抗人胸腺细胞单克隆抗体2G2B2和2G2C2的制备及特性鉴定

用杂交瘤技术制备２株单克隆抗体（单抗）２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２。经研究发现,它们主要与胸腺细胞、脐血及ＰＨＡ激活的外周血单个核细胞等反应;免疫组化显示其主要作用于皮质胸腺细胞;与造血系统中分化早期的瘤细胞、骨髓瘤细胞等反应阳性率较高。生物学特性鉴定结果提示,单抗均属免疫球蛋白ＩｇＧ１亚类,腹水效价达１：１２８０００,所识别抗原分子量为４５／４６ＫＤａ,无抗原调变作用,故２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是类似Ｏ     

Atg2基因敲除对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨自噬相关基因2(Autophagy-related gene 2,Atg2)对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和迁移的影响。方法 蛋白质免疫印迹法鉴定两组细胞，即腺病毒介导CRISPR/Cas9系统靶向剪切AAVS1位点的基因未敲除组(AAVS1细胞)和Atg2ab基因双敲除组(Atg2ab DKO细胞);细胞划痕实验和Transwell小室法检测两组细胞的迁移能力；CCK-8法和细胞平板克隆形成实验检测两组细胞的增殖能力。结果 Atg2ab DKO细胞在24、48及72 h的光密度值(OD值)均较对照AAVS1细胞有所降低，但在72 h时，两种细胞的OD值差异有统计学意义(P<0.01)。Atg2ab DKO细胞形成的克隆数量少于对照组AAVS1细胞(6.33±2.31 vs15.00±1.00),差异有统计学意义(P<0.01)。Atg2ab DKO细胞创面愈合率(0.22±0.05)%显著低于对照组AAVS1细胞(0.82±0.05)%,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组AAVS1细胞相比，Atg2ab DKO细胞穿过Transwell小室的细胞数量显...     

Bcl-2短发夹状RNA对BEL-7402、Caco2细胞的生长抑制作用

目的:研究Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体对肝癌细胞系BEL-7402和结肠癌细胞系Caco2生长的抑制作用.方法:将Bcl-2 shRNA序列克隆到携带绿色荧光蛋白基因的质粒Pgenesil-1载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的Bcl-2shRNA表达质粒转入BEL-7402、Caco2细胞,同时设立阴性shRNA组、空载体组、脂质体组、空白组作为对照.通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察细胞的转染效率,Western印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖情况.结果:Bcl-2 shRNA转染组、阴性shRNA组、空载体组的转染效率无显著差异.转染Bcl-2 shRNA后BEL-7402、Caco2细胞Bcl-2蛋白表达水平与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组相比均显著降低(P＜0.05),且Bcl-2 shRNA抑制Caco2细胞Bcl-2蛋白表达比BEL-7402细胞更为明显(P＜0.05).MTT测定显示转染Bcl-2 shRNA载体入BEL-7402、Caco2细胞在72、96 h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:Bcl-2 shRNA可特异性地抑制BEL-7402、Caco2细胞生长.     

LX-2与HK-2细胞共培养模型的建立及对其细胞转分化的影响

[目的]建立人肝星状细胞(LX-2)与人肾小管上皮细胞(HK-2)共培养体系的理论模型,研究LX-2对HK-2转分化的影响。[方法]以Transwell小室建立体外LX-2细胞和HK-2细胞间接共培养体系。应用细胞免疫组织化学法检测HK-2细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各组细胞培养液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR法)检测HK-2细胞TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA、Smad2 m RNA、Smad3 m RNA、Smad7 m RNA的表达。[结果]除了空白组,形态学上其他两组均可看到HK-2细胞胞浆染棕黄色,不同数量细胞由立方铺路石样转变为梭形长条状,细胞肥大;HK-2细胞高表达α-SMA(P0.01);HK-2细胞上清液中TGF-β1含量明显高于空白组(P0.01);HK-2细胞TβRⅠ、Smad2、Smad3基因表达明显上调,而TβRⅡ、Smad7基因表达明显下调。[结论]Transwell共培养法可诱导HK-2细胞转分化,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路有关。     

H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的：了解H2O2对兔血管平滑肌细胞（VSMC）p38蛋白激酶（p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法：取兔主动脉血管平浮雕肌细胞培养，加或不加H2O2孵育，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应（MTT）法检测平滑肌细胞活性。以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果：（1）随着H2O2浓度增加，VSMC活性呈剂量依赖性降低；（2）磷酸化p38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加，且磷酸化的p38MAPK在H2O2作用后15min时达到峰值。（3）加用特异性的p38MAPK抑制剂SB203580后可显著降低p38MAPK的活化，并能逆转H2O2诱导细胞凋亡的作用。结论：H2O2通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加，这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一。     

使用大鼠因子部分取代IL—2培养CTLL—2细胞

使用大鼠因子部分取代ＩＬ┐２培养ＣＴＬＬ┐２细胞王彦宏王树宽朱平（第四军医大学西京医院临床免疫科西安７１００３３）关键词大鼠因子白细胞介素┐２ＣＴＬＬ－２细胞中图号Ｒ４４６．６ＣＴＬＬ－２细胞是白细胞介素－２（ＩＬ－２）依赖性细胞株，它来自用白血病细...     

EB1089对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的:探讨EB1089对体外培养的肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法:以1,10,100nmol/LEB1089分别作用2,4,6和8d,采用平板克隆形成实验、细胞计数法及MTT法测定EB1089对HepG2细胞生长增殖的抑制作用,并绘制生长曲线.流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡.结果:平板克隆形成试验及MTT提示,EB1089对HepG2细胞的增殖有显著抑制作用,抑制率为16.9%～74.3%,EB1089的IC50为8.2nmol/L;细胞计数法的结果提示与平板克隆形成试验结果一致.流式细胞仪检测结果显示,10nmol/LEB1089处理HepG2细胞4d,G1期细胞占71.0%,对照组G1期细胞为63.2%,呈降低趋势;处理组与对照组S期及G2期分别占28.9%和36.8%,呈增加趋势,且处理组有凋亡峰出现,凋亡细胞占21.4%.结论:EB1089能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡有关.     

干扰素α-1b对HepG2细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响*

目的研究α干扰素-1b（IFN-α-1b）对人肝癌细胞系HepG2细胞MMP-2和TIMP-2表达及其表达比例的影响,探讨IFN-α抗肝癌细胞生长与转移复发的相关分子机制。方法培养HepG2细胞,在不同剂量的IFN-α-1b干预下,于不同时间提取上清液,通过ELISA方法检测MMP-2、TIMP-2蛋白的表达浓度。结果在培养HepG2细胞24及48 h后,IFN-α剂量为3000 IU.ml-1时的MMP-2蛋白浓度与空白对照组相比明显降低,分别为（1 725.3±300.7）、（2 899.8±343.2）pg.ml-1,差别均具有统计学意义（P〈0.05）;各时间段TIMP-2浓度与对照组比较均无显著性差异;MMP-2、TIMP-2浓度比值较对照组显著降低,具有统计学意义（P〈0.05）。结论大剂量的IFN-α-1b可抑制HepG2细胞MMP-2的表达水平,下调MMP-2、TIMP-2浓度比值,并呈剂量效应关系。IFN-α对HepG2细胞MMP-2表达的抑制作用在其抗肝细胞癌生长与转移复发中发挥一定作用。     

Bcl-2基因与细胞凋亡

细胞凋亡是机体细胞衰老与死亡过程的一种主要形式,它是一个生理性调节机制,在生物体的发育形成及功能维持中起重要作用。近年来研究发现Bcl-2及其相关蛋白在细胞凋亡的调控中起着很重要的作用。本文就Bcl—2分子生物学、生理功能、作用机制以及Bcl—2研究的应用展望等方面进行了讨论。     

HSP70抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡

目的：阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：采用基因瞬间转染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达，采用Hoechst 33258染色观察H2O2 (0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase-9和caspase-3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2所致Smac从线粒体释放的影响。结果：HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋亡核百分率明显降低, DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase-9和caspase-3的活化明显受到抑制;并进一步发现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论：HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来抑制H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡。     

墓头回提取物对HepG2细胞作用的初步研究

目的研究墓头回提取物体外对HepG2细胞毒作用，探讨其抑癌作用机理。方法用MTF法检测墓头回提取物对HepG2细胞毒作用；透射电镜观察细胞超微结构变化；流式细胞仪P1染色观察墓头回对HepG2细胞的促凋亡活性。结果墓头回提取物对HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用；流式细胞仪结果显示，实验组细胞凋亡率明显高于对照组；透射电镜观察可见细胞体积缩小，微绒毛减少或消失，核固缩，核染色质浓缩边集。结论墓头回提取物对HepG2细胞具有良好的抗肿瘤活性，其作用机制与诱导细胞凋亡有关。     

人参皂苷Rb2透过Caco-2单细胞层的吸收特征研究

目的测定人参皂苷Rb2透过Caco-2单细胞层的浓度,研究其吸收特征。方法采用液相色谱-质谱联用（LC-MS-MS）法,测定人参皂苷Rb2浓度并计算其表观渗透系数（Papp）。结果人参皂苷Rb2从基顶侧至基底侧的表观渗透系数Papp（AP-BL）为3.27&#215;10^-7cm&#183;s^-1,从底侧至顶侧Papp（BL-AP）为3.16&#215;10^-6cm&#183;s^-1,Papp（BL-AP）/Papp（AP-BL）比值为9.63。结论本研究阐明了人参皂苷Rb2在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征,这在国内尚属首次报道。     

H2S显著减少巨噬细胞COX-2表达和泡沫化

目的:探讨H2S对巨噬细胞COX-2表达及泡沫化的影响?方法:建立氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导RAW264.7细胞泡沫化模型,同时给予不同浓度的H2S?应用油红O染色观察泡沫细胞的形成;Real-time qPCR检测COX-2 mRNA的表达;Western blot检测COX-2蛋白的表达?结果:Ox-LDL能够明显增加细胞内脂质的沉积,同时伴有COX-2的产生?不同浓度的H2S可以明显减少由Ox-LDL引起的COX-2的表达,同时也减少了细胞内脂质的沉积,以250 μmol/L最为明显,差异具有统计学意义(P < 0.05)?结论:H2S可以显著减少巨噬细胞COX-2的表达及泡沫化?     

IL-33及其受体ST2的研究进展

IL-33是的IL-1家族的新成员,通过受体ST2活化Th2辅助性T细胞。近来在自身免疫性疾病、变态反应性疾病和心脏疾病的研究表明IL-33是炎症性因子。本文总结了IL-33和其受体ST2信号通路的研究进展。     

人宫颈癌细胞凋亡与Bcl—2表达的研究

目的 探明Ｂｃｌ－２在宫颈癌细胞凋亡过程中的作用。方法 采用＾６０Ｃｏ和顺铂处理体外培养的３株人宫颈癌细胞株Ｈｅｌａ、ＳｉＨａ、ＲＪＣ,２４ｈ后检测细胞恨和Ｂｃｌ－２。结果 发现放射线＾６０Ｃｏ和顺铂均可以诱发宫颈癌细胞凋亡;它们都表达Ｂｃｌ－２,其表达率随着细胞调良的出现而下降;两种因素联合应用后诱导细胞凋亡和降低Ｂｃｌ－２表达的作用增强。结论 Ｂｃｌ－２的表达可能参与了宫颈癌细胞凋亡的调节过程     

BCL-2基因家族在调节细胞凋亡中的作用

BCL-2是B细胞淋巴瘤／白血病-2(Beell lymphoma leukemia-2)的缩写，是研究最早的与凋亡有关的一类重要的原癌基因，在细胞凋亡过程中，BCL-2家族成员起着至关重要的作用。对于BCL-2调节凋亡分子机制的深入了解，将有助于寻找与细胞凋亡调节紊乱有关的疾病治疗方法。     

SHP2过表达抑制人肝星状细胞LX-2凋亡

目的 探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达对人肝星状细胞LX-2凋亡的影响。方法 将表达绿色荧光蛋白（GFP）的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2转染LX-2细胞。实验分为3组：(1)Control组,以DMEM代替腺病毒转染LX-2细胞;(2)Ad-GFP组,转染空病毒Ad-GFP;(3)Ad-SHP2组,转染重组腺病毒Ad-SHP2。Western blotting检测3组LX-2细胞的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组LX-2细胞的SHP2 mRNA表达;TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测3组LX-2细胞凋亡情况。结果 Ad-SHP2组LX-2细胞的SHP2蛋白及mRNA相对表达量高于Control组及Ad-GFP组（P <0.05）;Ad-GFP组与Control组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测结果显示,与Control组LX-2细胞凋亡率（3.08±0.73）%、（9.44±...     

五味子提取物对HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax基因转录的影响

目的观察五味子提取物（SCEs）对肝癌细胞HepG2生长的影响,考察Bcl-2、Bax基因表达的变化,探讨SCEs致HepG2细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,并给予不同浓度SCEs进行干预,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测用药后HepG2细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测细胞Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果随着各药物浓度增加,细胞抑制率有增加的趋势;五味子甲素（SchA）、五味子乙素（SchB）、SCEs及DDP的IC50分别为41.91μmol/L、350.00μmol/L、236.52μg/mL、1 792μmol/L;流式细胞术结果显示SchA、SchB及顺铂（DDP）组均能有效地诱导或促进HepG2的凋亡,SCEs质量浓度≥200μg/mL可明显诱导或促进HepG2细胞凋亡。SchA、SchB及一定质量浓度的SCEs作用后细胞内Bcl-2及Bax mRNA表达水平均显著降低（P〈0.05）,DDP则可同时上调Bcl-2及Bax mRNA的表达。结论 SCEs能抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞凋亡,下调Bcl-2及Bax mRNA的表达,其诱导及促进HepG2细胞凋亡的分子机制尚需进一步研究。