脂多糖刺激巨噬细胞分泌含miR-155-5p的外泌体促进肝星状细胞的活化及迁移

目的 探索脂多糖（LPS）刺激下的巨噬细胞来源的外泌体对肝星状细胞的激活及迁移能力的影响及分子机制。方法 以100 ng/mL丙二醇甲醚醋酸（PMA）处理人THP-1巨噬细胞24 h,诱导其分化为巨噬细胞,给予脂多糖刺激后收集巨噬细胞的培养上清,运用超速离心法提取外泌体并加以鉴定。荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外泌体中miR-155-5p的表达。采用Transwell共培养体系观察巨噬细胞分泌的外泌体对肝星状细胞LX2增殖、氧化应激、迁移和I型胶原等纤维化标志物表达的影响。同时,LX2转染miR-155-5p-mimics及miR-155-5p-inhibitors分别过表达和干扰miR-155-5p,从正反两方面去验证miR-155-5p对LX2功能的影响。Western blot检测SOCS1以及其下游信号通路蛋白的表达。结果 与对照相比,经脂多糖刺激后巨噬细胞的外泌体处理的LX2细胞增殖迁移能力增强,氧化应激水平和I型胶原等纤维化标志物的表达明显增高（P<0.05）。巨噬细胞经脂多糖处理后分泌的外泌体中miR-155-5p的表达显著增高（P<0.01）。miR-...     

阿格列汀通过miR-497-5p/GPLD1信号通路抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化的研究

目的 探究阿格列汀对高糖诱导的小鼠心肌成纤维细胞（mouse cardiac fibroblasts,MCFs）纤维化的影响及其作用机制。 方法 使用5.50、25.00 mmol/L葡萄糖处理MCFs细胞,设为低糖组和高塘组。阿格列汀（0.05、0.10、0.20 μmol/L）治疗高糖诱导的MCFs细胞6 h,筛选最适浓度0.10 μmol/L。使用脂质体法将mimics-NC组（转染mimics-NC）、miR-497-5p组（转染miR-497-5p）、anti-NC组（转染anti-NC）、anti-miR-497-5p组（转染anti-miR-497-5p）、si-NC组（转染si-NC）、si-糖基磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D（glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D,GPLD1）组（转染si-GPLD1）、阿格列汀+mimics-NC组（转染mimics-NC）、阿格列汀+miR-497-5p组（转染miR-497-5p）、阿格列汀+miR-497-5p+pcDNA组（共转染miR-497-5p和pcDNA）、阿格列汀+miR-497-5p+pcDNA-GPLD1组（共转染miR-497-5p和pcDNA-GPLD1）转染至MCFs细胞,并用25.00 mmol/L葡萄糖或0.10 μmol/L的阿格列汀处理。蛋白免疫印迹（Western blotting,WB）实验、实时荧光定量聚合酶链式反应（real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）、胶原Ⅰ（collagenⅠ,ColⅠ）、ColⅢ的蛋白表达及 miR-497-5p、GPLD1的表达。双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。 结果 与NG组相比,HG组MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ的蛋白表达显著升高,miR-497-5p显著降低（P＜0.05）,而阿格列汀（0.10、0.20 μmol/L）呈浓度依赖性显著抑制高糖诱导的MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白升高和miR-497-5p的降低。过表达miR-497-5p后,高糖诱导的MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达均明显降低,并且miR-497-5p抑制野生型GPLD1细胞的荧光活性,负向调控GPLD1蛋白表达。敲减GPLD1具有与过表达miR-497-5p相似的抑制高糖诱导MCFs细胞α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达的作用。过表达GPLD1则能够显著削弱阿格列汀和过表达miR-497-5p对高糖诱导MCFs细胞α-SMA、ColⅠ、ColⅢ表达的抑制作用。 结论 阿格列汀可抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞的纤维化,其机制与调控功能miR-497-5p/GPLD1信号通路有关。     

肺结核患者血清中miR-431、miR-194-5p、SOCS1的表达及诊断效能

目的探讨肺结核患者血清中微小RNA-431（miR-431）、微小RNA-194-5p（miR-194-5p）、细胞因子信号转导抑制物1（SOCS1）的表达及用于诊断肺结核的效能。方法选取2019年11月至2020年11月台州市第一人民医院收治的肺结核患者45例（肺结核组）、肺炎患者45例（肺炎组）、肺癌患者45例（肺癌组）及同期在本院体检中心健康体检的健康志愿者45名（对照组）作为研究对象。采用RT-PCR法检测所有研究对象入院时空腹血清miR-431、miR-194-5p表达水平,采用ELISA法检测血清SOCS1表达水平。ROC曲线评估血清miR-431、miR-194-5p、SOCS1单独检测及联合检测诊断肺结核的效能。采用Pearson相关分析miR-431、miR-194-5p、SOCS1表达水平的相关性。结果肺结核组患者血清miR-431、miR-194-5p表达水平均高于对照组和肺癌组,低于肺炎组;SOCS1表达水平低于对照组和肺癌组,高于肺炎组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。有吸烟史、有结核空洞、病灶范围大、疾病处于进展期与肺结核患者血清miR-431、miR-194-5p、SOCS1表达水平均有关（均P＜0.05）。ROC曲线显示,与血清miR-431、miR-194-5p、SOCS1单独检测以及miR-431联合miR-194-5p、miR-431联合SOCS1、miR-194-5p联合SOCS1检测相比,3项指标联合检测对肺结核的诊断效能更高（均P＜0.05）。相关性分析显示,肺结核患者血清miR-431表达水平和miR-194-5p表达水平呈正相关（r=0.680,P＜0.01）,血清miR-431、miR-194-5p表达水平与SOCS1表达水平均呈负相关（r=-0.962、-0.639,均P＜0.01）。结论肺结核患者血清中miR-431、miR-194-5p表达升高,SOCS1表达降低,3项指标之间呈线性相关,且与患者的临床病理特征有关,对肺结核的临床诊断有参考价值。     

外泌体转运miR-324-5p对胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨外泌体转运微小RNA(miR)-324-5p对胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响。方法培养人胃癌细胞系MGC-803并提取外泌体,制备外泌体转运miR-324-5p模拟物(mimic)。细胞分为对照组(细胞不进行处理)、外泌体组(外泌体混悬液)和miR-324-5p mimic组(加入外泌体转运miR-324-5p mimic混悬液),制备移植瘤模型。检测各组摄取外泌体效率。MTT法和流式细胞术检测细胞增殖率和凋亡率,qRT-PCR和Western blotting法检测各组瘤体中miR-324-5p、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA及蛋白的表达。结果外泌体组和miR-324-5p mimic组MGC-803细胞摄取外泌体效率分别为60%和57%。与对照组和外泌体组比较,miR-324-5p mimic组MGC-803细胞增殖率降低,凋亡率增加(P＜0.05);裸鼠移植瘤质量和CyclinD1 mRNA及蛋白降低,抑瘤率、miR-324-5p、p21、LC3 mRNA及蛋白增加(P＜0.05)。结论外泌体转运miR-324-5p能抑制MGC-803细胞增殖和促进MGC-803细胞凋亡,其机制可能是增加移植瘤中p21和LC3水平,降低CyclinD1水平,从而提高抑瘤率,降低移植瘤质量。     

紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p诱导乳腺癌细胞产生耐药表型研究

目的研究紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p对乳腺癌细胞迁移、凋亡和耐药性的影响。方法超速离心法获取外泌体,使用qRT-PCR方法分别检测乳腺癌细胞（SKBR-3）和紫杉醇耐药乳腺癌细胞（SKBR-3/PR）细胞株和外泌体中miR-5585-5p的表达量;通过外泌体共培养技术以及在乳腺癌耐药细胞中转染miR-5585-5p的抑制剂,用Transwell检测其迁移能力,流式细胞术检测其凋亡情况;qRT-PCR和Western blotting检测其耐药指标。结果与SKBR-3相比,miR-5585-5p在耐药细胞SKBR-3/PR细胞株和外泌体中表达均上调（P < 0.01和P < 0.05）;在耐药细胞株中转染miR-5585-5p的抑制剂,Transwell、流式分析等结果显示,与对照相比,抑制剂组的耐药性下降,生物学活性降低（P < 0.01）;耐药细胞源性的外泌体与亲本细胞共培养可使SKBR-3细胞产生耐药表型,增强其迁移能力,抑制其凋亡率（P < 0.01）,而转染抑制剂的耐药细胞分泌的外泌体可减弱这一作用。结论紫杉醇耐药乳腺癌细胞通过外泌体递送高表达的miR-5585-5p至亲本细胞并诱导亲本细胞产生耐药表型,外泌体miR-5585-5p可为乳腺癌耐药治疗提供新的分子靶点,为乳腺癌预后评估提供新的生物标志物。     

miR-155-5 p靶向c-SKI对冠状动脉内皮细胞增殖及胶原合成的影响

目的 探讨miR-155-5p靶向c-SKI对TGF-β1诱导的人冠状动脉内皮细胞增殖及胶原合成的影响.方法 不同浓度TGF-β1处理人冠状动脉内皮细胞48h,MTT法检测细胞增殖情况,Western blot法和RT-PCR法检测细胞中胶原蛋白、miR-155-5p和c-SKI的表达.转染miR-155-5p抑制剂后...     

子痫前期蜕膜巨噬细胞源性外泌体来源miR-146a-5p通过靶向HIF1α抑制滋养细胞的活力和侵袭能力

目的：探究蜕膜巨噬细胞源性外泌体miR-146a-5p对子痫前期滋养细胞的作用及其分子机制。方法：收集子痫前期（preeclampsia,PE）患者和正常妊娠女性蜕膜组织，使用密度梯度法与流式细胞术分选获得巨噬细胞，提取蜕膜巨噬细胞源性外泌体；为了鉴定外泌体，采用透射电镜观察结构，western blot验证外泌体CD63蛋白表达；采用CCK-8检测外泌体对滋养细胞活力的影响；Transwell实验检测滋养细胞迁移变化；qPCR检测外泌体中miR-146a-5p的表达；western blot检测滋养细胞中HIF1α蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测miR-146a-5p与HIF1α是否存在结合位点。结果：巨噬细胞外泌体呈现直径约30～130 nm的中间凹陷“饼状”结构形态，CD63高表达，符合外泌体特征。与正常组相比，PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体显著降低滋养细胞增殖与迁移（P<0.001）。PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体中miR-146a-5p表达量显著下降，蜕膜巨噬细胞源性外泌体处理滋养细胞后滋养细胞中HIF1α蛋白表达显著升高，miR-146a-5p和HIF1α之间存在靶向结合...     

血栓闭塞性脉管炎患者血浆源性外泌体miR-223-5p对人血管平滑肌细胞的影响

目的 探究血栓闭塞性脉管炎（thromboangiitis obliterans,TAO）患者血浆源性外泌体中miRNAs对人血管平滑肌细胞（human vascular smooth muscle cell,HVSMC）的影响。方法 从TAO患者和健康对照的血浆中提纯外泌体,进行miRNA测序。通过生物信息学分析鉴定差异表达的miRNA（differentially expressed miRNA,DE-miRNA）,用RT-qPCR进一步验证。将PKH67荧光标记的外泌体与HVSMC共培养,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测HVSMC的细胞活力和凋亡。使用双荧光素酶报告分析并确认miR-223-5p的下游靶点。结果 在TAO患者和健康对照之间共发现39个DE-miRNA,其中miR-223-5p是显著上调的miRNA。TAO患者血浆外泌体或miR-223-5p模拟物能降低HVSMC的细胞活力并促进细胞凋亡,miR-223-5p抑制剂可削弱TAO患者血浆源性外泌体的抑制和促凋亡作用。血管内皮细胞黏附分子1（vascular endothelial cell adhesion molecule-1,VCAM-1）和胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R）的表达被TAO患者血浆源性外泌体和miR-223-5p模拟物下调,这一下调作用可被miR-223-5p抑制剂所抑制。双荧光素酶报告提示VCAM-1是miR-223-5p的靶点。结论 TAO患者血浆源性外泌体可能通过miR-223-5p/VCAM-1途径抑制HVSMC的细胞活力并促进细胞凋亡,从而在TAO的发生发展中起作用。     

miR-155-5p对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及可能机制

目的: 探讨miR-155-5p对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）细胞凋亡的影响及可能机制。方法: 收集43例AML患者和21例缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells, BMMNC）,qRT-PCR法检测两组细胞miR 155 5p和Bcl 2 mRNA表达水平。AML细胞转染miR 155 5p类似物或抑制剂后,CCK 8法检测经不同浓度阿糖胞苷作用后AML细胞的活性,流式细胞术检测经阿糖胞苷（0.16 μg/mL）作用后AML细胞的凋亡情况。通过qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测AML细胞转染miR-155-5p抑制剂后NF-κB、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。结果： AML患者较缺铁性贫血患者BMMNC的miR 155 5p（t=4.688, P=0.002）和Bcl-2 mRNA（t=4.066, P=0.014）的表达水平明显升高。CCK 8和流式细胞术检测结果显示,转染miR 155 5p类似物的AML细胞经阿糖胞苷处理后细胞活性增高,凋亡明显减少;相反,转染miR-155-5p抑制剂组细胞活性降低,凋亡明显增多（P均<0.01）。qRT-PCR和蛋白质印迹结果显示,转染miR 155 5p抑制剂后AML细胞NF κB、Bcl-2表达水平降低。结论： miR-155-5p可能通过上调NF-κB、Bcl-2的表达抑制AML细胞凋亡。     

miR-155-5p调节Wnt信号通路促进肾透明细胞癌细胞的增殖与转移

目的 研究miR-155-5p和Wnt信号通路在肾透明细胞癌细胞中的作用机制。方法 采用qRT-PCR检测细胞中miR-155-5p的表达。WB检测各细胞中Wnt信号通路相关蛋白磷酸化水平及蛋白表达水平。通过MTT实验、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测各细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 肾透明细胞癌细胞中miR-155-5p的表达明显高于正常细胞。过表达miR-155-5p促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭。加入通路蛋白抑制剂后,我们发现其会减弱过表达miR-155-5p对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的促进能力。结论 miR-155-5p和Wnt在调节肾透明细胞癌发生发展中起着关键作用,miR-155-5p可能成为肾透明细胞癌治疗的新靶点。     

miR-590-5 p靶向调控STAT3基因对骨肉瘤143 B细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-590-5p和信号转导与转录激活因子3(STAT3)基因在骨肉瘤143B细胞中的表达,探讨miR-590-5p对STAT3基因的靶向作用及其对143B细胞迁移和侵袭的影响.方法:运用生物信息学方法对miR-590-5p和STAT3基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染miR-590-5p模拟物以及干扰STAT3的siRNA后,real-time PCR检测miR-590-5p和STAT3 mRNA在癌细胞中的表达,Western blotting检测STAT3蛋白在癌细胞中的表达,细胞划痕实验检测癌细胞的迁移情况以及Transwell小室检测癌细胞体外的侵袭性.结果:生物信息学软件TargetScan和miRanda显示miR-590-5p和STAT3基因二者靶向配对良好,荧光素酶报告系统鉴定发现miR-590-5p能够抑制STAT3 mRNA表达.Real-time PCR和Western blotting检测结果均表明过表达miR-590-5p能够降低STAT3 mRNA和蛋白的表达.细胞划痕实验和Transwell实验发现过表达miR-590-5p能够分别抑制143B细胞的迁移和侵袭.结论:miR-590-5p通过负性靶向调控骨肉瘤143B细胞中STAT3基因的表达,进而抑制癌细胞的迁移和侵袭.     

SOCS3经JAK/STAT信号通路调控气道黏蛋白高分泌

目的 研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在炎症情况下经JAK/STAT通路调控气道黏液高分泌.方法 培养人气道16HBE上皮细胞,设置空白对照组、白介素(IL)-6处理组、IL-6和microRNA (miR)-203处理组,Westernblot法分析细胞中磷酸化JAK激酶(p-JAK1/2)、SOCS3、黏蛋白(MUC) 5AC蛋白水平;Real-time法检测各组细胞中SOCS3、STAT3、MUC5AC mRNA表达量;ELISA法检测各组培养上清液中p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白含量.结果 在IL-6刺激下,IL-6处理组的p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白量及SOCS3、STAT3 mRNA含量较空白对照组显著升高(P＜0.05),IL-6和miR-203处理组的p-JAK1/2、MUC5AC蛋白量及STAT3 mRNA含量较IL-6处理组显著升高(P＜0.05),但SOCS3 mRNA与IL-6处理组比较差异无统计学意义,SOCS3蛋白含量较IL-6处理组显著降低(P＜0.05).结论 细胞在IL-6刺激后SOCS3呈现高表达,同时经JAK/STAT信号通路负反馈调控MUC5AC.     

TWEAK诱导巨噬细胞源性外泌体miRNA抑制膀胱癌转移的研究

目的:研究肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)诱导的肿瘤相关巨噬细胞(TMs)源性的外泌体对膀胱癌细胞的转移影响.方法:使用TWEAK刺激THP-1诱导分化的TMs,检测其外泌体的特征.并使用miRNAs芯片...     

MiR-155-5p:在肾母细胞瘤中表达下调并抑制肾母细胞瘤细胞的增殖、迁移及促进细胞凋亡

目的 探讨miR-155-5p在肾母细胞瘤中的表达及其对肾母细胞瘤细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。方法 收集40例肾母细胞瘤患者的肿瘤组织及其相对应的瘤旁组织,瘤旁组织作为正常对照组,应用RTqPCR检测肾母细胞瘤组织和正常瘤旁肾脏组织中miR-155-5p的表达水平;在肾母细胞瘤细胞株G401中,运用脂质体转染技术过表达及抑制miR-155-5p;采用CCK-8实验检测肾母细胞瘤细胞增殖能力的变化;划痕实验检测肾母细胞瘤细胞迁移能力的变化;流式细胞术检测肾母细胞瘤细胞凋亡能力的变化。结果 RTqPCR结果显示肾母细胞瘤肿瘤组织中miR-155-5p的表达水平显著低于正常肾脏组织,且miR-155- 5p的表达与肾母细胞瘤的临床分期呈负相关,差异有统计学意义（P<0.05）;在人肾母细胞瘤细胞G401中上调miR-155-5p表达能够显著抑制肿瘤细胞的增殖和迁移,促进凋亡（P<0.05）;下调miR-155-5p表达能够显著促进肿瘤细胞的增殖和迁移,抑制凋亡（P<0.05）。结论 miR-155-5p在肾母细胞瘤患者肿瘤组织中表达显著下调,且其表达量与临床分期呈负相关;miR-155-5p可抑制肾母细胞瘤细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡;miR-155-5p有望成为肾母细胞瘤诊断、治疗和预后评估的一个新的潜在标志物。     

miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移

目的 探讨miR-let-7c-5p能否调控HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移。方法 生物信息学方法确定miR-let-7c-5p的关键基因;RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌和癌旁组织中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2 蛋白相对表达量。以人正常膀胱细胞SV-HUC-1作为对照,RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌细胞系T24,UM-UC-3,5637细胞中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2蛋白的相对表达量。对UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p分别进行上调和下调,上调实验设模拟物阴性对照组（mimic-NC）、miR-let-7c-5p模拟物组（mimicmiR-let-7c-5p）、下调实验设阴性对照组（inhibitor NC）及miR-let-7c-5p抑制剂组（si-miR-let-7c-5p）,双荧光素酶实验、RT-qPCR和Western blot法共同验证miR-let-7c-5p和HMGA2的靶向关系;Transwell小室检测单独上调或下调miR-let-7c-5p表达及同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移的变化;Western blot检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白（E-cadherin, N-cadherin, vimentin, Snail）相对表达量。结果 HMGA2为miR-let-7c-5p的靶基因之一;与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-let-7c-5pmRNA相对表达量降低（P<0.05）,HMGA2蛋白相对表达量增加（P< 0.05）;与SV-HUC-1细胞相比,UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p相对表达量显著降低,HMGA2显著增加（P=0.01）。上调miR-let-7c-5p表达,UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著下降（P<0.05）;下调miR-let-7c-5p表达,UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著增加（P<0.05）;当同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力显著下降（P<0.05）。Western blot结果显示,上调miR-let-7c-5p表达,E-cadherin表达增加,N-cadherin,vimentin,Snail蛋白表达下降;下调miR-let-7c-5p表达,E-cadherin表达下降,N-cadherin,vimentin,Snail蛋白表达增加;同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达能够抑制UM-UC-3细胞EMT（P<0.05）。结论 miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制EMT进而抑制UM-UC-3细胞侵袭和迁移。     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达MIF和分泌TNF-α、IL-8的影响(英文)

目的观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和分泌TNF-α、IL-8的影响。方法用PMA诱导单核细胞THP-1分化为巨噬细胞。将分化后的THP-1源性巨噬细胞用不同浓度的ADMA作用24 h后,分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测MIF mRNA和蛋白表达水平及培养上清中TNF-α与IL-8的含量。结果 ADMA剂量依赖性的上调了THP-1源性巨噬细胞内MIF mRNA和蛋白表达,15μmol/L ADMA对MIFmRNA和蛋白表达的上调作用最明显。随着ADMA浓度增加,THP-1源性巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-8的水平逐渐升高,在15μmol/LADMA作用时达到峰值。结论 ADMA能够上调巨噬细胞内MIF的表达,促进TNF-α和IL-8的分泌。