壮骨颗粒对骨关节炎兔去分化软骨细胞影响的实验研究

目的:探讨壮骨颗粒对膝骨性关节炎兔软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:60只新西兰大白兔用Hulth法造骨关节炎动物模型.随机分成空白对照组、实验组:实验组用壮骨颗粒灌胃,空白对照组用生理盐水.治疗第4、8、12、24周后每绢各取6只动物.用亚硝酸盐还原酶法测定关节滑液NO水平.关节软片组织HE染色,光镜观察形态学变化、电镜观察软骨细胞内结构变化及原位末端标记(TLNEL)法观察软骨细胞凋亡病理改变,进行组织病理学评估。结果:空白对照组NO活性在不同时期均高于实验组(8周.P<0.05;12、24周,P<0.01),两组问比较有显著性差异P<0.05,0.01):实验组的关节软骨病理改变总积分、软骨细胞病理改变积分和软片表层病理改变积分均明显低于空白对照组(P<0.05);实验组的软骨细胞凋亡指数与对照组的软骨细胞凋亡有显著性差异(P<0.05)。与关节液中NO含量显著相关。结论:壮骨颗粒对兔膝关节实验性骨关节炎软骨退变具有保护作用。通过NO诱导途径减少软骨细胞的凋亡。可能是其作用机制之一。     

回医烙灸对兔膝骨关节炎软骨细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 观察回医烙灸对兔膝骨性关节炎软骨细胞Bcl-2(B-cell lymphomas,B淋巴细胞-2蛋白)和Bax(Bcl-2 AssociatedXprotein,B淋巴细胞-2的相关X蛋白)的表达的影响.方法 将新西兰兔30只,随机分为正常对照组、模型对照组和回医烙灸组,每组各10只.采用Hulth造模方法制备兔膝骨性关节炎模型.回医烙灸组在造模4周后,在膝关节局部行回医烙灸疗法,1次20 min/次,治疗4周.正常对照组和骨关节炎模型组不予干预.3组动物8周后处死,进行标本的大体形态学和光镜检测,Bcl-2、Bax蛋白的表达采用免疫组化方法进行检测.结果 回医烙灸组关节软骨的组织学评分、软骨细胞Bax的表达灰度低于模型组(P＜0.05),软骨细胞Bcl-2的表达灰度高于模型组(P＜0.05).结论 回医烙灸疗法可以调节兔膝骨性关节炎软骨细胞Bcl-2和Bax的表达平衡,从而延缓膝骨性关节炎软骨的退变.     

关节内注射透明质酸钠对兔膝关节退变软骨的影响

目的：观察关节内注射透明质酸钠对兔膝关节炎模型中退变软骨的影响。方法：以２４只成年新西兰兔为实验对象,建立Ｈｕｌｔｈ膝关节骨关节炎模型。实验组（１２只）于术后第８周开始,每周关节内注射１％透明质酸钠１ｍｌ,连续注射５次,对照组（１２只）不作任何治疗。注射后６周处死动物,在手术显微镜下观察膝关节表面,取股骨内髁软骨标本进行透射电镜观察;取内侧胫骨髁软骨作氨基己糖测定。结果：实验组动物软骨细胞退变程度     

MMP-1、TIMP-1在兔实验性膝骨关节炎中的表达

目的 观察基质金属蛋白酶1(MMP-1)及其抑制剂(TIMP-1)在兔实验性骨关节炎中的表达,探讨骨关节炎的发病机制是否与MMP-1及TIMP-1的异常表达有关.方法 20只日本大耳白兔随机分为2组:A组正常对照组,B组模型组.B组用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射,建立兔膝骨关节炎模型,4周后观察软骨组织形态学的变化及软骨中MMP-1、TIMP-1的表达.结果 B组软骨病理损害程度重于A组(P<0.01),MMP-1表达明显高于A组(P<0.01),TIMP-1表达高于A组(P<0.05).结论 MMP-1与TIMP-1与骨关节炎软骨退变有关,其异常表达在骨关节炎关节软骨退变的病理过程中发挥关键作用.     

实验性骨关节病中软骨细胞的凋亡

应用兔膝关节伸直位石膏管型固定造成的实验性骨关节病模型,对其关节软骨细胞进行形态学及原位ＤＮＡ 断裂标记研究。结果显示：制动１ 周时即出现软骨表层细胞凋亡,２ 周后凋亡呈增加趋势,６周时出现全层软骨细胞大量凋亡,而正常及实验对照组很少出现凋亡细胞。提示制动可引起软骨细胞凋亡;软骨细胞凋亡可能是关节软骨出现退变的重要机制之一。     

益气养血方抗兔膝骨关节炎模型软骨退变的作用及机制研究

目的探讨益气养血方对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞凋亡及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、人基质金属蛋白酶-13(MMP13)表达的影响,揭示其抗骨关节炎软骨退变的作用及机制。方法 40只日本大耳白兔随机分为4组,即假手术组、KOA模型组、阳性药(双醋瑞因)组、益气养血方组各10只。石蜡切片HE染色观察软骨退变情况,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化检测COL-Ⅱ、MMP13的表达。结果益气养血方对KOA模型兔膝关节软骨退变具有一定抑制作用,能下调血清促炎细胞因子TNF-α产生水平(P0.05),抑制软骨细胞凋亡;能下调软骨组织MMP-13蛋白的表达(P0.01),上调软骨组织COL-Ⅱ胶原的表达(P0.05),抑制软骨基质降解。结论益气养血方通过下调TNF-α、MMP-13蛋白表达,同时上调COL-Ⅱ胶原表达,抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,可能是益气养血方治疗骨关节炎的作用机制之一。     

鹿角壮骨胶囊对膝骨关节炎家兔模型关节软骨病理改变及骨形态发生蛋白-7表达的影响

目的 观察鹿角壮骨胶囊对膝骨关节炎家兔模型膝骨关节炎软骨的保护作用及其对软骨细胞骨形态发生蛋白-7表达的影响.方法 将60只新西兰兔按照数字随机分为3组,每组20只,模型对照组和鹿角壮骨胶囊组采用单侧改良Hulth术制作膝骨关节炎模型.正常对照组仅打开关节腔,不损伤韧带和半月板作对照,连续42 d.正常对照组和模型对照组给予等量生理盐水灌胃(0.1 mL/kg),鹿角壮骨胶囊组给予鹿角壮骨胶囊(0.1g/kg)灌胃,3组连续28 d.观察兔膝关节大体情况,并进行软骨退行性变评分和组织学观察,免疫组化检测膝关节软骨中骨形态发生蛋白-7表达情况.结果 鹿角壮骨胶囊组兔膝关节软骨病理退变程度较模型对照组轻,膝关节软骨细胞骨形态发生蛋白-7的表达量较模型对照组高,差异有统计学意义(P<0.05).结论鹿角壮骨胶囊能延缓骨关节炎关节软骨病理损伤,增强膝关节软骨细胞骨形态发生蛋白-7表达,从而达到延缓骨关节炎病程进展的作用.     

丹紫康膝冲剂对兔膝关节退行性骨关节病模型的抗退变作用

观察了丹紫康膝冲剂对兔膝ＯＡ模型的抗退变作用。将２８只家兔随机分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４组，前３组用管型石膏制动兔左后膝于伸直位，６周后制成膝ＯＡ模型，Ａ、Ｂ组分别喂服丹紫康膝冲剂、壮骨关节丸，Ｃ组为空白对照，Ｄ组为正常平行对照，治疗６０天后，处死各组动物，取兔后双膝关节组织切片，定性定量观察药物对制动引起膝退变模型的治疗作用。结果，Ａ组兔左后膝关节软骨表层中可见到明显软骨细胞分裂增生，而在Ｂ、Ｃ组中则很少见到。揭示丹紫康膝冲剂对制动所致关节软骨退变具有一定的促其修复作用。     

兔膝关节内侧副韧带重度损伤后重建手术对关节软骨保护作用的研究

目的 通过动物实验研究自体肌腱移植重建膝关节内侧副韧带对膝关节软骨退变的影响,为临床使用肌腱重建手术治疗严重膝内侧副韧带损伤,进而减少骨性关节炎的发生提供实验依据.方法 取24只成年新西兰大白兔,两侧膝关节内侧副韧带(MCL)于中段完全切断做成自身对照模型.随机选取实验组,模拟人半腱肌腱重建内侧副韧带进行手术,对照组未行重建手术.术后4、12、162L 24周分别安乐死处死6只兔子,通过组织学切片、免疫组织化学和电镜观察膝关节软骨细胞的凋亡及其凋亡调控基因BCL-2的表达情况.结果 组织学观察:实验组软骨的表面情况及软骨细胞的排列、形态均好于对照组,而且24周时对照组出现了大量的软骨陷窝内细胞消失.免疫组织化学:实验组和对照组均可见BCL-2阳性表达细胞,实验组中的BCL-2阳性表达细胞所占百分比与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05).透射电镜:实验组各组仅出现退变的软骨细胞,未见凋亡的软骨细胞,对照组各组均出现了退变的软骨细胞和凋亡的软骨细胞,在24周组尤其严重.结论 MCL重度损伤后用半腱肌腱重建MCL,能够使软骨细胞的排列和形态较好的维持.MCL重度损伤后用半腱肌腱重建MCL能够减缓软骨的退变,减少软骨细胞的凋亡.     

复元胶囊对实验性兔骨关节炎白介素1及转化生长因子β2的调节作用

目的:观察复元胶囊对实验性兔早、中、晚期骨关节炎软骨中白介素1β、转化生长因子β2及病理形态学的影响.方法:选用健康新西兰大白兔54只(2.3kg±0.2kg),随机分为5组:(1)正常组6只,不给予任何处理;(2)模型组12只,ACTL造模后用生理盐水10ml/d灌胃;(3)实验组即复元胶囊组:又分为低、中、高剂量组.每组各12只.ACTL造模后分别用复元胶囊灌胃.于给药4周、8周及12周各处死4只,正常组处死2只.比较各组股骨内髁关节软骨大体、光镜下的病理变化.电镜观察软骨细胞及基质的变化.免疫组化法检测兔膝关节软骨中白介素1β和转化生长因子β2蛋白水平.采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法检测股骨内髁内侧及胫骨平台退变软骨中转化生长因子β2的mRNA表达.结果:实验组软骨退变程度较模型组明显减轻,实验组软骨细胞中白介素1β的表达低于模型组(P＜0.05);实验组的转化生长因子β2的蛋白和mRNA的表达明显高于模型组(P＜0.01).结论:复元胶囊能明显抑制OA软骨中白介素1β的蛋白表达,提高骨关节炎软骨中转化生长因子β2的蛋白和mRNA的水平,稳定二者水平,提示对软骨退变有一定的预防作用.     

烙灸疗法通过增加软骨细胞中PI3K和mTOR的表达治疗兔膝骨性关节炎的研究

目的 探明烙灸疗法对兔膝骨性关节炎软骨细胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mTOR)的基因和蛋白质表达水平的影响。方法 将实验动物随机分为3组，空白对照组、模型对照组以及烙灸组，每组各10只。采用Hulth造模方法制备兔膝骨性关节炎模型。烙灸组在造模4周后开始干预，在膝关节局部进行烙灸疗法，每天20 min,每天1次，治疗4周；对照组不予干预。各组动物在实验的8周后处死，通过HE染色观察病例变化；采用Western-blot检测PI3K和mTOR蛋白的表达；采用RT-qPCR方法检测PI3K和mTOR mRNA的表达。结果 烙灸组膝关节软骨的Mankin的评分、软骨细胞中PI3K和mTOR的mRNA和蛋白质表达均高于模型对照组(P<0.05)。结论 烙灸疗法可以提高兔膝骨性关节炎模型中软骨细胞PI3K和mTOR的表达，抑制软骨细胞的过度凋亡，从而减少膝骨关节软骨的退变。     

硫酸氨基葡萄糖胶囊对兔膝关节软骨细胞凋亡的影响观察

目的观察硫酸氨基葡萄糖胶囊对兔膝关节软骨细胞凋亡的影响,为临床应用其治疗膝关节骨关节炎提供参考。方法采用30只新西兰兔,随机分为药物组、对照组和正常组各10只。药物组、对照组通过手术造成右膝关节失稳型动物模型,造模1周始躯赶全部兔子行走,连续4周,药物组并连续给药8周。造模后12周末处死所有动物,取右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,采用原位末端标记法检测软骨细胞凋亡率,数据经统计学处理。结果对照组软骨组织退变明显,细胞凋亡率（30.50±4.72）%;药物组软骨组织退变较轻,细胞凋亡率（16.61±2.14）%;正常组软骨组织正常。细胞凋亡率（4.67±1.85）%。各组间细胞凋亡率比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论硫酸氨基葡萄糖胶囊可降低兔膝关节软骨细胞凋亡率,延缓软骨组织的退行性改变。     

中药保护关节软骨的作用机制研究进展

通过文献整理,从组织形态学、细胞因子、软骨细胞凋亡等多方面概述了近些年来中药在保护关节软骨方面的作用机制及研究进展,中药治疗骨关节炎主要通过减轻损伤、延缓退变及促进软骨分化和修复起作用,其机制包括:1)抑制软骨细胞炎性因子的表达及产生;2)抑制关节软骨基质金属蛋白酶表达;3)促进生长因子表达;4)促进胶原蛋白形成;5)促进关节软骨细胞增殖;6)抑制关节软骨细胞凋亡等方面。     

脉冲电磁场对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡及凋亡调控蛋白的影响

目的 探讨脉冲电磁场对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡及凋亡调控蛋白的影响。方法 将24只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组和脉冲电磁场组,每组8只。除正常组外,其他两组动物均行右前交叉韧带切断术,术后6周,脉冲电磁场组用低频脉冲电磁场干预,每次40 min, 1次／d,每周5 d,共干预2周。干预结束后,取右股骨内外侧髁软骨进行HE染色（观察软骨全层结构和细胞形态）及Mankin评分、软骨细胞凋亡检测、凋亡调控蛋白（caspase-3和caspase-8）免疫组化检测。取右胫骨平台全层软骨提取总蛋白,采用Western blot检测caspase-3和caspase-8蛋白表达水平。结果 脉冲电磁场组Mankin评分高于正常组（P<0.01）,但低于模型组（P<0.01）。脉冲电磁场组软骨细胞凋亡指数较正常组高（P<0.01）;但低于模型组（P<0.05）。免疫组化及Western blot检测:脉冲电磁场组caspase-3表达水平比正常组升高（P<0.01）,但低于模型组（P<0.01）。脉冲电磁场组caspase-8表达水平比正常组升高（P<0.01）,但与模型组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 脉冲电磁场能通过下调caspase-3表达的机制抑制软骨细胞凋亡,从而抑制兔膝骨关节炎关节软骨退变。     

针刀松解法对兔膝骨关节炎模型行为学和形态学的影响的实验研究

目的通过观察针刀松解法对兔膝骨关节炎模型行为学和形态学的影响,探讨骨性关节炎的发病机理及针刀松解法治疗的可行性。方法以膝关节伸直位固定法造成膝骨关节炎模型,用电针和针刀进行治疗,治疗3周后观察Lequesne MG的膝关节评估级别,取胫骨组织HE染色后进行光镜观察,切取股骨内髁软骨进行透射电镜观察。结果Lequesne MG评分显示在局部反应、步态反应和关节活动上,电针组和针刀组分别与正常组、模型组比有显著性差异(P<0.05),电针组和针刀组之间比较无显著性差异(P>0.05)。HE染色显示电针组和针刀组软骨组织损伤减轻,且有修复趋势;电镜结果显示针刀组兔膝关节软骨细胞破坏程度和胶原纤维紊乱程度明显减轻,与电针组相当。结论针刀松解法对膝骨关节炎有较好的治疗效果,从宏观到微观证实了针刀松解法的有效性。     

回医烙灸疗法对实验性兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的观察回医烙灸疗法对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法将30只新西兰兔随机分为正常对照组、模型组和回医烙灸组,每组10只。采用石膏固定的方法制作兔左膝骨性关节炎模型。造模6周后,回医烙灸组在膝关节局部行回医烙灸疗法,每2d1次,每次20min,治疗4周;正常对照组和模型组不予干预。治疗4周后处死3组动物,取胫骨平台和股骨内侧髁软骨,进行标本的形态学观测,末端标记（TUNEL）法检测软骨细胞凋亡情况。结果模型组TUNEL阳性软骨细胞散在于软骨全层,且数量多,凋亡指数显著高于正常对照组,2组比较差异有统计意义（P〈0．05）;回医烙灸组表层也有TUNEL阳性软骨细胞,但凋亡指数显著低于模型组,2组比较差异有统计意义（P〈0．05）。结论回医烙灸疗法可以减少兔膝骨性关节炎软骨细胞的凋亡,从而延缓膝骨性关节炎的病情进展。     

钻孔抽吸治疗兔实验性膝骨关节炎的组织病理学观察

目的探讨钻孔抽吸治疗兔实验性膝骨关节炎的组织病理学变化。方法采用健康雄性家兔,按文献方法制作膝骨关节炎的模型,并抽髓腔血液作病理学观察。结果钻孔抽吸治疗组的骨内压随时间的延长而降低,软骨退变程度造模后8周与造模后5周相比有明显修复表现;空白对照组的骨内压随时间的延长变化不明显,软骨退变程度造模后8周与造模后5周相比有加重表现。结论钻孔抽吸对兔实验性膝骨关节炎具有一定治疗作用。     

针刀松解法对兔膝骨关节炎模型行为学和形态学的影响

目的通过观察针刀松解法对兔膝骨关节炎模型行为学和形态学的影响,探讨骨性关节炎的发病机理及针刀松解法治疗的可行性。方法以膝关节伸直位固定法造成膝骨关节炎模型,用电针和针刀进行治疗,治疗3周后观察Lequesne MG的膝关节评估级别,取胫骨组织HE染色后进行光镜观察,切取股骨内髁软骨进行透射电镜观察。结果Lequesne MG评分显示在局部反应、步态反应和关节活动上,电针组和针刀组分别与正常组、模型组比有显著性差异(P0.05),电针组和针刀组之间比较无显著性差异(P0.05)。HE染色显示电针组和针刀组软骨组织损伤减轻,且有修复趋势;电镜结果显示针刀组兔膝关节软骨细胞破坏程度和胶原纤维紊乱程度明显减轻,与电针组相当。结论针刀松解法对膝骨关节炎有较好的治疗效果,从宏观到微观证实了针刀松解法的有效性。     

高脱乙酰度羧甲基壳聚糖对兔骨关节炎软骨MMP-1,3表达的作用

目的 :观察高脱乙酰度羧甲基壳聚糖 (CMCTS)经关节腔注射对实验性兔膝骨关节炎软骨退变的影响。方法 :18只大白兔行右膝关节前交叉韧带切断术 ,随机分为 2组 ,每组 9只 ,实验组于术后第 0 ,2 ,4周经关节腔内注射 3%高脱乙酰度CMCTS 0 .15mg·kg-1,对照组同一时间点注射等容生理盐水 0 .15mg·kg-1。于第 6周全部处死大白兔 ,对比两组大白兔股骨髁关节软骨的大体改变和病理变化 ,并用免疫组化的方法对比两组的基质金属蛋白酶 1(MMP 1)及基质金属蛋白酶 3(MMP 3)的表达情况。结果 :实验组退变软骨的大体评分及病理变化轻于对照组 ,免疫组化方法显示MMP 1,3的表达明显低于对照组。结论 :高脱乙酰度CMCTS能明显降低骨关节炎软骨中MMP 1,3的表达水平 ,延缓软骨的退变程度 ,具有软骨保护作用 ,值得进一步深入研究。     

消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型关节液中MMP-1、MMP-3表达的影响

目的 观察消瘀接骨散对兔膝骨关节炎模型中关节软骨病理改变及关节液中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-1、MMP-3表达的影响。 方法 将24只新西兰大耳白兔分为正常组、模型组、用药组,每组8只。采用膝关节石膏制动方法复制膝骨关节炎模型,模型复制成功后,正常饲养并驱赶1周,给予用药组家兔消瘀接骨散外敷,给予模型组和正常组家兔相同大小药棉、绷带、胶布固定。光镜下观察膝关节软骨退变情况,采用酶联免疫吸附法测定关节液中MMP-1、MMP-3表达水平。 结果 用药组家兔膝关节软骨损伤较模型组明显减轻,关节软骨表面较正常组粗糙,滑膜增厚、稍有肿胀,镜下可见细胞排列规律尚可,偶见少量细胞簇集现象,关节软骨细胞有轻度变性,潮线尚完整。用药组家兔膝关节软骨的Mankin评分及关节液中MMP-1、MMP-3表达水平明显低于模型组（P<0.05）。 结论 消瘀接骨散外敷治疗兔膝骨关节炎的机制与其降低关节液中MMP-1、MMP-3的表达水平有关。