恒定性及波动性高糖对牛视网膜周细胞凋亡的影响

目的探讨恒定性高糖及不同频率的波动性高糖对原代培养的牛视网膜周细胞增生、细胞周期及凋亡的影响。方法以体外培养3代近融合的牛视网膜毛细血管周细胞为对象，分别在对照组（5．5mmol／L）、恒定性高糖组（25mmol／L）及不同波动频率的高糖组（5．5mmol／L与25mmol／L交替，频率分别为6h和24h）中孵育6d，采用MTT比色法观察周细胞增生情况；流式细胞术观察周细胞周期情况；TUNEL法检测培养后周细胞的凋亡率。结果周细胞增生受抑制，周期阻滞，出现典型的细胞凋亡特征。恒定性高糖组的作用高于波动性高糖组（P〈0．05）；波动性高糖组内波动频率越高作用越明显（P〈0．05）。结论恒定性高糖较波动性高糖可能具有更强的抑制周细胞增生、周期阻滞及诱导凋亡作用，波动组间波动频率高者比频率低者作用更明显。     

高糖对体外培养的视网膜Mǖller细胞活性的影响

背景视网膜Mǖiler细胞具有为视网膜组织提供营养、维持视网膜的正常结构等多种生理功能,研究发现Mǖiler细胞的病变会导致视网膜血管发生相应的改变。探讨高糖对视网膜Mǖiler细胞的影响对于糖尿病视网膜病变（DR）的发病机制研究具有重要意义。目的研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的视网膜Mǖiler细胞活性的影响。方法取出生后10d清洁级SD大鼠的视网膜组织,用组织块培养法在含质量分数20％胎牛血清的DMEM培养液中体外原代培养Mǖiler细胞并传代,取第3代细胞用免疫组织化学法对细胞进行鉴定。将不同浓度（5．5、30．0、40．0mmol／L）的葡萄糖加入培养基中培养4d,MTT比色法测定各组波长570nm处Mǖller细胞的吸光度（A570）值,计算各组细胞的相对存活率;采用流式细胞仪检测各组Mǖller细胞的凋亡率。结果培养的细胞贴壁生长,呈长梭形;95％以上细胞神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）反应阳性。MTT比色法检测显示,正常葡萄糖组及30．0mmo／L、40．0mmol／L葡萄糖处理组Mǖller细胞A570值分别为0．24±0．01、0．21±0．03和0．20±0．02,总体差异有统计学意义（F=6．755,P〈0．05）。与正常葡萄糖组比较,30．0mmol／L、40．0mmol／L葡萄糖处理组A570值均明显降低,差异有统计学意义（q=0．645、0．486,P〈0．05）。流式细胞仪检测结果表明,正常葡萄糖组、30．0mmol／L和40．0mmol／L葡萄糖处理组Mǖller细胞凋亡率分别为（26．40±0．25）％、（30．19±0．16）％和（36．23±0．19）％,总体差异有统计学意义（F=294．530,P〈0．05）,与正常葡萄糖组比较,30．0mmol／L、40．0mmol／L葡萄糖组凋亡率均明显升高,差异有统计学意义（q=0．754、0．484,P〈0．05）。结论高浓度葡萄糖可抑制视网膜Mǖller细胞的生长并增加其凋亡率,葡萄糖的上述作用呈浓度依赖性。     

高糖条件下胰岛13细胞株MIN-β细胞对视网膜色素上皮细胞的保护作用

背景糖尿病视网膜病变（DR）与高糖所致的视网膜色素上皮（RPE）细胞的氧化损伤密切相关,近年来人们广泛地致力于保护RPE细胞的研究。目的研究胰岛B细胞株MIN-6细胞对RPE细胞高糖损伤的保护作用。方法将RPE细胞体外培养4d,待贴壁生长良好后分为正常对照组、高糖对照组和MIN-6细胞共培养组,ABC法鉴定RPE细胞。用含5mmol／L葡萄糖的RPE细胞培养液进行培养作为正常对照组,高糖对照组用含30mmol／L葡萄糖的培养液进行培养,MIN-6细胞共培养组为含5×10^4个MTN-6细胞以及30mmol／L葡萄糖的培养液进行培养。各组继续培养24h后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测量高糖对已贴壁生长良好的RPE细胞的损伤作用以及MIN一6细胞对RPE细胞高糖损伤的保护作用。结果ABC法鉴定RPE细胞可见95％以上呈棕色着色,为阳性细胞。各组继续培养24h后,正常对照组、高糖对照组和MIN-6细胞共培养组RPE细胞的吸光度（A_540）值差异有统计学意义（F=19．94,P〈0．01）,正常对照组的A。值为0．44±0．02,高糖对照组为0．30±0．01,差异有统计学意义（t=6．85,P〈0．01）;MIN-6细胞共培养组的A。值为0．41±0．01,与高糖对照组的0．30±0．叭比较,差异有统计学意义（t=5．62,P〈0．01）。正常对照组RPE细胞的生存率为（97．5±3．3）％,高糖对照组为（68．2±4．5）％,差异有统计学意义（t=11．30,P〈0．01）。结论高糖导致贴壁生长良好的RPE细胞损伤,MIN-6细胞可以明显保护高糖所致的RPE细胞损伤。     

高糖对人视网膜色素上皮细胞Na-K-ATP酶表达的影响

目的 观察高糖对人视网膜色素上皮（RPE）细胞Na-K-ATP酶基因与蛋白表达的影响。方法 采用ARPE-19细胞，培养4周后分为高糖组（葡萄糖浓度30mmol／L）与对照组（葡萄糖浓度7mmol／L），继续培养2周、4周，RT-PCR法检测Na-K-ATP酶α1、Na-K-ATP酶β1的mRNA表达水平的变化，Western blot法检测Na-K-ATP酶β的蛋白表达情况。结果 高糖抑制Na-K-ATP酶α1与β1的mRNA表达，2周、4周时α1与β-actin光密度比值分别为0．17、0．23，对照组分别为0．37、0．36；β1与β-actin光密度比值分别为0．69、0．41，对照组分别为0．98、0．83；Na-K-ATP酶β蛋白表达水平较对照组降低，2周、4周时与β-actln的比值分别为0．51、0．25，对照组分别为0．65、0．68。结论 高糖环境下人RPE细胞Na-K-ATP酶基因与蛋白表达水平降低，可能参与了黄斑水肿的发生。     

高糖条件下糖康乐对RPE细胞GSH表达的影响

目的探讨在高糖条件下糖康乐对兔视网膜色素上皮（RPE）细胞谷胱甘肽（GSH）表达的影响。方法采用体外培养的兔RPE细胞,分成空白对照组、高糖组、糖康乐组和牛磺酸组4个实验组（n=6）,在高糖条件下糖康乐组加以不同质量浓度的糖康乐,对RPE细胞的GSH含量进行测定。结果RPE细胞的GSH含量在高糖作用后明显降低（t=5．72,P〈0．01）,糖康乐在质量浓度为2μg／mL时可显著抑制GSH含量的降低（t=4．63,P〈0．01）,在2p．g／mL时其作用优于阳性对照组的牛磺酸（t=4．74,P〈0．01）。结论一定质量浓度的糖康乐可以抑制高糖所导致的RPE细胞GSH含量的降低。     

高糖环境下白细胞介素1β对大鼠视网膜Müller细胞谷氨酰胺合成酶的影响

目的探讨高糖环境下白细胞介素1β（IL-1β）对视网膜Mǚller细胞谷氨酰胺合成酶的影响及其机制。方法将体外培养的大鼠Mǚller细胞随机分为对照组（5mmol／L葡萄糖）和实验组（25mmol／L葡萄糖）,分别以不同浓度的IL-1β（0、0．1、1．0、5．0、10．0ng／ml）刺激24h后,采用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测两组细胞内谷氨酰胺合成酶（GS）和即早基因c—Jun的表达变化,使用流式细胞仪Annexin V—FITC／PI双染色法测定两组细胞凋亡的情况。结果细胞免疫荧光组化法和免疫印迹法检测显示在高糖环境下就有Mǘller细胞GS表达下降、IL-1β和c—Jun表达的升高（P〈0．05）;IL-1β刺激24h后,对照组和实验组Mǚller细胞中GS的表达都随IL-1β刺激浓度升高而逐渐降低同时c—Jun的表达随IL-1β刺激浓度的增加而升高,这一结果在高糖状态下尤为明显;流式细胞仪检测显示不同浓度的IL-1β刺激24h后,两组细胞随着IL-1β浓度的增加凋亡率明显升高,在高糖环境下细胞凋亡率的增加更加明显。结论模拟糖尿病状态下,免疫相关因子IL-1β可使GS表达下降,从而影响了谷氨酸的循环,可能间接引起神经节细胞的死亡,出现早期神经视网膜功能的障碍。其可能机制为IL-1β激活了c-Jun途径而影响GS的功能。     

曲安奈德对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增生抑制作用的实验研究

目的观察曲安奈德（triamcinolone acetonide，TA）对培养的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）增生的影响。设计实验性研究。研究对象ARPE-19。方法采用MTT比色法和TUNEL染色法观察不同终质量浓度（0、10、30、300mg／L）TA分别作用于培养的ARPE-19细胞24、72小时后细胞的增生和凋亡的情况。主要指标吸光度，凋亡指数。结果（1）TUNEL法：质量浓度10mg／LTA不影响ARPE-19细胞的生长，随着质量浓度增大，细胞凋亡程度逐渐增强（t=2．921，P〈0．01），随着时问延长，ARPE-19细胞的凋亡指数逐渐增大（t=2．306，P〈0．01）。（2）MTT法：TA浓度和作用时间均对ARPE-19细胞的增生具有显著影响，随着浓度增加和时间延长，其抑制作用的差别有显著性意义（F0．05，3．16=3．24，P〈0．05；F0.05,1．16=4．49，P〈0．05），而且，TA浓度和作用时间相互影响着ARPE-19细胞的生长，对其抑制作用具有统计学意义（F0.05,1．16=4．49，P〈0．05）。结论TA能够抑制ARPE-19细胞的增生，通过玻璃体腔内注射TA或联合玻璃体切割手术可能成为增生性玻璃体视网膜病变的有效治疗。     

高糖环境下视网膜微血管周细胞β1，4半乳糖基转移酶-1的表达

目的 了解高糖培养环境下牛视网膜微血管周细胞β1,4半乳糖基转移酶-1(galactosyltransferase-1,GalT-1)的表达情况以及细胞凋亡情况.方法 原代培养牛视网膜微血管周细胞,在含不同浓度葡萄糖的培养基(5 mmol/L,10 mmol/L,20 mmol/L,30 mmol/L)培养72 h,以5 mmol/L浓度葡萄糖培养组作为正常对照组.采用RT-PCR,蛋白凝集素染色法观察不同浓度葡萄糖培养下GalT-1表达的改变情况,同时采用流式细胞观察高糖诱导的细胞凋亡.结果 高糖培养环境下,视网膜微血管周细胞内GalT-1 mRNA表达上调,凝集素染色提示视网膜微血管周细胞蛋白由Galβ1→4GlcNAc糖基化基团的修饰表达上调;视网膜微血管周细胞凋亡加剧,各葡萄糖浓度组的凋亡细胞平均死亡率为7.35±1.82%,16.34±2.25%,29.85±6.66%,39.48±6.48%.结论 高糖环境下,牛视网膜微血管周细胞内β1,4半乳糖基转移酶-1的表达上调,其可能参与了高糖环境下的视网膜微血管周细胞凋亡,参与机制有待进一步研究.     

苯磷硫胺对高糖培养的牛视网膜微血管内皮细胞的作用

目的 研究苯磷硫胺对体外高糖环境中培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞的生长及细胞凋亡的影响。方法采 用MTT法观察不同浓度的苯磷硫胺对高糖培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞增生的影响，采用流式细胞分析技术观察选定浓度的苯磷硫胺对高糖环境中培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞的凋亡的影响。结果 MTT法显示，一定浓度的苯磷硫胺可以降低高糖对牛视网膜毛细血管内皮细胞生长的抑制作用，且呈浓度相关性。在浓度为75μmol／L时OD值差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞分析技术显示，75μmol／L的苯磷硫胺可明显减少牛视网膜毛细血管内皮细胞的凋亡。结论 一定浓度的苯磷硫胺对体外高糖环境中培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞具有明显的保护作用，其机制可能在于苯磷硫胺能减少细胞凋亡。     

超氧化物歧化酶在视网膜毛细血管周细胞凋亡中的活性及意义

目的通过检测糖基化终产物（AGE）诱导培养的牛视网膜毛细血管周细胞凋亡及凋亡周细胞中超氧化物歧化酶（SOD）的活性及意义，进一步探讨糖尿病视网膜病变（DR）的发生机制。方法周细胞分别与不同浓度的AGE（0．47、1．88、7．5μmol／L）共同培养4d后，分别检测细胞凋亡、SOD活性，以及SOD对细胞凋亡及凋亡调节基因Bcl-2／Bax比率的影响。结果AGE能以浓度依赖的方式诱导周细胞凋亡（r=0．878，P〈0．01）、降低细胞内SOD的活性（r=-0．878，P〈0．01），而应用SOD能明显抑制AGE作用下的周细胞凋亡及提高凋亡调节基因Bcl-2／Bax的比率.结论凋亡及氧化应激的增加是DRP中周细胞选择性丧失的主要原因，SOD活性的下降是AGE诱导周细胞发生凋亡的关键因素。     

Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型葡萄糖浓度和培养时间的筛选

目的　筛选Ｗｉｓｔａｒ大鼠视网膜神经元高糖模型的葡萄糖浓度及培养时间。方法　取出生１～３ｄＷｉｓｔａｒ大鼠分离视网膜神经元进行传代培养,尼氏染色法鉴定细胞;实验分５组:Ａ组培养液葡萄糖浓度为０ｍｍｏｌ·Ｌ－１（正常对照组）,Ｂ组浓度为１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１,Ｃ组浓度为１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１,Ｄ组浓度为２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１,Ｅ组浓度为３５ｍｍｏｌ·Ｌ－１。分别培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ后用ＭＴＴ法检测各组细胞ＯＤ值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果　倒置显微镜观察分离培养细胞,大部分细胞于接种２４ｈ后贴壁,少数细胞长出较短的突起,并有向中央聚集生长的现象。２～３ｄ后长出突起的神经元数目增多,突起长度增加,约为自身胞体长度的１倍。培养５～７ｄ后神经元突起进一步增多、变长。经尼氏染色后细胞质呈蓝紫色,尼氏小体颗粒状结构清晰。非神经元细胞胞质基本不着色,细胞核呈淡紫色、圆形,核仁清晰可辨,神经元率达９１％。各实验组在培养２４ｈ后ＯＤ值均低于正常对照组,但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。随培养时间延长ＯＤ值继续下降,４８ｈ后各组ＯＤ值比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）;其中Ｂ组及Ｃ组与Ａ组比较差异无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;Ｄ组ＯＤ值明显下降,与Ａ组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）,Ｅ组下降更明显,与Ａ组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。７２ｈ后各组ＯＤ值比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）;其中Ｂ组及Ｃ组与Ａ组比较差异无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;Ｄ组及Ｅ组与Ａ组比较差异有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。各组在培养２４ｈ后视网膜神经元凋亡率差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。４８ｈ后各组凋亡率比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）;其中Ｂ组及Ｃ组与Ａ组比较差异无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;Ｄ组凋亡率明显升高,与Ａ组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;Ｅ组凋亡率升高更明显,与Ａ组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）,且与Ｄ组比较亦有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。７２ｈ后各组凋亡率比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）;其中Ｂ组及Ｃ组与Ａ组比较差异无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,Ｄ组及Ｅ组与Ａ组比较差异有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。结论　葡萄糖浓度为２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１培养４８ｈ是视网膜神经元高糖模型最佳葡萄糖浓度及干预时间。     

高糖饮食与近视相关信号通路关系的研究

随着近视发病率的升高,近视已成为影响我国社会健康的主要问题之一。近视是环境或遗传因素造成异常的视觉信息作用于视网膜,经视网膜色素上皮层-脉络膜信号转导,最终作用于巩膜,引发巩膜重塑而形成的。其中饮食因素很少受到关注,但已有文献报道高糖是近视的危险因素之一,长期高糖摄入导致血糖和胰岛素升高,胰高血糖素降低,以及诱发的慢性高胰岛素血症介导的胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-3表达变化等均可影响近视的进程。本文就高糖饮食与近视相关信号通路的关系进行综述,探讨影响近视进程的潜在分子机制。     

高浓度葡萄糖对视网膜毛细血管周细胞的影响

目的观察高浓度葡萄糖对体外培养的视网膜毛细血管周细胞的影响,探讨糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制。方法以新鲜牛眼球为材料,分离并培养周细胞;控制培养液中葡萄糖的浓度,采用形态学观察、乳酸脱氢酶(LDH)的测定、3H-TdR掺入法及液体闪烁技术,研究高糖对周细胞的作用。结果周细胞在高糖(10、20、40mmol     

视网膜血管内皮细胞高糖模型糖浓度及培养时间的筛选

目的:筛选Wistar大鼠视网膜血管内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,RVEC)高糖模型糖浓度及培养时间.方法:取出生1～3d的Wistar大鼠,分离RVEC进行原代培养,Ⅷ因子抗体免疫组化鉴定细胞;设立葡萄糖浓度0mmol/L为正常对照组(C组),按不同葡萄糖浓度依次分为10mmol/L(A组)、15mmol/L(B组)、25mmol/L(D组)、35 mmol/L(F组),分别在24、48、72h的3个时间点用MTT法检测各组细胞OD值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果:RVEC纯度达94％;MTT法检测不同浓度葡萄糖对Wistar大鼠RVEC的影响:培养24h,各组的OD值比较差异无统计学意义(F=0.42,P=0.7411);培养48h,五组OD值比较差异有统计学意义(F=45.2,P=0.000),五组间两两比较,除A组、B组、C组间差异无统计学意义外(Q48AB=44.0427,Q48AC=36.4701,Q48BC=27.7953,均P＞0.05),其余各组两两比较差异均有统计学意义(其中Q48CF=11.0715,Q48AF=14.0794,Q48AF=12.2964,Q48BD=23.4698,Q48BF=12.7016,Q48DF=10.2013,均P＜0.05;Q48CF=6.4701,P＜0.01).培养72h后,五组OD值比较差异有统计学意义(F=37.46,P=0.000),五组间两两比较,同样A、B、C三组间差异无统计学意义(Q72AB=27.7338,Q72AC=25.0054,Q72BC=33.3797,均P＞0.05),其余各组差异均有统计学意义(其中Q72AD=13.4793,Q72BD=12.7546,均P＜0.05;Q72CD=7.3743,Q72Cr=8.3465,Q72AF=4.7455,Q72BF=3.9471,Q72DF=3.2649,均P＜0.01).不同浓度葡萄糖在不同时间点对RVEC凋亡率的影响:培养24h后各组间差异无统计学意义(P＞0.05).培养48h后,五组间两两比较,Q48AB=31.1704,Q48AC=33.5947,Q48BC=29.3968,Q48AD=30.4097,Q48BD=28.8164,均P＞0.05;Q48CF=12.5032,Q48AF=11.7531,Q48BF=14.1076,Q48DF=13.9372,均P＜0.05;Q48CF =7.0953,P＜0.01.培养72h后,五组间两两比较,Q72AB=26.3392,Q72AC=24.9142,Q72BC=30.2976,均P＞0.05,其余各组差异均有统计学意义(其中Q72AD=14.1983,Q72BD=12.9356,均P＜0.05;Q72CD=6.8752,Q72CF=7.6745,Q72AF=5.0545,Q72BF=4.0741,Q72DF=3.8876,均P＜0.01).结论:葡萄糖浓度为25mmol/L培养48h是RVEC高糖模型最佳葡萄糖浓度及干预时间.     

Effect of high glucose concentration on corneal collagen biosynthesis

The effect of high glucose concentration (3 g/l) on bovine corneal total protein and collagen biosynthesis was studied, using 3H-proline incorporation in explant cultures with protein and collagen determinations. The high glucose concentration increased the incorporation of 3H-proline in total corneal proteins as well as in collagens. The specific radioactivity of stromal collagens was strongly increased in these conditions. Mannitol was used to control the osmotic effect of the high glucose concentration, both at 1 and 3 g/l concentrations. Mannitol did not increase the incorporation of 3H-proline in total proteins or collagens, but on the contrary decreased it. The high glucose concentration decreased the excretion of neosynthesized proteins and collagens in the culture medium, but did not affect the total protein or collagen content of the corneas. The strong increase in the specific radioactivity of corneal collagens in the presence of 3 g/l glucose suggests an increased turnover of collagens in diabetic corneas. The increased biosynthesis of collagens together with their decreased elimination in the extracellular compartment can create the conditions for the formation and accumulation of advanced glycation endproducts by the Maillard reaction. This can induce and stimulate the liquefaction of the vitreous body leading to sight-threatening disorders such as diabetic retinopathy, retinal detachment, glaucoma, cataract formation and age-related macular degeneration.     

姜黄素对高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞损伤的抑制作用

目的:探讨姜黄素对高浓度葡萄糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(rhesus choroido-retinal endothelial cell,RF/6A)损伤的保护作用及机制。方法:RF/6A细胞分4组培养(n=6/组),对照组:DMEM培养基+100/L胎牛血清;高糖组:对照组培养基添加40mmol/L葡萄糖;姜黄素组:对照组培养基添加30μmol/L姜黄素;姜黄素-高糖组:对照组培养基添加40mmol/L葡萄糖及30μmol/L姜黄素。分组培养5d后,显微镜观察各组细胞生长状态,噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测各组细胞活力,琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder判断凋亡,Western-blot检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达。结果:与对照组相比,高糖组RF/6A细胞生长状态较差,活力明显降低(P<0.01),而姜黄素组及姜黄素-高糖组RF/6A活力无明显变化(P>0.05)。高糖组RF/6A出现明显的DNA ladder,对照组、姜黄素组以及姜黄素-高糖组未见明显DNA ladder。与对照组相比,高糖组TNF-α表达上调(P<0.01),姜黄素组及姜黄素-高糖组TNF-α表达无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素抑制高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞凋亡、维持细胞活力,可能与姜黄素恢复高浓度葡萄糖诱导的TNF-α表达有关。     

高糖环境诱导视网膜细胞衰老的实验研究

背景 细胞衰老在血管功能失调性疾病中的作用越来越受到人们的重视,人们推测细胞衰老可能参与糖尿病相关血管并发症的发生及发展,而目前检测细胞衰老的主要标志是β-半乳糖苷酶表达的上调.目的 证实高糖环境对牛视网膜血管内皮细胞（BRVECs）及糖尿病小鼠视网膜衰老状态的影响.方法 对BRVECs进行体外培养和传代,取第7代细胞用于实验.将培养的细胞分为对照组和高糖培养组,分别用含5.5 mmol/L或25.0mmol/L葡萄糖的M199内皮细胞培养液培养细胞7d,用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷（X-Gal）染色法观察各组离体细胞中β-半乳糖苷酶的阳性表达情况,计算方法为β-半乳糖苷酶阳性细胞/总细胞＆#215;100％.将SPF级8～10周龄C57BL/6J雄性小鼠12只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,用链脲佐菌素腹腔内注射法制备糖尿病小鼠模型,3个月后取其双眼视网膜平铺于48孔板,采用X-Gal染色法进行染色,光学显微镜下比较两个组小鼠视网膜细胞中β-半乳糖苷酶阳性表达细胞数.结果 BRVECs复苏并培养24 h后每孔内细胞70％～80％铺满,细胞排列不规则;培养后48 h细胞融合成片,紧密排列.高糖培养组和对照组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例分别为（51.4±5.4）％和（36.6±3.8）％,差异有统计学意义（t=-3.204,P=0.033）;糖尿病鼠视网膜中β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数为（94.0±15.1）个/视野,明显多于对照组的（60.0±5.7）个/视野,差异有统计学意义（t=-2.974,P=0.041）.结论 高糖环境下离体BRVECs和在体小鼠视网膜细胞中β-半乳糖苷酶表达明显上调,高糖引起的细胞早衰可能参与糖尿病视网膜病变的发生.     

硫醇转移酶对高糖诱导大鼠晶状体氧化应激的保护作用

目的：观察高浓度葡萄糖对离体大鼠晶状体氧化还原系统的影响,探讨硫醇转移酶( Thioltransferase,TTase)在糖尿病性白内障中抗氧化应激的作用。
　　方法：用不同浓度葡萄糖(35.5,65.5,95.5 mmol/L葡萄糖组以及相应的甘露醇等渗对照组)体外培养大鼠晶状体7d,动态观察晶状体的混浊情况。测定各组晶状体中TTase、超氧化物歧化酶( SOD )、过氧化氢酶( CAT )的活性,以及氧化型谷胱甘肽( GSSG)与总谷胱甘肽( T-GSH)的比值。
　　结果：高糖组晶状体早期就已出现雾状混浊,而对照组保持相对透明;在高糖刺激下, TTase活性增加较正常对照组增加,并在含35.5 mmol/L 葡萄糖的高糖组中最高(1.743±0.20mU/mg protein,P<0.01)。高糖组GSSG/T-GSH比值均较正常对照组增加,分别增加2.89倍、2.57倍和2.42倍,其组间互相比较无明显差异,相应等渗对照组和正常对照组比较差异不明显;高糖处理组的SOD和CAT较正常对照组降低,其中 SOD 分别为正常对照的0.71倍、0.52倍和0.49倍(P<0.05),CAT分别为正常对照的0.47倍、0.56倍、0.50倍(P<0.05),不同葡萄糖浓度处理组间差异无显著性。
　　结论：高糖环境激活晶状体内的抗氧化系统,诱导TTase活性增加,GSSG/T-GSH比例增高,CAT, SOD活性下降,晶状体抗氧化能力降低是糖尿病性白内障形成的重要机制。     

高糖和糖浓度波动对人角膜上皮细胞中MMP-9表达及真菌黏附的影响

目的　探讨不同浓度葡萄糖环境下茄病镰刀菌和尖端赛多孢子菌对人角膜上皮细胞（HCEC）的黏附能力和HCEC 中MMP-9表达的影响。方法　将处于对数生长期的HCEC分为3组:低糖组（5.5 mmol·L^-1葡萄糖培养基培养）、高糖组（25.0 mmol·L^-1葡萄糖培养基培养）和糖波动组（5.5 mmol·L^-1和50.0 mmol·L^-1葡萄糖培养基交替培养）,根据干预真菌的不同共分9小组（低糖-对照组、高糖-对照组、糖波动-对照组、低糖-茄病镰刀菌组、高糖-茄病镰刀菌组、糖波动-茄病镰刀菌组、低糖-尖端赛多孢子菌组、高糖-尖端赛多孢子菌组、糖波动-尖端赛多孢子菌组）。真菌干预组均加入相应真菌孢子悬液,且孢子与HCEC的比例为10∶1,对照组加入等量的无菌生理盐水。观察真菌在培养板上的生长状况,倒置显微镜下观察每组HCEC的形态,荧光白染色法和平板稀释涂布法用于HCEC的黏附真菌计数,利用qRT-PCR检测各组HCEC中MMP-9 mRNA的表达、Western blot检测各组HCEC 中MMP-9蛋白的表达。结果　倒置显微镜下可见与真菌共培养的HCEC出现不同程度的形变和脱落,尤以高糖-茄病镰刀菌组和糖波动-茄病镰刀菌组最为显著。荧光白染色法和平板稀释涂布法计数结果显示,两种真菌高糖组和糖波动组对HCEC的黏附量均大于低糖组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;高糖和糖波动条件下,尖端赛多孢子菌黏附量大于茄病镰刀菌,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。qRT-PCR和Western blot检测结果显示,MMP-9 mRNA和蛋白在各组HCEC中均有表达,与低糖组相比,高糖组和糖波动组HCEC中MMP-9 mRNA和蛋白表达均增多;高糖和糖波动条件下,真菌干预组HCEC中MMP-9 mRNA和蛋白表达均高于对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）,而两种真菌干预组之间差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　高糖和糖波动环境能够促进HCEC分泌更多的MMP-9,并增加真菌对HCEC的黏附。     

高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的晶状体上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对高糖诱导的晶状体上皮细胞(LEC)凋亡和自噬的影响。方法 本研究以糖尿病性白内障患者和年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体前囊膜以及高糖和正常糖条件下培养的人晶状体上皮细胞株(SRA01/04)为研究对象。选取2021年10月至2022年3月在南通大学第二附属医院眼科确诊为白内障的患者20例,依据白内障类型分为糖尿病性白内障组(DC组)和ARC组,每组各10例,取患者晶状体前囊膜进行实验。将细胞分为正常糖组和高糖组,正常糖组培养基含5.5 mmol·L^-1葡萄糖,高糖组培养基含25.0 mmol·L^-1葡萄糖,处理24 h后进行实验。采用Western blot检测各组HMGB1蛋白的表达水平。利用siRNA技术对HMGB1进行敲降,将细胞分为正常对照组、scr-siRNA组和si-HMGB1组。正常对照组：不作任何处理;scr-siRNA组：加入等量的Lipofectamine 3000和scr-siRNA;si-HMGB1组：加入等量的Lipofectamine 3000和si-HMGB1。三组...