水蛭素及其重组技术的研究进展

传统中药水蛭中提取的活性成分水蛭素是凝血酶的天然抑制剂,具有抗凝、抗血小板凝聚等药理作用,在血栓疾病的临床应用中有重要的意义。重组水蛭素是基因工程的产物,与天然水蛭素具有相同的功效,质量更加稳定可控,它能与血浆中的凝血酶结合,为新一代高效安全的抗凝、防栓药物。本文综述水蛭素的来源、药理作用、临床应用及重组技术的研究概况。     

重组水蛭素的研究进展

 用生物方法合成的重组水蛭素是一个很有前途的活血化瘀药物。本文概括地介绍了重组水蛭素的几种合成方法，药理实验（包括抗凝抗栓作用等）及临床研究的进展情况，其性质和作用与天然水蛭素基本相同。     

水蛭素的药理作用及临床应用研究进展

水蛭素（hirudin）为特异性凝血酶抑制剂,根据其来源可分为天然水蛭素和重组水蛭素两类。水蛭素具有抗凝、抗血栓、抗纤维化、抗细胞凋亡、舒血管和提高随意皮瓣成活率等多种药理作用,对于血管瘤、肝癌、动脉粥样硬化症、肾病综合征、高尿酸血症、输卵管炎性阻塞和白内障等疾病均具有显著的治疗作用。对近年来水蛭素的相关研究进行综述,为其进一步研发提供参考。     

水蛭素抑制凝血作用探讨

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离出来的一种单链多肽,是中药水蛭中的重要活性成分,为迄今发现的作用最强的凝血酶抑制剂。水蛭素具有极强的抑制凝血作用和抗血栓形成作用,在临床治疗和预防各种血栓形成方面有着广阔的应用前景。近年来,国内外在水蛭素治疗疾病方面进行了研究,并在重组水蛭素的研发方面取得了令人瞩目的进展[1]。     

水蛭素的研究概况

 水蛭有多种活性成分，其主要的有效成分是水蛭素（hirudin）。本文概括地介绍了水蛭素的提取方法、结构与稳定性，抗凝抗栓作用，动力学研究以及临床研究及毒副作用概况。认为它是一种很有前途的抗凝血、抗血栓的药物。     

水蛭素的生理处置及药动学研究现状

水蛭素为活血化瘀中经水蛭的重要成分，现已通过基因重组技术大量制备，具有强大的抗凝抗栓作用。现对水蛭素的生理处置、临床前药动学和临床药动学及其血药浓度测定的研究进展进行综述，为水蛭素的进一步研究和临床应用提供科学依据。     

重组水蛭素研究进展

水蛭素是医用水蛭的唾液腺分泌的一种多肽,一般由65~66个氨基酸组成,是迄今发现的活性最强的特异性凝血酶抑制剂。本文介绍了重组水蛭素的表达、分离和纯化的研究进展,并展望了重组水蛭素的应用前景。     

水蛭素抗凝血和抗肿瘤转移的研究进展

据国内外近20年文献,概述水蛭素抗凝血和抗肿瘤转移研究进展,主要阐述重组水蛭素与天然水蛭素的结构以及在抗凝血作用方面与肝素、枸橼酸纳等的不同点,水蛭素能抑制肿瘤细胞的增值和转移,并通过抑制凝血酶活性产生抗肿瘤作用的机制,是一种具有良好应用前景的药物.     

重组水蛭素抗栓及抗弥漫性血管内凝血作用的实验研究

水蛭素 (ｈｉｒｕｄｉｎ)为中医活血化淤药水蛭的主要有效成分 ,系由 6 5个氨基酸组成的单链多肽 ,是迄今作用最强的特异性凝血酶抑制剂 ,具有很强的抗凝、抗栓活性 ,对多种血栓疾病具有预防和治疗效果。目前国内外采用基因重组技术研制水蛭素取得了令人瞩目的进展。重组水蛭素 (ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒ ｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒＨ)产品中仅变异体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ具有抗凝活性 ,简称ＨＶ1,ＨＶ2和ＨＶ3。国内有关单位采用甲基营养型汉逊酵母真核表达系统研制出的ｒＨ与天然水蛭素ＨＶ1不同之处除ｒＨ 6 3位酪氨酸脱硫酸基外 ,还有Ｎ…     

重组水蛭素体内抗凝活性的实验研究

目的：研究重组水蛭素的抗凝活性,为水蛭素新药开发提高实验依据,方法：家兔iv重组水蛭素前及后心脏采血,应用血凝仪测定凝血酶时间（TT）,凝血酶原时间（PT）,和活化的部分凝血活酶时间（APTT）,并考察其抗凝活性的量效和时效关系。结果：重组水蛭素能明显延长TT和APTT,且呈剂量依赖性,但在所试剂量范围内对PT无明显影响,其延长TT和APTT的作用随时间而下降,作用持续约60min,结论：重组水蛭 素具有明显抗凝作用,明显强于现有抗凝药肝素,且其作用强度与同剂量德国产基因重组水蛭素Refludan相同。     

水蛭素治疗脑血管疾病研究探析

脑血管疾病,虚是本质,瘀血是核心,治疗宜补虚和活血。从实验与临床研究对水蛭素治疗脑血管疾病作了综述。指出:水蛭素具有强大的抗凝、抗栓活性,有效的抗血栓形成的作用。主要作用于心脑血管疾病的防治,认为水蛭为临床广泛应用而疗效确切的活血化瘀药。     

水蛭的化学成分与药理作用

水蛭是我国传统的活血化瘀药之一,临床多用于血滞经闭、微痕积聚、跌打损伤等症。水蛭的炮制方法《伤寒论》中有所记载,大致有净制、切、加辅料和不加辅料制几大类,十几种炮制方法;现代对水蛭的炮制大多采用酒制、滑石粉烫、砂烫等方法。水蛭的主要成分为大分子类化合物,如水蛭素、肝素、组织胺、吻蛭素、氨基酸等。水蛭中也含有糖脂类、蝶啶类、甾体类和羧酸酯类等多种小分子类物质。水蛭具有抗细胞凋亡,抗肿瘤,抗凝、抗血栓,抗炎、抗纤维化等药理作用。     

水蛭的药效与应用分析

目的：探讨水蛭的药理作用与功效,并由此对其临床应用作出总结归纳。结果：水蛭含有蛋白质、水蛭素、肝素等多种活性成分,其中水蛭素是其最主要的活性成分;水蛭具有抗凝、抗血栓,降血脂,改善血液流变学等多种药理效果;水蛭的临床应用广泛,应用效果佳。结论：水蛭具有良好的临床应用效果与前景。     

重组水蛭素在大鼠体内的药动学研究

目的研究重组水蛭素iv给药在大鼠体内的药动学。方法采用125-标记的放射性同位素法(RA法)、三氯醋酸沉淀结合放射性检测法(TCA-RA法)研究重组水蛭素iv给药在大鼠体内的药动学。结果大鼠iv0.5、1.0和2.0mg/kg重组水蛭素,以RA法检测,该药的消除半衰期(t1/2ke)分别为162.8、147.5和172.8min,AUC分别为264.9、429.9和1112.9(μg·min)/mL;以TCA-RA法检测,该药的t1/2ke分别为100、101和107min,AUC分别为160.7、327.7和551.3(μg·min)/mL。两种方法所得结果均证明AUC与剂量呈正相关,相关系数均大于0.99。大鼠iv重组水蛭素1.0mg/kg后用RA法和TCA-RA法测定不同组织的药物质量浓度,在各时间点以肾脏含药量显著高于其他组织,肺、胃、脾、心、肝、性腺等组织次之,脑、脂肪最少。大鼠iv重组水蛭素1.0mg/kg后,用RA法测定不同时间段内尿、粪的放射性总量,在96h内70.16%放射性从尿中回收,1.35%从粪中回收到,24h内胆汁排泄量为3.46%。结论RA法和TCA-RA法测得重组水蛭素在大鼠体内的药动学结果不同,但整体趋势一致;重组水蛭素主要由尿排泄。     

重组水蛭素对人肝细胞癌生长的影响及分子机制研究

目的:探讨重组水蛭素对人肝癌细胞增殖、凋亡能力的影响及可能的分子机制。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,分4组:空白对照组,以PBS溶液进行假干预;重组水蛭素组,以1.0 U/m L重组水蛭素干预;凝血酶组,以1.0 U/m L凝血酶干预;混合组,以1.0 U/m L凝血酶+1.0 U/m L重组水蛭素干预。采用MTT、流式细胞技术分别观察细胞增殖能力及细胞凋亡的变化。采用qRT-PCR技术检测Bcl-2及Bax的mRNA表达变化,免疫蛋白印记技术检测细胞内Bcl-2及Bax蛋白的表达变化。结果:与空白对照组相比,重组水蛭素组细胞增殖能力较空白对照组与凝血酶组均显著降低、凋亡比例显著升高(P<0.05),而凝血酶组细胞增殖能力显著升高、凋亡比例显著降低(P<0.05);混合组细胞增殖能力较凝血酶组均显著降低、凋亡比例显著升高(P<0.05),而与空白对照组相比无明显统计学差异(P>0.05)。与空白对照组相比,凝血酶组细胞内Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平显著升高而Bax mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);重组水蛭素组细胞内Bcl-2mRNA及蛋白的表达水平明显降低而Bax mRNA及蛋白的表达水平明显升高(P<0.05);混合组Bcl-2及Bax表达未发生显著变化(P>0.05)。结论:重组水蛭素不仅可以显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,并促进其凋亡发生,而且能够有效逆转凝血酶导致的生长促进及凋亡抵抗作用。     

应用ELISA研究重组水蛭素在大鼠体内的药动学

水蛭素 (ｈｉｒｕｄｉｎ)是从药用水蛭 (ｍｅｄｉｃｉｎａｌｌｅｅｃｈｅｓ)中分离出的天然的凝血酶抑制剂 ,目前 ,国内外已通过基因重组技术大量制备。本实验应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ＥＬＩＳＡ)对国产重组水蛭素 (Ｒｅｃｏｂｉｎａｎｔｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒＨ)在大鼠体内的药动学进行了研究。1　实验材料ｒＨ供试品 :由 6 5个氨基酸组成 (Ｎ Ｉｌｅ1 Ｔｈｒ2 6 3位脱硫酸基 水蛭素 ) ,分子量 70 0 0 (批号 99110 1;纯度 99.7% ,大连高新生物制药有限公司 )。ＥＬＩＳＡ试剂盒包括 :包被抗体板 (Ｈｉｒｕｄｉｎ抗兔 ,多克隆 ) ;酶标…     

重组水蛭素鼻腔喷雾剂及辅料的鼻黏膜毒性评价

目的:考察重组水蛭素鼻腔喷雾剂及其辅料的鼻黏膜毒性作用。方法:采用在体蟾蜍上腭模型法,光学显微镜下观察纤毛持续运动时间,考察辅料和重组水蛭素的纤毛毒性作用;采用病理学检查法考察长期给予家兔重组水蛭素鼻腔喷雾剂对鼻黏膜结构的影响。结果和结论:辅料SDS,Brij35,azone,lecithin,EDTA,menthol,ni-pagin,thiomersal可显著抑制纤毛运动(与PRS组比较P<0.05),而HP-β-CD,tween80,甘草酸单胺盐,benzalkoniumbromide,sodiumbenzoate及黏附性材料对纤毛运动影响较小;重组水蛭素鼻腔喷雾剂长期给药对鼻黏膜结构有一定影响,但此作用可在停止给药后恢复。表明辅料SDS,Brij35,azone,lecithin,EDTA,menthol,nipagin,thiomersal等的纤毛毒性较大;而HP-β-CD,tween80,甘草酸单胺盐,benzalkoniumbromide,sodiumbenzoate及黏附性材料的纤毛毒性较小,可用于鼻腔给药;黏附性材料壳聚糖可能会加重某些辅料的纤毛毒性;重组水蛭素鼻腔给药具有可行性。     

水蛭素基础及临床研究发展状况

 目的综述水蛭素基础及临床研究发展状况。方法依据近年来国内外文献,进行分析、归纳和总结。结果与结论水蛭素(hirudin)是迄今发现的活性最强的特异性天然凝血酶抑制剂,通过与凝血酶特异性结合而产生强有力地抑制血液凝固的作用,在抗栓抗凝方面应用广泛,药物开发前景较为广阔。     

水蛭开发与临床应用

简介了水蛭素的理化性质、药理作用、制剂与临床应用现状。提示水蛭素及其相关制剂可望成为极有前叙的抗凝血,抗血栓新药之一。     

提取水蛭有效成分初探

水蛭作为常用的活血化瘀中药 ,具有破血 ,逐瘀 ,通经之功能[1 ] ,在中药临床广泛用于脑血栓、冠心病、脑水肿等疾病的治疗。水蛭医用始载于《神农本草经》 ,其有效成分主要为一种抗凝血物质 ,名为水蛭素 (Ｈｉｒｕｄｉｎ)。它能阻止凝血酶对血小板的作用 ,抑制血小板受凝血酶的刺激而释放 ,从而延缓或阻止血液的凝固[2 ] 。研究表明 ,水蛭素是由 65个氨基与 3个二硫键组成的多肽 ,分子量约为 70 0 0 [3] ,在干燥状态下稳定存在 ;室温下 ,在水中稳定存在六个月 ,80°Ｃ下加热 1 5ｍｉｎ不被破坏 ;提高溶液的ｐＨ值 ,其稳定性下降 ;2 0°Ｃ下 …