沙利度胺促进肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

目的探讨沙利度胺单药及联合应用5-氟尿嘧啶(5-FU)+奥沙利铂对肝癌细胞株SMMC7721生长的影响。方法采用MTT法检测确定各个单药的IC50,并以药物的IC50作为后续实验的给药浓度。实验分为空白对照组、沙利度胺组、5-FU+奥沙利铂组及沙利度胺联合5-FU+奥沙利铂组。MTT法检测各组药物作用24 h及48 h后对肝癌细胞的抑制率。各组药物作用48 h后,采用流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法测定SMMC7721细胞的Bcl-2、Bax mRNA的表达,Western blot法分析Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 MTT结果显示,药物作用24、48 h后,沙利度胺能够明显抑制肝癌细胞SMMC7721的增殖,促进其凋亡(抑制率分别为14.86%和24.24%),而沙利度胺联合5-FU+奥沙利铂的抑制作用更加显著(抑制率分别为29.80%和40.53%),呈现时间依赖性。药物作用48h后,三个用药组的肝癌细胞均被阻滞于G0/GI期,且沙利度胺联合5-FU+奥沙利铂组的阻滞作用更为明显(P0.05)。沙利度胺下调Bcl-2基因表达而上调Bax基因表达,且沙利度胺联合5-FU+奥沙利铂对Bcl-2、Bax基因的调控作用更为显著,差异均有统计学意义(P0.01)。结论沙利度胺能够明显抑制SMMC7721细胞的增殖,且与5-FU及奥沙利铂具有协同作用,其机制可能与影响Bcl-2及Bax的表达有关。     

靶向Livin反义寡核苷酸对结肠癌LoVo细胞增殖及对卡铂敏感性的影响

目的探讨靶向Livin反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌LoVo细胞增殖及Livin基因表达的影响,并观察其对卡铂敏感性的变化。方法 (1)用靶向Livin ASODN、随机寡核苷酸(RODN)分别转染LoVo细胞,反转录-聚合酶链式扩增反应检测Livin mRNA表达量变化;(2)流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;(3)采用CCK-8法检测卡铂联合靶向Livin ASODN作用对肿瘤细胞的增殖抑制率。结果 Livin ASODN转染LoVo细胞明显抑制Livin mRNA表达,与空白对照组、RODN组比较差异均有统计学意义(P<0.01);流式细胞术碘化丙锭单染色显示,空白对照组、RODN组均未出现细胞亚二倍体峰;Livin ASODN组存在LoVo早期凋亡细胞,200、400 nmol.L-1的Livin ASODN组细胞亚二倍体百分率分别为(10.59±1.05)%、(11.63±1.27)%;卡铂单药半数抑制浓度(IC50)为3.33 mg.L-1,卡铂与Livin ASODN(100 nmol.L-1)联合,IC50为0.22 mg.L-1,表现为协同作用(Q≥1.15),增敏倍数15.14。结论靶向Livin ASODN下调Livin mRNA表达,诱导LoVo细胞凋亡并提高其对卡铂的敏感性。     

5-氟尿嘧啶和奥沙利铂诱导结肠癌SW620细胞死亡的比较

【目的】研究5-氟尿嘧啶和奥沙利铂分别诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡的作用效果。【方法】用80μg／ml 5-氟尿嘧啶和25μg/ml奥沙利铂分别作用SW620细胞8h,并应用AnnexinV—FITX／PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞的比例。【结果】80μg／ml 5-氟尿嘧啶处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约11．9％（P〈0．01）;25μg／ml奥沙利铂处理8小时组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约21．4％（P〈0．01）。【结论】在特定条件下,5-氟尿嘧啶和奥沙利铂均能明显诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡;奥沙利铂对结肠癌细胞的诱导凋亡作用要强于5-氟尿嘧啶。     

TRAIL联合奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合奥沙利铂(oxaliplatin)对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 应用MTT法分别检测TRAIL组、奥沙利铂组及联合组的细胞抑制率,Annexin Ⅴ-FITC/PI染色,流式细胞仪检测SW480细胞的凋亡率.结果 SW480细胞对TRAIL不敏感,对奥沙利铂相对敏感,TRAIL与亚毒性浓度的奥沙利铂联用对细胞的杀伤作用显著增强;亚毒性浓度的TRAIL、奥沙利铂及联合组作用SW480细胞24h的抑制率分别为8.62%,60.51%,81.28%;凋亡率分别为2.43%,11.76%,18.37%,流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现.结论 TRAIL能显著提高奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用,此协同作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现.     

PLOD2对卵巢癌奥沙利铂化疗耐药的影响及机制研究

目的：探讨赖氨酸羟基化酶2(procollagenlysine 2?xoglutarate 5?dioxygenase 2,PLOD2)对卵巢癌奥沙利铂化疗耐药的影响及机制。方法：应用慢病毒转染将PLOD2干扰和过表达质粒转染至卵巢癌A2780和OV1063细胞株,嘌呤霉素筛选出稳定转染质粒的细胞株;qRT?PCR和Western blot检测PLOD2表达的变化;CCK?8实验、克隆形成实验、流式细胞术检测干扰或过表达PLOD2对卵巢癌细胞奥沙利铂作用下增殖和细胞凋亡的影响;建立异种移植瘤裸鼠模型,观察 PLOD2 表达下调后奥沙利铂对肿瘤生长抑制作用的变化;通过 qRT?PCR 和 Western blot 检测 PLOD2 干扰和过表达对乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)、多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein 1,MRP1)mRNA水平和蛋白水平的影响。结果：在稳定转染PLOD2 干扰或过表达质粒后,PLOD2 mRNA和蛋白表达水平分别较转染空载体质粒组明显下调或升高。在相同药物浓度条件下,奥沙利铂对卵巢癌PLOD2干扰组细胞的增殖抑制率显著高于对照组,半数抑制浓度IC50下降,克隆形成能力下降, 细胞凋亡率增加;同样,在相同药物浓度条件下,奥沙利铂对卵巢癌PLOD2过表达组细胞的增殖抑制率显著低于对照组,IC50 升高,克隆形成能力增强,细胞凋亡率下降。PLOD2 干扰组奥沙利铂作用下的瘤体体积和瘤重均低于对照组。稳定转染 PLOD2干扰质粒或过表达质粒后,BCRP、MRP1 mRNA和蛋白表达水平明显下调或上调。结论：PLOD2可增强卵巢癌对奥沙利铂的化疗耐药性,这一作用可能与药转蛋白BCRP和MRP1表达上调有关。     

siRNA沉默Survivin抑制结肠癌细胞株HCT116增殖并增强其对奥沙利铂的敏感性

目的研究Survivin特异性siRNA对人结肠癌细胞株HCT116增殖和对化疗药物奥沙利铂敏感性的影响。方法体外将Survivin特异性siRNA表达载体pgsiRNA-Survivin转染HCT116细胞,通过Western blot和Real time-PCR方法检测细胞Survivin的表达,采用流式细胞术分析细胞周期分布,MTT法检测干扰Survivin后HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性。结果 pgsiRNA-Survivin转染HCT116细胞48 h后,细胞的Survivin基因表达明显降低,导致了HCT116细胞G2/M期阻滞;pgsiRNA-Survivin转染组细胞对奥沙利铂的敏感性显著性增强。结论 Survivin特异性siRNA能显著沉默HCT116细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性。     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR通路逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药

目的 探讨紫草素对人胃癌细胞奥沙利铂耐药的影响及机制。方法 以0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L 紫草素干预对数生长期人胃癌奥沙利铂耐药细胞(MGC803/L-OHP)24h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,参照半抑制浓度(IC₅₀)设定后续实验紫草素浓度。取对数生长期MGC803/L-OHP细胞,设空白对照组、奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂+IGF-1(PI₃K激活剂)组。药物干预24h后,检测细胞增殖抑制率和凋亡率,GFP-LC3质粒转染后观察自噬小体,Western blot法检测p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3表达。结果 紫草素对MGC803/L-OHP细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,IC₅₀值为9.58μmol/L,后续实验紫草素浓度设定为10μmol/L。与空白对照组比较,奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多。与奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达下调,cleaved caspase-3、Beclin1表达上调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ升高(P<0.05)。与紫草素+奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂+IGF-1组细胞增殖抑制率、凋亡率降低(P<0.05),自噬小体减少;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达上调,cleaved caspase-3、Beclin1表达下调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ降低(P<0.05)。结论 紫草素可逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药,其机制可能与抑制PI₃K/Akt/mTOR通路而促进胃癌细胞凋亡和自噬有关。     

Flavopiridol联合顺铂对人U2-OS细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Flavopiridol（FP）联合顺铂（DDP）对人骨肉瘤细胞株（U2-OS）的增殖及凋亡的作用。方法将不同浓度的FP(0、50、100、200、400、1000nmol·L^-1)分别与人U2-OS细胞共同培养24、48h后,采用MTT法检测U2-OS细胞增殖,以确定FP作用48h的半数抑制浓度（IC50）;采用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变;采用流式细胞术测定U2-OS细胞凋亡率。然后将培养后的U2-OS细胞分为4组:空白对照组、单用FP组、单用DDP组、联合用药组（FP+DDP组）,每组设5个复孔,分别加入0.1%DMSO、FP（IC50）、DDP、FP（IC50）+DDP处理,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 FP对人U2-OS细胞的增殖抑制作用呈现浓度依赖性,作用48h的IC50值为340nmol·L^-1,Hoechst33258染色后细胞出现明显的核固缩、核浓聚等凋亡改变,随着FP浓度的增加,流式细胞术检测细胞凋亡率升高。FP+DDP联合作用于人U2-OS细胞,随着时间的增加抑制率逐渐增大（P<0.05）;与FP和DDP单独用药组比较,抑制率、凋亡率及周期阻滞差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 FP可明显抑制人U2-OS细胞增殖并诱导凋亡,联合顺铂对人U2-OS细胞的增殖抑制及凋亡促进具有协同作用。     

结直肠癌中microRNA-451部分逆转MDR1/P-gp途径介导的多药耐药

目的 研究microRNA-451在结直肠癌组织与细胞中的表达及其在MDR1/P-gp途径介导的多药耐药中的作用.方法 收集68例新鲜结直肠癌及癌旁组织,RT-qPCR检测其miR-451表达情况,Western blot检测P-gp蛋白是否表达,并分析其关系;RT-qPCR检测结直肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L、耐阿霉素细胞LoVo/adr及对应亲本细胞中miR-451的表达;利用脂质体将miR-451 mimics(模拟物)、NC RNAs转染2组耐药细胞,RT-qPCR和Western blot分别检测转染后其MDR1 mRNA和P-gp的表达;MTT检测转染细胞在不同浓度奥沙利铂、阿霉素下的增殖并计算其半数抑制浓度(IC50);流式细胞术进一步比较NC转染组和mimics转染组耐药细胞在同一浓度奥沙利铂、阿霉素下凋亡率.结果 相对于癌旁组织,miR-451在结直肠癌组织中低表达,其表达下调与P-gp阳性表达存在相关性(r=-0.404,P=0.002);与亲本细胞相比,miR-451在2组耐药细胞中表达明显降低(P＜0.01);mimics转染组细胞MDR1 mRNA、P-gp相对表达量明显下降,IC50及凋亡率与NC组均有显著差异(P＜0.05).结论 miR-451在结直肠癌中通过MDR1/P-gp途径参与多药耐药,耐药细胞转染miR-451mimics后,可部分逆转耐药.     

奥沙利铂长循环纳米脂质体对结肠癌细胞株体外作用研究

目的 检测奥沙利铂长循环纳米脂质体药物样品对SW480结肠癌细胞株的毒性影响,并验证其长效性和缓控释作用.方法 乙醇注入法制备出奥沙利铂长循环纳米脂质体药物样品,MTT实验检测其对SW480细胞株作用时效性与抑制率,并与标准品组对照分析.结果 阳性对照组的IC50=70.96μg/mL,36h内抑制率随着奥沙利铂浓度的增加迅速上升而达到顶峰.药物样品组的IC50=85.39μg/mL,72h内抑制率随着药物样品浓度的增加而稳步上升.结论 奥沙利铂长循环纳米脂质体药物样品IC50=85.39μg/mL,抑制率随着浓度的增加而上升且增势稳定,100μg/mL以上组别的抑制率在72h后均达到90％以上,具有长效性,缓释稳定性,其生物利用度更优.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

头孢他啶用于胸外科感染的疗效分析

目的 观察和评价头孢他啶（泰得欣）应用于普通胸外手术的临床疗效和安全性。方法 采用对比试验，观察2005年8-10月96例普胸手术预防和治疗的疗效和不良反应。结果 泰得欣在预防和治疗术后感染中总有效率95．9％，不良反应发生率为5．2％。结论 泰得欣临床效果满意，使用安全，值得在普胸手术中选用。     

骨淋巴管瘤病1例报告

患者女,19岁,体检发现全身多处固执破坏4个月。影像学检查：平片及CT平扫检查：双侧髂骨、耻骨、股骨颈及股骨上段均可见多发大小不等的低密度影,略呈膨胀性,边界清楚,部分可见硬化边。双侧肱骨上段、肩胛骨近关节盂处骨质及股骨下段、右胫骨近端、左腓骨中上段可见多个囊性骨及右侧锁骨亦可见多发局限性低密度减低区、略呈膨胀性（图1、5）。MRI平扫：脊柱可见多个囊状长T1长T2信号,部分略呈膨胀性。（图2～4）     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

胃镜诊断胃癌107例分析

1986年1月至1991年6月经内窥镜检查发现胃癌107例,其中100例经内窥镜活检病理证实,阳性率93.5％,7例阴性者均经手术证实。本文分析了胃癌的内镜特征(中、晚期胃癌、一点癌)和病理特点,并就临床意义进行分析、讨论。认为在胃角、胃窦部的溃疡、糜烂、结节状及粘膜粗糙不平应仔细观察并进行活检。