人骨髓间充质干细胞来源外泌体分离、鉴定及卵巢摄取

目的 提取及鉴定人骨髓间充质干细胞(hBMSC)来源外泌体，探讨颗粒细胞及自身免疫性早发性卵巢功能不全(POI)小鼠卵巢摄取外泌体的情况。方法 取P3至P9代hBMSC培养上清液，倒置显微镜下观察P4代hBMSC细胞形态，超高速离心法提取外泌体；纳米流式仪测外泌体粒径；透射电镜观察外泌体形态；Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、CD9、肿瘤易感基因(TSG)101表达。外泌体采用DiR进行荧光标记；共聚焦显微镜观察人卵巢颗粒细胞(KGN)共孵育24 h和48 h摄取外泌体的情况；用ZP3蛋白多肽构建自身免疫性POI小鼠模型，在建模成功后的第1、7天腹腔注射150μg DiR标记的外泌体。在第2次注射外泌体后的第14天通过活体成像仪监测小鼠卵巢摄取情况。结果 h BMSC呈纺锤状，大小均一，提取出的外泌体平均直径为(81.12±17.23)nm。透射电镜显示外泌体结构为双层膜状；外泌体表面相关特异性蛋白CD63、CD9和TSG101呈阳性。共聚焦显微镜下观察到KGN细胞能够摄取外泌体，并与共孵育24 h比，48 h摄取的外泌体量更多。在自身免疫性POI小鼠模型中观察到小鼠...     

比较两种方法提取人脐带间充质干细胞外泌体的效果

目的 比较两种方法提取人脐带间充质干细胞来源外泌体的效果。方法 分别采用超速离心法和组合优化法提取人脐带间充质干细胞上清液中外泌体，获得的外泌体设为外泌体A和外泌体B,采用透射电镜观察外泌体形态，纳米颗粒跟踪分析法检测外泌体浓度和粒径，BCA法测定外泌体蛋白含量以及Western blot法检测外泌体表面标志物的蛋白表达。结果 两种方法提取的外泌体均具有茶托形或椭圆形的双膜性结构，且边界清晰，但是外泌体B背景中存在其他聚合物。外泌体A浓度与外泌体B相仿(P>0.05)。外泌体A、B粒径峰值分别为128、101 nm。外泌体A蛋白含量高于外泌体B,且外泌体A表面特异性标志物CD9、CD63、CD81和TSG101蛋白表达高于外泌体B(P<0.05)。结论 两种方法均可以提取人脐带间充质干细胞来源的外泌体，但超速离心法提取的外泌体纯度更高。     

外泌体传递miR-139调控卵巢癌顺铂敏感性的机制研究

目的探讨外泌体介导的miR-139传递对卵巢癌顺铂(cDDP)敏感性的影响。方法分别提取卵巢癌cDDP敏感细胞及耐药细胞分泌的外泌体,透射电镜观察外泌体形态,Western blotting检测外泌体标志蛋白的丰度,qPCR定量检测miR-139水平,MTT检测cDDP敏感细胞、miR-139敲低敏感细胞源性外泌体对耐药细胞cDDP敏感性的影响。结果卵巢癌细胞培养基上清液中存在大量椭圆形或圆形、粒径50~100 nm且高表达外泌体标志因子Alix、CD63、CD9的囊状结构。相较于卵巢癌cDDP耐药细胞源性外泌体,cDDP敏感细胞源性外泌体中miR-139的丰度更高,且将cDDP敏感细胞源性外泌体与耐药细胞株共同孵育可增强后者的cDDP敏感性,而下调外泌体中miR-139的表达可削弱其对耐药细胞的cDDP敏感性诱导作用。结论卵巢癌cDDP敏感细胞可通过外泌体传递miR-139,增强耐药细胞对cDDP的敏感性。     

优化脂肪间充质干细胞外泌体提取方法的研究

目的 本研究旨在探讨用外泌体提取试剂盒提取脂肪间充质干细胞源性外泌体的优化方法。方法 采用组织块贴壁法分离提取和培养原代脂肪间充质干细胞。收集1000mL 3～6代脂肪间充质干细胞的细胞上清，用100KD超滤离心管进行浓缩，外泌体提取试剂盒提取外泌体，测定外泌体悬液蛋白浓度后进行鉴定。结果 脂肪间充质干细胞的形态主要以长梭形为主；外泌体悬液的蛋白浓度，经BCA法测定为7.66 mg/mL;透射电镜、NTA、蛋白质印迹法结果均符合外泌体的典型特征。结论 在使用外泌体提取试剂盒(invitrogen)之前，用100KD的超滤管对1000mL细胞上清进行浓缩的方法可以成功提取到外泌体，而且是一种有效节省外泌体提取试剂盒剂量的方法。     

对比剂诱导巨噬细胞来源外泌体对肾小管上皮细胞的作用及甘草酸苷的干预效应#br#

目的　探讨对比剂诱导巨噬细胞来源外泌体对肾小管上皮细胞的作用及甘草酸苷的干预效应。方法　分别用PBS、碘海醇、碘海醇+甘草酸苷刺激THP-1细胞,获取3种外泌体（NC-Exo、CIN-Exo、CIN-GL-Exo）。透射电镜观察外泌体的形态;蛋白免疫印迹（Western blot）检测CD63、TSG101、calnexin的表达;荧光标记法检测外泌体的摄取。将HK-2细胞随机分为4组：Con组、NC-Exo组、CIN-Exo组、CIN-GL-Exo组。Western blot检测3种外泌体中高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达量,以及4组细胞中凋亡相关蛋白及HMGB1/Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测4组细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测4组细胞炎性因子［白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α］mRNA的表达。结果　THP-1细胞来源的外泌体为圆形或类圆形小囊泡,表达标志物蛋白CD63、TSG101,而不表达内质网蛋白calnexin。标记DiR荧光素的外泌体可被HK-2细胞摄取。CIN-Exo中HMGB1表达量高于NC-Exo和CIN-GL-Exo（P＜0.05）。CIN-Exo组的细胞凋亡率以及Bax、Cleaved caspase-3表达量高于Con组、NC-Exo组、CIN-GL-Exo组,而Bcl-2表达量低于其他3组（P＜0.05）。CIN-Exo组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平,以及HMGB1、TLR4、NF-κB表达量高于其他3组（P＜0.05）。结论　对比剂可通过巨噬细胞来源外泌体诱导肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应,可能与外泌体HMGB1水平上调有关,甘草酸苷可抑制该途径而发挥保护效应。     

hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a影响PCOS患者颗粒细胞凋亡的研究

目的 探究人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）来源的外泌体miR-1260a靶向CASP8对多囊卵巢综合征（PCOS）患者颗粒细胞凋亡的影响。方法 取健康足月胎儿的脐带进行组织块贴壁法分离培养获得hUC-MSCs，采用流式细胞仪检测其标志性蛋白CD73和CD90的表达。收集hUC-MSCs培养上清液，提取hUC-MSCs外泌体，透射电镜观察其形态，Western blot检测外泌体膜表面标志物热休克蛋白70(HSP70)和肿瘤易感基因101(TSG101)的表达。PKH67标记外泌体，采用激光共聚焦显微镜观察PCOS颗粒细胞对外泌体的内化作用。Western blot检测hUCMSCs外泌体对PCOS颗粒细胞凋亡的影响。利用GSE69909临床样本进行生物信息学分析，得到hUC-MSCs外泌体中异常高表达的miRNAs，并通过实时荧光定量PCR进行验证。合成miR-1260a模拟物及其对照转染至KGN细胞中，流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。利用Target Scan Human 7.2数据库进行miR-1260a靶基因的预测，采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-1260a对靶基因的调...     

BMSCs外泌体来源miR-133a对大鼠脊髓损伤修复的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体来源miR-133a对大鼠脊髓损伤(SCI)修复的影响。方法 原代分离和培养BMSCs,测定BMSCs细胞表面标记物(CD90,CD45)表达;提取BMSCs外泌体,观察外泌体形态及外泌体标记分子(Alix、CD63)表达;建立SCI大鼠模型,随机将大鼠分为假手术组、SCI组、外泌体组、外泌体-抑制剂对照(NC)组、外泌体-miR-133a抑制剂组,28 d后,对各组大鼠进行BBB评分评估脊髓损伤程度;分离大鼠骨髓组织,检测该组织病理学变化、细胞凋亡状况;同时检测相关蛋白[胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核抗原(NeuN)、炎性小体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-1]及miR-133a表达水平。双荧光素酶实验验证miR-133a、NLRP3靶向关系。结果 BMSCs细胞中CD90、CD45表达率分别为98.07%、0.09%。外泌体呈球形,Alix、CD63呈阳性表达。与假手术组比较,SCI组BBB评分、NeuN、miR-133a表达显著降低,细胞凋亡率、GFAP、NLRP3、caspase-1表达显著增加(P&...     

负载连翘苷的外泌体递药系统制备及体外评价

目的:制备负载连翘苷(phil)的外泌体(exos)递药系统(phil-exos),并考察其对人肺上皮腺癌细胞A549迁移能力的影响.方法:采用差速-超高速离心法结合超滤法获取小鼠肺泡巨噬细胞(MHS)来源的外泌体,超声法制备phil-exos并测定其粒径及电位,采用透射电子显微镜观察其形态,蛋白质免疫印迹法鉴定标志蛋...     

不同来源外泌体保存方法的研究进展

外泌体是一类由各种类型的细胞分泌的直径为30~100 nm的细胞外囊泡。外泌体由脂质双分子层膜和膜相关蛋白组成，并含有胞质成分，如mRNA、miRNA和蛋白质。外泌体可以与靶细胞的膜结合或融合，从而将表面蛋白和胞质成分输送到细胞中。外泌体通过将其生物活性物质转移到远处的细胞，参与细胞间的通信，并被认为可以调节受体细胞中的基因和蛋白表达水平。细胞外泌体与许多应激条件，如缺氧、衰老和癌基因激活等有关。目前外泌体可以通过差异离心、过滤加离心、免疫亲和或排阻色谱、聚合物沉淀和微流体技术等方法从细胞培养基或体液中分离出来。但不同来源外泌体的保存条件尚未确定，保存条件对外泌体的稳定性及后续实验研究十分重要。基于此，本文就适宜外泌体保存条件的研究进展进行综述，为后续研究提供参考。     

间充质干细胞源性外泌体提取鉴定方法研究

目的:探讨间充质干细胞源性外泌体的成功提取方法。方法:应用试剂盒二次提取huc-MSCs外泌体,凝胶电泳法及BCA蛋白定量法检测两次提取外泌体蛋白纯度与含量的不同;电镜及流式细胞仪鉴定外泌体。结果:凝胶电泳法及BCA蛋白定量法证实二次提取后外泌体蛋白纯度提高,形态特征明显,并高表达CD63及CD81蛋白。结论:间充质干细胞外泌体经过二次提取纯化后,纯度提高,可以更准确的开展后续实验。     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。