巨细胞病毒感染与儿童免疫性血小板减少性紫癜的关系探讨

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与儿童免疫性血小板减少性紫癜(ITP)的关系。方法采集154例ITP患儿(ITP组)和50例健康儿童(对照组)的血清样本,用Real-time PCR检测HCMV DNA,ELISA方法检测HCMV IgM、IgG抗体;其中105例ITP患儿和50例健康对照儿童采集了尿液标本,用Real-time PCR检测HCMV DNA,并比较ITP组HCMV DNA阳性患儿与阴性患儿的血小板数量的差异。结果 ITP患儿血清HCMV DNA、HCMV IgM及IgG抗体和尿HCMV DNA阳性率均明显高于健康对照儿童,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01);ITP组HCMV DNA阳性患儿的血小板数量(29.72±14.54)×109/L与阴性患儿(41.28±18.35)×109/L比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童感染HCMV可能是发生ITP的重要致病因素之一,这对指导临床有效治疗及预防ITP的发生有着积极的意义。     

婴幼儿人巨细胞病毒感染154例PCR与ELISA检测比较

目的:探讨采用不同的定量方法及不同的标本检测婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染阳性率。方法:采用荧光定量PCR法和ELISA定量法分别对154例疑感染HCMV住院患儿进行HCMV DNA和HCMV IgM抗体的定量检测,其中对73例患儿的血及尿标本同时进行HCMV DNA的检测。结果:血和尿HCMV DNA同时检测,尿检出率明显高于血;血和尿HCMVDNA检出率明显高于血清HCMV IgM;两种方法的联合检测进一步提高阳性率。结论:两种方法同时检测可提高HCMV的检出率;尿标本HCMV DNA的检出率明显高于血标本,采用尿标本更方便,且阳性率高。     

实时荧光PCR检测黄疸婴儿尿中人巨细胞病毒感染研究

目的探讨实时荧光PCR技术检测尿中人巨细胞病毒(HCMV)在黄疸婴儿HCMV活动性感染的检测价值。方法分别应用实时荧光PCR法和ELISA法检测2585例黄疸婴儿尿HCMV-DNA和血清HCMV-IgM,比较病毒DNA与血清抗体的平行性和敏感性。结果 2585例黄疸婴儿尿中实时荧光PCR检测HCMV-DNA阳性1428例;ELISA检测HCMV-IgM阳性1084例。两种方法阳性符合率为73.88%,实时荧光PCR法和ELISA法阳性检出率分别为55.24%和41.93%,差异有统计学意义(P0.01);实时荧光PCR法阳性标本的平均拷贝数为7.86×105。结论 HCMV是引起婴儿黄疸的主要原因之一,实时荧光PCR法检测敏感性要高于ELISA法检测,可以有效地提示体内活动性HCMV感染,具有良好的应用价值。     

孕妇及新生儿巨细胞病毒感染的分子生物学诊断

目的 :建立套式聚合酶链反应 ( n PCR)检测人巨细胞病毒 ( HCMV)。方法 :建立套式 PCR检测 HCMV DNA,同时结合病毒分离检测临床标本。结果 :在 2 3例新生儿肝炎综合征患儿中 ,10例病毒分离及套式 PCR均阳性 ;1例病毒分离阴性 ,但套式 PCR阳性。对 58例妊娠早期孕妇血标本进行检测 ,套式 PCR阳性率为 9% ,病毒分离阳性率则为 7%。结论 :套式 PCR是一种临床检测HCMV的快速有效手段。     

肝、肾移植术后受者人巨细胞病毒巢式PCR检测

目的 探讨巢式PCR（Nest PCR)检测器官移植术后受体人巨细胞病毒（HCMV）DNA，并与传统ELISA法作方法学对照。方法 巢式PCR针对HCMV AD169株IEA基因设计内外两对引物，对59例肝、肾移植术后受体（肝移植27例、肾移植32例）血、尿标本进行HCMV DNA检测。分离血清作ELISA检测IgG、IgM。结果 血液Nest PCR阳性率肝移植62.9%，肾移植46.8%；ELISA法阳性率：IgG35.5%,IgM27.1%,IgG IgM18.6%，IgM阳性标本（16例）DNA检测皆为阳性，6例IgG、IgM皆阴性标本DNA检测仍为阳性。结论 巢式PCR是一种敏感特异、简便快速诊断HCVM感染的方法，灵敏度及特异性高于传统ELISA，能弥补ELISA的假阴性，更适用于临床检测器官移植术后HCMV感染。     

荧光定量PCR法和巢式PCR法检测新生儿脐血人巨细胞病毒DNA的比较

目的 比较荧光定量PCR法和巢式PCR法在检测新生儿人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染中的灵敏度,为HCMV先天性感染的快速特异性检测提供实验依据.方法 随机收集36例脐血标本,分离单核细胞,提取总DNA,进行巢式PCR和荧光定量PCR检测.结果 巢式PCR法检测HCMV糖蛋白(gB) DNA的阳性率为22.2%(7/...     

荧光定量聚合酶链反应与免疫印迹法检测人巨细胞病毒

目的比较荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）与免疫印迹法（IBT）检测人巨细胞病毒效果。方法分别应用FQ-PCR和IBT检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染小儿和成人各42例尿HCMV DNA和血清HCMV IgM。结果 42例疑似人巨细胞病毒感染小儿尿HCMV DNA阳性检出率为57.14%,血HCMV IgM阳性检出率为35.71%。前者的诊断阳性率高于后者,差异有统计学意义（χ^2=3.88,P〈0.05）;42例成人尿HCMV DNA阳性检出率为14.29%,血HCMV IgM阳性检出率为71.43%。后者的诊断阳性率显著高于前者,差异有统计学意义（χ^2=28,P〈0.005）;84例患者尿HCMV DNA阳性检出率38.10%,血HCMV IgM阳性检出率48.81%。2种方法检测HCMV活动性感染的差异无统计学意义（χ^2=1.96,P〉0.1）。结论 FQ-PCR检测HCMV DNA是早期诊断小儿HCMV感染的有效的方法;免疫印迹法检测血清HCMV IgM水平对于判断成人HCMV活动性感染具有一定意义;做人群HCMV普查时,免疫印迹法有较好的应用价值。     

聚合酶链反应在临床巨细胞病毒感染检测中的应用和研究

本文用聚合酶链反应(PCR)技术检测76份患儿尿标本中巨细胞病毒(CMV)DNA,其中32份尿标本做了病毒分离,另44例同时做血清CMV IgM抗体检测。结果PCR和病毒分离阳性符合率为100％,与CMV IgM抗体检出率无显著差异(P>0.05)。证明PCR方法具有特异性高、敏感性好、操作简便、检测周期短等优点,适用于临床进行CMV感染的快速诊断。     

人乳头瘤病毒、疱疹病毒Ⅱ型及人巨细胞病毒与宫颈癌关系的研究

用人乳头瘤病毒(HPV)16,18,11型、疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)N/BglⅡ,L/HindⅢ片段和人巨细胞病毒(HCMV)DNA等6个核酸探针,通过分子杂交技术对宫颈疾患活检标本进行了检测和分析,结果在同一标本中未发现3种病毒DNA均阳性者,但宫颈癌标本中46%HPV和HCMV DNA同时存在,2例HSV-2 DNA阳性的宫颈癌标本中有1例同时存在HCMV DNA。提示宫颈癌的病毒病因是多因素的,HPV,HSV-2和HCMV均可能有关,在宫颈癌发生过程中3者之间可能有某些内在联系。     

二甲亚砜对人巨细胞病毒初次分离促进作用的实验观察

目的观察二甲亚砜(DMSO)对人巨细胞病毒(HCMV)初次分离的影响.方法将临床收集的11例患者尿标本接种至两组人胚成纤维细胞(HF)细胞中进行HCMV分离.1组为DMSO细胞组,即在培养液中添加了终浓度为1%的DMSO;另1组为常规细胞组接种组,设为对照,不作任何处理.待细胞出现HCMV特征性细胞病变(CPE)时,通过PCR法测定HCMV DNA加以确证.结果 11例标本中,两组均有5例标本出现HCMV CPE,且标本号一致.但DMSO细胞组CPE出现时间比对照组提前约9 ～12 d.结论 DMSO对HCMV初次分离的阳性结果没影响,但可使HCMV特征性CPE的出现得以提前,加快了临床标本中HCMV的分离.     

Rapid detection of human cytomegalovirus DNA in urine samples by polymerase chain reaction in vitro gene amplification

In the detection of human cytomegalovirus (HCMV) DNA in the urine by polymerase chain reaction (PCR). We have designed and synthesized two pairs of oligonucleotide primers (patent pending) corresponding to the specific and conserved DNA sequences of HCMV AD 169 strain. The sequences of the primers were checked that they did not have cross reaction with either normal human genomic DNA or with other herpesviruses. As less as 1fg of HCMV DNA (equal to the amount of DNA from four HCMV virions) in urine can be detected by the method A total of 47 urine specimens from infants suspected of HCMV infection was examined by PCR and conventional virus isolation simultaneously 31 samples were positive in both PCR and virus isolation; 12 samples were negative in either; 4 samples were positive in PCR but negative in virus isolation. So the samples were further examined by serology and the data showed that there was HCMV-specific IgM in all the virus isolation negative sera examined. The result suggests that HCMV in the above samples is possibly underdetected by virus isolation. Therefore the method described in the paper is a specific, sensitive, rapid conventional and non radioisotopic one for detection of HCMV in urine samples.     

器官移植术后受者人巨细胞病毒的PCR检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对３０例器官移植受者血、尿标本进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ检测。结果显示，１６例ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率５３．３％。提示ＰＣＲ是一种敏感特异、简便快速、能早期诊断ＨＣＭＶ感染的方法，适用于监视器官移植病人术后ＨＣＭＶ感染。     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％；其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％。与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．２％；提示ＰＣＲ检测临床标本中ＨＣＭＶ，不仅敏感特异，而且与ＣＣＣ，ＤＥＡ两法相比快速简便。     

IgG抗体亲和力指数在儿童巨细胞病毒感染诊断中的意义

目的探讨IgG抗体亲和力指数(AI)在儿童巨细胞病毒(HCMV)感染诊断中的意义。方法分别收集120例临床疑似HCMV感染患儿的尿液和外周血标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和微粒子酶免化学发光法检测尿液HCMV DNA载量和血清HCMV IgM/IgG抗体;采用尿素变性结合酶联免疫吸附试验(ELISA)测定HCMV IgG抗体亲和力指数(AI)。结果 120例疑似HCMV感染患儿的尿液HCMV DNA、血清HCMV IgM和HCMV IgG阳性检出率分别为70.83%(85/120)、60.83%(73/120)和76.67%(92/120),差异有统计学意义(χ2=7.252,P=0.027);25例HCMV IgM-/IgG+患儿中,以高亲和力抗体检出为主,占92%(23/25);67例HCMV IgM+/IgG+患儿中,以低、中等亲和力抗体为主,分别占26.87%(18/67)和53.73%(36/67);高、中、低IgG抗体AI患儿尿液HCMV DNA阳性检出率分别为36.11%(13/36)、86.84%(33/38)和100%(18/18),差异有统计学意义(χ2=32.262,P<0.01)。结论 IgG抗体亲和力指数测定能准确地反映HCMV感染的活动状况,有助于HCMV感染的诊断与治疗。     

生物素标记组合探针杂交检测患儿尿液以诊断巨细胞病毒感染

利用 HCMV AD 169株的克隆 DNA 片段制成生物素标记的组合探针进行临床标本的 HCMV DNA 的杂交检测,此探针特异性强,不与其它类 DNA 发生非特异性杂交,可检出25pg 同源 DNA,100～500个 HCMV 感染细胞或2.57LgTCID50 HCMV 病毒悬液.杂交法结果与病毒分离结果符合率极高.初步用于临床尿标本检测得出,先天畸型,乳儿肝炎及激素治疗三组患儿中,HCMV 的排毒率分别为100%(3/3),61%(11/18)和75%(3/4).提示 HCMV 可能是临床部分患儿的重要致病源.同时表明杂交法对 HCMV 感染的检测是快速、特异及敏感的.     

DETECTION OF HUMAN CYTOMEGALOVIRUS INFECTION BY DNA-DNA HYBRIDIZATION

A rapid detection method has been established to identify human cytomegalovirus (HCMV) in specimens of urine and white blood cells with use of DNA-DNA hybridization technology. Since radioactive labels should be avoided if possible, the DNA-DNA hybridization procedure has also been modified to employ biotin labelled probe. Preliminary experiments for sensitivity and specificity showed that hybridization with the probe HCMV DNA EcoRI J fragment could detect 0.9 pg (~(32)P-probe) or 90 pg (biotin-probe) homologous DNA; 60 cells (~(32)P-probe) or 325 cells (biotin-probe) of HCMV infected fibroblasts, and 0.3125 TCID_(50) HCMV-AD_(169). The labelled probe failed to hybridize to DNA from ather herpesviruses, uninfected human lung fibroblasts and human placental DNA. Some specimens have been detected for HCMV by DNA hybridization with ~(32)P-probe. Of 76 urine specimens and 46 white blood cell specimens from 51 newborn infants with clinically suspected cogenital HCMV infection, 11 (12%) and 9 (19%) were positive for HCMV DNA, respectively. Of 11 white blood cell specimens from normal women of childbearing age and 47 white blood cell specimens from blood donors, 6 (55%) and 30 (63%) were positive for HCMV DNA, respectively.     

肺癌与人类巨细胞病毒感染关系的初步研究

目的：探讨肺癌与人类巨细胞病毒（HCMV）感染的关系。方法：对88例肺癌及117例肺非癌患者，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清HCMV－IgG，IgM抗体，用聚合酶链反应（PCR）法检测尿HCMV－DNA。同时检测其中64例肺癌及67例肺非癌患者的病灶局部冲洗或支气管肺泡灌洗回收液HCMV－DNA。对肺癌组中抗癌化疗的患者于每一化疗周期复查血清HCMV－IgM，尿HCMV－DNA。结果：肺癌组血清HCMV－IgM阳性率26．1％，病灶局部冲洗或支气管肺泡灌洗回收液HCMV－DNA阳性率26．6％，均显著高于肺非癌组（P＜0．01）；血清HCMV－IgG及尿HCMV－DNA阳性率两组未见明显差别。42例肺癌到化疗第二周期时，血清HCMV－IgM16例由阴性转阳性，尿HCMV－DNA6例转阳性。结论：肺病与HCMV感染有统计学上的相关性；抗癌化疗使肺癌患者HCMV活动性感染明显增多，值得重视。     

肾移植患者人巨细胞病毒的检测

采用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对１１例肾移植者的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染情况进行了研究。在术前及术后的４周内，对其外周血及尿中病毒和血清中ＩｇＡ及ＩｇＭ抗体进行了连续检测。结果显示：有６例在移植后出现巨细胞病毒感染，感染率为５４％（６／１１）。血、尿中ＨＣＭＶＤＮＡ或ＨＣＭＶ抗体（ＩｇＡ或ＩｇＭ）阳性。提示：用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对肾移植病人的ＨＣＭＶ感染情况进行监测，对预防和治疗ＨＣＭＶ感染和提高肾移植的成功率有着重要的意义。