新疆博乐地区动物感染恙虫病东方体调查研究

目的了解新疆博乐地区动物自然感染恙虫病东方体(Ot)的情况。方法捕鼠、旱獭取脾组织,采用颈部静脉刺穿法取羊血,提取DNA,应用巢式PCR(nPCR)检测Ot-Sta56基因;对部分阳性样本测序,通过NCBI网站对序列进行BLAST比较分析。结果在博乐地区平原湿地、农田和居民区捕鼠126只,其中7只nPCR检测阳性,阳性率5.56%;取绵羊群血210份,8份nPCR检测阳性,阳性率为3.81%;捕获鸟类12只,其中2只nPCR检测阳性,阳性率为16.67%。在山地草原捕获鼠58只,捕获旱獭26只,nPCR检测无阳性。DNA序列分析表明,鼠类、鸟类、羊血阳性样本nPCR产物碱基序列相同,与Karp株相应DNA片段的碱基序列同源性最高,均为97%,应属于Karp型。结论在新疆博乐地区平原湿地中存在恙虫病东方体感染,为下一步深入进行该地区恙虫病东方体疫源地的调查奠定了基础。     

山东地区不同季节优势恙螨自然感染恙虫病东方体的分子流行病学调查

目的从分子水平探讨山东地区不同季节优势恙螨自然感染恙虫病东方体（Ot）情况及其作为恙虫病传播媒介的可能性.方法根据Ot-Sta56 kDa外膜蛋白基因部分序列设计Ot种和型特异性引物,对标本提取的DNA先采用种特异性引物扩增,然后再采用型特异性引物扩增分型,并对部分标本进行序列测定.结果从不同季节优势恙螨幼虫共得到11株Ot分离株和16份恙螨匀浆,从这27份标本提取的DNA经首轮PCR扩增后,18份标本有预期的目的带.对首轮PCR产物采用nested PCR扩增分型,结果17份为Kawasaki型,1份（LHGM2株）为Karp型.序列同源性分析结果证实了nested PCR分型结果：XDM2株首轮PCR产物碱基序列与Kawasaki型相应DNA片段的碱基序列同源性最高,为97.00%,在系统发育树上与Kawasaki株位于同一分支,应属于Kawasaki型;LHGM2株首轮PCR产物碱基序列与Karp型相应DNA片段的碱基序列同源性最高,为96.45%,在系统发育树上与Karp株位于同一分支,应属于Karp型.结论山东地区不同季节优势恙螨中存在Ot自然感染,Ot主要基因型为Kawasaki型.     

环泰山区域鼠类与人恙虫病东方体基因同源性和系统进化树分析

[目的]了解环泰山区域恙虫病东方体(Ot)流行株的基因型、遗传特征,探讨人、鼠间所感染Ot的基因同源性和系统进化情况。[方法]2006~2008年对在环泰山区域采集的鼠类和疑似恙虫病病人标本进行Ot-Sta56kDa基因片段检测,对阳性标本进行序列测定;对所测到的序列与GenBank中部分Ot参考序列进行序列同源性分析,绘制系统发生树。[结果]检测84份鼠脾标本,4份Ot基因阳性,阳性率为4.76%。其中,家鼠阳性率为1.79%,黑线姬鼠阳性率为10.71%(P>0.05)。4份病人焦痂标本3份Ot基因阳性。序列同源性分析显示,鼠脾标本08P、53P的核苷酸序列与Sdu-1型同源性为99.77%,与Taguehi和Oishi型的同源性均为95.98%,与Kanda和Kawasaki型的同源性均为95.74%;鼠类标本55P、56P的核苷酸序列与TA686型的同源性分别为86.27%和77.11%。3份病人阳性标本的核苷酸序列与鼠标本08P、53P同源性均为100.00%,与55P、56P的同源性仅为74.30%。系统发生树分析显示,08P、53P和3份病人阳性标本与Sdu-1型在同一分支,与Kawasaki、...     

山东省泰安市鼠类自然感染恙虫病东方体调查

目的 了解山东省泰安地区鼠类自然感染恙虫病东方体(Ot)的情况.方法 应用巢式PCR对山东省泰安地区采集的鼠类标本Ot-Sta56kDa基因片段进行检测,对阳性标本进行序列分析.结果 在泰安地区秋冬季捕获类鼠68只,阳性率为5.88%;不同鼠种间阳性率差异无统计学意义(Fisher X2=4.714,P=0.062).其中3只鼠胚胎标本均未检出Ot.序列同源性分析显示,2只鼠脾标本(08P,53P)的核苷酸序列与Sdu-1型的核苷酸序列同源性最高,为99.77%;其次,与Taguchi和Oishi型的同源性均为95.98%,与Kanda和Kawasaki型的同源性均为95.74%.而另2只鼠类标本(55P,56P)的核苷酸序列与TA686型的同源性最高,分别为86.27%和77.11%.系统发生树分析也显示.08P和53P与Sdu-1型在同一分支,它们又与Kawasaki、Kanda、Tagnchi和Oishi型共处于同一分支;而55P和56P与TA686型在同一分支.结论 山东省泰安地区鼠类存在Ot自然感染.该地区Ot的基因型较为复杂.不仅存在与临沂地区相同的Ot型,该型与日本的Kawasaki型相似;同时还存在与泰国的TA686型相似的Ot型.     

山东地区恙虫病东方体Sta56基因片段扩增与分型研究

目的 鉴定山东地区恙虫病东方体(Ot)基因型别。方法 采用巢式聚合酶链反应技术对23株恙虫病东方体山东株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及10份恙虫病患者全血中提取的Ot目的基因进行分析研究,并与Gilliam、Karp、Kato国际参考株进行比较。将群引物扩增产物用双向测序法进行序列测定。结果 35份标本中33份属于Kawasaki型,2份(FXS4 and LHGM2株)属于Karp型。从这33份中选出B-16、FXS2株进行碱基序列测定,结果B-16、FXS2株Sta56基因片段序列与Kawasaki型同源性最高,分别为94.22％、95.21％,而与其他6株Ot同源性均<75.87％.应属于Kawasaki型;FXS4和HGM2株Sta56基因片段序列与Karp型同源性最高,分别为83.03％、96.45％,应属于Karp型。结论 山东地区恙虫病东方体流行株以Kawasaki型为主,但同时存在Karp型。     

山东部分地区鼠类寄生恙螨及感染恙虫病东方体研究

目的 调查山东地区鼠体外寄生虫分布及种类组成及鼠类自然感染恙虫病东方体(ot)的情况.为传染病防治、媒介生物控制提供科学依据.方法 采用笼日法捕鼠,收集鼠体外寄生虫,应用巢式PCR对山东地区采集的鼠类标本Ot-Sta56kDa基因片段进行检测.结果 在山东省内的5市(县)中共捕获鼠类186只;采获鼠体外寄生革螨、恙螨451只,共1科3属5种.仅泰安地区黑线姬鼠脾组织中扩增出阳性结果,与血清型为Gilliam型的核苷酸序列同源性最高,为99.77％.结论 山东泰安地区鼠类存在Ot自然感染,通过对山东部分地区鼠体外寄生虫分布及种类组成调查;为该地区进一步研究鼠类传染病提供了依据.     

新疆博乐和伊犁地区恙螨自然感染恙虫病东方体调查

目的 调查新疆部分地区恙螨自然感染恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)情况,探讨其作为恙虫病传播媒介的可能性.方法 野外捕鼠采集其体表恙螨标本,分类鉴定后同种恙螨20只一组,提取DNA,根据Ot-Sta56kDa外膜蛋白基因部分序列设计Ot种和型特异性引物,对标本提取的DNA先采用种特异性引物扩增,然后再采用型特异性引物扩增分型,并对标本进行序列测定及系统进化树分析.结果 共采集恙螨5种680只.其中,博乐纤恙螨(L.bolei) 220只,鼠幅纤恙螨(L.myotis) 200只,新疆纤恙螨(L.xinjiangensis)120只,二肩纤恙螨(L.dihumerale) 80只,岩栖纤恙螨(L.rupestre) 60只.从40只博乐纤恙螨、20只鼠幅纤恙螨中检测到Ot基因,经巢式-聚合酶链式反应(nested-polymerase chain reaction,nested-PCR)分型均为Karp型.序列同源性分析结果显示碱基序列与Karp型相应DNA片段的碱基序列同源性最高,为97.00％,在系统发育树上与Karp株位于同一分支,证实了nested-PCR分型结果.结论 在新疆地区恙螨中存在Ot自然感染,Ot主要基因型为Karp型,应进一步开展相关调查研究工作.     

环泰山区域秋冬季恙虫病调查

[目的]了解环泰山区域是否存在恙虫病（Ot）感染。[方法]2002年9-12月,在泰山西南麓部分村庄及泰山旅游景区进行人间、鼠间Ot感染情况调查。[结果]血清抗-Ot,8例高度怀疑的现症病人均阳性（几何平均滴度为1∶320）,8例既往疑似病人2例阳性,10例阳性者均为Gilliam型;血清Ot群特异基因检测,6例现症病人中4例阳性,既往病人8例中3例阳性。115名健康人群抗-Ot阳性率为8.70%,高发病村、低发病村、无发病区域分别为37.50%、10.00%、3.37%。3例急性期病人血接种小白鼠,1只肝脾肿大,Ot为阳性。捕获的16只鼠的内脏标本Ot均阴性。[结论]环泰山区域存在人间Ot感染,流行血清型为Gilliam型;尚不能排除当地存在恙虫病疫源地。     

2007年浙江省鼠类感染汉坦病毒监测及病毒分离

目的了解浙江省鼠类自然感染汉坦病毒（HV）情况和病毒型别,为肾综合征出血热（HFRS）防治提供科学依据。方法采集鼠类肺组织和血清标本,用间接免疫荧光试验检测鼠血清IgG抗体,直接免疫荧光试验检测鼠肺Hv抗原。HV抗原阳性鼠肺接种Vero—E6细胞分离病毒,用HV单克隆荧光抗体鉴定分离株的型别。结果共捕获鼠形动物1129只,其中黑线姬鼠为优势种,鼠肺HV抗原阳性率为3．0％,鼠血标本IgG抗体阳性57份,阳性率8．0％。分离到6株汉滩（HTN）型病毒,其中来自黑线姬鼠5株,褐家鼠1株。结论浙江省存在以黑线姬鼠为主要传染源的HFRS疫源地,HV主要流行型别为HTN型。     

恙虫病东方体山东分离株Sta56基因全序列扩增及酶切分析

目的明确山东恙虫病东方体（Ot）分离株Sta56基因全序列与其他已知的序列之间的遗传变异关系。方法对从山东省费县恙虫病患者、黑线姬鼠、小盾纤恙螨体内分离的3株Ot分离株Sta56基因全序列进行聚合酶链反应（PCR）扩增；选取4种内切酶HinfⅠ、HhaⅠ、HaeⅢ、PstⅠ对PCR扩增产物进行限制性片段长度多态性分析（RFLP）；对代表株XDM2株Sta56基因全序列测序，运用Clustal X（5、0）和PHYLIP软件对测得的序列与GenBank中已知的Ot序列构建系统发育树，进行比较分析。结果患者分离株B-16、黑线姬鼠分离株FXS2和小盾纤恙螨分离株XDM2均扩增出接近1．6kbp的目的条带。Ot山东分离株PCR扩增产物经HhaⅠ、HinfⅠ、HaeⅢ、RstⅠ酶切后图谱一致，但与国际参考株Gilliam、Karp、Kato株的RFLP图谱均不相同；虽与日本地方株Kawasaki株的酶切图谱有相似之处，但存在酶切位点的突变。序列同源性分析结果显示，山东地区代表株XDM2株Sta56基因全序列与Kawasaki型相应的序列同源性最高，为97％，氨基酸序列同源性为92％。结论经Sta56基因全序列分析，仇山东分离株基因型虽与日本Kawasaki型相似，但也存在差异。     

新疆博乐地区大沙土鼠感染恙虫病东方体基因分型与序列分析

目的 鉴定新疆博乐地区恙虫病东方体分离株的基因型别,分析其核苷酸序列.方法 应用巢式PCR(nPCR)对新疆博乐地区采集的鼠标本Ot-Sta56KDa基因片段进行检测,PCR扩增产物纯化后测序,进行序列分析.结果 博乐地区艾比湖滩涂地优势鼠种为大沙土鼠;在大沙土鼠脾总DNA用群引物扩增出481～507bp的目的 片段;经相应型引物扩增出了目的 片段,序列同源性显示,核苷酸序列与Karp、ISS-11、Taiwan的核苷酸序列的同源性为97%,与Kanda的核苷酸序列同源性为92%.系统发生树表明,分离株与Karp株亲缘关系较近.结论 在新疆地区首次从大沙土鼠中分离并扩增到恙虫病东方体基因片段,与Karp株型有较近的亲缘关系.     

山东地区秋冬型恙虫病传播媒介的调查研究

目的：探讨山东地区恙虫病传播媒介。方法：1995年5月～2002年4月在山东恙虫病疫区捕鼠。观察鼠体外恙螨季节消长，分离恙虫病东方体(Ot)。结果：室内外共捕捉到的527只活鼠(黑线姬鼠335只，大仓鼠119只，黑线仓鼠6只，小麝鼩2只，褐家鼠63只，小家鼠2只)，从活鼠体外共检获15467只恙螨，其中太平洋无前恙螨最多5720只，其它螨数量依次为小盾纤恙螨4175只，临淮岗纤恙螨3090只，须纤恙螨1687只，泰山纤恙螨466只，脆弱无前恙螨329只。恙螨季节变化：小盾纤恙螨主要出现在9～12月，高峰在11月，是秋季鼠体外绝对优势种；须纤恙螨出现在10～翌年4月，高峰在12月，为冬季优势螨种，临淮岗纤恙螨5月出现，11月消失，高峰在8月，为夏季优势种；泰山纤恙螨主要出现在6～10月，数量较少，且起伏较大；太平洋无前恙螨、脆弱无前恙螨全部采自仓鼠，主要出现在4～12月，高峰期在7月。Ot分离：小盾纤恙螨共接种11批，分离到5株Ot；须纤恙螨、临淮岗纤恙螨和太平洋无前恙螨分别接种4批，分离到4株、2株和2株Ot。小盾纤恙螨是恙虫病发病季节疫区鼠体外优势螨种，季节消长与当地人群恙虫病季节分布基本一致；能自然感染、叮刺传播和经卵传递恙虫病东方体；被恙螨叮刺或悬液接种的小白鼠血清中能检测到特异性抗体，以上结果证明小盾纤恙螨为当地秋冬型恙虫病的传播媒介。血清学分型：除从临淮纤恙螨分离到的1株为Karp型外，其余分离株均为Gilliam型。从不同材料中分离到的Ot毒力相差不大，均属弱毒株，分离株与标准株间有交叉免疫保护能力。现场和实验室杀螨实验表明，小盾纤恙螨对敌敌畏和以二氯苯醚菊酯为主的杀虫剂均很敏感，且防治效果至少可维持1个月以上。结论：小盾纤恙螨为当地秋冬型恙虫病的主要传播媒介，同时其它螨种也有充当恙虫媒介的可能。     

山东地区恙虫病东方体分离株的基因分型与序列分析

目的鉴定山东地区恙虫病东方体分离株的基因型别,分析其核苷酸序列。方法以日本、韩国常用的恙虫病东方体分型引物,用巢式PCR技术检测恙虫病东方体分离株的相对分子质量(Mr)56×103蛋白基因片段,对群引物扩增的PCR产物纯化回收后测序,并行序列分析。结果Gilliam、Karp、Kato、山东分离株用群引物均扩增出481-507 bp的目的片段,Gilliam、Karp、Kato经相应的型引物扩增出了目的片段。山东分离株仅Kawasaki型的分型引物扩增出目的条带,序列分析证实山东分离株与Kawasaki型相似。结论在国内首次扩增出Gilliam、Karp、Kato三型标准株,山东地区恙虫病东方体分离株为Kawasaki型;山东地区恙虫病东方体与日本的Kawasaki型相似,两者有较近的亲缘关系。     

部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的检测

目的了解我国部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的自然感染情况，比较南北地区不同鼠种带菌率的差异。方法在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州5省（自治区）共捕获鼠473只，用聚合酶链反应检测鼠脾脏中的斑点热群立克次体DNA序列片段。结果共检测鼠473只，69只阳性，阳性率为14．6％；在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州省（自治区）都检测出阳性标本，阳性率分别为3．1％、21．6％、30．0％、10．8％和21．4％。结论我国黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州省（自治区）的鼠中都存在斑点热群立克次体的感染，南北地区鼠的带菌率差异无统计学意义（P〉0．05）。     

恙虫病东方体的分离及外膜蛋白基因序列分析

目的 对福建省平潭岛的恙虫病病人、宿主动物和媒介恙螨进行现场调查和恙虫病东方体分离，并对其56kD外膜蛋白基因序列进行测定和分析．为有针对性的防制提供依据。方法 将病人血、鼠脏器、地里纤恙螨标本分别腹腔接种小白鼠分离东方体，小鼠腹壁刮液经Gimesa染色镜检；PCR扩增分离株的东方体56kD外膜蛋白基因片段．并进行测序及多序列比较和进化树分析。结果 其中1份病人血标本、1份鼠脏器标本及1份恙螨标本腹腔接种的小白鼠，12d后出现耸毛、弓背、厌食、腹部增大等典型东方体感染症状，解剖后见肝脾肿大或腹水，显微镜下清淅可见细胞浆内短杆状或球杆状东方体，共分离出Pt1、Pt2、及Pt33株东方体。3株东方体用设计的引物分别扩增出约1350bp特异性56kD基因片段。序列测定结果表明，此3株东方体之间56kD基因片段同源性大于99％。它们与Ot标准株Karp、Kato、GiUiam及地方株Kawassaki、Kuroki的同源性分别为93．8％，66．2％，85．1％，69．6％，84．2％。结论 从恙虫病病人、宿主及媒介均分离到恙虫病东方体，证实了平潭岛恙虫病春季恙虫病的存在，并从分子水平上证实该分离株与Karp株同源性较高。     

内蒙古自治区1955-2006年肾综合征出血热流行特征分析

目的阐明内蒙古地区肾综合征出血热（HFRS）的流行特征。方法对内蒙古地区52年来的疫情资料及监测情况进行统计分析，对重点疫区宿主动物分布及其汉坦病毒感染率进行流行病学调查。结果1955—2006年全自治区共报告HFRS 8310例，分布在9个盟（市）的61个旗（县、市、区）。呼伦贝尔市是全自治区HFRS流行最严重的地区，共报告病例7369例，占全区发病例数的88．68％。20世纪90年代前，疫情主要发生在内蒙古的东部地区；90年代后，疫情在中西部地区陆续出现。位于西部的巴彦淖尔市于1999年首次报告HFRS病例，随后发病例数逐年增多，2005年报告95例。在啮齿动物中，现已查明黑线姬鼠、褐家鼠、小家鼠、黑线仓鼠、子午沙鼠、莫氏田鼠、红背肝、大林姬鼠、小毛足鼠、三趾跳鼠、五趾跳鼠11种鼠携带汉坦病毒。结论内蒙古自治区HFRS疫区有可能还将扩大，疫情也会在一段时间内维持在较高水平。