负载连翘苷的外泌体递药系统制备及体外评价

目的:制备负载连翘苷(phil)的外泌体(exos)递药系统(phil-exos),并考察其对人肺上皮腺癌细胞A549迁移能力的影响。方法:采用差速-超高速离心法结合超滤法获取小鼠肺泡巨噬细胞(MHS)来源的外泌体,超声法制备phil-exos并测定其粒径及电位,采用透射电子显微镜观察其形态,蛋白质免疫印迹法鉴定标志蛋白CD63和Alix,激光共聚焦显微镜观察A549细胞对phil-exos的摄取,划痕实验考察其对A549细胞迁移能力的影响。结果:phil-exos的平均粒径为(139±1)nm,聚合物分散系数(PDI)为(0.237±0.023),Zeta电位为-(19.33±0.17)mV;外观呈类球状,具有茶托状膜结构;外泌体及phil-exos对Alix高表达,CD63低表达。A549细胞8 h时对phil-exos摄取良好,且24 h时phil的迁移抑制率为46.30%,phil-exos的迁移抑制率为81.99%,phil-exos对A549细胞迁移能力具有效抑制作用。结论:phil-exos制备成功,其可显著降低A549细胞的迁移能力。     

慢性阻塞性肺病稳定期模型大鼠支气管肺泡灌洗液的代谢组学研究

目的：基于代谢组学方法研究慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）稳定期大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）的潜在生物标志物。方法：采用烟熏联合细菌反复感染的方法制备COPD稳定期模型大鼠。采用超高效液相色谱-串联质谱技术采集大鼠的BALF数据，利用多元统计分析软件筛选差异代谢物，再结合数据库鉴定潜在生物标志物，并进行代谢通路分析。结果：多元统计分析结果显示，正常组与模型组BALF代谢物发生显著变化。通过比对数据库，共鉴定出30个差异性代谢物，主要涉及到体内的氨酰基-tRNA的生物合成，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢，鞘脂代谢，苯丙氨酸代谢和花生四烯酸代谢等8条代谢通路。结论：基于代谢组学研究COPD稳定期的BALF代谢物变化，寻找COPD稳定期相关代谢标志物，为治疗COPD提供理论参考。     

庞氏安胎止血标准汤剂HPLC指纹图谱建立及7种成分含量测定

目的：建立庞氏安胎止血标准汤剂HPLC指纹图谱,并对7种成分进行含量测定,为庞氏安胎止血标准汤剂的质量控制和后续研究提供依据。方法：采用YMC-Triart C₁₈(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,检测波长为230 nm,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^–1,柱温30℃。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》(2012年版)对10批标准汤剂进行相似度评价,并对其进行含量测定。结果：建立了庞氏安胎止血标准汤剂HPLC指纹图谱,相似度均大于0.97,共标定23个共有峰,指认13个共有峰,10批样品中绿原酸、异阿魏酸、甘草苷、菊苣酸、迷迭香酸、黄芩苷、木犀草素的质量分数分别为1.56～3.51 mg·g^–1,3.43～5.28 mg·g^–1,3.42～5.08 mg·g^–1,0.53～0.62 mg·g^–1,0.80～1.34 mg·g^–1,3.51～6.24 mg·g^–1...     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学研究连翘治疗急性肺损伤的作用机制

目的: 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析连翘的入血成分,并结合网络药理学研究连翘治疗急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用机制。方法: 使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立ALI大鼠模型,采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定连翘的入血成分,结合PharmMapper、GeneCards和Disgenet数据库筛选连翘入血成分治疗ALI的潜在作用靶点,String平台绘制蛋白互作(PPI)网络图,Cytoscape软件做网络拓扑分析并筛选核心靶点,通过David数据库对核心靶点富集分析,使用Autodock Vina和PyMol软件对相关入血成分与核心靶点进行分子对接。结果: 肺组织切片结果显示ALI大鼠模型制备成功;得到37个连翘入血成分;连翘治疗ALI核心靶点70个,涉及PI3K/Akt、MAPK和Ras等152个相关通路;agatholic acid、无梗五加苷B、连翘苷、连翘酯苷A和芦丁5个入血成分与核心靶点JAK2和JAK3分子对接的结合能均小于-4.25 kJ·mol^-1,对接结果良好。结论: 该研究明确了连翘的入血成分,网络药理学预测agatholic acid、无梗五加苷B、连翘苷、连翘酯苷A和芦丁可能为连翘防治ALI的主要成分,其作用机制可能与靶向JAK2和JAK3调控PI3K/Akt信号通路有关。