骨关节炎肾阳虚证个案的温针疗效及基因表达谱研究

目的　观察温针治疗骨关节炎肾阳虚证患者的临床疗效 ,并以基因芯片研究温针疗效的基因表达谱。方法　筛选出符合西医骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者 1例 ,温针治疗 2周 ,治疗前后取血、提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程 ,获得差异基因表达谱。结果　温针对此例患者的治疗作用达到显效 ,对基因表达的影响涉及免疫、基础代谢、肌肉运动、生长发育和信息传导等多个方面。结论　温针治疗肾阳虚型骨关节炎疗效确切 ;应用基因芯片技术能够同时半定量地研究数千条基因的表达状态 ,可以从微观基因水平研究针刺的整体机制 ,并从分子水平判定其疗效 ,为探讨针灸的作用机制开辟新途径。     

右归丸对围绝经期综合征/肾阳虚证基因表达谱的影响

目的:研究右归丸对围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱治疗前后的异同。方法:以围绝经期综合征肾阳虚证患者为对象,服用右归丸一个月,应用基因芯片技术,分析治疗前后围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱;结合SAM软件对差异表达基因进行筛选并分析。结果:经核酸定量分析仪检测,6例患者RNA的OD260/OD280比值在1.90~1.98,经琼脂糖凝胶电泳检测,28s和18 s条带清晰,28 s条带约是18 s条带的2倍,说明RNA完整性较好;治疗前后基因表达谱存在明显的差异,表达有差异的基因共81条,ratio值≤0.5的基因62条;ratio值≥2的基因19条,下调基因大于70%,获得基因主要是与免疫应答、代谢通路、信号通路、氧化应激、细胞因子相关基因等,差异表达基因的信号值区为治疗前与治疗后两大类,说明与临床治疗结果符合。结论:围绝经期综合征肾阳虚证患者通过右归丸治疗后,下调基因超过70%,且主要与多种代谢途径密切相关。     

冠心病心阳虚证相关差异表达基因分析

目的　通过基因表达谱分析冠心病心阳虚证的差异表达基因 ,探寻心阳虚证的特征性基因表达谱。方法　筛选出符合西医冠心病和中医心阳虚证诊断标准的患者 5例 ,选择同年龄段正常人 5例 ,分别取外周血 ,提取总RNA ,作基因芯片。 5例患者中经温阳通痹法治疗显效的典型病例 1例 ,治疗前后分别取外周血 ,提取总RNA ,作基因芯片。结果　患者与正常人的基因芯片差异表达谱与典型病例患者治疗前后的基因芯片差异表达谱中有 39条基因差异表达一致。结论　此 39条基因的差异表达可能是冠心病心阳虚证发生的分子生物学基础 ,对基因功能的分析 ,部分阐释了冠心病心阳虚证的病理机制。     

肾阳虚骨关节炎个案与13个免疫基因的初步研究 --辨证论治的个体化医学及分子疗效评定方法探试

目的 :观察温针治疗肾阳虚骨关节炎典型病例的疗效 ,通过基因芯片前沿方法研究该疗效的差异表达基因。从而探索辨证论治的个体化医学治疗效果及分子疗效评定的新方法。方法 :对 10例典型肾阳虚关节炎患者 ,辨证评分 ,然后施以温针灸治疗后精选疗效最好者。对其治疗前、后分别采血 ,提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图象采集与数据分析等过程获得差异基因表达谱。结果 :在 10例肾阳虚关节炎治疗有显著性的背景上 ,所选 1例患者的肾阳虚证、疼痛分分别减少 2 6分、12分 ,基因芯片检测该患者治疗前、后血液获得有表达差异的基因 5 7条 ,其中已知功能的基因有 3 3条 ,与免疫相关有 13条 ,约占整个已知功能基因的 3 6 4%。结论 :温针治疗肾阳虚证有效病例的基因表达涉及广泛 ,其分子机理包括免疫、能量、疾病、肿瘤等多个方面 ,但以免疫方面最为突出。同时也可由肾阳虚证的分子生物学基础 ,来探讨辨证论治的个体化医学疗效及其评价方法     

温针个案的分子药效学分析

目的　采用基因芯片技术研究温针对肾阳虚证骨关节炎患者基因表达的影响 ,探讨温针治疗肾阳虚证骨关节炎的分子机制。方法　以 4 0项肾阳虚辨证因子量表为评定标准 ,筛选出 8例符合西医骨关节炎诊断标准和中医肾阳虚证诊断标准的典型肾阳虚证患者 ,给予温针治疗 15d ,选取疗效最好的 4例提取mRNA作基因芯片分析 ,本文仅选择其中 1例。结果　治疗后患者疼痛积分由 14分降至 1分 ,骨关节炎病情严重指数由 19分降至 1分 ,肾阳虚积分由 2 0分降至 6分 ,虚寒积分由 2 6分降至 9分。获得表达差异的基因 2 4 6条 ,已知功能的 12 6条 ,分别涉及免疫、代谢、细胞骨架及运动等多种相关基因。结论　温针通过影响多种相关基因的表达而达到治疗的效果。     

肺气虚证患者T淋巴细胞相关基因的表达研究

目的：通过基因芯片技术研究肺气虚证患者T淋巴细胞基因表达的差异。方法：采集肺气虚证和肺阴虚证患者、正常人的外周血作为实验血样和对照血样。采用Fieoll技术分离外周血淋巴细胞、流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞，一步法提取总RNA，逆转录合成双链cDNA，体外转录合成生物素标记的cRNA，片断化后，采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交，扫描后筛选出差异表达基因。结果：肺气虚证患者／正常人外周血T淋巴细胞相关差异表达基因45条，其中上调41条，下调4条；肺气虚证／肺阴虚证患者外周血T淋巴细胞相关差异表达基因43条，其中上调27条，下调16条；肺气虚证组／肺阴虚证组、正常人组均高表达的差异基因15条。结论：基因芯片技术能有效地研究中医证的基因表达谱，筛查出肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异表达基因。     

针灸对克罗恩病患者结肠黏膜基因表达谱的影响

目的从基因表达谱的角度,探讨针灸治疗克罗恩病(CD)的效应机制。方法受试者签署知情同意书进行结肠镜检查,收集CD患者和健康者结肠黏膜。采用基因芯片技术检测健康志愿者及CD患者针灸治疗前后结肠黏膜的基因表达谱,筛选出针灸治疗CD的差异表达基因,结合生物信息学方法,对差异表达的基因进行GO和Pathway分析。结果针灸治疗CD后结肠黏膜组织炎症反应较治疗前明显减轻;与健康者比较,CD结肠黏膜差异表达基因共有3449个(上调2250个,下调1199个)。与治疗前比较,针灸治疗后CD结肠黏膜差异表达基因共有1926个(上调536个,下调1390个),其中CD结肠黏膜差异表达的基因能被针灸逆转的有388个(上调62个,下调326个);针灸可调控的CD中差异表达基因与疾病密切相关的生物功能主要有转录因子STAT磷酸化、ATP酶活性、B细胞介导的免疫、自然杀伤细胞相关免疫等,相关的通路主要有Toll-like受体信号通路、自噬调节系统、自然杀伤细胞介导的细胞毒作用。结论针灸能有效减轻CD患者结肠炎症反应,影响CD结肠黏膜组织异常的基因表达谱,其差异表达基因主要涉及细胞周期、免疫炎症反应、细胞自噬等生物学过程。     

右归丸调控老龄肾阳虚免疫相关基因表达水平的研究

目的:研究右归丸对老龄肾阳虚体质干预前后其免疫相关基因定量表达水平的差异,探讨右归丸调控的分子靶向。方法:基于课题组前期获得的老龄肾阳虚证差异基因表达谱,筛选免疫相关差异表达基因28条。纳入老龄肾阳虚体质者,给予右归丸治疗28 d,以肾阳虚半定量诊断标准进行疗效评价,采用RT-PCR技术检测右归丸对老龄肾阳虚干预前后28条免疫相关基因的定量表达水平差异。结果:28条免疫相关基因经右归丸干预前后有7条基因存在表达水平差异。结论:经PCR验证的老龄肾阳虚免疫相关差异表达基因集中反映了肾阳亏虚对免疫系统功能的影响,提示肾阳虚体质与肿瘤发生可能存在某种关联机制。     

肾阳虚证免疫功能相关基因筛选及其表达分析

目的以基因芯片技术从基因表达角度分析肾阳虚证与免疫功能的关联性。方法筛选出符合中医肾阳虚证诊断标准的患者4例,健康对照4例,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,获得基因表达数据,通过SAM芯片数据分析软件筛选肾阳虚证显著表达基因。结果筛选到70条显著表达基因,其中与免疫相关的有18条。结论肾阳虚证患者存在免疫功能异常,免疫功能基因的异常表达是肾阳虚证发生的分子基础之一。     

寒热证候类风湿性关节炎患者外周血CD4+T淋巴细胞基因表达谱初步探索

目的:探讨类风湿性关节炎寒热证候的基因表达差异。方法:采集类风湿性关节炎寒热证候患者及正常人空腹静脉血,纯化得到CD4 T淋巴细胞,利用基因芯片检测和分析技术,探索类风湿性关节炎寒热证候患者及正常人CD4 T淋巴细胞基因表达差异点。结果:与正常人相比,类风湿性关节炎患者有149条基因异常表达,主要涉及免疫应答和信号传导;寒热证类风湿性关节炎患者之间有42条基因异常表达,只有2条与上述149条基因重复,主要涉及功能代谢、信号传导;寒热证类风湿性关节炎患者与正常人之间有49条基因异常表达,与上述42条之间有20条基因重复,也主要涉及功能代谢、信号传导;这些差异表达基因涉及多个生物学途径。结论:寒热证候类风湿性关节炎患者的基因表达谱存在差异,这种差异与类风湿性关节炎患者和正常人之间的差异有所不同,提示中医证候分类学具有基因表达谱依据。     

Curculigo orchioides (Xian Mao) modifies the activity and protein expression of CYP3A in normal and Kidney-Yang Deficiency model rats

Aim of the study

In Chinese medicine clinics, traditional Chinese herbs are used to treat disorders of Yin and Yang balance, including Kidney-Yang Deficiency. The activity of the hepatic cytochrome P450 3 A (CYP3A) is closely associated with body status. The aim of the present study is to investigate CYP3A enzymatic activity and CYP3A4 protein expression using a Kidney-Yang Deficiency rat model and furthermore to investigate the intervention effects of the Pungent-hot herb Xian Mao. This work contributes rationale for personalized medicine and enhances our understanding of herb–drug interactions.

Materials and methods

Rats were randomly divided into three groups: the model group, the Xian Mao group and the intervention group (model rats treated with Xian Mao). The model rats were given an intramuscular injection of hydrocortisone for 14 days, and the control rats were given normal saline. The Xian Mao group consisted of normal rats treated with Xian Mao by oral gavage for 7 days. The intervention group was given Xian Mao for 7 days after treatment with hydrocortisone. The activity of CYP3A was detected by using the erythromycin-N-demethylase method. CYP3A4 protein expression level was detected by Western-blot.

Results

CYP3A enzymatic activity in the Kidney-Yang Deficiency rat was decreased by 44% compared to normal animals. The relative CYP3A4 protein expression level of the Kidney-Yang Deficiency rat (mean value 0.663±0.188) was 20% lower than that of normal rat (0.830±0.199). The in vitro data showed that CYP3A activity was significantly (P<0.001) inhibited (decreased by 59%) by Xian Mao concentrations of 1 mg/mL. The in vivo data also showed that CYP3A activity was significantly decreased in the rats treated with the three doses of Xian Mao. The CYP3A4 protein expression was significantly decreased by Xian Mao treatment at the high and intermediate doses (30 and 20 g/kg, respectively) compared with the normal group. However, the intervention group (the Kidney-Yang Deficiency rat treated with Xian Mao at 20 and 30 g/kg) showed an increased CYP3A activity and CYP3A4 protein expression compared with the herb-untreated model rats.

Conclusion

CYP3A enzymatic activity and CYP3A4 protein expression could be inhibited by Xian Mao. The CYP3A activity and CYP3A4 expression in the Kidney-Yang Deficiency model rat were lower than that of normal rat but this deficiency could be rescued by treatment with Xian Mao.     

丽参注射液对老年女性冠心病肾虚患者性激素双向调节的初步研究

本研究观察了丽参注射液治疗前后老年女性冠心病肾虚患者雌二醇（Ｅ２）、睾酮（Ｔ）及Ｅ２／Ｔ比值的变化。结果：治疗前与对照组比较，Ｅ２、Ｅ２／Ｔ肾阳虚组明显降低，肾阴虚组明显升高（Ｐ均＜０．０１）；肾虚两组比较亦差异显著（Ｐ＜０．００１）。３组Ｔ比较差异均不显著（Ｐ＞０．０５）。治疗后随着肾虚症状改善，Ｅ２、Ｅ２／Ｔ肾阳虚组明显回升（Ｐ＜０．０５），肾阴虚组明显下降（Ｐ＜０．０１），均接近对照组，Ｔ两组均无显著变化。提示：绝经期后冠心病肾虚患者阴阳失调与性激素紊乱有关，主要表现在生物活性作用强的Ｅ２水平的升高或降低；人参既可调整阴阳改善肾虚症状又可逆转性激素变化，对Ｅ２有很好的双向调节作用，有助于人体内环境雌雄性激素的平衡。     

丽参注射液对老年女性冠心病肾虚患者性激素双向调节的初步研究

本研究观察了丽参注射液治疗前后老年女性冠心病肾虚患者雌二醇（Ｅ２）、睾酮（Ｔ）及Ｅ２／Ｔ比值的变化。结果：治疗前与对照组比较，Ｅ２、Ｅ２／Ｔ肾阳虚组明显降低，肾阴虚组明显升高（Ｐ均＜０．０１）；肾虚两组比较亦差异显著（Ｐ＜０．００１）。３组Ｔ比较差异均不显著（Ｐ＞０．０５）。治疗后随着肾虚症状改善，Ｅ２、Ｅ２／Ｔ肾阳虚组明显回升（Ｐ＜０．０５），肾阴虚组明显下降（Ｐ＜０．０１），均接近对照组，Ｔ两组均无显著变化。提示：绝经期后冠心病肾虚患者阴阳失调与性激素紊乱有关，主要表现在生物活性作用强的Ｅ２水平的升高或降低；人参既可调整阴阳改善肾虚症状又可逆转性激素变化，对Ｅ２有很好的双向调节作用，有助于人体内环境雌雄性激素的平衡。     

针刺对快速老化小鼠SAMP10皮质衰老相关基因表达谱的影响

目的利用基因芯片技术研究“益气调血,扶本培元”针法对快速老化小鼠SAMP10皮质基因表达的影响。方法选取雄性8月龄快速老化小鼠SAMP10（分成针刺腧穴组,对照组）和同源正常老化小鼠SAMR1,采用cDNA microarray技术,分析伴随快速老化SAMP10皮质基因表达谱的变化以及针刺对其的影响。结果芯片结果显示,伴快速老化。P10皮质共有9类17个基因的表达发生变化,15个基因表达下调,2个基因表达上调,施予“益气调血,扶本培元”针法后,所有与P10快速老化相关基因的表达均被部分或全部的逆转,显示针刺具有特异性。结论“益气调血,扶本培元”针法能够良性调节脑老化相关基因的表达,并可能通过该种作用延缓脑衰老。     

针刺内关穴对急性心肌缺血大鼠缺血心肌基因表达谱的影响

[目的]研究针刺对急性心肌缺血大鼠缺血心肌基因表达谱的影响。[方法]建立左前降支冠状动脉结扎大鼠心肌缺血模型,分组干预后分离提取缺血心肌总RNA,与大鼠全基因表达谱芯片杂交后进行检测,对筛选得到的针刺治疗过程中的差异表达基因,利用基因功能分类体系寻找和分析显著富集差异表达基因的复合功能分类,从基因功能水平探索针刺对急性心肌缺血模型大鼠缺血心肌基因表达谱的影响。[结果]发现心肌缺血24 h后表达上调的398条基因中,经过间断针刺内关穴3次,24 h后其中298条基因(占表达上调基因的74.87%)的表达出现不同程度的下调趋势;心肌缺血24 h后表达下调的338条基因中,经过间断针刺内关穴3次,24 h后其中188条基因(占总下调基因的55.62%)的表达出现不同程度的上调趋势,表明针刺内关穴对缺血心肌差异表达基因有良性调节趋势。针对筛选出来的差异表达基因蛋白磷酸酶1B(Ppm1b)、琥珀酸辅酶A连接酶(Suclg1)、谷氨酸草酰乙酸转氨酶2(Got2)、苹果酸脱氢酶(Mdhl)、丙酮酸脱氢酶磷酸酶同工酶(PDP1)、延胡索酸水合酶(Fh)、羟肽酶b2(Cpb2)、酪氨酸单氧化酶激活蛋白酶(Ywhaz)、S100钙结合蛋白a9(S100A9)、Na+/K+转运ATP酶B1亚基(Atp1b1)、肌钙蛋白I(TnI)、肌球蛋白轻链激酶3(Myl3)、肌集钙蛋白2(Casq2)、肌红蛋白(Mb),其功能模块主要涉及氧化磷酸化、线粒体电子传递、电子传递偶联三磷酸腺苷(ATP)合成、能量代谢、磷酸盐代谢过程、单价无机阳离子转运、辅酶代谢过程等。[结论]针刺内关穴可能是通过影响上述基因,从而对急性心肌缺血发挥保护作用。     

SAMP10鼠脑衰老相关基因HSP86、HSP84的表达及针刺影响的研究

目的：探讨针刺延缓衰老的作用机制。方法：采用快速老化小鼠SAMP10、SAMR1为模型，运用RT-PCR和地高辛标记的非放射性Northern blot技术，观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马HSP84、HSP86基因表达的变化。结果：SAMP10对照组小鼠热休克蛋白HSP84、HSP86在全脑、皮层、海马中的表达下调，针刺后表达上调并趋向于正常组。结论：SAMP10小鼠脑衰老与热休克蛋白HSP84、HSP86基因表达异常有关，针刺可以通过调节HSP84、HSP86基因表达增强细胞保护、抑制细胞凋亡、抵抗氧化应激，从而起到延缓衰老的作用。     

蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚大鼠血清甲状腺激素和促甲状腺激素的影响

采用醋酸氢化可的松造成肾阳虚模型大鼠，以它床子素和蛇床子总香豆素给药，测定大鼠血清促甲状腺激素和三种甲状腺激素Ｔ３，反Ｔ３及Ｔ４的浓度。结果，肾阳虚模型大鼠与正常大鼠比较，ＴＳＨ，Ｔ３，ｒＴ３和Ｔ４都显著降低；     

肥胖人痰湿体质外周血基因表达谱特征研究

目的：采用基因芯片技术对痰湿型体质人的外周血基因表达谱进行研究。方法：挑选3例非痰湿型体质肥胖人、2例痰湿型体质肥胖人和3例正常体重者，取上述受试者的外周血．提取总RNA并进行扩增和标记．检测受试样品的质量．进行基因表达谱观察，从基因序列中A出具有显著统计学意义的序列所标志的基因。结果：痰湿型体质与非痰湿型体质相比．有115个差异表达探针组。结论：本研究发现痰湿型体质人的外周血相关基因表达与非痰湿型体质人有明显差异。     

蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚大鼠血清甲状腺激素和促甲状腺激素的影响

采用醋酸氢化可的松造成肾阳虚模型大鼠，以蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌ，ＯＳＴ）和蛇床子总香豆素（ｔｏｔａｌ－ｃｏｕｍａｒｉｎｓ，ＴＣＲ）给药，测定大鼠血清促甲状腺激素（ＴＳＨ）和三种甲状腺激素Ｔ３、反Ｔ３（ｒＴ３）及Ｔ４的浓度。结果，肾阳虚模型大鼠与正常大鼠比较，ＴＳＨ、Ｔ３、ｒＴ３和Ｔ４都显著降低（Ｐ均＜０．０１）；用药大鼠与肾阳虚模型大鼠比较，上述４项指标都有显著性提高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。提示ＯＳＴ和ＴＣＲ可以提高肾阳虚模型大鼠的腺垂体－甲状腺轴功能。