转化生长因子-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的：针对转化生长因子-β（TGF-β）Ⅱ型受体基因的不同部位，构建不同TG-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA（shRNA）表达质粒载体，在转录后水平抑制TGF-βⅡ型受体的表达，对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法：用DNA重组技术将针对人TGF-βⅡ型受体基因不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒pSilencer^TM 3．1-H1 neo vector中，构建TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3．1-H1-TGF-β R ⅡshRNA1、2、3、4。脂质体介导转染成人原代成纤维细胞，经G418筛选抑制TGF-βⅡ型受体表达的稳定细胞克隆。结果：3个TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3．1-H1-TGF-βRⅡ shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westem blotting均证实3种shRNA重组质粒中pSilencer^TM3．1-H1—TGF-βRⅡshRNA2可明显降低细胞内TGF-βⅡ型受体mRNA峰度及TGF-βⅡ型受体蛋白表达。结论：成功构建了TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilenceir^M3.1—H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3，并筛选出特异而高效的阻断TGF-βⅡ型受体表达的克隆。此实验结果为进一步研究TGF-βⅡ型受体蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。     

原发性阑尾肿瘤18例的诊治

原发性阑尾肿瘤少见,其诊断和外科治疗具有不确定性.中山大学附属第三医院1999年1月至2007年11月收治18例原发性阑尾肿瘤患者,现报道如下.     

胃间质瘤蒂扭转一例

患者女,81岁.因左上腹包块11个月,腹痛2 d于2007年10月25日入院.2006年12月B超检查发现左上腹囊实性占位,因无不适,拒绝治疗.2007年10月23日无明显诱因出现腹痛、腹胀,进行性加重,无发热、恶心、呕吐、腹泻、黑便等表现.查体:腹部膨隆,腹肌紧张,全腹压痛、反跳痛,左上腹触及质硬、活动欠佳、边界不清、大小约10.0 cm×10.0 cm包块,移动性浊音阴性,肠鸣音正常.     

妊娠合并急性阑尾炎的早期诊断和外科治疗（附26例报告）

目的总结妊娠合并急性阑尾炎的临床特点及手术效果。方法妊娠合并急性阑尾炎26例,平均发病时间28.2（4-72）h。术前明确诊断23例,术前疑诊3例。均行阑尾切除术,入院至手术平均时间4.7（1.8-44）h。结果术后2例切口感染,1例应患者要求行药物流产,余无流产、早产、胎儿宫内窘迫及死胎发生。所有病例均获随访,平均10.5（9-12）个月,1例术后4月发生轻度粘连性肠梗阻,保守治愈。结论妊娠合并急性阑尾炎临床特点不典型,但根据病史、体检,结合B超检查作出早期诊断亦不困难,一旦确诊应尽早手术,以保证母婴安全。     

两种不同切口缝合法在化脓性或坏疽性阑尾切除术中的随机对照研究

目的比较不同切口缝合法在化脓性或坏疽性阑尾切除术中的临床应用效果。方法2004年8月~2006年12月对613例采用右下腹切口行化脓或坏疽性阑尾切除术病人,随机分为采用腹膜外单层缝合(单层缝合组259例)或常规切口分层缝合(分层缝合组354例),对其疗效进行对比分析。结果单层缝合组在手术时间、术后7 d内出院率、切口感染率等方面明显低于分层缝合组(P<0.01);两组术后24 h下床活动者及镇痛药物应用比较无显著性差异(P>0.05);术后210例平均随访17个月,两组在术后粘连性肠梗阻、切口疝等方面比较差异无显著性(P>0.05)。结论对化脓性或坏疽性阑尾炎开腹阑尾切除术,右下腹横切口腹膜外单层缝合法具有操作简单、安全、并发症少的优点,值得推广。     

全反式维甲酸对人结肠癌细胞亚株SW480/M5增殖和凋亡的影响

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌细胞亚株SW480/M5增殖和凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测1、2、4、8μmol/L ATRA作用24、48、72 h对SW480/M5细胞的抑制率.流式细胞仪检测8 μmol/L ATRA作用24、48、72 h及2、4μmol/L ATRA作用48 h的肿瘤细胞周期和凋亡率.结果 ATRA抑制SW480/M5细胞增殖作用呈一定时效和量效依赖性;8μmol/LATRA作用72 h明显抑制肿瘤细胞增殖,抑制率接近30％.2、4μmol/L ATRA作用SW480/M5细胞48 h或8μmol/L作用24 h,肿瘤细胞G1期比例开始降低,S期比例增加(P＜0.05).8umol/L ATRA作用48 h后,S期比例进一步增高,G2/M期细胞比例不增加;作用72 h后,G1期细胞比例进一步下降,伴G2/M期细胞比例增加(P＜0.05).8μmol/L ATRA作用24 h无明显诱导SW480/M5细胞凋亡作用,作用48 h或72 h可诱导肿瘤细胞凋亡,但凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 8μmoL/LATRA作用48 h或72 h通过阻滞SW480/M5细胞在S期或(和G2/M)期,并诱导肿瘤细胞凋亡,可明显抑制肿瘤细胞增殖.     

奥沙利铂对人结肠癌细胞LoVo和SW480/M5作用的实验研究

目的探讨体外实验奥沙利铂对人结肠癌LoVo和SW480/M5细胞的抑制作用及其可能机制。方法 MTT法检测不同剂量奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测1/2GI₅₀和GI₅₀浓度奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞周期和早期凋亡的影响。原子光谱吸收仪检测GI₅₀浓度奥沙利铂作用4、8、24h后LoVo和SW480/M5细胞DNA含铂量。结果奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞增殖的抑制作用呈量效依赖;其GI₅₀浓度:LoVo细胞为6.5mg/L,SW480/M5细胞为58.0mg/L。自然对数增殖周期,LoVo细胞中G₁期细胞比例高于、G₂期细胞比例低于SW480/M5细胞（P<0.05）。奥沙利铂浓度GI₅₀时,降低肿瘤细胞G₁期比例,升高LoVo细胞S期比例较SW480/M5细胞明显,升高SW480/M5细胞而降低LoVo细胞G₂/M期比例。1/2GI₅₀、GI₅₀奥沙利铂均可诱导两种肿瘤细胞发生早期凋亡,但1/2GI₅₀L-OHP促凋亡作用两种肿瘤细胞间无统计学差异,GI₅₀L-OHP对LoVo细胞的促凋亡作用高于SW480/M5细胞。GI₅₀L-OHP奥沙利铂使两种肿瘤细胞DNA含铂量显著升高,并呈时效依赖。LoVo细胞DNA交联铂原子能力高于SW480/M5细胞。结论奥沙利铂主要通过阻滞细胞于S期或（和）G₂/M期并诱导细胞凋亡而抑制两种肿瘤细胞增殖。LoVo细胞对奥沙利铂敏感性明显高于SW480/M5细胞。     

p27kip1蛋白表达与胃癌的关系

[目的]探讨p27kip1蛋白表达与胃癌的关系。[方法]用免疫组化SP法检测69例胃癌中p27kip1蛋白表达。[结果]p27kip1蛋白表达率在胃癌中为46.38%(32/69),而正常胃组织中为96.43%(27/28),差异有显著性(P<0.01)。p27kip1蛋白阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、部位无关(P>0.05),与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴转移及临床分期有关(P<0.05)。[结论]p27kip1蛋白缺失与胃癌的发生发展有关,其蛋白检测可为胃癌的临床诊断及预后判断提供参考。     

小儿胆汁性腹膜炎27例诊断与治疗

目的　探讨小儿胆汁性腹膜炎的病因 ,提高小儿胆汁性腹膜炎的诊治水平。方法　对 2 7例小儿胆汁性腹膜炎的病因与诊治进行回顾分析。结果　 2 7例中 17例手术中发现穿孔灶 ,行胆总管引流和腹腔引流 ,合并胆道扩张症作二期根治术 ;未明确穿孔灶 10例 ,作腹腔引流 ,合并胆道扩张症作一期根治术。无手术死亡及严重并发症 ,疗效满意。其中婴幼儿 6例 (2 2 .2 % ) ,儿童 2 1例 (77.8% )。病因多与胆总管囊肿 (6 2 .9% )、胆道结石与蛔虫 (7.4% )、经皮肝穿刺胆道造影 (PTC)损伤 (3 .7% )等有关 ,部分原因不明 (2 2 .2 % )。结论　小儿胆汁性腹膜炎容易误诊 ,掌握其临床特点、提高诊断意识及选择合适的手术方法 ,是提高早期诊断率和减少并发症的关键。     

胚胎猪皮移植效果的实验研究

目的:探讨胚胎猪皮作为烧伤创面移植覆盖物的可行性,为临床应用提供一种新的创面覆盖物。方法:通过对实验动物(家兔、幼猪)进行胚胎猪皮和幼猪皮的异体、异种皮移植,观测移植效果,利用免疫组织化学方法及Western blot检测观察移植物内CD8+和CD4+T淋巴细胞的浸润情况。结果:家兔异种皮移植效果最差;幼猪异体皮移植效果次之;胚胎猪皮无论是在异体还是异种移植效果上均强于同组幼猪皮移植;CD8+和CD4+细胞计数值及其蛋白表达明显低于同组幼猪皮移植。结论:胚胎猪皮抗原性小,可作为一种新的创面覆盖物应用于临床研究。