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1.
目的: 制备包裹pcDNA3.1-NR2B重组质粒的免疫脂质体.方法: 采用逆相蒸发法, 制备含pcDNA3.1-NR2B质粒的脂质体, 并与小鼠抗大鼠转铁蛋白受体的单克隆抗体(mAb OX26)相连, 形成免疫脂质体, 并对其形态结构、粒径、包封率及偶联抗体的分布进行初步检测研究.结果: 所获得的免疫脂质体近球形、平均粒径低于100 nm、包封率达30.4%、偶联抗体呈均匀分布.结论: 成功地制备了免疫脂质体, 为应用于体内试验奠定了基础.  相似文献   
2.
地方株HPV16L1基因免疫小鼠诱发的抗体反应   总被引:2,自引:1,他引:1  
为了检测pcDNA-L1的表达,评价地方株HPV16L1基因诱导的体液免疫反应。我们采用PCR技术从宫颈癌组织中获得HPV16L1基因,以pGEM-Teasy为克隆载体构建重组质粒pGEM-T-L1,进行限制性核酸内切酶及核苷酸序列分析,再将L1基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建重组pcDNA-L1,转染Cos-7细胞,通过IFA试验验证L1蛋白的表达。  相似文献   
3.
人乳头瘤病毒16E6/7转基因小鼠模型的建立   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的构建pCEP4-HPV16 E6/7真核表达质粒,通过显微注射法建立HPV16 E6/7转基因小鼠模型。方法应用基因重组技术,构建pCEP4-HPV16 E6/7真核表达质粒,将经线性化的包含启动子、目的基因、PolyA尾的完整的真核表达DNA。通过将外源基因显微注射到供体小鼠受精卵的雄原核中,再植入到假孕受体鼠的输卵管中,获得129只F0代小鼠,常规法提取这些转基因小鼠的基因组DNA,进行PCR分析,得到5只原代转基因小鼠,再进行DNA印迹分析,其中4只小鼠的DNA出现与阳性质粒对照类似的特异条带,说明E6/7整合在这4只小鼠的基因组中。将Founder小鼠与正常FVB配种,后代经PCR检测。统计结果符合孟德尔遗传定律,证明外源基因稳定遗传给后代。在4只5月龄F0代阳性转基因小鼠中有2只小鼠耳朵皮肤出现不典型增生改变。结果成功构建了pCEP4-HPV16 E6/7真核表达质粒,用包含CMV启动子、HPV16 E6/7目的基因转基因的小鼠已出现皮肤组织不典型增生。结论获得可繁殖传代的罄合了HPV16 E6/7基因的转基因小鼠模型。  相似文献   
4.
胚胎干细胞 (Embryonicstemcell ,EScell)是多潜能性细胞 ,它在体外既可维持不分化而无限增殖 ,又能参与胚胎发育分化为各种类型细胞和组织而形成器官 ;小鼠ES细胞可供的数量大、在体外培养条件可进行精确调控、实验比较经济加上现代基因及其他生物操作等技术 ,因此小鼠ES细胞体外发育分化系统被广泛地作为模型系统加以利用。小鼠ES细胞体外发育分化研究为推动其他哺乳类动物以及人的ES细胞研究 ,从而将更好地进行细胞、组织工程实验为人类细胞组织和基因治疗服务创造了有利条件。本文将ES细胞体外发育分化情况加以概述 ,以便更好地开展ES细胞体外研究  相似文献   
5.
小鼠精子冷冻的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探索、建立一套小鼠精子冷冻方法。方法:通过CPS和RS318两种冷冻液对比试验;进行不同解冻法试验;对B6DF1、CD-1、DBA、C57BL/6四种品系小鼠精子分别进行快速冷冻和缓速冷冻,将解冻精子、鲜精与卵母细胞进行体外受精,并进行体外培养、胚胎移植,通过受精率和受孕率对冷冻方法进行筛选。结果:两种冷冻液试验、不同解冻法试验的受精率差异均无显著性。B6DF1、CD-1、C57BL-6品系小鼠快速冷冻精子解冻后与卵母细胞的体外受精率(35%、34%、17%)显著低于鲜精(60%、59%、34%)、缓速冷冻精子的受精率(62%、58%、30%),此三种品系小鼠快速、缓速冷冻精子体外受精试验的受孕率均显著低于鲜精试验的受孕率。结论:缓速冷冻法是小鼠精子冷冻的适宜方法,干解冻法和稀释法处理冷冻液可简单有效地解冻精子。  相似文献   
6.
目的 观察MMTV Wnt 1转基因小鼠的乳腺癌发病情况及病理学变化规律。方法 观察MMTV Wnt 1转基因小鼠肿瘤发生情况 ,并采用原位移植将瘤组织置于裸鼠皮下 ,通过组织病理学切片来观察MMTV Wnt 1阳性转基因小鼠和移植鼠的病理学变化。结果 MMTV Wnt 1转基因小鼠最早从 7周龄开始出现乳腺瘤 ,发瘤鼠剖检可见脾、肝有不同程度的肿大 ,其他器官无明显病变 ;病理组织学检查发现发瘤鼠各脏器有不同程度的病变 ,但未出现肿瘤转移。将瘤组织移植裸鼠后 ,肿瘤可在裸鼠皮下生长 ,移植肿瘤病理学形态与原发瘤一致 ,未出现转移。结论 实验结果验证MMTV Wnt 1转基因小鼠可稳定自发乳腺肿瘤 ,可作为研究乳腺癌的良好的动物模型  相似文献   
7.
应用氯化锶对小鼠卵母细胞孤雌活化的研究   总被引:6,自引:1,他引:5  
根据弓形虫P30基因序列设计二对引物分别进行了PCR一次扩增和套式扩增,结果这两对引物在一次扩增和套式扩增中分别出现预期的扩增片段914bp,522bp和522bp;套式扩增出现的条带比一产供销扩增出现的条带亮度明显增强,提示套式扩增比一次扩增具有更高的敏感性,用外引物进行扩增后,最低可以检测到1pg的弓形虫DNA,说明所建立的反应体系具有高度的敏感性。用内引物对人工感染弓形虫的ICR小鼠血液,组织进行弓形虫DNA的检测,结果均扩增出522bp的扩增带。根据B1基因序列设计的弓物进行PCR一次扩增和半套式扩增。结果均出现预期的扩增片段619bp,362bp和362bp;用半套式扩增检测感染弓形虫形虫的ICR小鼠血液,组织时可扩增出522bp的619bp,362bp和362bp;用半套式扩增检测感染弓形虫的ICR小鼠血液,组织时可扩增出522bp的扩增带,半套式扩增比一次扩增更敏感。  相似文献   
8.
为了解急性胰腺炎急性期局部组织结构所起的作用,采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制备大鼠胆源性急性胰腺炎的模型。并观察了模型制备后原发性病变与继发性局部病变以及胰腺病理的变化。大体病理所见:同一时段的模型各组间比较差异均非常显著(P<0.01)。胰腺水肿或出血坏死和胰周水肿或出血坏死间均存在正相关(P<0.01)。镜下病理所见:同一时段的模型中,除了6h间质出血和脂肪坏死各组间差异显著外(P<0.05),其余均差异非常显著(P<0.01)。例外情况的病理所见:2例轻度胰腺水肿或出血与腹膜后间隙广泛浸润:3例重度胰腺水肿或出血坏死与腹膜后局限浸润:5例出血坏死组脾门区病变严重。结果提示,在实验模型制备条件近似相同的情况下,原发性病变越严重,继发性的局部病变也越严重。局部病变表现的差异,可能与局部组织结构上存在的差异有关。  相似文献   
9.
目的:制备抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B(GPA/GPB)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用人“O”型血红细胞作为免疫源,免疫BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb,用谱红细胞筛选阳性克隆;采用直接、间接血凝试验检测杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价。分别用快速定性试纸和酶处理红细胞检测mAb的Ig亚类及抗原表位。用Western blot鉴定抗GPA/GPB mAb的特异性。结果:获得4株分泌抗M、1株抗N及3株抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞培养上清mAb的效价介于1×2-4~1×2-8之间,腹水mAb的效价在1×2-7~1×2-12之间。除1株mAb 1C1C9C4为IgM外,其他7株mAb均为IgG。通过杂交瘤细胞培养上清与谱红细胞的反应格局,结合mAb抗原表位的检测,确定4株和1株mAb可分别特异性结合于GPA的M、N抗原表位;另3株mAb 6D7C9、7C9H4和7C9G11与“O”型血红细胞膜的Western blot结果显示,均可结合GPA、GPB蛋白。结论:成功地建立了4株分泌抗M、1株分泌抗N及3株分泌抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株,可用于MNSs血型系统的研究及鉴定,并为制备双功能抗体用于病毒、肿瘤疾病的诊断和治疗打下了坚实的基础。  相似文献   
10.
花青素对肺癌细胞NCI-H460的体内外抗肿瘤效应   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 研究花青素对肺癌细胞NCI-H460的体内外抗肿瘤效应.方法 采用细胞记数和台盼蓝拒染法观察对细胞增殖和活力的影响;用MTT比色分析法测定细胞生长抑制率,计算出IC 50值; DNA琼脂糖凝胶电泳测细胞的凋亡; 利用裸鼠肺癌细胞移植瘤模型观察花青素对裸鼠肿瘤生长的抑制作用.结果 花青素可以使NCI-H460细胞的活力明显下降,对NCI-H460细胞具有抑制作用,并有时间和剂量依赖性,IC50值为90.8 mg/ml;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带;花青素对裸鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用.结论 花青素能明显抑制NCI-H460细胞的增殖、诱导细胞凋亡和抑制裸鼠肿瘤的生长.  相似文献   
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