大鼠胼胝体神经元化学性质研究:Ⅱ.γ—氨基丁酸的免疫细胞化学研究

用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪与γ-氨基丁酸(GABA)免疫细胞化学结合法研究了大鼠额叶和枕叶皮质内胼胝体神经元的化学性质.结果发现,有少量胼胝体神经元为 GABA 免疫反应阳性.含 GABA 的胼胝体神经元为中等大小的非锥体细胞,胞体为圆形、椭圆形或梭形,绝大部分位于皮质Ⅴ、Ⅵ层,并有成群分布的倾向。本文首次从形态学上证实,少量胼胝体神经元含抑制性神经递质 GABA,因而具有抑制性质。含GABA 的胼胝体神经元的存在还提示:至少在大鼠大脑皮质内一些含 GABA 神经元有比局部回路神经元较长的轴突投射。     

大鼠胼胝体神经元表达Cav2.2及其神经纤维联系

目的:证明成年大鼠胼胝体内存在神经元,检测胼胝体神经元是否表达钙通道蛋白并追踪胼胝体神经元纤维联系方式.方法:选取正常SD大鼠脑,冰冻连续切片进行成熟神经元的标志物NeuN和N型电压依赖性钙通道α1亚单位(Cav2.2)的免疫组织化学染色,应用神经束路逆行追踪剂30%辣根过氧化物酶(HRP)生理盐水溶液注射入胼胝体小钳下方,对HRP进行四甲基联苯胺(TMB)显色.分别观察胼胝体中NeuN和cav2.2的表达和胼胝体内神经元突起的联系情况.结果:在胼胝体中存在少量NeuN阳性细胞,部分NeuN阳性细胞同时表达Cav2.2.神经逆行追踪显示在胼胝体内存在HRP阳性神经元,其神经纤维连接与皮质或尾壳核有联系.结论:在成年大鼠胼胝体内存在少量的神经元,部分胼胝体神经元表达Cav2.2.这些神经元可能与脑皮质和胼胝体下方的尾壳核有联系.     

大鼠颞叶皮质谷氨酸能神经元至纹状体的投射

用辣根过氧化物酶(HRP)逆行追踪与免疫细胞化学结合方法,对大鼠颞叶皮质谷氨酸(Glu)能神经元至纹状体的投射进行了研究。结果发现,将HRP注入一侧新纹状体后,从侧颞叶皮质Ⅲ～V层内可见3种不同的标记细胞:HRP单标记细胞、Glu单标记细胞和HRP与Glu双标记细胞,其中HRP单标记细胞及HRP与Glu双标记细胞以同侧略多。提示,大鼠颞叫皮质Ⅲ～V层的Glu能神经元有至双侧纹状体的投射,以同侧为主,此外尚有含其他神经递质的神经元也直接投射至纹状体。     

大鼠听皮质(41区)胼胝体神经元轴突在胼胝体内的定位─HRP法研究

为探讨听皮质（41区）胼胝体神经元轴突在胼胝体内的局部定位关系，本文人为地将听皮质按四个象限分为41卫区A、41区B、41区C和41区D四个亚区，应用辣根过氧化物酶（HRP）逆轴突标不己法，对40只Wistar大鼠听皮质各部标记纤维在胼胝体正中矢状面上的分布范围进行了观测和分析，结果表明：141区标记的胼胝体神经元轴突分布在距胼胝体尾端0．11mm向吻侧0．75mm范围。各部的标记纤维在胼胝体中重叠分布，但各自又有着相对的局限区域。2在胼胝体中标记的41区胼胝体神经元轴突由疏松标记区，致密标记区和混合标记区三部分组成。各部的致密区均位于各自标记区的尾侧。     

益气养阴活血法对糖尿病大鼠额叶皮质神经元NT-3表达的影响

目的探讨益气养阴活血法对糖尿病大鼠额叶皮质神经元神经营养因子3(NT-3)表达的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱发糖尿病大鼠模型,益气养阴活血药灌胃给药进行防治,8周后取脑做NT-3免疫组化染色。结果正常对照组大鼠额叶皮质内NT-3阳性神经元数目多,染色深;糖尿病模型组大鼠额叶皮质内NT-3阳性神经元数目少,染色浅;益气养阴活血法治疗组大鼠数目和染色与正常组大鼠接近。结论益气养阴活血法具有防治糖尿病大鼠额叶皮质神经元退行性变的功效。     

大鼠颞叶(41区)与对侧大脑皮质的对应及非对应性胼胝体联系—HRP法研究

为探讨颞叶(41区)各部胼胝体神经元在皮质的层次分布特点,本文人为地将颞叶(41区)按四个象限分为A B、C、和D四个亚区,应用辣根过氧化物酶(HRP)逆轴突标记法,对40只大鼠颞叶(41区)皮质各层逆行标记的胼胝体神经元的数量、形态大小及分布进行了观察和分析。结果如下: 1、两侧41区及其与对侧20区、36区之间存在着皮质间的对应和非对应性联系。 2、逆行标记的胼胝体神经元主要位于听皮质的Ⅲ～Ⅴ层。颞叶各区又有其不同的分布特点。 3、注射对侧41区的标记细胞数量最多,其分布密度尾侧大于吻侧;36区居中,细胞分布密度吻侧大于尾侧;20区最少,细胞分布密度中间疏忪,在背腹部集中。颞叶各区的标记细胞大多集聚成群。 4、注射对侧颞叶各区的标记细胞以中型细胞为主,小型细胞次之,大型细胞最少。     

大鼠额前皮质的皮质-皮质传入纤维联系——CB-HRP及HRP法研究

本实验用CB-HRP及HRP法研究了27只大鼠额前皮质的半球间和半球内的皮质-皮质传入纤维联系。观察结果如下：皮质中标记细胞主要见于梨状区，扣带区和岛叶无颗粒皮质，其次见于额叶，顶叶、枕叶、颗叶皮质和海马后区皮质。而且发现额前皮质不同部位的传入郊位有区别，新皮质主要投射到额叶内侧面，中间皮质和旧皮质主要投射到岛叶无颗粒皮质前部，而古皮质只投射到额叶内侧面和眶回。另外，发现各区域内部存在固有纤维联系，各不同区域间也存在着往返纤维联系。     

异丙酚对在体大鼠前额叶皮质细胞外液谷氨酸和γ-氨基丁酸含量的影响

目的 观察局部灌注异丙酚对大鼠前额叶皮质细胞外液中谷氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响.方法 选用30只成年雄性大鼠随机分为实验组(n=24)和对照组(n=6),于前额叶皮质处放置微透析探头.实验组以2 μl/min灌注含不同浓度异丙酚(按照异丙酚浓度分为1、3、10、30 μmol/L4个亚组,每组n=6)的人工脑脊液;对照组灌流液中不含异丙酚.每10 rain收集灌流液并应用反相高效液相色谱法测定其中谷氨酸和GABA浓度.结果 局部灌注异丙酚1 μmol/L 10 min后,各时点灌流液中谷氨酸含量与基础值比较差异无统计学意义(P＞0.05).异丙酚3μmol/L局部灌注后,灌流液中谷氨酸含量于第10、20 min时降至基础值的60%(P<0.05),随后逐渐回升至基础值水平.前额叶皮质局部灌注异丙酚10 μmol/L 10 min后,灌流液中谷氨酸含量于第10 min至30 min显著低于基础值(P<0.01或<0.05).局部灌注异丙酚30 μmol/L 10 min后,灌流液中谷氨酸含量于第10 min至40 min均显著降低(P<0.01或<0.05).而不同浓度的异丙酚局部灌注后,各时点灌流液中GABA含量与各基础值比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可降低大鼠前额叶皮质细胞外液谷氨酸含量,而对GABA含量不产生影响.     

大鼠丘脑中央下核GABA纤维终末与腹外侧眶皮质投射神经元的突触联系

目的:观察大鼠丘脑中央下核(Sm)GABA纤维终末与腹外侧眶皮质(VLO)投射神经元的突触联系。方法:18只大鼠麻醉后固定于脑立体定位仪上,于VLO微量注射辣根过氧化物酶(HRP),48h后,应用包埋前HRP组化和GABA免疫组化双重标记电镜技术观察大鼠SmGABA纤维终末与VLO投射神经元的突触联系。结果:光镜下Sm内有大量GABA纤维终末及少数阳性神经元,电镜下可见GABA纤维终末与HRP标记的阳性神经元胞体及树突间构建了对称性和(或)非对称性突触。结论:形态学上证实了Sm内GABA纤维终末与VLO投射神经元胞体及树突发生突触联系。     

电针联合氟西汀抑制慢性应激抑郁大鼠额叶皮质nNOS、c-Fos上调和SYP下调

目的:观察电针联合氟西汀对慢性应激抑郁模型大鼠额叶皮质神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、基因片段(c-Fos)和突触素(SYP)表达的作用。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组、氟西汀组和电针+氟西汀组。对大鼠进行21 d的应激刺激建立慢性应激抑郁模型。按分组给予电针刺激百会、神庭穴30 min,氟西汀灌胃,每天1次,持续21 d,旷场实验检测大鼠行为学。免疫组织化学法检测额叶皮质nNOS、c-Fos和SYP的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠额叶皮质nNOS和c-Fos阳性神经元表达增加(P<0.05),SYP阳性神经元表达减少(P<0.05),大鼠行为学指标降低;与模型组比较,电针组、氟西汀组和电针+氟西汀组大鼠额叶皮质nNOS和c-Fos阳性神经元表达减少(P<0.05),SYP阳性神经元表达增加(P<0.05),大鼠行为学指标提高;与电针组、氟西汀组比较,电针+氟西汀组大鼠额叶皮质nNOS和c-Fos阳性神经元表达减少(P<0.05),SYP阳性神经元表达增加(P<0.05),大鼠行为学指标提高。结论:电针联合氟西汀可发挥协同作用,可能通过抑制慢性应激抑郁对额叶皮质nNOS、c-Fos的上调和SYP的下调,更好地达到抗抑郁的作用。     

人胎端脑额叶代谢型谷氨酸受体5的发育性表达及细胞定位

目的探讨人类胚胎期大脑额叶、脑室区(VZ)和脑室下区(SVZ)内代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的表达规律及细胞分布。方法将收集的引产胎儿按胎龄分为4组:9~11周,14~16周,22~24周和32~36周。切取额叶及含VZ、SVZ的脑组织固定后切片,免疫组织化学染色后观察额叶、VZ和SVZ内mGuR5的表达及其细胞定位。结果 9~36周的胚胎额叶及VZ、SVZ都有mGluR5表达,边缘带和皮质板内的免疫反应程度强于VZ和SVZ,阳性产物主要位于细胞膜。表达mGluR5的细胞主要为VZ和SVZ内的神经干/祖细胞、边缘带和VZ内的成熟前神经元及皮质板内的大量成熟神经元。结论人类胚胎额叶、VZ和SVZ内均有mGluR5表达,提示mGluR5可能参与了人类大脑皮质发生的调节过程。     

神经肽Y和一氧化氮合酶阳性神经元在大鼠大脑皮质枕叶的分布及其衰老变化

目的：研究大鼠皮质枕叶神经肽Y（NPY）和一氧化氮合酶（NOS1）阳性神经元的分布及其衰老变化。方法：采用免疫组化SABC法,观察3个不同年龄组大鼠大脑皮质枕叶NPY和NOS1阳性神经元的分布及形态特征,并进行比较。结果：NPY和NOS1阳性细胞在皮质Ⅱ-Ⅳ层均有分布,两者都属于非锥体形神经元;比较3个年龄组两种阳性细胞的数量和截面积的变化,发现老年组与幼年组及中年组相比,两项指标都显著减少（P＜0.01)。结论：NPY和一氧化氮（NO）作为神经递质,可能与在脑皮质枕叶功能的调节有关;随着衰老这两种阳性神经元的变化可能影响NPY及NO发挥正常的生理功能。     

年龄和性别影响DAT水平的实验研究

目的研究年龄、性别对1255I-2β-甲酯基-3β-(4-碘苯基)托烷(β-CIF)与多巴胺转运蛋白(DAT)结合的影响。方法 6周龄与6月龄昆明小鼠年龄影响因素实验，大鼠年龄、性别影响因素实验。结果 6周龄小鼠的纹状体、额叶皮质、顶叶皮质、颞叶皮质、枕叶皮质、海马、脑干、小脑对125I-β-CIT摄取的％ID/g值及全脑摄取量(％ID)均大于6月龄小鼠。3月龄雄性SD大鼠纹状体、额叶皮质、顶叶皮质、颞叶皮质、枕叶皮质、海马、脑干、小脑对125I-β-CIT摄取的％ID/g值及全脑％ID均大于12月龄雄性SD大鼠相应组织的％ID/g或％ID值，而且也大于12月龄雌性大鼠相应组织的％ID/g值(除颞叶皮质、全脑外)。同龄(12月)SD雌性大鼠纹状体、额叶皮质、顶叶皮质、颞叶皮质、枕叶皮质、海马、脑干、小脑对125I-β-CIT摄取的％ID/g值及全脑％ID均大于同龄雄性SD大鼠相应值。结论低龄小鼠、大鼠纹状体摄取125I-β-CIT均高于高龄小鼠、大鼠；雄性大鼠纹状体摄取125I-β-CIT高于同龄雄性大鼠。提示小鼠、大鼠脑纹状体内DAT水平随年龄的增长可能减低。 [全文刊登于中华核医学杂志2000,20(6):263]     

谷氨酸和GABA对额叶皮质锥体细胞自发性电活动的影响

目的 应用膜片钳全细胞记录技术，观察急性分离大鼠额叶皮质Ⅴ、Ⅵ层锥体细胞自发性电活动的特点及其影响因素。方法 采用酶加机械分离法分离8～12d鼠龄的Wistar大鼠额叶皮质Ⅴ、Ⅵ层锥体细胞，用膜片钳全细胞记录技术测定电生理学特性，观察不同膜电位水平时自发性电活动的特点及谷氨酸和GABA对其影响。结果 73．44％的分离神经元具有自发性电活动(n=64)，膜电位在-40～-60mV时较易出现。1mmol/L儿的谷氯酸显著增加放电活动的频率，100μmol/L GABA则明显抑制放电活动的产生。结论 急性分离的大鼠额叶皮质锥体细胞有自发性电活动，且受谷氨酸和GABA的调节。     

REM睡眠剥夺对大鼠额叶皮质5-TH的含量及学习记忆的影响

目的 观察不同持续时间快速眼动相(REM)睡眠剥夺对大鼠额叶皮质内5-羟色胺(5-TH)的含量及学习记忆的影响.方法 采用改良多平台水环境法建立大鼠REM睡眠剥夺模型,高效液相色谱电化学法检测大鼠额叶皮质内5-TH的含量,Morris水迷宫检测大鼠睡眠剥夺前后的学习记忆变化.结果 与正常对照组相比,随着REM睡眠剥夺的延长,大鼠额叶皮质内5-TH的含量增加,同时大鼠的学习记忆能力较前下降.结论 REM睡眠剥夺导致大鼠学习记忆能力下降,可能与额叶皮质内5-TH含量增加有关.     

人胎中后期大脑额叶一氧化氮合酶阳性神经元发育的免疫组织化学观察

目的探讨人胎发育中后期大脑额叶内一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的生长发育规律。方法采用免疫组织化学方法对人胎大脑额叶NOS阳性神经元的发育进行观察。结果第7～8个月龄时,大脑额叶皮质板深层NOS阳性神经元大小不一,形态多样,呈散在分布,NOS阳性反应较强;在神经元之间脑组织内有膨体神经纤维分布。第9～10个月龄时,大脑皮质板深层NOS阳性神经元胞体略大,胞质丰富,形态饱满,染色深;膨体神经纤维明显;在皮质板浅层出现散在分布的NOS阳性神经元,胞体呈圆形或椭圆形,核大,胞质少,神经突起明显。结论大脑额叶皮质深层NOS阳性神经元基本形成神经网络系统,产生较高浓度的一氧化氮微环境,有利于各种类型神经元的分化、增殖、迁移和发育。     

HRP法对大白鼠杏仁皮质核及杏仁体各亚核间联系的研究

应用辣根过氧化物酶(HRP)法对49只大白鼠杏仁皮质核的传入性联系及杏仁体内各亚核间的相互联系作了追踪观察。当HRP注入杏仁皮质核时发现标记神经元主要散布于:嗅球的僧帽细胞层、嗅径的嗅前核、嗅结节、斜角带核,对侧杏仁皮质核、梨状区、扣带回前部及邻近的额叶皮质;在间脑则位于室旁核、带旁核以及内、外侧膝状体;在下丘脑的视前核、下丘脑腹内侧核、下丘脑外侧区可见到标记细胞;在脑干内的标记神经元多限于中脑为黑质密带、腹侧被盖区、中缝背核和脚间核。上述标记部位的特点表现为对侧的杏仁皮质核,而额叶、扣带回前区、丘脑联合核,带旁核见可于双侧,但以本侧为主,其余均为同侧。     

大鼠黑质内一氧化氮合酶阳性神经元向杏仁中央核的投射

目的　观察大鼠黑质内一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元向杏仁中央核 (CeA)的投射 ,为进一步阐明一氧化氮 (NO)在黑质与CeA的纤维联系中的作用提供有价值的形态学依据。方法　用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH d)法结合辣根过氧化物酶 (HRP)逆行追踪技术 ,观察大鼠黑质内NOS阳性神经元向CeA的投射。结果　同侧黑质内有NOS/HRP双标记阳性神经元 ,主要分布在黑质致密部。结论　黑质内有NOS阳性神经元向CeA投射     

脑溢安含药血清对谷氨酸致培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 :研究中药复方脑溢安对培养大鼠皮层神经元谷氨酸兴奋毒损伤的保护作用 ,为脑溢安用于治疗中风提供实验依据。方法 :建立谷氨酸致离体培养的大鼠皮层神经元兴奋毒损伤模型 ,用中药脑溢安浸膏粉含药血清进行干预 ,检测各组细胞培养液中的乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果 :脑溢安浸膏粉含药血清能显著地对抗培养皮层神经元的谷氨酸兴奋毒损伤 ,培养液中LDH活性明显降低 (P <0 .0 1)。实验过程中 ,含药血清加入量 5 %至 2 0 %均可。致神经元损伤的谷氨酸浓度以 1mmol·L- 1 以下为宜。结论 :脑溢安含药血清对谷氨酸致培养皮层神经元损伤具有明显保护作用     

海马接触脑脊液神经元皮质内联系的光镜和电镜研究

应用HRP追踪与电镜结合的方法研究了大白鼠海马接触脑脊液神经元的分布特征和皮质内联系.光镜观察在海马的多形细胞层和锥体细胞层等处可见散在的神经元被标记,而在室管膜层标记的细胞较多,它们分布于交织成网的阳性纤维素中.透射电镜可见海马室管膜层的HRP反应阳性的神经细胞、树突末稍及神经胶质细胞.在海马室管膜上也见到了被标记的神经纤维.同时在海马室管膜层内还发现未标记的阴性轴突与被HRP标记的阳性树突构成的轴—树突触.上述结果提示海马为接触脑脊液神经元存在的部位之一,其接触脑脊液神经元并受到其它神经元的突触调控。