性差异有统计学意义(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率显著高于CD34+CD38+细胞(P<0.05)。结论免疫磁珠法分选白血病干细胞简单易行,分选的细胞符合白血病干细胞生物学特性。     

富集CD34^＋细胞作干细胞移植的临床初步探索

目的 观察富集ＣＤ３４＾＋的造血干／祖细胞做肿瘤患者同种异基因造血干细胞移植（Ａｌｌｏ－ＨＳＣＴ０的自体移植的临床疗效。观察输注纯化ＣＤ３４＾＋细胞患者的预后情况。方法 采用磁分选临床型细胞富集仪将表面包被有ＣＤ３４单抗的磁性微球体系与细胞共同培养,特异性结合ＣＤ３４＾＋细胞。在磁场作用下分别收集ＣＤ３４＾＋和ＣＤ３４＾－组分。完成２０例患者ＣＤ３４＾＋细胞体外纯化富集。其中ＨＬＡ半相合移植５例,     

人脐带间充质干细胞对脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠体内造血重建的影响

目的 探讨人脐带间充质干细胞对脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠体内造血重建的影响.方法 将3.5×10~5个脐血CD34~+细胞单独(单移植组)或与5.0×10~6个人脐带间充质干细胞共同(共移植组)输入经~(137)Cs 3.0Gy照射后的NOD/SCID小鼠体内,观察移植后6周内小鼠外周血象的变化情况.于移植后第6周处死小鼠,采用流式细胞术检测小鼠骨髓、脾脏及外周血人源细胞(hCD45~+)含量,并分别检测小鼠骨髓中人源淋巴系(CD3/CD19)、粒系(CD33)、单核系(CD14)、血小板(CD61)、红系(CD235a)等各系血细胞比例,比较间充质干细胞共移植对CD34~+细胞植入率的影响.结果 移植后3周,两组小鼠外周血象开始有不同程度恢复;移植后6周,共移植组外周血白细胞和血小板计数均已达高峰,明显高于单移植组(P<0.05),两组小鼠的红细胞计数差异无统计学意义(P>0.05).移植后6周,共移植组骨髓及外周血中人源细胞hCD45~+CD34~+比例分别为(42.66±2.57)%和(4.74±1.02)%,明显高于单移植组的(25.27±1.67)%和(1.19±0.54)%(P=0.006).移植后6周,共移植组小鼠骨髓内的CD19~+、CD33~+、CD14~+、CD61~+和CD235a~+细胞比例均明显高于单移植组(P<0.05),CD3~+T淋巴细胞比例明显低于单移植组(P=0.003);CD19~+B淋巴细胞得到优势扩增,明显高于其他各系血细胞比例(P<0.05).结论 脐带间充质干细胞与脐血CD34~+细胞共移植可促进造血干细胞的植入,缩短CD34~+细胞移植后造血恢复时间.     

外周血CD34~+细胞与急性脑梗死及脑血管病危险因素的相关性

目的:探讨急性脑梗死是否会动员CD34+细胞到外周血及其与脑血管病危险因素的相关性。方法:筛选急性脑梗死32例(A组),脑血管病危险因素32例(B组),健康对照组20例(C组)。流式细胞仪测定外周血CD34+含量。结果:①A、B、C 3组CD34+含量分别为(0.036±0.023)%,(0.073±0.021)%和(0.094±0.022)%,有显著性差异(P<0.001)。②CD34+含量与高血压、糖尿病呈负相关,与HDL-C/LDL-C呈正相关(P<0.05)。吸烟,TC,HDL,LDL与CD34+无相关性(P>0.05)。③高血压、糖尿病、HDL/LDL是CD34+含量的独立影响因素(P<0.05)。④CD34+含量越低,CSS评分越高。结论:①急性脑梗死动员CD34+细胞到外周血效率差。②脑血管病危险因素中高血压、糖尿病患者外周血中CD34+含量降低,HDL-C/LDL-C增高能增加外周血中CD34+含量,可能通过影响其危险因素参与了急性脑梗死的发生发展。     

肾母细胞瘤基因衍生肽诱导细胞毒性T淋巴细胞对白血病患者骨髓CD34+细胞的体外杀伤效应

目的 探讨肾母细胞瘤基因(WT1)衍生肽负载树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病CD34+细胞的体外清除效应.方法 合成一段针对HLA-A*0201锚位的WT19聚肽,体外负载来源于HLA-A*0201*健康人的DC后,诱导产生WT1肽特异性CTL(A组),以噻唑盐(MTT)比色法观察其对WT1表达阳性白血病患者(HLA-A* 0201+者3例,HLA-A*0201-者3例)骨髓CD34+细胞、健康人(HLA-A*0201+者2例,HLA-A*0201-者1例)外周血CD34+细胞和白血病NB4、K562及U937细胞株的体外杀伤效应,粒细胞-巨噬细胞系集落形成试验观察其对白血病患者骨髓CD34+细胞和健康人外周血CD34+细胞粒细胞-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)形成的影响.设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照.结果 在效靶比为20:1时,A组CTL对3例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞和NB4细胞的杀伤活性(分别为55.3%±2.8%,67.1%±3.2%、49.4%±3.8%和55.0%±3.7%)明显高于对3例HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞及K562、U937细胞的杀伤活性(均<20%),并明显高于B组和C组CTL(均P＜0.01).2例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞经A组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率分别为17.8%±4.0%和20.8%±3.4%,明显低于经B组CTL处理后(分别为88.9%±3.4%和91.8%±5.7%,均P＜0.01);HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞经A组和B组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率差异尤统计学意义.结论 WT1肽特异性CTL能够以HLA-1类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病CD34+细胞,且能特异性抑制其CFU-GM集落形成,WT1基因的表达产物可以作为清除白血病CD34+细胞靶点.