高糖环境诱导视网膜细胞衰老的实验研究

背景 细胞衰老在血管功能失调性疾病中的作用越来越受到人们的重视,人们推测细胞衰老可能参与糖尿病相关血管并发症的发生及发展,而目前检测细胞衰老的主要标志是β-半乳糖苷酶表达的上调.目的 证实高糖环境对牛视网膜血管内皮细胞（BRVECs）及糖尿病小鼠视网膜衰老状态的影响.方法 对BRVECs进行体外培养和传代,取第7代细胞用于实验.将培养的细胞分为对照组和高糖培养组,分别用含5.5 mmol/L或25.0mmol/L葡萄糖的M199内皮细胞培养液培养细胞7d,用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷（X-Gal）染色法观察各组离体细胞中β-半乳糖苷酶的阳性表达情况,计算方法为β-半乳糖苷酶阳性细胞/总细胞＆#215;100％.将SPF级8～10周龄C57BL/6J雄性小鼠12只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,用链脲佐菌素腹腔内注射法制备糖尿病小鼠模型,3个月后取其双眼视网膜平铺于48孔板,采用X-Gal染色法进行染色,光学显微镜下比较两个组小鼠视网膜细胞中β-半乳糖苷酶阳性表达细胞数.结果 BRVECs复苏并培养24 h后每孔内细胞70％～80％铺满,细胞排列不规则;培养后48 h细胞融合成片,紧密排列.高糖培养组和对照组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例分别为（51.4±5.4）％和（36.6±3.8）％,差异有统计学意义（t=-3.204,P=0.033）;糖尿病鼠视网膜中β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数为（94.0±15.1）个/视野,明显多于对照组的（60.0±5.7）个/视野,差异有统计学意义（t=-2.974,P=0.041）.结论 高糖环境下离体BRVECs和在体小鼠视网膜细胞中β-半乳糖苷酶表达明显上调,高糖引起的细胞早衰可能参与糖尿病视网膜病变的发生.     

新型可降解泪道支架的制备及其生物降解性和生物相容性评估

背景 泪道探通术联合泪道支架植入是治疗泪道阻塞性疾病的主要方法,传统的非降解材料泪道支架存在需二次手术取出及并发症较多的缺点,基于可降解生物高分子材料的泪道支架及其应用是相关领域的研究热点. 目的 采用高分子可降解生物材料构建可降解泪道支架,并观察其植入兔泪道后的生物降解性和生物相容性.方法 与华中科技大学化学研究院共同研制左旋聚乳酸:聚己内酯+15％聚乙二醇中空管状可降解材料的泪道支架.采用计算机随机数字分配法将3～4月龄清洁级日本大耳兔32只随机分为术后1、4、8和16周组,将泪道支架植入实验兔左眼泪道,分别于相应时间点取出植入的泪道支架进行称量和观察,评价各组泪道支架的形状,并计算支架的失重率;采用泪道内窥镜检查各组兔术眼泪道黏膜的术后反应情况;分别于上述时间点处死各组实验兔,制备泪道黏膜组织标本,分别采用苏木精-伊红染色于光学显微镜下行组织病理学检查及激光扫描电子显微镜下行黏膜表面的超微结构观察. 结果 制作的可降解泪道支架为光滑、柔韧的亲水乳白色中空管道,术后1周组术眼取出的泪道支架完整,术后4周组可见泪道支架管口劈裂,术后16周组泪道支架断裂成不连续的碎片.术后1、4、8和16周组支架失重率分别为(13.44±6.59)％、(23.96±6.33)％、(55.08±6.55)％和(78.00±8.74)％,其中术后16周组泪道支架失重率最高,与术后8周组比较差异有统计学意义(q=4.27,P＜0.05),而术后1周组与术后4周组间差异无统计学意义(q=1.71,P＞0.05).泪道内窥镜检查可见术后4周组、术后8周组术眼黏膜水肿、充血和轻度增生,术后16周组术眼黏膜表现接近正常.组织病理学检查显示,术后1、4、8周组术眼泪道固有层大量炎性细胞浸润,术后16周组术眼泪道黏膜固有层仅见少量炎性细胞.激光扫描电子显微镜检查显示,术后8周组术眼泪道黏膜表面有不同程度的皱褶,表面微绒毛数量减少,排列紊乱,术后16周组术眼泪道黏膜上皮细胞表面微绒毛长度和数量增加,黏膜基底结构完整.各组兔眼均未见术后并发症. 结论 可降解泪道支架植入兔眼后对泪道黏膜的刺激性小,损伤轻微,具有较好的生物可降解性、生物相容性及生物力学特性.