婴儿双歧杆菌对小鼠黑色素瘤模型肿瘤组织的靶向性

目的：探讨婴儿双歧杆菌对黑色素瘤组织是否具有靶向特性。方法：采用荷瘤鼠尾静脉推注。H-TdR标记婴儿双歧杆菌示踪分析、组织培养和组织切片革兰氏染色观察婴儿双歧杆菌的瘤组织靶向性。结果：瘤组织内放射性强度持续增强，正常组织放射性强度则持续减弱。组织培养显示婴儿双歧杆菌在瘤组织内富集增殖。组织切片显示瘤组织内大量革兰氏染色阳性条杆状紫蓝色深染区，而正常组织中却无。结论：婴儿双歧杆菌对黑色素瘤具有较好的靶向性。     

婴儿双歧杆菌介导的CD/5-FC自杀基因系统对黑色素瘤的抑瘤实验

目的 观察婴儿双歧杆菌介导的胞嘧啶脱氨酶／5-氟胞嘧啶(CD／5-FC)自杀基因系统对黑色素瘤的体内、外抑瘤效果。方法 含重组CD基因的婴儿双歧杆菌中加入5-FC．厌氧条件下培养24h后取其上清液．加到黑色素瘤B16-F10细胞上．观察其对细胞形态及细胞生长抑制率的影响;建立小鼠黑色素瘤动物模型,尾静脉注入含重组CD基因的婴儿双歧杆菌,腹腔注入5-FC,观察携带重组CD基因的婴儿双歧杆菌联合5-FC对黑色素瘤肿瘤体积及肿瘤体积倍增时间的影响。结果 ①体外实验：实验组肿瘤细胞形态显示出显著的损伤性改变,细胞生长受到明显抑制．而对照组肿瘤细胞影响不大。②小鼠黑色素瘤动物模型实验结果显示,经重组婴儿双歧杆菌联合5-FC治疗21d．实验组肿瘤倍增时间明显长于对照组．其肿瘤体积明显小于对照组．且随着观察时间的延长,这种差异越显著。结论 婴儿双歧杆菌介导的CD／5-FC自杀基因系统对黑色素瘤具有明显的抑瘤效果。     

双歧杆菌对兔VX2瘤组织的靶向性及其对肝癌细胞抑制作用的研究

目的 探讨青春型双歧杆茵对兔VX2瘤肿瘤组织的靶向性及其对人肝癌细胞的体外抑制作用.方法 ①建立荷VX2瘤兔模型,实验组经耳缘静脉注射青春型双歧杆菌;对照组经耳缘静脉注射生理盐水.处死动物,取出脏器和肿瘤组织粉碎后进行厌氧培养和革兰氏染色,观察双歧杆菌对肿瘤的靶向性.②采用超声波细胞粉碎法提取双歧杆茵细胞壁(BCW),应用MTT法和镜下观察来证明BCW体外对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用.结果 ①实验组瘤组织中可见革兰氏阳性菌落,对照组及实验组各正常组织培养未查见.②不同浓度BCW均能抑制HepG-2细胞生长,且BCW浓度越大,抑制作用越强(P<0.05),且镜下观察到HepG-2细胞的生长状态逐渐减弱.结论 青春型双歧杆菌能够在兔VX2瘤组织中靶向定植,且其细胞壁能够在体外抑制肝癌细胞的生长.     

厌氧菌介导的CD/5-FC系统对鼠黑色素瘤的杀伤效应

目的 构建婴儿双歧杆菌介导的CD/5-FC肿瘤基因治疗系统,探讨该系统对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10的体外杀伤效应. 方法 构建重组质粒pGEX-CD,以电穿孔法转化婴儿双歧杆菌,筛选阳性克隆菌,然后加入5-FC厌氧培养,24h后取其上清,作用于小鼠黑色素瘤B16-F10细胞,采用MTT法检测细胞存活率,并观察细胞形态学改变. 结果 成功构建出婴儿双歧杆菌介导的CD/5-FC肿瘤基因治疗系统.与对照组和pGEX组相比,CD组的肿瘤细胞发生了明显的形态学改变,细胞存活率明显降低. 结论 婴儿双歧杆菌介导的CD/5-FC系统对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞具有明显的体外杀伤效应.     

厌氧菌介导的肿瘤靶向自杀基因系统对鼠黑色素瘤B16-F10细胞的杀伤作用研究

目的 构建婴儿双歧杆菌介导的胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)肿瘤基因治疗系统,探讨该系统对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10的体外杀伤效应.方法 构建重组质粒pGEX-CD,以电穿孔法转化婴儿双歧杆菌,筛选阳性克隆菌,然后加入5-FC厌氧培养,24 h后取其上清液,作用于小鼠黑色素瘤B16-F10细胞,采用MTT法检测细胞存活率,并观察细胞形态学改变.结果 成功构建出婴儿双歧杆菌介导的CD/5-FC肿瘤基因治疗系统.与空白对照组和pGEX组相比,CD组肿瘤细胞发生了明显的形态学改变,细胞存活率明显降低.结论 婴儿双歧杆菌介导的CD/5-FC系统对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞具有明显的体外杀伤效应.     

双歧杆菌联合顺铂对黑色素瘤小鼠的治疗作用及机制

目的:探讨双歧杆菌、顺铂及二者联合对黑色素瘤小鼠的抑瘤作用及其机制.方法:建立黑色素瘤荷瘤小鼠模型,分别以皮下及腹腔注射双歧杆菌和顺铂,处死小鼠后测瘤质量计算抑瘤率,病理切片后HE染色观察瘤组织及瘤细胞变化,流式细胞仪测瘤细胞周期,MTT法测小鼠淋巴细胞活性,CD3,CD4,CD8双荧光标记法测小鼠T细胞亚群变化.结果:注射1×1010 cfu/L的双歧杆菌其抑瘤率可达54.0%,与顺铂组相似,与顺铂联合作用后其抑瘤作用更强,达74.4%;病理切片显示双歧杆菌抑制瘤细胞生长,且加强了顺铂杀伤瘤细胞的作用;流式细胞仪检测结果显示:双歧杆菌作用后瘤细胞生长阻滞于G1期,顺铂作用后瘤细胞生长阻滞于S期;双歧杆菌作用后小鼠细胞免疫功能增强,主要表现为CD4 比例增加,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:双歧杆菌联合顺铂对黑色素瘤小鼠具有较强的抑瘤作用,其机制与抑制瘤细胞生长及增强小鼠细胞免疫功能有关.     

携带重组胞嘧啶脱氨酶基因的婴儿双歧杆菌对鼠黑色素瘤B16-F10细胞的杀伤效应研究

目的将携带胞嘧啶脱氨酶(CD)基因的重组婴儿双歧杆菌应用于肿瘤的基因导向酶前药物疗法，利用厌氧菌趋低氧代谢的特性构建一种全新的肿瘤靶向基因治疗系统。方法PCR扩增CD目的基因、酶切后连接目的基因与质粒片段，电穿孔法将重组体转染婴儿双歧杆菌，筛选阳性克隆抽提质粒，酶切后琼脂糖凝胶电泳鉴定，并体外检测CD基因的表达。结果携带自杀基因CD的重组载体成功地被转染进婴儿双歧杆菌，并能表达CD酶活性，当加入CD酶底物5-FC后，显示出对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞明显的杀伤效应。结论成功构建了携带自杀基因CD的重组婴儿双歧杆菌，重组菌在体外显示出对B16-F10肿瘤细胞有明显的抑制效应。     

双歧杆菌对黑色素瘤免疫治疗的影响

目的:本论文选择两种相同环境下生长的小鼠,对其进行黑色素瘤造模,研究小鼠肠道微生物对肿瘤治疗的影响。方法:选取A小白鼠和B小白鼠,每组实验有6只小鼠。注射B16.SIY黑色素瘤株,分别给小鼠注射靶向抗体PD-L1和食用双歧杆菌,以及靶向抗体PD-L1和双歧杆菌共同使用。30天后,处死裸鼠,分离肿瘤组织,使用游标卡尺测量肿瘤体积,研究其黑色素瘤生长情况。结果:使用双歧杆菌的造模小鼠对黑色素肿瘤抑制作用明显提高,特别是和PD-1/PD-L1抑制剂药物同时使用时,抗肿瘤治疗效果更加显著。     

长双歧杆菌的应用前景

实体瘤内存在低氧代谢区,故可利用趋低氧的厌氧菌作为肿瘤基因治疗的载体。厌氧菌作为基因治疗的载体,具有肿瘤靶向性强、安全性高等特点,是一种新型的基因治疗载体。长双歧杆菌作为厌氧菌的一种,作为基因治疗载体能够选择性在肿瘤组织内定植和生长,具有较好的靶向性、安全性,并可有效的抑制实体瘤细胞的生长。     

双歧杆菌在儿科临床及保健中的应用

婴儿的营养健康状况与双歧杆菌在肠道中的数量密切相关。双歧杆菌与宿主之间有着相互依存、相互制约的微生态关系,双歧杆菌对人体的生长发育、营养代谢、免疫机能、衰老及粘膜屏障(定植抗力)方面都有着重要影响。下面就双歧杆菌的微生态学及其在儿科临床和儿童保健中的应用做一介绍。 　　一、双歧杆菌在人体肠道的定植过程及婴幼儿肠道菌群构成特点 　　1.双歧杆菌在人体肠道的定植过程 　　定植是正常肠道菌群在宿主的特异性定位、定居与繁殖的微生态学现象。定植是正常菌群对宿主产生生态效应和发挥生理作用的前提。新生儿的胎便是无菌的,生后2小时即可检出肠道杆菌、细球菌、链球菌等,其数量不断增加。24小时大肠杆菌占优势,数量达到108～1011/g(湿便)(Mata,1997)。生后第2天检出的双歧杆菌数量不多,但增长十分迅速,第4～5天开始占优势。此时最先出现的肠道杆菌等数量开始逐渐下降,到第6天左右减少到106～107/g(Yoshiora,1983),于第6～8天则建立了以双歧杆菌占绝对优势的肠道菌群。在母乳喂养儿的粪便中,双歧杆菌占细菌总数的98%,可达109～1011/g。可见婴幼儿肠道菌群的出现与定植也有一定的规律,即最先出现并强烈繁殖的是兼性厌氧菌,它可迅速达到高峰。双歧杆菌检出于兼性厌氧菌之后。随着双歧杆菌数量迅速上升,兼性厌氧菌逐渐减少,直至双歧杆菌占绝对优势。 　　造成双歧杆菌成为优势菌群的因素是多方面的,如兼性厌氧菌群和需氧菌的“生物夺氧”,造成的厌氧环境刺激了双歧杆菌等厌氧菌群的大量繁殖;母乳中的“双歧因子”是人奶酪蛋白的低聚糖部分,是含有N-乙酰-D-葡萄糖胺的糖类,为双歧杆菌合成细胞壁所必需。此外,母乳中的分泌型IgA、乳铁蛋白以及厌氧菌群发酵糖类而产生的大量有机酸,都可抑制肠杆菌的过量繁殖,而保证双歧杆菌在数量上的优势。近年有关双歧杆菌转换为优势菌群的时间后延的报道,认为这是由于助产技术的发展、更加严格的无菌操作,使新生儿从母亲和产房那里获得双歧杆菌的机会减少。     

MMTV-Wnt-1转基因小鼠作为高发乳腺癌动物模型的观察

目的　观察MMTV Wnt 1转基因小鼠的乳腺癌发病情况及病理学变化规律。方法　观察MMTV Wnt 1转基因小鼠肿瘤发生情况 ,并采用原位移植将瘤组织置于裸鼠皮下 ,通过组织病理学切片来观察MMTV Wnt 1阳性转基因小鼠和移植鼠的病理学变化。结果　MMTV Wnt 1转基因小鼠最早从 7周龄开始出现乳腺瘤 ,发瘤鼠剖检可见脾、肝有不同程度的肿大 ,其他器官无明显病变 ;病理组织学检查发现发瘤鼠各脏器有不同程度的病变 ,但未出现肿瘤转移。将瘤组织移植裸鼠后 ,肿瘤可在裸鼠皮下生长 ,移植肿瘤病理学形态与原发瘤一致 ,未出现转移。结论　实验结果验证MMTV Wnt 1转基因小鼠可稳定自发乳腺肿瘤 ,可作为研究乳腺癌的良好的动物模型     

细胞毒性T淋巴细胞和细胞因子诱导杀伤细胞在荷人胃癌裸鼠体内的迁徙与分布

目的 研究细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞在荷人胃癌裸鼠体内的迁徙与分布特点.方法 采用皮下注射人低分化胃腺癌细胞株BGC-823的方法建立荷人胃癌裸鼠模型.将荷瘤裸鼠分为2组,每组9只,分别经尾静脉输入~(99)Tc~m标记的CTL和CIK细胞.输人后1、6和24 h,每组各取3只裸鼠,应用单光子发射型计算机体层摄影术(SPECT)观察2种细胞在裸鼠体内的分布状况,之后处死动物取肿瘤和肝、脾、肾、肺、肠等器官,以井型探测器测量每克组织百分注入活度(%ID/g),计算肿瘤组织%ID/g与正常组织%ID/g的比值(T/NT).结果 SPECT示踪显示2种细胞输入裸鼠体内后均迅速分布至肿瘤和肝、脾、肾、肺、肠等器官.CTL的%ID/g峰值由高到低依次为肿瘤(7.79±0.46)、肝(4.12±0.51)、肠(2.71±0.16)、肾(1.44±0.25)、脾(1.24±0.12)和肺(1.12±0.11),各组织器官T/NT值均>1;CIK 细胞的%ID峰值由高到低依次为肝(6.64±0.67)、肿瘤(5.47±0.87)、肠(3.55±0.23)、肾(2.34±0.41)、脾(1.45±0.17)和肺(1.27±0.21),除肝以外,其他各组织器官T/NT值均>1.细胞输入后1、6和24 h在肿瘤组织的%ID/g值,CTL分别为2.35±0.28、4.58±0.52和7.79±0.46,CIK 细胞分别为2.23±0.46、3.25±0.70和5.47±0.87,24 h时间点CTL组明显高于CIK组(P<0.05).结论 CTL和CIK细胞在荷瘤裸鼠体内的分布均具有明确的肿瘤靶向性.     

~（99）Tc~m-REG的制备及其在正常小鼠体内分布和药代动力学研究

目的研究99Tc^m-精氨酸-符氨酸-片氨酸（99Tc^m-REG）与肺癌细胞结合及其在正常小鼠体内分布和约代动力学。方法采用99Tc^m直接法标记REG,行99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的结合实验。正常小鼠尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间处死,取主要脏器或组织,测定其每克组织百分注射剂照牢（％ID／g）。另取尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间小鼠血液,测量放射性计数并计算药代动力学参数。尾静脉注射99Tc^m-REG后,测定不同时间荷H1299细胞肿瘤裸鼠肿瘤％ID／g及肿瘤／肌肉比值。结果 99Tc^m直接标记REG的标记率为（92．90±2．86）％。99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的最高结合率分别为（1．29±0．16）％和（2．324-0．31）％。体内分布提示99Tc^m-REG在小鼠血液中清除迅速,2h时放射性仪为注射5min时的20．26％,肝脏内放射性浓聚较多,且旱缓慢下降．肾脏、心、肺放射性摄取随时间逐渐下降,其余组织放射性警低水平。2h肿瘤％ID／g为2．02±0．67,肿瘤／肌肉比值为3．50±1．27。结论99Tc^m-REG具有亲肺癌细胞的特性,有可能成为一种亲肺癌肿瘤显像剂。     

减毒鼠伤寒沙门氏菌作为肿瘤基因治疗载体的低毒性和靶向性研究

 目的 研究基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009的低毒性和对于肿瘤细胞的靶向性。方法 将野生型沙门氏菌（对照组）和VNP20009（研究组）分别通过尾静脉注射感染正常小鼠，观察其生存期差别；将绿色荧光蛋白（，GFP）标记VNP20009，红色荧光蛋白（Red Fluorescent Protein，RFP）和GFP 分别标记小鼠前胃癌细胞（MFC）的胞质和胞核，尾静脉注射感染离体肿瘤细胞和荷瘤小鼠，以双色荧光成像的定性方法和组织匀浆细菌培养的定量方法显示细菌在离体肿瘤细胞、在体肿瘤和正常组织中的生长情况。结果 接受野生型沙门氏菌注射的对照组小鼠在注射后4d全部死亡，而接受VNP20009注射的研究组小鼠在注射后10d依然全部存活；VNP20009能在离体肿瘤细胞中持续增殖并引起核碎裂；在体实验中，感染后第6天，正常组织中的细菌明显减少，到第15天时几乎消失，但在肿瘤组织中依然持续增殖。细菌在肿瘤/正常组织(肝脏)中的比例在感染后第4天约为224：1，第6天为1020：1。结论 基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009有着良好的低毒性以及肿瘤靶向性，具有作为肿瘤基因治疗载体的潜力。     

荷瘤小鼠不同时期免疫器官的组织学变化

用组化技术对荷瘤小鼠不同时期免疫器官的变化进行观察,结果发现荷瘤小鼠早、中期免疫器官处于增生状态,吞噬细胞反应明显,免疫应答较强,但在终末期,荷瘤小鼠的免疫器官萎缩、纤维化,应答反应低下。说明荷瘤小鼠早、中期免疫器官受肿瘤细胞抗原的刺激产生免疫应答,对机体产生保护性反应,而晚期的免疫器官萎缩、纤维化、功能受到抑制,对机体无明显防御反应。     

应用AFLP法检测小鼠黑色素瘤B16基因组的变异

目的 应用AFLP技术检测小鼠黑色素瘤B16的遗传改变。方法 肿瘤及正常组织基因组DNA经限制性内切酶酶切,连接特异性接头,采用20条与接相识别的引物进行扩增,扩增产物经含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶电泳,紫外透视仪分析,照相。结果 20条引物均扩增出清晰条带,20条引物扩增结果显示B16瘤细胞株与移植瘤基因组间无差异。17条引物扩增结果显示肿瘤与正常组织间无差异,3条引物扩增结果显示肿瘤与正常组织间有差异,表现为扩增带的丢失或增加。结论 黑色素瘤的发生可能与基因组不稳定性有关。     

肺癌放射免疫导向手术的动物实验和临床初步应用

目的：用手持型γ探测仪(Gamma--detecting probe，GDP)对荷瘤小鼠肿瘤原发灶及微小转移灶行放射免疫探测，术中对肺癌的侵润范围及淋巴结转移进行了初步探测。方法：采用抗肺腺癌单克隆抗体LC-1生物素化预定位技术，进行肺腺癌小鼠RIGS动物实验。应用培普利欧霉素(peplomycin，PPM)和甲氧基异丁基异腈(methoxy-isobutylisonitrile，MIBI)为肿瘤示踪剂对肺肿瘤患者手术标本的放射性探测，以T／NT值判定探测标本韵性质。结果：荷瘤小鼠的原发肿瘤和转移肺组织均有较高的T／NT比值。GDP探测鼠肺肿瘤转移的灵敏度、特异性和准确率为98％、96％和97％。临床应用GDP能准确地探测出肿瘤侵及范围和淋巴结转移，灵敏度、特异性和准确率为91％、88％和90％。结论：应用GDP可以探测出荷瘤小鼠体内肿瘤及其微小转移灶。PPM和MIBI用作肿瘤示踪剂可以有效地判别肺癌的侵润范围及淋巴结转移。     

99m Tc-HL91 "hot spot" imaging of mice bearing human carcinoma by gamma camera and the effects of tumor necrosis on imaging

Objective To evaluate the hypoxia-avid agent ^99m Tc-HL91 (^99m Tc labeled 4, 9-diaza-3, 3, 10, 10-tetramethyldodecan-2, 11-dione dioxime) as the tracer of tumor "hot spot" imaging and the influence of tumor necrosis on the image.
Methods After injection of ^99m Tc-HL91, 6 nude mice bearing human breast cancer MCF-7 and 18 nude mice bearing human pancreatic adenocarcinoma were subjected to gamma camera imaging, postmortem analysis, and autoradiography and imaging of tumor sections.
Results The image of tumor was identified 1 hour after injection of ^99m Tc-HL91.Images demonstrated gradually increased ^99m Tc-HL91 uptake in the tumor 1-12 hours after injection (P<0.05-0.001).Six hours after injection, the radioactivity ratios of tumor to thorax and tumor to head were higher than 2.1.Six hours after injection, the radioactivity ratios of tumor to brain, muscle, blood, heart, lung and kidney in pancreatic adenocarcinoma bearing nude mice were 101.0±114.7, 30.0±30.3, 19.9±21.9, 14.4±15.1, 3.71±2.41 and 0.46±0.26, respectively, and the radioactivity ratios in breast cancer MCF-7 bearing nude mice were close to these figures.The radioactivity of non-necrotic tumor was 3.77 times that of necrotic tumor.However, the radioactivity ratios of tumor to liver, intestine and stomach were lower than 1.3. Autoradiographs and images of tumor sections showed that the radioactivity was higher in the region of solid tumor than in the necrotic region.
Conclusion ^99m Tc-HL91 via gamma camera positively identifies regional tumor in nude mice bearing human cancer.^99m Tc-HL91 retention is lower in necrotic tumor than in non-necrotic tumor.The low radioactivity ratio of tumor to abdominal organs limits the application of ^99m Tc-HL 91 in detecting abdominal tumors.