重组水蛭素抗栓及抗弥漫性血管内凝血作用的实验研究

水蛭素 (ｈｉｒｕｄｉｎ)为中医活血化淤药水蛭的主要有效成分 ,系由 6 5个氨基酸组成的单链多肽 ,是迄今作用最强的特异性凝血酶抑制剂 ,具有很强的抗凝、抗栓活性 ,对多种血栓疾病具有预防和治疗效果。目前国内外采用基因重组技术研制水蛭素取得了令人瞩目的进展。重组水蛭素 (ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒ ｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒＨ)产品中仅变异体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ具有抗凝活性 ,简称ＨＶ1,ＨＶ2和ＨＶ3。国内有关单位采用甲基营养型汉逊酵母真核表达系统研制出的ｒＨ与天然水蛭素ＨＶ1不同之处除ｒＨ 6 3位酪氨酸脱硫酸基外 ,还有Ｎ…     

重组水蛭素的研究进展

 用生物方法合成的重组水蛭素是一个很有前途的活血化瘀药物。本文概括地介绍了重组水蛭素的几种合成方法，药理实验（包括抗凝抗栓作用等）及临床研究的进展情况，其性质和作用与天然水蛭素基本相同。     

重组水蛭素抗凝和抗血栓形成作用的实验研究

目的:观察重组水蛭素对凝血系统、血栓形成和血小板聚集的影响,研究其药理作用.方法:测定大鼠凝血时间(CT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原含量(Fib)及抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性;采用A-V循环模型进行血栓形成实验;采用Born氏比浊法测定家兔血小板聚集.结果:重组水蛭素可显著延长大鼠血浆的CT、APTT、TT及PT(P＜0.001),明显降低Fib含量(P＜0.05),对AT-Ⅲ的活性无明显影响;明显减少血栓重量(P＜0.001);显著降低凝血酶诱导的家免血小板聚集率(P＜0.001),对胶原诱导的家兔血小板聚集率有降低趋势.结论:重组水蛭素具有抗凝、抑制血小板聚集和血栓形成的作用.     

水蛭素及重组水蛭素的应用研究概况

水蛭素及重组水蛭素具有抗凝血、抗肿瘤、降血脂等多种药理活性，临床上用于治疗多种疾病。现综述近年来水蛭素及重组水蛭素在心血管系统疾病、脑血管系统疾病等方面的临床应用及其药代动力学和不良反应，指出水蛭素及重组水蛭素具有广泛的发展前景。     

重组水蛭素体内抗凝活性的实验研究

目的：研究重组水蛭素的抗凝活性,为水蛭素新药开发提高实验依据,方法：家兔iv重组水蛭素前及后心脏采血,应用血凝仪测定凝血酶时间（TT）,凝血酶原时间（PT）,和活化的部分凝血活酶时间（APTT）,并考察其抗凝活性的量效和时效关系。结果：重组水蛭素能明显延长TT和APTT,且呈剂量依赖性,但在所试剂量范围内对PT无明显影响,其延长TT和APTT的作用随时间而下降,作用持续约60min,结论：重组水蛭 素具有明显抗凝作用,明显强于现有抗凝药肝素,且其作用强度与同剂量德国产基因重组水蛭素Refludan相同。     

重组水蛭素在大鼠体内的药动学研究

目的研究重组水蛭素iv给药在大鼠体内的药动学。方法采用125-标记的放射性同位素法(RA法)、三氯醋酸沉淀结合放射性检测法(TCA-RA法)研究重组水蛭素iv给药在大鼠体内的药动学。结果大鼠iv0.5、1.0和2.0mg/kg重组水蛭素,以RA法检测,该药的消除半衰期(t1/2ke)分别为162.8、147.5和172.8min,AUC分别为264.9、429.9和1112.9(μg·min)/mL;以TCA-RA法检测,该药的t1/2ke分别为100、101和107min,AUC分别为160.7、327.7和551.3(μg·min)/mL。两种方法所得结果均证明AUC与剂量呈正相关,相关系数均大于0.99。大鼠iv重组水蛭素1.0mg/kg后用RA法和TCA-RA法测定不同组织的药物质量浓度,在各时间点以肾脏含药量显著高于其他组织,肺、胃、脾、心、肝、性腺等组织次之,脑、脂肪最少。大鼠iv重组水蛭素1.0mg/kg后,用RA法测定不同时间段内尿、粪的放射性总量,在96h内70.16%放射性从尿中回收,1.35%从粪中回收到,24h内胆汁排泄量为3.46%。结论RA法和TCA-RA法测得重组水蛭素在大鼠体内的药动学结果不同,但整体趋势一致;重组水蛭素主要由尿排泄。     

水蛭不同提取物抗凝活性的体外实验研究

目的:研究水蛭不同提取物的抗凝活性,为水蛭的新药开发提供实验依据.方法:Wistar大鼠腹静脉取血,应用血凝仪体外测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和活化的部分凝血活酶时间(APTT).结果:水蛭的乙酸乙酯部分能使大鼠的PT、TT、APTT显著延长.正己烷部分、水溶液部分能使大鼠的PT显著延长,正丁醇部分能使大鼠的APTT显著延长.结论:水蛭各提取物均有抗凝活性,水蛭中存在不同于水蛭素的新的抗凝血成分.     

黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方含药血清对大鼠肾小球系膜细胞生长周期及凋亡的影响

目的:比较黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生长周期、凋亡的影响及凋亡的形态学观察。方法:应用流式细胞仪检测GMCs生长周期与凋亡;用瑞氏染色,显微镜观察凋亡细胞的形态。结果:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能使大量GMCs处于G0/G1期,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);均能提高GMCs凋亡率,水蛭、水蛭黄芪配方与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能阻止GMCs进入S期从而达到抑制增生的目的,且能提高GMCs的凋亡率,水蛭黄芪配方效果最优,水蛭次之。     

重组水蛭素对人肝细胞癌生长的影响及分子机制研究

目的:探讨重组水蛭素对人肝癌细胞增殖、凋亡能力的影响及可能的分子机制。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,分4组:空白对照组,以PBS溶液进行假干预;重组水蛭素组,以1.0 U/m L重组水蛭素干预;凝血酶组,以1.0 U/m L凝血酶干预;混合组,以1.0 U/m L凝血酶+1.0 U/m L重组水蛭素干预。采用MTT、流式细胞技术分别观察细胞增殖能力及细胞凋亡的变化。采用qRT-PCR技术检测Bcl-2及Bax的mRNA表达变化,免疫蛋白印记技术检测细胞内Bcl-2及Bax蛋白的表达变化。结果:与空白对照组相比,重组水蛭素组细胞增殖能力较空白对照组与凝血酶组均显著降低、凋亡比例显著升高(P<0.05),而凝血酶组细胞增殖能力显著升高、凋亡比例显著降低(P<0.05);混合组细胞增殖能力较凝血酶组均显著降低、凋亡比例显著升高(P<0.05),而与空白对照组相比无明显统计学差异(P>0.05)。与空白对照组相比,凝血酶组细胞内Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平显著升高而Bax mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);重组水蛭素组细胞内Bcl-2mRNA及蛋白的表达水平明显降低而Bax mRNA及蛋白的表达水平明显升高(P<0.05);混合组Bcl-2及Bax表达未发生显著变化(P>0.05)。结论:重组水蛭素不仅可以显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,并促进其凋亡发生,而且能够有效逆转凝血酶导致的生长促进及凋亡抵抗作用。     

扶正抑毒丸治疗无症状HBV 阳性90例

笔者自 1996 - 0 1～ 2 0 0 0 - 0 8用扶正抑毒丸 (水泛丸 )对无症状ＨＢＶ阳性患者 (ＡＳＣ) 90例进行治疗 ,并设立对照组、随访组进行对比观察 ,资料统计结果说明扶正抑毒丸对ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｃ -ＩｇＭ阴转有明显疗效 ,现报告如下。1　一般资料　经ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢＶ血清标志物 ,筛选出ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ、抗ＨＢｃ -ＩｇＭ阳性患者 180例 ,其中男性 112例、女性 6 8例 ,年龄最小者 8岁、最大者 5 5岁 ,发现ＨＢＶ阳性时间最短者半年、最长者 11年 ;所有病例皆无明显临床症状、初诊时肝功能检查正常 ;随机分为…     

HBV-DNA和乙肝血清标志物之间的关系

目前 ,人们对乙型肝炎血清标志物 (ＨＢＶ -Ｍ)与乙型肝炎的关系已有一个较全面的认识 ,认为ＨＢｓＡｇ与ＨＢｅＡｇ是评价ＨＢＶ复制和传染性的重要指标。为探讨ＨＢＶ -ＤＮＡ和ＨＢＶ -Ｍ之间的关系 ,笔者收集了我院乙型肝炎门诊患者的血清 ,应用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)检测ＨＢＶ -ＤＮＡ ,同时应用酶联免疫试验 (ＥＬＩＳＡ)检测ＨＢＶ -Ｍ ,现将结果报道如下。1　材料和方法1 1　标本来源　 2 80例标本均系我院门诊 2 0 0 0年 1月— 2 0 0 1年 1月乙肝患者血清。1 2　试剂　ＨＢＶ -Ｍ由上海荣盛生物技术有限公司提供(ＥＬＩＳＡ法 ) ;…     

提取水蛭有效成分初探

水蛭作为常用的活血化瘀中药 ,具有破血 ,逐瘀 ,通经之功能[1 ] ,在中药临床广泛用于脑血栓、冠心病、脑水肿等疾病的治疗。水蛭医用始载于《神农本草经》 ,其有效成分主要为一种抗凝血物质 ,名为水蛭素 (Ｈｉｒｕｄｉｎ)。它能阻止凝血酶对血小板的作用 ,抑制血小板受凝血酶的刺激而释放 ,从而延缓或阻止血液的凝固[2 ] 。研究表明 ,水蛭素是由 65个氨基与 3个二硫键组成的多肽 ,分子量约为 70 0 0 [3] ,在干燥状态下稳定存在 ;室温下 ,在水中稳定存在六个月 ,80°Ｃ下加热 1 5ｍｉｎ不被破坏 ;提高溶液的ｐＨ值 ,其稳定性下降 ;2 0°Ｃ下 …     

水蛭素联合阿霉素对TCA8113细胞株作用机制的研究

目的研究水蛭素与阿霉素(ADM)联合应用对人舌鳞癌细胞株TCA8113生长的影响。方法通过MTT法测定其对TCA8113细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测凋亡及分析细胞周期的变化;利用吖啶橙-溴化乙啶(Ao-EB)染色观察水蛭素作用前后细胞形态的改变;应用透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。结果水蛭素、ADM对TCA 8113有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈时间-剂量效应(P<0.05);水蛭素(15ATU/mL)与ADM(0.39～3.125 mg/L)联合给药可对TCA 8113产生增强的联合杀伤效果(P<0.05);流式细胞术检测提示水蛭素可促使细胞凋亡并阻滞细胞周期于G0/G1期;透射电镜和荧光染色观察可见凋亡细胞染色质凝聚、边集,并出现凋亡小体。结论水蛭素和阿霉素均对TCA8113有抑制作用,水蛭素的作用机制可能为诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于G0/G1期。水蛭素可增强TCA8113对ADM的敏感性,对于阿霉素化疗有增效减毒作用。     

水蛭仿生酶解有效部位HPLC指纹图谱的研究

目的:建立水蛭仿生酶解有效部位HPLC指纹图谱的鉴定标准。方法:采用依利特SinoChrom ODS-BP色谱柱;0～25min,甲醇(1%～10%)～水梯度洗脱;柱温35℃;流速0.8 mL.min-1;检测波长254nm。结果:在相同色谱条件下获得6批水蛭仿生酶解有效部位的指纹色谱图,其中8个色谱峰分离较好,均达到指纹图谱的技术要求。结论:HPLC指纹图谱中8个共有峰的相对保留时间比值(RRT)和相对峰面积比值(RPA)可用于水蛭仿生酶解有效部位的质量控制。     

水蛭素对凝血酶造成的血管内皮细胞单层通透性增高的抑制作用

观察水蛭素对凝血酶造成的血管内皮细胞单层通透性增高的抑制作用。从新生牛主动脉分离获得单个内皮细胞 ,培养于微孔滤膜上直至形成致密单层。通过灌流Hanks液或含 5g·L-1 白蛋白的Hanks液后 ,测定经 1 0U/ml凝血酶溶液处理或经 1 0U/ml凝血酶溶液加 1 0U/ml水蛭素处理的液体滤过系数 (Kf)、液体滤过流量(Jv)和蛋白质渗透压反射系数(σ)。结果 :内皮单层经凝血酶处理后 ,Kf和Jv降低 ,σ升高 ;而水蛭素能够抑制因凝血酶造成的Kf和Jv降低 ,以及σ升高。提示 :凝血酶能够引起血管内皮单层通透性的增加 ,而水蛭素能够减轻凝血酶造成的内皮单层通透性的增加 ,其作用机制尚需进一步研究     

中成药及中药材中黄曲霉毒素B_1含量的调查实验研究

中药大多为天然植物药,在采收贮藏过程中极易发霉,污染黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是强致癌物质。因此对中药污染黄曲霉毒素含量进行调查研究,为制定其限度标准提供依据,是一个急待解决的问题。本调查实验研究采用酶联免疫吸附分析法(ＥＬＩＳＡ)[1],对中成药及中药材进行抽样检测,检测了不同剂型44个品种114批中成药,以及24个品种51批中药材中黄曲霉毒素Ｂ1(ＡＦＢ1)的含量。1　仪器和材料ＤＧ3022型酶联免疫检测仪(华东电子仪器厂)。ＡＦＢ1标准品、ＡＦＢ1抗原结合物、ＡＦＢ1抗体(Ⅰ抗)、酶标羊抗兔辣根过氧化物酶(Ⅱ抗)、聚苯乙烯酶标板,均…     

不同药物对人肺巨细胞癌PGCL3细胞表面表达的血小板免疫相关抗原的影响

利用辅有Ｍａｔｒｉｇｅｌ的Ｂｏｙｄｅｎ小室观察抗ＣＤ９、抗ＣＤ４２ａ、抗ＣＤ６３、抗ＴＳＰ抗体对ＰＧ－ＣＬ３细胞侵袭作用的影响;采用流式细胞术观察２．５、１０、２０ｍｇ／Ｌ的川芎嗪、丹参酮ⅡＡ和５０、５００、１０００Ｕ／Ｌ的水蛭素和凝血酶对ＰＧＣＬ３细胞膜表面ＣＤ９、ＣＤ４２ａ、ＣＤ６３、ＴＳＰ表达的影响,观察川芎嗪、丹参酮ⅡＡ、水蛭素和凝血酶对人肺巨细胞癌ＰＧＣＬ３细胞表面血小板免疫相关抗原ＣＤ     

水蛭素抑制凝血作用探讨

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离出来的一种单链多肽,是中药水蛭中的重要活性成分,为迄今发现的作用最强的凝血酶抑制剂。水蛭素具有极强的抑制凝血作用和抗血栓形成作用,在临床治疗和预防各种血栓形成方面有着广阔的应用前景。近年来,国内外在水蛭素治疗疾病方面进行了研究,并在重组水蛭素的研发方面取得了令人瞩目的进展[1]。     

中药水蛭各部位提取物对高分子葡聚糖所致大鼠血瘀模型的影响

中国将水蛭作为破血逐瘀药而用于血瘀症的治疗。本实验观察水蛭各部位治疗血瘀症的疗效和初步的作用机理。1　实验部分1.1　药品与试剂　水蛭 (宽体金线蛭、菲牛蛭 ,产地 :广东 )各部分提取物配制成一定浓度 ,备用。A .宽体金线蛭水煎液 (1g生药·mL-1) :取宽体金线蛭粗粉10 0g ,浸泡 30min后 ,常法水煎 3次 ,每次 1h ,过滤浓缩成每1mL相当于生药 1g ,备用。B .菲牛蛭水煎液 (1g生药·mL-1) :取菲牛蛭粗粉 10 0 g ,同上法制备。C .宽体金线蛭醇提液 (1g生药·mL-1) :取宽体金线蛭粗粉10 0 g ,用 95 %乙醇回流提取 3次 ,每次 1h ,过滤浓缩…     

水蛭素对肾病综合征患者凝血酶激活的纤溶抑制物的影响及疗效观察

目的探讨水蛭素对肾病综合征患者凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)的影响及疗效观察。方法确诊肾病综合征的患者53例,随机分为两组,常规组23例:应用标准剂量的激素[强的松,1 mg/(kg·d)]治疗;水蛭素组30例:标准激素治疗+水蛭素(0.5g/次,tid)抗凝治疗,两组均治疗4周。测定治疗前后TAFI、凝血指标、24 h尿蛋白定量、血生化指标。选取健康体检者20例为对照组测定TAFI浓度。结果常规组、水蛭素组治疗前与对照组比较,TAFI浓度均高,具有统计学意义(P<0.05)。常规组、水蛭素组治疗后与同组治疗前比较,血浆TAFI、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、24 h尿蛋白定量均下降,白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均升高,均有统计学意义(P<0.05)。常规组与水蛭素组治疗后两组间比较,水蛭素组以上指标改变更明显,另外,抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)活性明显升高,活化部分凝血活酶时间(APTT)显著延长,具有统计学意义(P<0.05)。结论水蛭素可显著改善肾病综合征患者的高凝状态,改善纤溶系统的功能,促进肾病综合征的缓解并改善其预后。