人大肠癌细胞株（HT29）与人多器官血管内皮细胞粘附数目及…

为了模拟体内癌细胞与血管内皮粘附的过程，用人大肠癌细胞与人多器官血管内皮细胞共同培养，观察到与不同血管内皮粘附的癌细胞数有显著性统计学差异。与门静脉、肠系膜静脉内皮粘附的癌细胞数多，细胞表面微绒毛多，丝状突起细长，伪足多且长；与大隐静脉内皮粘附的癌细胞数少，细胞表面突起也细小。这表明不同的血管内皮对癌细胞的粘附是具有选择性的。     

大肠癌细胞及其多细胞球体对血管内皮模型的粘附和浸润

将人脐带血管内皮细胞(HEC)培养于人羊膜基膜模型上,构成一种新的血管内皮模型,并与利用人胎儿主动脉内膜等多种血管内皮模型作对比观察。从粘附率,浸润力及形态学角度比较研究了大肠癌细胞及其多细胞球体对血管内皮细胞的粘附和浸润作用。结果表明:癌细胞直接浸润血管内皮细胞是一种重要的浸润血管方式。多细胞球体对血管内皮具有高粘附,高侵袭特性。     

三七总皂甙对白细胞及细胞粘附因子表达的影响

目的:探讨三七总皂甙对微循环障碍的主要白细胞与血管内皮的粘附因子的抑制作用。方法:采用内毒素(LPS)连续静脉给药的方法建立大鼠肠系膜微循环障碍模型,观察三七总皂甙对白细胞及静脉内皮粘附的抑制作用,并用流式细胞仪检测外周血粒细胞粘附因子CD11b、CD18的表达。结果:在LPS静脉滴注20min后,静脉血管壁的白细胞数显著增多,三七总皂甙可以显著抑制白细胞及内皮细胞的粘附,在体外LPS刺激可显著增加中性粒细胞表面粘附因子的表达,而三七总皂甙可以抑制粒细胞CD11b和CD18的表达,差异具显著性。结论:三七总皂甙通过抑制细胞粘附因子CD11b及CD18的表达,起到抑制白细胞血管壁粘附的作用。     

M21黑色素瘤细胞与淋巴管内皮细胞相互作用的形态研究

目的：观察恶性黑色素瘤细胞转移时与淋巴管内皮的作用过程，探讨肿瘤淋巴转移的机理。方法：将M21黑色素瘤细胞接种在单层淋巴管内皮上，用相差显微镜和扫描电镜观察肿瘤细胞穿越淋巴管内皮的方式及两者的形态改变。结果：黑色素瘤细胞借胞膜突起与内皮粘附，粘附部位多位于内皮细胞连接处；粘附处的内皮收缩，肿瘤细胞穿越并在内皮下迁移。结论：肿瘤细胞的转移过程包括粘附、浸润和迁移；肿瘤细胞可以直接或通过内皮细胞间隙穿越淋巴管内皮向远处转移。     

人食管鳞癌的扫描电镜观察

利用扫描电镜观察人食管鳞癌的表面形态。观察结果如下: 1.不同肉眼类型的食管癌,其癌组织表面形态各异。 2.癌细胞表面形态:从细胞最表面直到细胞溃烂处,依次可见4层不同结构,即碎屑物质、细咆外衣、质膜及细胞骨架。 3.癌细胞的细胞连接:小圆球形及包裹细胞外衣的癌细胞,其连接不好。分化较好的多角形癌细胞以胞浆突起相连接。     

兔晶体上皮细胞在不同材料人工晶体表面粘附密度的实验研究

利用体外培养的兔晶体上皮细胞（ＬＥＣ），制成４×１０４个／ｍｌ的细胞悬液接种于国内生产的３种不同材料人工晶体（ＩＯＬ）表面，在ＣＯ２培养箱内孵育２４ｈ（３７℃），再将粘附于ＩＯＬ表面的细胞消化下来、计数。结果：粘附于ＰＭＭＡＩＯＬ表面的细胞数最多，与其在ＳＩ、ＨＥＭＡＩＯＬ表面的细胞数比较差异显著（Ｐ＜０．０５）；ＳＩ与ＨＥＭＡ之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

人内皮细胞表面腺苷浓度测定

[目的]通过外源性腺苷输入法,测定人脐静脉内皮细胞表面腺苷浓度,进一步了解人类血管内皮细胞的腺苷代谢.[方法]建立细胞柱模型,分别以不同浓度的外源性腺苷注入细胞柱中,并收集各时相内细胞柱流出液中分离的人脐静脉内皮细胞分泌的腺苷,以高性能液相色谱仪(HPLC)测量其所分泌腺苷的量.[结果]生理状态下人脐静脉内皮细胞分泌的腺苷浓度为(14.4±4.9)nmol/L,细胞表面腺苷浓度为(23.8±8.1)nmol/L,差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]人类血管内皮细胞是人体内腺苷分泌的主要场所之一,在生理状态下的腺苷分泌率可较好地反映细胞表面腺苷的浓度;外源性腺苷输入法可用于定量测量细胞分泌物质在细胞表面的浓度.     

同型半胱氨酸对人外周血内皮祖细胞功能的影响

摘 要： 【目的】 探讨同型半胱氨酸（Ｈｃｙ）对外周血内皮祖细胞（EPC）迁移、粘附能力的影响。【方法】密度梯度离心法获取单个核细胞,接种于铺有人纤维连接蛋白包被的培养皿,培养７ ｄ后免疫荧光鉴定EPC。实验分对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ,ＣＴ）、５０ μｍｏｌ／Ｌ腺苷（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ, Ａｄｅ）组（Ａ５０）、５０ μｍｏｌ／Ｌ Ｈｃｙ组（Ｈ５０）、５０ μｍｏｌ／Ｌ Ｈｃｙ＋５０μｍｏｌ／ＬＡｄｅ组（Ａ５０＋Ｈ５０）和５０ μｍｏｌ／Ｌ Ｈｃｙ＋５０ μｍｏｌ／Ｌ Ａｄｅ＋１０ ｎｇ／ｍＬ血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）组（Ａ５０＋Ｈ５０＋ＶＥＧＦ）,不同给药组处理后检测内皮祖细胞迁移、粘附功能。各项实验都至少重复３次。【结果】Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ（红色）和ＦＩＴＣ－ｌｅｃｔｉｎ（绿色）染色双阳性的细胞可鉴定为EPC。与ＣＴ组相比,Ｈｃｙ、Ａｄｅ可抑制EPC细胞的迁移（Ｐ ＜ ０．０５）;Ｈｃｙ、Ａｄｅ还可抑制EPC细胞粘附到纤维连接蛋白及脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）（Ｐ＜ ０．０５）。与Ｈｃｙ、Ａｄｅ组相比,Ｈｃｙ联合Ａｄｅ可进一步显著抑制EPC细胞的迁移和粘附功能（Ｐ ＜ ０．０５）。加入ＶＥＧＦ可显著增加EPC细胞的迁移及粘附功能（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 Ｈｃｙ可显著抑制EPC的迁移粘附能力,加入ＶＥＧＦ后可明显改善这种抑制效应。     

不同转移潜能人肝癌细胞株与细胞外基质的粘附研究

目的：探讨肿瘤生物学特性对肝癌转移的影响。方法：采用荧光标记的体外细胞粘附方法，确定粘附最佳条件，比较高，低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97，SMMC7721与细胞外基质成分的粘附百分比。结果：SMMC7721细胞与玻璃蛋白，纤连蛋白和纤维蛋白原的粘附百分比分别为44．9％，47．4％，59．3％，MHCC97细胞则分别为73．6％，76．4％，80．6％，对应比较均有显差异（P＜0．05），结论：肿瘤细胞粘附能力的改变与其生物特性有关，人肝癌细胞的高转移特性与其高粘附性，细胞表面粘附分子（主要是整合蛋白）表达上的差异有关。     

脂质过氧化内皮细胞cAMP水平与单核细胞粘附关系的研究

目的：研究内皮细胞脂质过氧化损伤后环磷腺苷酸（ｃＡＭＰ）含量变化及其与单核细胞粘附的关系。方法：用氧化剂联胺作用于培养人脐静脉内皮细胞,诱发脂质过氧化损伤后,以生化方法检测内皮细胞ｃＡＭＰ含量变化,光镜观察计数单核细胞对内皮的粘工用抑制ｃＡＭＰ因素Ｇａｌａｎｉｎ观察其对单核细胞粘附的影响。结果：适当浓度的联胺可引起内皮脂质过氧化损伤。脂质过氧化损伤后内皮的ｃＡＭＰ含量显著增加（Ｐ〈０．０５）,单核     

人脐静脉内皮细胞体外培养及其相关研究

血管内皮损伤是许多疾病如动脉粥样硬化等发生的始动机制。血管内皮细胞在体外的成功培养为研究内皮细胞功能及其在各种疾病的发生发展中所起的作用提供了良好的基础。人脐静脉内皮细胞取材容易,操作方便,目前已成为血管内皮细胞体外实验的的重要材料。近年来,人脐静脉内皮细胞在妊娠高血压综合征、静脉血栓等方面的研究中有很高的应用价值。     

化疗药物对白念珠菌粘附及播散的影响

吕药等对播散性念珠菌病的影响。方法采用体外实验，观察几种抗癌药和抗生素对白念 菌粘附上皮细胞的影响；同时对经环磷酰胺处理的小鼠静脉接种白念 珠菌，观察抗癌药物对血管内皮细胞的作用及其与白念 珠菌播散的关系。     

Effects of eukaryotic expression plasmid encoding human tumstatin gene on endothelial cells in vitro

Background Tumstatin is a novel endogenous angiogenesis inhibitor which is widely studied using purified protein.The current study evaluates the antiangiogenic effects of tumstatin-overexpression plasmid in vitro, reveals the mechanism underlying the vascular endothelial cell growth inhibition and searches for a novel method administering tumstatin persistently.Methods The eukaryotic expression plasmid pcDNA-tumstatin encoding tumstatin gene was constructed and transfected to human umbilical vein endothelial cell ECV304 and human renal carcinoma cell ACHN.Expression of tumstatin in the two cell lines was determined by RT-PCR and Western blotting.Vascular endothelial cell proliferation was assessed by CCK-8 assay and cell cycle was analyzed by flow cytometry.To investigate the mechanism by which pcDNA-tumstatin inhibited vascular endothelial cell proliferation in vitro, cyclin D1 protein was detected by Western blotting.Results DNA sequence confirmed that pcDNA-tumstatin was successfully constructed.RT-PCR and Western blotting indicated that tumstatin could express in the two cell lines effectively.After tumstatin gene transfer, ECV304 cell growth was significantly inhibited and the cell cycle was arrested in G1 phase.And Western blotting showed that pcDNA-tumstatin decreased the level of cyclin D1 protein.Conclusions Overexpression of tumstatin mediated by pcDNA 3.1 （＋） specially inhibited vascular endothelial cells by arresting vascular endothelial cell in G1 phase resulting from downregulation of cyclin D1 and administration of tumstatin using a gene therapy might be a novel strategy for cancer therapy.     

己酮可可碱抗白细胞与内皮细胞粘附的研究

本实验用流室系统定量地研究了己酮可可碱在体外对健康人白细胞与培养的人脐静脉内皮细胞粘附的作用。实验结果表明：己酮可可碱可减少白细胞与内皮细胞的粘附，且己酮可可碱的这种抗粘附作用主要是通过作用于白细胞而实现的。     

食管癌细胞来源的外泌体促进人脐静脉血管内皮细胞血管生成

目的: 探讨食管癌细胞EC109分泌的外泌体（EC109 derived exosomes, EC109-ex）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）成管能力的促进作用。方法：培养食管癌细胞EC109至对数生长期,收集细胞上清液,梯度超速离心法提取外泌体,并采用蛋白质印迹法检测外泌体的表面特异性分子CD9、CD63,透射电镜观察外泌体的结构和粒径。荧光染料CM-DiR标记EC109-ex并与HUVECs共培养,荧光显微镜观察HUVECs摄取EC109-ex。分别加入PBS（对照组）、EC109 ex（5 μg/mL和10 μg/mL）与HUVECs共培养,通过Transwell和细胞成管实验观察EC109-ex对于HUVECs的侵袭和成管能力的促进作用,通过蛋白质印迹法检测HUVECs血管特异性标志物CD31、CD34和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：EC109-ex能够定位于HUVECs的胞质。与对照组相比,与EC109 ex共培养后,HUVECs的侵袭（P<0.01）和成管能力（P<0.01）均显著提高,血管特异性标志物CD31、CD34和VEGF的表达也显著增强（P<0.01）。结论：食管癌细胞可通过旁分泌外泌体途径促进肿瘤血管的生成。     

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

目的：检测重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）的抗肿瘤活性。方法：检测重组人可溶性VEGI对建株人脐静脉内皮细胞（ECV304）、新生牛主动脉内皮细胞（BAEC）增殖抑制的活性以及对荷S180肉瘤小鼠的疗效。结果：重组人可溶性VEGI可以直接抑制ECV304、BAEC的增殖,强烈抑制S180肉瘤生长并延长S180腹水瘤小鼠的寿命。结论：重组人可溶性VEGI可通过抑制新生血管形成用于肿瘤治疗。     

柚皮苷抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞与单核细胞的粘附作用

目的研究柚皮苷对高糖诱导的脐静脉内皮细胞(HUVECs)与单核细胞的粘附的抑制作用及机制。方法分离培养HUVECs后,采用不同剂量的柚皮苷预处理HUVECs,然后高糖诱导HUVECs;加入荧光染料标记单核细胞系THP-1细胞与HUVECs共同孵育,荧光显微镜下观察HUVECs与单核细胞的粘附作用并拍照,比较粘附密度;提取总蛋白后,Western blotting检测处理后HUVECs粘附分子的表达;荧光染料结合法检测处理后HUVECs活性氧的产生;提取处理的脐静脉内皮细胞核蛋白后,Western blotting检测核因子-κB在核内的量。结果高糖诱导HUVECs与单核细胞的粘附,柚皮苷可显著抑制高糖诱导的HUVECs与单核细胞的粘附。柚皮苷抑制高糖诱导的HUVECs细胞间粘附分子和血管内皮细胞粘附分子的表达,柚皮苷抑制高糖诱导的HUVECs活性氧产生,柚皮苷抑制高糖诱导的HUVECs核因子-κBp65活化。结论柚皮苷可能通过抑制高糖诱导的HUVECs活性氧产生,从而抑制核因子-κB的活化,进一步抑制细胞间粘附分子和血管内皮细胞粘附分子的表达,影响HUVECs与THP-1细胞的粘附,从而抑制高糖诱导的血管炎症...     

刮取法改良人原代大隐静脉内皮细胞的提取方法

目的 改良人原代大隐静脉内皮细胞的提取方法,为冠状动脉旁路移植术后静脉移植物衰败的研究提供细胞模型。方法 传统酶消法(酶消组)和刮取法(刮取组,刮取酶消法后的大隐静脉内皮并进一步酶消)从人大隐静脉中提取内皮细胞。获得的内皮细胞在含10%胎牛血清+1%内皮细胞生长补充剂+100 U/mL青霉素+100 mg/mL链霉素的内皮细胞培养基中传代培养。倒置显微镜观察内皮细胞形态和贴壁情况;血管性血友病因子(vWF)的免疫荧光实验鉴定内皮细胞特异性抗原;CD31流式细胞计数检测内皮细胞纯度;绘制不同观测日的内皮细胞生长曲线测定内皮细胞活性。结果 显微镜下观察到两组大隐静脉内皮细胞贴壁汇合并且呈典型的鹅卵石样排列;免疫荧光实验证实培养的细胞vWF阳性表达;流式细胞计数结果显示,酶消组99.9%、刮取组89.2%的细胞阳性表达CD31;不同观测日的生长曲线结果显示,两组内皮细胞活性的主效应不显著(P=0.057)。两组内皮细胞均能够传至第7～8代。结论 在传统酶消法的基础上增加刮取再消化的步骤,能够提取出数量更多且满足实验需要的原代人大隐静脉内皮细胞。     

人外周血来源的血管内皮祖细胞体外诱导分化

目的研究外周血来源内皮祖细胞的分离、培养、分化及鉴定方法。方法采集正常人外周血单个核细胞进行体外培养，通过免疫组化、免疫荧光和流式细胞术测定分化细胞表面特异性抗原的表达及其变化。结果培养7d后多数细胞贴壁生长，逐渐显示内皮细胞的形态特点，传代培养4周后呈典型铺路石样，并可继续稳定传代扩增；免疫组化和免疫荧光染色CD31、CD34、血管内皮细胞生长因子受体．2和vWF均呈阳性；流式细胞显示，经体外诱导培养后CD34^＋／AC133^＋细胞数明显增多。结论外周血来源的单个核细胞中含有能分化成血管内皮细胞的内皮祖细胞，其在一定条件下可稳定分化、扩增。     

Culture supernatants of breast cancer cell line MDA-MB-231 treated with parthenolide inhibit the proliferation, migration, and lumen formation capacity of human umbilical vein endothelial cells

Background  Parthenolide has been tested for anti-tumor activities, such as anti-proliferation and pro-apoptosis in recent studies. However, little is known about its role in the process of tumor angiogenesis. This study aims to investigate the effects and potential mechanisms of parthenolide on the proliferation, migration and lumen formation capacity of human umbilical vein endothelial cells.

Methods  Different concentrations of parthenolide were applied to the human breast cancer cell line MDA-MB-231 cells. After 24-hour incubation, the culture supernatants were harvested and used to treat human umbilical vein endothelial cells for 24 hours. Then an inverted fluorescence phase contrast microscope was used to evaluate the human umbilical vein endothelial cells. The secretion of vascular endothelial growth factor (VEGF), interleukin (IL)-8 and matrix metalloproteinases (MMP)-9 in the culture supernatant of the MDA-MB-231 cells was then measured with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) assays.

Results  Suppression of proliferation, migration, and the lumen formation capacity of human umbilical vein endothelial cells was observed in the presence of the culture supernatants from the breast cancer cell line treated with different concentrations of parthenolide. Parthenolide decreased the levels of the angiogenic factors MMP-9, VEGF, and IL-8 secreted by the MDA-MB-231 cells.

Conclusions  Parthenolide may suppress angiogenesis through decreasing angiogenic factors secreted by breast cancer cells to interfere with the proliferation, migration and lumen-like structure formation of endothelial cells, thereby inhibiting tumor growth. It is a promising potential anti-angiogenic drug.