献血者中TTV感染情况调查及部分序列分析

目的：调查了解淮阴地区献血者中一种新的肝炎病毒－TTV的感染情况。方法：用巢式聚合酶链反应（nest-PCR）技术对淮阴地区220名专业献血者进行血清中输血传播疾病（TTV）的检测，并在PUC18中对其开放读码框2（ORF2）基因进行了克隆。结果：序列分析表明，该序列与国内外发现的TT病毒AB008394（日本株）、AF079173（中国河北株）对应位置核苷酸同源性为98％和97％，献血者中TT病毒阳性率为18％。结论：病毒ORF2基因高度保守，献血者中有较高的TTV感染率。     

TT病毒子宫内传播的初步研究

目的 :观察TT病毒 (TTV)子宫内传播的可能性。方法 :采用妊娠中期引产孕妇的静脉血及其胎儿心脏血 ,以巢式聚合酶链反应检测TTVDNA部分基因 ,对产物进行基因序列测定和分析 ,并比较母子TTV部分序列之间同源性。结果 :2 3例孕妇中TTVDNA阳性者 5例 (2 1.7% ) ,其中 2例引产儿亦阳性。测序结果与中国北京株TTVDNA同段序列基本一致。两对阳性母子TTVDNA序列同源性极高 (98.3% ,99.1% )。结论 :TTV可在子宫内传播     

肝炎患者TTV感染情况及部分基因序列分析的研究

目的 :新发现的DNA病毒 (transfusiontransmittedvirus简称TTV)被认为是一种新的肝炎病毒。为了研究肝炎患者中TTV的感染情况 ,对 10 8例肝炎患者 (ALT >2 0 0IU/L)进行了TTVDNA的检测。方法 :利用巢式PCR方法扩增TTV基因 ,并对两例TTV分离株的部分基因进行克隆和序列分析。结果 :10 8中有 2 4例TTVDNA阳性 ,阳性率为 2 2 2 % ;在非甲～非庚型肝炎中TTV的阳性率为 3 4 6% ( 9/ 2 6) ;甲型肝炎病例中TTVDNA的阳性率为 9 1%( 1/ 11) ;乙型肝炎病例为 2 3 2 % ( 13 / 5 6) ;丙型肝炎病例 7 1% ( 1/ 14 )。两个TTV分离株 (TTVHN 1AF15 15 3 2 ,TTVHN 2AF15 1683 )的核酸序列与GenBank资料中TTV对应序列的核酸同源性高于 90 %。结论 :TTV病毒可能是非甲～非庚型肝炎的重要致病因子 ,并且能够与甲、乙、丙型肝炎病毒发生重叠感染     

一株输血传播病毒新变种的克隆和序列分析

目的从1例不明原因转氨酶升高的病人血清中克隆输血传播病毒(TTV)DNA,并进行序列分析。方法用巢式PCR扩增TTVDNA长片段,连接至pGEM-T载体上,挑选一个克隆(56-B)进行测序。将56-B与GenBank中五株TTV进行氨基酸和核苷酸序列的同源性分析,并用最大似然法进行分子进化分析。结果56-B株与TA278等五株TTV序列的核苷酸同源性分别为42.4%、48.2%、47.9%、49.8%、61.7%,氨基酸序列的同源性更低,但其5'和3'两端非编码区的序列仍然很保守。结论56-B株与其他TTV株之间的同源性很低,有很高的基因异质性,是TT 的一个新变种,代表TTV的一个新的基因型。     

50例慢性非甲-庚型肝病患者中TTV的感染状况及部分序列的基因分析

目的:探讨新型肝炎相关病毒(TTV)在慢性非甲-庚型肝病患者中的感染状况,分析国内病毒的基因结构特点.方法:根据国内外报道的部分基因序列,自行设计特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)法检测了50例慢性非甲-庚型肝病患者,并对阳性标本克隆后进行序列分析.结果:慢性非甲-庚型肝病患者中TTV感染率为52%,对TTV病毒株进行序列分析发现与N22克隆同源性可达97.8%.结论:我国也存在严重的TTV感染,TTV可能为慢性非甲-庚型肝病的致病因子.我国TTV感染株与国外报道的N22克隆有高度同源性.     

TTV在非甲至非庚型肝炎中感染的检测和分析

目的 研究新近报导的1种与输血后肝炎有关的病毒（TTV）在中国郑州地区非甲至非庚型肝炎患中的感染和基因序列变异情况。方法 采用TTV基因组ORF1区的套式聚合酶链反应（nested-PCR)方法对非甲至非庚型肝炎患和正常人血清标本进行检测，并对非甲至非庚型肝炎患中的TTV分离株进行序列测定。结果 TTV DNA在40例非甲至非庚型肝炎患中检出18例，阳性率为45％，在96例正常人中检出17例，阳性率为17.7%，两组阳性率相比差异有统计学意义。TTV分离株序列与日本株（CLON22）相对应位置的核苷酸同源性为99.1%。结论 TTV在非甲至非庚型肝炎患中的感染率较高，可能是非甲至非庚型肝炎的主要致病因子。TTV分离株与日本株可能属同一基因型。     

TT病毒子宫内传播的初步研究

目的：观察TT病毒(TTV)子宫内传播的可能性。方法：采用妊娠中期引产孕妇的静脉血及其胎儿心脏血。以巢式聚合酶链反应检测TTV DNA部分基因，对产物进行基因序列测定和分析，并比较母子TTV部分序列之间同源性。结果：23例孕妇中TTV DNA阳性者5例(21．7％)，其中2例引产儿亦阳性。测序结果与中国北京株TTV DNA同段序列基本一致。两对阳性母子TTV DNA序列同源性极高(98．3％，99．1％)。结论：TTV可在子宫内传播。     

非甲至非戊型肝炎患者TTV检测和部分基因序列分析

目的：研究新近报道的一种与输血后肝炎有关的病毒在中国郑州地区正常人群、HBsAg阳性者、非甲至非戊型肝炎患者中的感染和基因序列变异情况。方法：采用TTV基因组ORF1区的套式聚合酶链反应(nested-PCR)方法对血清标本进行检测,并对非甲至非戊型肝炎患者中的TTV分离株进行序列测定。结果：TTV DNA在非甲至非戊型肝炎患者中检出率为45％(18／40);在正常体检者中检出率为17．7％(17／96);在HBsAg阳性者(ALT≤34 IU／L)中检出率22．7％(10／44)。TTV分离株序列与日本株(CLON22)相对应位置的核苷酸同源性为．1％。结论：TTV在非甲至非戊型肝炎患者TTV的感染率明显高于其他人群,可能是非甲至非戊型肝炎的主要致病因子。     

TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

目的:用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原,建立诊断TTV 感染的特异性方法. 方法:采用PCR方法扩增TTV ORF2基因,将之插入到测序质粒载体中进行测序,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30,并转化大肠杆菌M15菌株,进行诱导表达.用SDS-PAGE分析表达产物.表达产物经Ni-NTA柱层析纯化后,得到纯度为90%的ORF蛋白抗原.用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western-Blot Blotting分析.结果:经IPTG诱导后,筛选出2株高表达株. 结论:该蛋白具有良好的抗原活性.     

TTV部分传播途径的初步研究及西安地区TTV部分片段测序分析

目的　研究输血传播肝炎病毒 (TTV)有否直接垂直传播途径及尿液传播的可能性 ,初步了解西安地区 TTV结构部分特点 .方法　参照文献 [1]在 TTV DNA ORF1区设计一套套式 PCR引物 ,建立 TTV DNA套式 PCR检测方法 ,对 16例血清检测TTV DNA阳性的患者尿液做了 TTV DNA检测 ,对 5 2例正常顺产孕妇血清及其婴儿脐带血同时检测 TTV DNA;并且对西安地区 1例原因不明而 TTV阳性肝炎患者的 TTV套式 PCR扩增终产物纯化直接测序 .结果　 16例血清检测 TTV DNA阳性的患者尿液 TTV DNA检测未发现 1例阳性 ;在 5 2例顺产妇外周血中 ,9例 TTV DNA阳性 TTV基因检测阳性率为 17.3%(9/5 2 ) ;而新生儿脐带血 TTV基因检测阳性率为 7.7%(4 / 5 2 ) ;其中 ,母子同时 TTV DNA阳性 2例 ,单纯母亲血 TTV DNA阳性 7例 ;单纯婴儿脐带血 TTV DNA阳性 2例 .直接测序法测序 ,测得的 143bp序列用 DNAsis分析软件中国 1株 (BDH1)序列比较 ,二者同源性为 6 5 .0 %,差异率为 35 .0 %(>30 %) .结论　 TTV可能不能通过尿液传播 ,但能经胎盘直接垂直传播 ,西安地区TTV流行毒株可能存在新的 TTV基因型 .     

献血人群感染TTV的检测及部分DNA序列分析

目的调查志愿无偿献血人群中输血传播病毒（TTV）的感染情况和分析TTV DNA部分基因序列。方法以TTV ORF1保守区设计两对引物,用巢式多聚酶链式反应（PCR）检测TTV DNA,并克隆和测序。结果在血液筛查合格的无偿献血人群中检出TTV DNA的阳性率为5．0％（5／100）。在单一转氩酶异常,HBV、HCV和HIV血清标记物正常的献血人群检出TTV DNA的阳性率为5．6％（4／71）。两者有非常显著性差异（P〈0．01）。与日本首例TTV-N22株相比,SZT1和SZT2株基因序列同源性为98．9％（3／272）和96．7％（9／272）,SZT3和SZT4株为67．3％（89／272）和86．0％（38／272）。结论在符合献血条件的人群中存在无症状TTV携带者。与之相比较,在ALT异常献血人群中TTV流行率相对较高,对其部分基因序列的比较显示了较大的变异性。     

献血员、肝炎患者TTV DNA检测及部分TTV基因序列分析

目的了解献血员、肝炎患者中的输血传递病毒(TTV)感染状况及基因型别。方法设计合成引物采用半套式聚合酶链反应（hemi-nestPCR）方法,对195份献血员血清、72份不同型别的肝炎患者血清进行了TTVDNA的PCR检测,并对部分阳性株进行序列测定及计算机分析。结果①在血清丙氨酸转氨酶（ALT）异常,HBsAg及抗HCV阴性的99份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本36份,阳性检出率为36.3%;而在ALT正常的96份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本16份,阳性检出率为16.6%,明显低于ALT异常献血者。②在72例不同肝炎患者中,共检出39例TTVDNA阳性血清,总检出率为54.16%,在非甲-非庚型肝炎患者中TTVDNA阳性率为87.5%,而在明确诊断为甲-庚型肝炎的患者中TTVDNA阳性率为50%,两组相比差异显著（P<0.05）。对8株阳性株序列分析结果显示,测序的8个分离株与9个G1、G2代表株核酸的同源性为60.4%～99.1%,氨基酸的同源性为55.4%～98.6%。经系统发育分析表明,这8个TTV分离株中有7株可分属于G1、G2两个基因型的5个亚型,而另1株为G1型的新亚型。结论①献血者中存在TTV感染,提示TTV可以导致感染个体的肝功能异常,TTV可能与HBV感染相似,亦存在“健康携带状态”。②非甲-非庚型肝炎患者的TTV感染率明显高于明确病原的甲-庚型肝炎患者,TTV感染与肝炎有关,可能是非甲-非庚型肝炎的病原之一。③8个TTV分离株中7个分属于G1、G2两个基因型中的5个亚型,另有1株为G1型的新亚型。     

输血传播病毒(TTV)基因变异的临床意义

目的 :研究TTV基因变异与其致病性的关系。方法 :采用巢式多聚酶链式反应 (PCR)扩增TTVDNA ,收集TTVDNA阳性病例 5 2例 ,其中献血员 4例 ,乙型肝炎病毒携带者 5例 ,慢性乙型肝炎患者 11例 ,慢性重型乙型肝炎患者 32例 ,采用单链构象多态性 (SSCP)方法进行TTV基因变异检测。结果 :献血员、乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎患者中 ,SSCP电泳条带数分别为 1.2 5± 0 .5 0 ,1.6 0± 0 .5 5 ,3.36± 1.36 ,4 .5 9± 1.83;慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者组中SSCP电泳条带数显著多于其他组 (P <0 .0 5 ) ;慢性重型乙型肝炎患者中SSCP电泳条带数显著多于慢性乙型肝炎患者 (P <0 .0 5 )。结论 :TTV存在基因变异 ,TTV基因变异株的复杂性或称准种感染的复杂性可能是TTV与HBV感染者重叠感染使病情加重的因素之一     

输血传播病毒（TTV）基因变异的临床意义

OBJECTIVE: To investigate the clinical significance of gene variant of transfusion transmitted virus (TTV). METHODS: A nested polymerase chain reaction (nested-PCR) assay with specific primers from open reading frame one (ORF1) of TTV genome was established to detect TTV DNA in the serum samples from patients with hepatitis B and blood donors. Asymmetric PCR was established to get single strand DNA in the TTV DNA positive cases, and then single strand conformation polymorphism (SSCP) was applied. RESULTS: 1.25 +/- 0.50, 1.60 +/- 0.55, 3.36 +/- 1.36 and 4.59 +/- 1.83 SSCP bands were detected in the blood donors, chronic HBV carriers, chronic hepatitis B patients and chronic severe hepatitis B patients respectively. SSCP bands were much more complicated in chronic hepatitis patients and chronic severe hepatitis than those of chronic HBV carriers and blood donors (P < 0.05). CONCLUSION: There is gene variant in TTV infection. The complication of gene variant strain or quasispecies infection of TTV may be one of the causes responsible for clinical exacerbation of TTV superinfection in chronic hepatitis patients.     

输血传播病毒(TTV)重叠感染在慢性乙型肝炎病毒感染患者中的临床意义

目的：研究乙型肝炎病毒感染患者TTV重叠感染情况及初步探讨TTV的致病性。方法：在ORF1区设计特异性引物建立巢式多聚酶链式反应（PCR），检测乙型肝炎病毒感染患者血清中TTV DNA，对PCR产物进行分子克隆和测序。结果：献血员、慢性乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者TTV DNA阳性率分别为10％、11％、27％、48％。其中前两者与后两者比较均有显著差异，慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者相比也有显著差异（P＜0．05），乙型肝炎病毒感染者中其HBV感染复制指标的阳性率在TTV DNA阳性与TTV DNA阴性组之间无明显差异（P＞0．05）。慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者的ALT和TBIL在TTV DNA阳性病人组与TTV DNA阴性病人组之间比较有显著性差异（P＜0．05），TTV DNA阳性病人组明显高于TTV DNA阴性病人组。结论：献血员中存在TTV感染，乙型肝炎病毒感染患者重叠感染TTV较常见。慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者TTV DNA阳性率明显高于献血员和慢性乙型肝炎病毒携带者的阳性带，提示TTV的重叠感染可能是HBV感染病情加重因素之一，TTV重叠感染对HBV的复制可能不存在相互作用。     

杭州地区健康献血员输血传播病毒的检测及部分阳性标本的核苷酸序列分析

目的：了解杭州地区健康献血员中输血传播病毒（TTV）的感染情况和病毒基因组片段的变异性。方法：用酚－氯仿法从献血员的血清标本中提取DNA，半套式聚合聚合链反应检测TTV，部分阳性标本的扩增片段T－1克隆后测序。结果：203例献血员血清标本中TTV DNA的阳性率为15．3％，部分阳性标本扩增产物与报道的TTV TA278株的核苷酸和氨基酸序列比较，其同源性分别为63．51％－67．12％和59．46％－66．22％，结论：杭州地区献血员中TTV的携带率比较高。献血员感染的TTV可能是一种新的基因型。     

应用熔点曲线分析输血传播病毒的基因变异

目的研究输血传播病毒(TTV)的基因变异及其临床意义。方法采用巢式荧光实时多聚酶链式反应(PCR)扩增TTVDNA,收集TTVDNA阳性病例142例。其中献血员4例;非甲-非庚型慢性肝炎患者16例;乙型肝炎病毒携带者(ASC)7例;慢性乙型肝炎患者(CHB)39例;慢性重型乙型肝炎患者(CSHB)76例。采用熔点曲线方法进行TTV基因变异检测。结果非甲-非庚型肝炎患者熔点曲线波峰数量显著多于献血员(P<0.05);重型与重度肝炎患者组中熔点曲线波峰数量显著多于中度患者(P<0.05),重度肝炎患者熔点曲线波峰数量与重型患者比较差异无显著(P>0.05)。乙型肝炎病毒感染者中CHB和CSHB组中熔点曲线波峰数量显著多于献血员及ASC组(P<0.05),CSHB和CHB重度熔点曲线波峰数量显著多于CHB中度患者(P<0.05)。但CHB重度患者TTVDNA熔点曲线波峰数量与CSHB相比较差异无显著(P>0.05)。结论TTV存在基因变异;TTV基因变异株的复杂性或称准种感染的复杂性可能是TTV与HBV感染者重叠感染使病情加重的因素之一;熔点曲线可以用于基因变异分析。     

献血员中TT病毒感染的检测及序列分析

目的： 研究ALT正常的献血员中TTV(transfusion transmitted virus) 的感染情况,探讨TTV感染的传播途径和致病性。方法： 设计TTV保守区域的特异性引物,聚合酶链反应(PCR)方法检测120例ALT正常的献血员,对1例TTV DNA阳性标本（TTVD026）进行PCR产物测序,并与已知TTV核苷酸序列比较同源性。结果： 120例ALT正常献血员中有20例为TTV DNA阳性,感染率为16.7％。同源性分析表明TTVD026与TA278,GH1,TTVCHN1和TTVCHN2的核苷酸同源性分别为99％,99％,99％和89％。结论： ALT正常的献血员中存在TTV的感染; TTVD026与TTV TA278,GH1,TTVCHN1和TTVCHN2可能属于同一个基因型;输血可能是TTV传播的主要途径。     

经输血传播病毒的前瞻性调查

目的了解我国供血员、受血者中经输血传播病毒（ＴＴＶ）感染率,及经输血传播ＴＴＶ的发生率。方法对１３０例输血者进行ＴＴＶ以及ＨＢＶ和ＨＣＶ血清标志物检测,其相应的供血者也检查ＴＴＶ。结果３４０例供血员中有３６例（１０．６％）可检测到ＴＴＶ－ＤＮＡ。１３０例受血者输血前有１１例（８．５％）ＴＴＶ阳性,其余１１９例输血后有１８例ＴＴＶ转为阳性,在他们的供血中至少可查到一份ＴＴＶ阳性。４６例输血后肝炎病毒感染者中,其中有４５例为ＨＣＶ感染（包括７例与ＴＴＶ混合感染）,２例为ＨＢＶ感染（包括与ＨＣＶ、ＴＴＶ混合感染各１例）。ＴＴＶ与ＨＢＶ混合感染以及７例ＴＴＶ与ＨＣＶ混合感染中有３例的受血者ＡＬＴ＞９０Ｕ／Ｌ,但是１０例单纯ＴＴＶ感染者,仅有２例伴有轻微的ＡＬＴ增高。结论供血员及住院病人中有较高的ＴＴＶ感染率,单纯ＴＴＶ感染与ＡＬＴ显著升高似乎并无关联。     

武汉地区献血员血清TTV等几种肝炎相关病毒的基因检测

了解武汉地区不同献血员血清ＴＴＶ感染特点及其与其它几种肝炎相关病毒感染之间的关系。方法采用ＰＣＲ及巢式ＰＣＲ对５４例武汉市城区义务献血员及７４例既往乡村献血者分别进行血清ＴＴＶ ＤＮＡ,ＨＣＶ ＲＮＡ及ＨＧＶ ＲＮＡ等检测。结果：ＴＴＶ ＤＮＡ、ＨＣＶ ＲＮＡ及ＨＧＶ ＲＮＡ指标阳性率在既 往乡村个体献血员为４３．２％、２３．０％与２．７％,城区义务献血员为５．６％、１．９％与１．９％,前者ＴＴＶ