miR-338-3p通过靶向RUNX2负调控人骨髓间充质干细胞成骨分化且促进骨质疏松

目的:探讨miRNA-338-3p在骨质疏松症进展中的作用及其对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响.方法:选择60例骨质疏松症患者为研究对象,另选同期60名非骨质疏松者作为对照组.检测两组血清miR-338-3p表达水平.采用RT-qPCR检测miR-338-3p、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)水平.Western blot检测miR-338-3p对RUNX2蛋白表达的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)测定法和茜素红染色评估miR-338-3p和RUNX2对成骨分化和矿化能力的影响;采用生物信息学和荧光素酶报告基因检测验证miR-338-3p和RUNX2之间的关系.结果:骨质疏松患者血清miR-338-3p水平相比对照组表达量明显上升(P<0.05),且其表达随着成骨诱导时间的延长而逐渐降低(P<0.05).与对照组比较,miR-338-3p表达情况影响OCN、OPN和Collagen Ⅰ mRNA的水平(P<0.05).与对照组相比,miR-338-3p过表达削弱了hBMSCs矿化能力和ALP活性(P<0.05).双荧光素酶报告基因检测证实,RUNX2是miR-338-3p的直接靶点,miR-338-3p过表达降低了RUNX2蛋白及其mRNA的表达水平(P<0.05).RUNX2过表达可逆转miR-338-3p对hBMSCs成骨分化的抑制作用.结论:miR-338-3p通过靶向RUNX2负调控hBMSCs的成骨分化,从而促进骨质疏松的进展.     

miR-125b通过靶向抑制Smad4调控骨髓间充质干细胞成骨分化

目的: 研究miR-125b是否通过调控其预测的靶基因Smad4表达而调节骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化。方法: 构建Smad4 3'-UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-125b对Smad4 3'-UTR-荧光素酶活性的影响;分离培养人骨髓MSCs,在MSCs中转染miR-125b mimics并进行成骨诱导,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测Smad4表达水平;Smad4 siRNA转染MSCs并进行成骨诱导,通过检测碱性磷酸酶(AKP)活性及RUNX2 mRNA表达水平变化考察Smad4下调对MSCs成骨分化的影响。结果: 双荧光素报告检测显示miR-125b能特异性地与Smad4 mRNA的3'-UTR结合,抑制其荧光素酶活性(P<0.05)。过表达miR-125b能抑制MSCs成骨分化过程中Smad4表达水平。干扰Smad4表达能抑制AKP活性及RUNX2 mRNA表达水平,它能部分模拟miR-125b调控MSCs成骨分化的功能。结论: miR-125b通过抑制靶基因Smad4的表达调控MSCs成骨分化。     

miR-129-5p调控MC3T3-E1细胞成骨分化的体外研究

背景 微小RNA(microRNA,miR)是一种非编码的小分子化合物,在成骨分化等生命过程中发挥重要调控作用.目的 探讨miR-129-5p对小鼠成骨前体细胞(preosteoblast cell line,MC3T3-E1)成骨分化功能的影响及相关作用机制.方法 体外培养MC3T3-E1细胞后,分别转染慢病毒载体(miR-control、miR-129-5p mimic和miR-129-5p inhibitor),以过表达或敲低细胞miR-129-5p水平.成骨诱导分化培养细胞后,使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色试剂盒检测碱性磷酸酶的活性,茜素红(alizarin red staining,ARS)染色观察钙结节形成情况,以检测细胞成骨分化水平.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和Western blot法检测成骨分化基因Runx2和OCN的mRNA及蛋白表达水平.生物信息学方法预测miR-129-5p靶基因,并用双荧光素酶基因报告实验验证.结果 转染慢病毒载体的MC3T3-E1细胞进行成骨诱导分化后,与miR-control组相比,转染miR-129-5p mimic的MC3T3-E1细胞7 d后碱性磷酸酶染色增强,成骨早期标志物Runx2表达增加,14 d后成骨晚期标志物OCN表达升高,21 d后茜素红染色显示钙化结节较大且量多(P<0.05).而转染miR-129-5p inhibitor慢病毒的MC3T3-E1细胞与miR-control组相比,碱性磷酸酶活性低,钙结节较小且少,成骨标志物Runx2和OCN表达下降(P<0.05).通过Targetscan网站(生物信息分析)预测miR-129-5p的靶基因为BMP通路负向调控蛋白Smad6;双荧光素酶报告实验验证Smad6为靶基因,过表达miR-129-5p后Smad6蛋白表达水平下调.结论 miR-129-5p通过靶向抑制Smad6的表达对MC3T3-E1细胞成骨分化产生促进作用.     

高糖微环境下miR-449对人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用和机制研究

目的 探讨miR-449在高糖(HG)作用下对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其可能的作用机制。方法 将hBMSCs接种于成骨培养基培养,诱导其成骨分化。实验组：成骨培养基中加入高糖25 mmol/L,模拟高糖微环境处理。对照组：细胞维持在5 mmol/L葡萄糖的正常培养基中。采用茜素红染色、碱性磷酸酶活性测定、双荧光素酶测定、实时定量PCR(qRT-PCR)检测等方法测定以下指标：(1)miR-449在HG诱导的hBMSCs成骨分化时的表达水平;(2)miR-449模拟物和抑制物对碱性磷酸酶(ALP)活性,成骨相关标志物表达的影响;(3)Sirt1和Fra-1的过表达对miR-449在HG处理的hBMSCs成骨分化标志物表达的影响。结果 (1)HG处理的实验组hBMSCs成骨分化低于对照组细胞(P<0.05),miR-449表达水平较对照组降低(P<0.05)。(2)在HG诱导的hBMSCs成骨分化过程中,miR-449模拟物可降低ALP活性(P<0.05),降低成骨标志物的mRNA表达(P<0.05);而miR-449抑制剂能提高成骨标志物...     

骨痹通消颗粒对激素型股骨头坏死人骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化的影响

目的 探究骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死人骨髓间充质干细胞（hBMMSC）成骨与成脂分化的影响。方法 取激素性股骨头坏死患者骨髓,体外进行hBMMSC的培养,通过细胞形态学观察、成骨及成脂分化潜能来鉴定hBMMSC。以完培组（基础培养基+10%的胎牛血清）作为对照,采用CCK-8法测定1%、2%、5%、8%、10%体积分数的骨痹通消含药血清A组作用24 h后对细胞增殖的影响。细胞在96孔板的培养过程中,每孔加入地塞米松溶液0.52 μl,以完培组（基础培养基+10%的胎牛血清）和损伤组（基础培养组+10%的胎牛血清+0.52 μl地塞米松溶液）作为对照,采用CCK-8法测定2%、5%、8%体积分数的骨痹通消含药血清B组对激素环境中细胞活力的影响。以无激素诱导细胞作为对照组（基础培养基+10%的胎牛血清）,将体外激素诱导的hBMMSC细胞分为模型组（基础培养基+10%的胎牛血清+10-5 mol/L地塞米松溶液）、实验组（基础培养基+5%的骨痹通消含药血清+ 10-5 mol/L地塞米松溶液）。茜素红染色试剂盒测定各组成骨分化后矿化结节的形成;油红O染色试剂盒测定各组成脂分化后脂滴的形成;RT-qPCR测定成脂相关标志基因PPARγ、C/EBP-α与Fabp4中mRNA的表达,Western blot检测成骨相关蛋白BMP-2、Runx2及β-catenin的蛋白表达含量。 结果 原代细胞培养7 d后,可见梭形、纺锤形或多角形的贴壁细胞。第三代细胞生长均匀,平行排列,透光率好。成骨诱导21 d,细胞发生改变,局部细胞聚集,并有矿化结节产生,茜素红染色呈阳性;成脂诱导21 d,脂滴与油红O染液结合变为红色,油红O染色呈阳性。与完培组比较,10%体积分数的含药血清A组细胞活力下降（P＜0.05）。与完培组比较,损伤组细胞活力下降（P＜0.05）;与损伤组比较,2%、5%、8%体积分数的含药血清B组细胞活力升高（P＜0.05）。与对照组比较,模型组染色面积降低（P＜0.05）;与模型组比较,实验组中矿化结节与沉积升高,染色范围也更广（P＜0.05）。与对照组比较,模型组细胞内脂质积累增多（P＜0.05）;与模型组比较,实验组较细胞内脂质积累降低（P＜0.05）。与对照组比较,模型组PPARγ、C/EBP-α和Fabp4的表达量升高（P＜0.01）,与模型组比较,实验组PPARγ、C/EBP-α和Fabp4的表达量降低（P＜0.05）。与对照组比较,模型组BMP-2、Runx2及β-catenin蛋白表达含量升高（P＜0.01）,与模型组比较,实验组BMP-2、Runx2及β-catenin蛋白表达含量降低（P＜0.05）。 结论 骨痹通消颗粒能够促进激素性股骨头坏死hBMMSC的增殖及其向成骨分化的能力,抑制成脂分化,为临床上防治激素性股骨头坏死提供了理论基础。     

炎性微环境下TGF-β1通过TGF-β1/Smad3 通路促进BMSCs成骨分化

目的 研究炎性微环境下转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响及作用机制。方法 应用肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)体外模拟炎性微环境,检测不同浓度TGF-β1对BMSC增殖活性的影响。实验分为对照组[BMSC+成骨诱导液(osteogenic medium,OM)]、实验组(BMSC+TGF-β1+OM)和抑制组[BMSC+SB431542 (TGF-β1拮抗剂)+OM]。应用ALP染色、茜素红染色、实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及Western blot法对BMSCs成骨分化能力和TGF-β信号通路因子Smad2、Smad3进行检测并比较3组间的差异。结果 低浓度TGF-β1作用下BMSCs增殖活性较高,高浓度(50ng/ml)抑制BMSCs增殖活性;成骨诱导7天和10天时,实验组与其他两组比较,ALP染色较深、面积最大;茜素红染色结果显示,实验组体外矿化结节形成均高于其他两组;RT-qPCR检测结果显示,实验组成骨分化基因OPN、RUNX2与ALP表达均增高,TGF-β信号通路中Smad3在实验组表达最高,抑制组表达最低,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot法检测结果显示,实验组内OPN、RUNX2与ALP蛋白表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β信号通路中Smad3蛋白表达在3组中差异不明显,而p-Smad3在实验组中表达明显增高、抑制组中明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 炎性微环境中TGF-β1通过激活TGF-β/Smad3信号通路促进了BMSCs成骨分化。     

葛根素对激素诱导骨髓间充质干细胞PPARγmRNA和CEBPαmRNA表达的影响

目的探讨葛根素防治激素性股骨头缺血性坏死的作用机制。方法大剂量地塞米松诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化,在诱导成脂的同时给予不同浓度的葛根素进行干预。干预6 d后检测细胞内成脂标志物PPARγmRNA和C/EBPαmRNA的表达。结果葛根素干预组PPARγmRNA和C/EBPαmRNA的表达较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论葛根素防治激素性股骨头缺血坏死的机理不仅是改善股骨头局部的微循环,同时还与其抑制激素诱导下的BMSCs成脂分化有关。     

土鳖虫对激素诱导骨髓间充质干细胞PPARγ和aP2mRNA表达的影响

目的 探讨激素性股骨头缺血坏死的发病机理及土鳖虫防治该病的作用机制. 方法 通过大剂量激素诱导体外培养的骨髓间充质干细胞成脂分化,同时给予土鳖虫含药血清干预.检测干预6天后细胞内成脂标志物PPARymRNA和aP2mRNA的表达. 结果 土鳖虫含药血清可对抗激素诱导下的BMSCs PPARymRNA和aP2mRNA表达的增加. 结论 土鳖虫防治激素性股骨头缺血坏死的机理不仅是改善股骨头的微循环,同时还与其抑制激素诱导下的BMSCs成脂分化有关.     

MicroRNA-675-5p对成牙骨质细胞分化的影响

目的:通过过表达或抑制microRNA-675-5p(miR-675-5p),观察miR-675-5p对小鼠成牙骨质细胞OCCM-30分化的影响。方法:用矿化诱导培养基诱导OCCM-30细胞分化,检测各矿化指标及miR-675-5p的含量变化。而后利用Lipofectamine 3000脂质体分别将miR-675-5p的mimic和inhibitor及对应的negative control转染进OCCM-30细胞,采用real-time PCR技术验证转染是否成功,继而采用real-time PCR和Western Blot的方法检测矿化相关指标ALP,OSX,RUNX2,BSP的含量变化,利用ALP活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性变化。结果:Real-time PCR结果显示在OCCM-30细胞分化过程中miR-675-5p表达下调,在mimic组miR-675-5p表达上调明显,同时ALP,OSX,RUNX2表达下降,Western Blot证明OSX,RUNX2与BSP在蛋白水平上表达同样明显降低,ALP活性试剂盒检测提示ALP活性被抑制。Inhibitor组结果与mimic组恰好相反。结论:miR-675-5p抑制OCCM-30细胞的分化能力。     

m6A结合蛋白YTHDC2对人骨髓间充质干细胞分化的影响

  目的  研究N6-腺苷酸甲基化（N6-methyladenosine, m6A）结合蛋白YTH结构域蛋白2（YTH domain-containing protein 2,YTHDC2）对人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs）成骨及成脂分化的调控。  方法  通过小干扰RNA（siRNA）体外对hBMSCs进行YTHDC2基因表达的敲降,并进行成骨及成脂诱导分化,以研究YTHDC2敲降后hBMSCs分化表型的改变。利用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色和茜素红染色鉴定成骨活性和钙结节形成,尼罗红染色检测脂滴形成。利用荧光定量PCR（RT-qPCR）检测成骨和成脂相关基因的表达。通过RNA测序（RNA-seq）分析YTHDC2敲降后的转录组变化,探索YTHDC2调控hBMSCs分化的潜在机制。  结果  敲降YTHDC2促进hBMSCs成骨分化中的ALP活性及钙结节形成,并显著上调成骨相关基因表达;同时降低了hBMSCs在成脂分化中的脂滴形成能力,并显著下调成脂相关基因表达。RNA-seq的基因富集分析显示YTHDC2与核糖体功能及mRNA翻译有关信号通路显著相关。  结论  敲降YTHDC2可促进hBMSCs成骨分化,抑制成脂分化。敲降YTHDC2可能造成核糖体功能改变。     

人骨髓间充质干细胞成骨分化相关的长链非编码RNA 表达谱特征

目的：观察人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成骨分化过程中长链非编码 RNA（lncRNA）的表达谱变化。方法以 hMSCs 及成骨诱导分化7、14、21 d 后的细胞为研究对象,利用 Agilent lncRNA 芯片技术筛选出成骨诱导分化前后2倍变化幅度的差异 lncRNA,并通过实时荧光定量 PCR（RT - PCR）对芯片结果进行验证。选取筛选结果中表达差异较大的 lncRNA 利用 UCSC Genome Browser 并结合芯片筛选结果分析 lncRNA 邻近蛋白编码基因。结果 hMSCs 经成骨诱导分化7、14、21 d 后,均具有成骨细胞特性;芯片筛选结果表明,与成骨诱导分化前的hMSCs 相比,成骨诱导分化7、14、21 d 后持续表达上调超过2倍的 lncRNA 有433条,下调超过2倍的有232条;选取其中部分 lncRNA,RT - PCR 验证与芯片结果相符合;对 lncRNA 邻近蛋白编码基因分析提示某些 lncRNA（如lncRNA ENST00000585537.1和 lncRNA eHIT00001595）可能在 hMSCs 成骨分化过程中发挥重要作用。结论 hM-SCs 成骨诱导分化前后,lncRNA 表达谱发生显著变化,提示差异表达的 lncRNA 可能与 hMSCs 成骨分化密切相关,由此可进一步解释 hMSCs 成骨分化机制。     

miR-133a调控RUNX2/BMP2信号通路参与激素性股骨头坏死的机制

目的 探讨微RNA (miR)-133a调控生长相关转录因子2 (RUNX2)/骨形态蛋白2 (BMP2)信号通路参与激素性股骨头坏死（SONFH）的机制。方法 收集本院接受髋关节置换SONFH患者（SONFH组）骨髓及股骨颈骨折不愈合患者（对照组）骨髓，提取骨髓间充质干细胞（BMSCs），经表型鉴定、成骨、成脂分化鉴定后检测BMSCs miR-133a、RUNX2 mRNA和蛋白表达水平，双荧光素酶鉴定miR-133a与RUNX2的靶向关系。实验分组包括对照组、SONFH组、抑制剂对照组（inhibitor con组）、miR-133a抑制剂组（miR-133a inhibitor组）、miR-133a inhibitor+si-RUNX2组。实时定量PCR (RT-qPCR)检测细胞中miR-133a、RUNX2 mRNA水平；Western blotting检测BMSCs中RUNX2、BMP2、骨钙素（OCN）、Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）蛋白水平；CCK-8检测细胞增殖情况；茜素红染色鉴定细胞矿化能力。结果 BMSCs细胞表型鉴定结果显示，细胞表面CD71、CD44表达，CD34...     

circSEC31A调控miR-324-5p对脂肪干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响

目的 探讨环状非编码RNA SEC31A(circSEC31A,又名hsa_circ_0006618)对脂肪干细胞增殖、 凋亡和成骨分化的影响和机制.方法 在脂肪干细胞中分别转染sh-circSEC31A和LV-circSEC31A后,细胞增殖采用CCK8法检测;细胞凋亡采用流式细胞仪检测;circSEC31A和miR-324-5p靶点结合情况采用双荧光素酶测定法检测;成骨分化相关分子RUNX2和OPN的mRNA和蛋白水平分别采用Western blot和RT-qPCR检测.结果 在脂肪干细胞中转染sh-circSEC31A后能够明显抑制细胞的增殖和成骨分化相关分子RUNX2、OPN的表达水平(P<0.05),促进细胞的凋亡(P<0.05).在脂肪干细胞中转染LV-circSEC31A后能够明显促进细胞的增殖和成骨分化相关分子RUNX2、OPN的表达水平(P<0.05),抑制细胞的凋亡(P<0.05).双荧光素酶结果 显示circSEC31A能够靶向结合miR-324-5p(P<0.05).回复实验显示,在脂肪干细胞中共转染LV-circSEC31A和miR-324-5p mimics后能够反转单独转染LV-circSEC31A对脂肪干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响;共转染LV-circSEC31A和miR-324-5p inhibitors后能够进一步加强单独转染LV-circSEC31A对脂肪干细胞增殖、 凋亡和成骨分化的影响.结论 circSEC31A能够通过靶向调控miR-324-5p参与脂肪干细胞增殖、 凋亡和成骨分化,circSEC31A可能成为干预脂肪干细胞生物学功能的靶点.     

miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1促进人牙髓干细胞成骨分化

目的 探讨miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1(YAP1)基因对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响.方法 体外分离培养hDPSCs细胞,将miR-27a-3p模拟物(miR-27a-3p mimics,过表达组)、miR-27a-3p抑制剂(miR-27a-3p inhibitor,敲低组)、miR-NC(对照组)分别转染至hDP-SCs细胞中,检测miR-27a-3p表达水平的改变对YAP1表达的影响.采用TargetScan数据库检索miR-27a-3p的靶基因.应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和YAP1的靶向关系.将miR-27a-3p mimics、miR-NC转染到hDPSCs特定时间后收集细胞,应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、Western blot等检测经典的成骨标志物骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、成骨转录因子-2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、YAP1 mRNA和蛋白表达水平.应用MTT比色法验证miR-27a-3p和YAP1对细胞增殖活性的影响.结果 过表达组hDPSCs细胞中miR-27a-3p的表达水平较对照组显著上调(P＜0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平下调(P＜0.05).而敲低组miR-27a-3p的表达水平较对照组明显下降(P＜0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平增高(P＜0.05).生物信息学分析表明,miR-27a-3p作用于YAP1的3'UTR区,双荧光素酶报告基因实验验证了YAP1是miR-27a-3p的靶基因.qRT-PCR、Western blot检测显示,与对照组相比,miR-27a-3p过表达时hDPSCs中BMP-2、RUNX2、OPN mRNA和蛋白的表达水平上调(P＜0.05).MTT检测显示,miR-27a-3p过表达可明显上调hDPSCs增殖率(P＜0.05),而YAP1过表达则会降低hDPSCs的增殖率(P＜0.05).结论 miR-27a-3p可能通过靶向调控YAP1促进hDPSCs成骨分化.     

袁氏生脉成骨胶囊对激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的拮抗作用

【目的】观察中药袁氏生脉成骨胶囊(主要由丹参、川芎、鸡血藤、黄芪组成)对激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的拮抗作用,探讨袁氏生脉成骨胶囊防治激素性股骨头坏死的病理机制。【方法】采用骨髓细胞体外培养技术和血清药理学方法,分离培养大鼠骨髓基质细胞;地塞米松诱导骨髓基质细胞的成脂分化,以含中药血清作为拮抗剂。检测培养细胞的甘油三酯含量和碱性磷酸酶活性。【结果】分离细胞培养4d后可以观察到大量成骨细胞、成纤维细胞、破骨细胞;模型组加入地塞米松造模;成骨胶囊药物组地塞米松用法同模型组,同时加入含药血清。6d后,光镜下观察成骨胶囊药物组见少量脂肪细胞,模型组脂肪细胞明显增多。成骨胶囊药物组碱性磷酸酶活性高于模型组(P<0.05);甘油三酯含量低于模型组(P<0.01)。【结论】中药袁氏生脉成骨胶囊能够有效拮抗激素诱导骨髓基质细胞成脂分化。提示活血化瘀类中药防治股骨头坏死的机理不仅是改善了股骨头的微循环,而且抑制了骨髓基质细胞成脂分化,增加了成骨细胞的表达。     

RUNX2/LAPTM5在小鼠颅骨前成骨细胞矿化诱导中的表达

目的 探讨RUNX2/LAPTM5在矿化诱导过程中的表达与成骨及溶酶体的相关性。方法 矿化诱导MC3T3-E1,对照组不做处理,茜素红染色检测矿化情况,碱性磷酸酶染色检测成骨分化情况。RT-qPCR及Western blot检测分化0-5 d RUNX2及LAPTM5的基因及蛋白表达。过表达与干扰RUNX2/LAPTM5的表达后,Western blot检测RUNX2、LAPTM5的表达。过表达与干扰LAPTM5的表达后,Western blot检测成骨相关基因碱性磷酸酶、骨钙素 的表达。结果 倒置显微镜下观察,茜素红染色矿化结节计数随时间变化逐渐增多,矿化结节的大小也逐渐变大;碱性磷酸酶染色蓝紫色颗粒计数随时间逐渐增加。RT-qPCR及Western blot结果显示RUNX2及LAPTM5的表达,其在成骨矿化过程中呈上升趋势（P<0.001）。过表达与干扰RUNX2影响LAPTM5表达（P<0.05）;过表达与干扰LAPTM5对RUNX2的影响不显著。过表达与干扰LAPTM5影响了成骨的表达（P< 0.01）。结论 RUNX2/LAPTM5可能参与了成骨细胞分化调节,RUNX2可能参与LAPTM5的表达调控。RUNX2/LAPTM5可能在溶酶体参与成骨矿化的过程中起到桥梁作用。     

杜仲诱导大鼠bMSCs分化早期成骨/成脂相关基因表达变化

目的：观察杜仲醇提取物诱导骨髓间充质干细胞（bMSCs）分化早期成骨/成脂相关基因表达变化。方法：培养大鼠bMSCs,用杜仲醇提取物分别诱导bMSCs 8 h,1、3、7 d,采用荧光定量PCR（RT-qFCR）的方法检测成骨相关基因Id4、Runx2、ALP和成脂相关基因PPARγ、Adipoq、aP2的表达变化。结果：Id4诱导3 d后表达略有上调;Runx2基本无变化;ALP诱导7 d后显著升高;PPARγ和aP2诱导3 d达最高峰,然后下调;Adipoq诱导7 d显著上调。结论：杜仲对bMSCs的成骨/成脂分化具有双重调节作用,提示杜仲醇提取物中既含有促成骨分化,也含有促成脂分化的成分。     

BADGE联合锂盐通过抑制PPARγ预防家兔激素性股骨头坏死

目的:研究双酚A二缩水甘油醚(BADGE)单独或与锂盐结合治疗对家兔骨髓间充质干细胞成脂分化和激素性股骨头坏死(ONFH)的预防作用及其可能机制。方法:分离家兔骨髓间充质干细胞并诱导成脂分化,油红O染色验证BADGE联合锂盐对成脂分化的抑制作用。将兔随机分为4组,除对照组外,将甲强龙(MPS)造模的家兔分为3组:一组行BADGE联合锂盐(BL)治疗,另一组行BADGE单独治疗(B),最后一组行空白治疗(M)。2周采血检测血脂,4周后提取双侧股骨头做病理、μ-CT、荧光定量PCR检测。结果:BADGE处理抑制了兔骨髓间充质干细胞(BMSC)成脂分化,并抑制脂肪分化主要调节因子PPARγ和C/EBPα的表达,并且这些生物活性与锂盐结合得到进一步增强。在体内研究中,结果显示BADGE治疗可降低激素性ONFH发生率,减少骨髓肥胖,并且改善了骨密度及骨质量,而且这些效果在与锂盐联合得到增强。BADGE单独治疗或与锂盐结合增加了RUNX2和β-catenin的表达,并抑制了PPARγ和C/EBPα的表达,同时降低了血清总胆固醇(TC)和游离脂肪酸(FFA)水平。结论:通过抑制PPARγ,BADGE单独或与锂盐联合治疗有效预防了激素性股骨头坏死。     

长链非编码RNA NORAD过表达通过靶向调控miR-132-5p/Bcl-2改善MPP+诱导的帕金森细胞模型损伤实验研究

目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA) NORAD对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)诱导的帕金森(PD)细胞模型损伤的影响，及其潜在分子作用机制。方法:3 mmol/L的MPP⁺处理MN9D细胞建立PD细胞损伤模型，MN9D细胞转染lncRNA NORAD过表达载体、miR-132-5p mimics、miR-132-5p inhibitor、Bcl-2 siRNA及相应对照，qRT-PCR检测细胞中lncRNA NORAD、miR-132-5p和Bcl-2 mRNA的表达，Western blot检测细胞中Bcl-2蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡，试剂盒法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的水平，双荧光素酶实验验证lncRNA NORAD、miR-132-5p和Bcl-2之间的靶向关系。结果:MPP⁺诱导MN9D细胞中lncRNA NORAD、Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低，诱导细胞中miR-132-5p表达升高；过表达...